感染症学雑誌第80巻第6号

A 群レンサ球菌迅速診断キットの基礎的検討

― Streptococcus pyogenes および A 群多糖体抗原を有する

その他の Streptococcus spp.を対象として―

光野 典子

播

智宏

玉川 信吉

糸井 壽一

池田 英治

濱崎 和子

勝川 千尋

奥山 道子

Key words : Streptococcus pyogenes , Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis , rapid diagnosis

要 旨

現在国内で入手可能な 8 社の A 群レンサ球菌迅速診断キットについて，同一条件下で基礎的検討を行っ た．検討を行ったキットはイムノクロマトグラフィーを原理とする，QuickVue Dipstick Strep A（住友製 薬バイオメディカル），TESTPACK Plus STREP A（ABOTT JAPAN CO.），CLEAVIEW STREP A（日 本シェーリング），QuickVue STREP A（和光純薬工業），ImmunoCard STAT! STREP A（TFB），DIPSTICK ‘Eiken’STREP A（栄研化学），Rapid Testa Strep A（第一化学薬品），StatCheck Strep A（カイノス）で

ある．検出感度試験では，最も高感度であり，供試した S. pyogenes 5 株すべてにおいて 1.0×105_CFU!mL

（1.0×104_{CFU!test）まで検出可能であったのは QuickVue Dipstick Strep A，TESTPACK Plus STREP A，}

Rapid Testa Strep A，StatCheck Strep A の 4 キットであった．また比較試験として，S. pyogenes 以外で A 群多糖体抗原を有する Anginosus group と S. dysgalactiae subsp. equisimilis についても，S. pyogenes と同 程度の検出感度を認めた．その中でも S. dysgalactiae subsp. equisimilis は，血液寒天培地上で S. pyogenes と よく似たコロニーを形成し，バシトラシン試験も陽性であることから，同定には PYR 試験など生化学的性 状の確認が必要であると考えられる．中でも A 群を持つ S. dysgalactiae subsp. equisimilis については近年 G 群レンサ球菌による劇症型レンサ球菌感染症が増加していることもあり，これらの確認が重要である．

〔感染症誌 80：665∼673，2006〕

序 文

Streptococcus pyogenes（A 群溶血性レンサ球菌：以 下，S. pyogenes）はヒトに咽頭炎，扁桃炎，蜂窩織炎， 膿痂疹などの化膿性疾患を引き起こす原因菌として知 られ，特に小児の咽頭炎の原因菌として今尚重要であ る．また，本菌による感染症で特徴的なことは，適切 に診断，抗菌薬治療を行わないと，続発症として急性 糸球体腎炎，リウマチ熱などを引き起こすことがある ということである．そのため，A 群溶血性レンサ球 菌 S. pyogenes による感染症を迅速かつ正確に診断す ることが重要である． A 群レンサ球菌迅速診断キット（以下，A 群迅速 診断キット）は免疫学的手法を用いた検査法で，操作 が簡便で数分間で結果を判定できるため，開業医を中 心とした外来患者の検査として普及している．わが国 では 1984 年に導入されて以降，次々と新しいキット が開発され，様々な比較検討，評価が報告されてい る１）∼６） ．しかし多くが 2 キット間の検討であるため，複 数のキットを直接比較することは困難であった． そこで今回われわれは，現在国内で入手可能な 8 社 のキットに関して，同一条件下で検出感度試験と特異 性試験を実施し，基礎的検討を行った．また S. pyo-genesの外に 1997 年 Bert ら７） が初めて報告し，わが国 でも報告がある８）９） A 群多糖体抗原を有する S. dysga-lactiae subsp. equisimilis や，従来から S. pyogenes 以外 で A 群多糖体抗原を有する菌株の存在も知られてい 原 著 別刷請求先：（〒534―0021）大阪市都島区都島本通 2 丁目 13 番 22 号 大阪市立総合医療センター中央臨床検査部 光野 典子

Table 1 Strainsevaluated source T type Hemolysis Lancefield’ sgroup Strains throat T-1 β A Streptococcuspyogenes（0304-1265） throat T-2 β A Streptococcuspyogenes（0309-610） throat T-28 β A Streptococcuspyogenes（0312-22） throat T-4 β A Streptococcuspyogenes（0406-611） throat T-12 β A Streptococcuspyogenes（0406-1254） blood β B Streptococcusagalactiae（0402-2658） throat β C Streptococcusanginosus（2003X-3） throat β F Streptococcusconstellatus（SM2004-2） throat β C Streptococcusdysgalactiaesubsp.equisimilis（2003C-V1） throat β G Streptococcusdysgalactiaesubsp.equisimilis（2003G-1） throat α A Streptococcusanginosus（SM2003-1） throat β A Streptococcusconstellatus（SM2004-1） necrosis β A Streptococcusdysgalactiaesubsp.equisimilis（2003X-1） blood β A Streptococcusdysgalactiaesubsp.equisimilis（0402-2366）

る Anginosus group（Streptococcus milleri group）と の反応性の比較も併せて検討した． 対象と方法 1．供試菌株 検出感度試験については，2003 年 4 月∼2004 年 6 月に当院小児科より提出された咽頭拭い液より検出さ れた菌株のうち，この間の主要流行菌型であった，T1， T2，T4，T12，T28 型の S. pyogenes 5 株を供試した． 特異性試験には A 群溶血性レンサ球菌以外の溶血性 レンサ球菌である臨床由来の S. agalactiae（Group B streptococcus），S. anginosus（Group C streptococ-cus），S. constellatus（Group F streptococcus）それ ぞれ 1 株，S. dysgalactiae subsp. equisimilis 2 株（Group C streptococcus 1 株および Group G streptococcus 1 株）の合計 5 株を用いた．さらに S. pyogenes 以外で A 群多糖体抗原を有する臨床由来の S. anginosus 1 株，S. constellatus 1 株，S. dysgalactiae subsp. equisimilis 2 株の合計 4 株について比較試験を実施した．供試菌 株の概要を Table 1に示した．

2．A 群迅速診断キット

イムノクロマトグラフィーを原理とするクイック ビューディップスティックストレップ A（QuickVue Dipstick Strep A，販売元：住友製薬バイオメディカ ル），ストレップ A テスト パ ッ ク・プ ラ ス（TEST-PACK Plus STREP A，販売元：ABOTT JAPAN CO.），ク リ ア ビ ュ ー ス ト レ ッ プ A（CLEAVIEW STREP A，販売元：日本シェーリング），クイック ビューストレップ A（QuickVue STREP A，販売元： 和光純薬工業），イムノカード ST ストレップ A（Im-munoCard STAT! STREP A，販売元：TFB），ディッ プ ス テ ィ ッ ク‘栄 研’ス ト レ プ ト A（DIPSTICK ‘Eiken’STREP A，販売元：栄研化学），ラピッド テスタストレップ A（Rapid Testa Strep A，販売元：

第 一 化 学 薬 品），ス タ ッ ト チ ェ ッ ク ス ト レ ッ プ A （StatCheck Strep A，販売元：カイノス）の計 8 社 のキットを使用し，取扱い説明書に従い検査を実施し た．結果判定はコントロールに対し，同程度以上の発 色を呈した場合に強陽性（＋＋），薄いが発色が認め られる場合に弱陽性（＋），痕跡程度の場合は判定不 能（＋−）とした．各キットの概要については Table 2に示した． 3．方法 1）検出感度試験：S. pyogenes 5 株をヒツジ血液寒 天培地で 37℃，20 時間，5％ 炭酸ガス培養後，滅菌 生理食塩液にて 1.0×106 ，3.0×105 ，1.0×105 ，3.0×104 ， 1.0×104 ，3.0×103 ，1.0×103_{CFU!mL の希釈系列を作} 成し，その 100µL（それぞれ 1.0×105 ，3.0×104 ，1.0× 104 ，3.0×103 ，1.0×103 ，3.0×102 ，1.0×102_CFU!test） をサンプルとした． 2）特異性試験：上記と同様に培養した A 群溶血性 レンサ球菌以外の溶血性レンサ球菌 5 株について，滅 菌生理食塩液にて 1.0×106 CFU!mL に調整し，その 100µL（1.0×105_{CFU!test）をサンプルとした．} 3） S. pyogenes 以外で A 群多糖体抗原を有する菌 の比較試験：上記と同様に培養した 4 株について，滅 菌生理食塩液にて検出感度試験と同様の希釈系列を作 成し，その 100µL をサンプルとした． 4．菌の同定 検 出 感 度 試 験 に 用 い た S. pyogenes 5 株 お よ び S. pyogenes以外で A 群多糖体抗原を有する菌 4 株，C 群および G 群 S. dysgalactiae subsp. equisimilis それぞ れ 1 株について，ラピッド ID ストレップアピ（日本 ビオメリュー）にて同定を実施した．またバシトラシ ン感受性はバシトラシンディスク‘栄研’（栄研化学） を用い，群別試験はストレプト LA「生研」（デンカ 生研）を，T 型別試験は T 型別用免疫血清「生研」（デ

Ta bl e 2 C omp ar is on o f 8 r ap id d ia gn os tic k its fo r de te ct in g gr ou p A st re pt oc oc cu s wi th immu no ch ro ma to gr ap hi ca l me th od St at C he ck St re p A （K A INOS L ab or at or ie s, In c. ） R ap id Te st a St re p A （D ai ic hi P ur e C he mi ca l C o. , L td .） DI PS TI C K E ik en ’ STR E P A （E ik en C he mi ca l C o. , L td .） Immu no C ar d STA T! STR E P A （T F B , I NC .） Qu ic k Vu e STR E P A （Wa ko P ur e C he mi ca l I nd us tr ie s, Lt d） 　 C LE AV IE W STR E P A （N ih on S ch er in g K. K. ） TE STP AC K Pl us STR E P A （A B B OTT JAP AN C o. , L td ） Qu ic k Vu e Di ps tic k St re p A （S umi to mo S ei ya ku B io me di ca l C o. , L td .） 6 7 6 6 5 7 6 6 to ta l r eq ui re d time （m in ） 1 2 1 1 ― 2 1 1 ex tr ac tio n time （m in ） 5 5 5 5 5 5 5 5 re ac tio n time （m in ） 2 2 2 2 2 3 3 2 nu mb er o f r ea ge nt s （m ix in t he a mp le ） （m ix in t he a mp le ） 25 25 20 30 10 10 20 25 pa ck in g un it（t es t） st ri p ty pe st ri p ty pe st ri p ty pe st ri p ty pe pl at e ty pe ca rd t yp e pl at e ty pe st ri p ty pe sh ap e 24 12 18 18 14 24 （8 ） 12 ex pi ra ct io n（m on th ） 2 ～3 0 15 ～3 0 2 ～3 0 2 ～3 0 ro om te mp er at ur e 2 ～3 0 2 ～3 0 1 ～3 0 st or ag e（℃） ンカ生研）を用いた． 成 績 1．検出感度試験 5 株中 3 株以上で陽性を示した最小濃度を各キット の検出感 度 と し て 判 断 し た 場 合，3.0×104_CFU!mL （3.0×103 CFU!test）まで陽性を示し，最も高感度で あったのはクイックビューディップスティックスト レップ A（4!5 株），ラピッドテスタストレップ A（4! 5 株），ストレップ A テストパック・プラス（3!5 株）， スタットチェックストレップ A（3!5 株）であった． 次 い で 1.0×105 CFU!mL（1.0×104 CFU!test）まで陽 性を示したのはクイックビューストレップ A（4!5 株），イムノカード ST ストレップ A（4!5 株），クリ アビューストレップ A（3!5 株）であった．最も低感 度であったのはディップスティック‘栄研’ストレプ ト A で，3.0×105 CFU!mL（4!5 株）まで陽性であっ た（Table 3）． 以上の検出感度試験については再現性を確認した． 2．特異性試験 A 群以外の溶血性レンサ球菌 5 株では，8 種のキッ ト は い ず れ も 1.0×106_{CFU!mL（1.0×10}5_CFU!test） において陰性であった（Table 4）． 3． S. pyogenes 以外で A 群多糖体抗原を有する溶 血性レンサ球菌の比較試験 菌株間に若干の差があったものの 3.0×104 CFU!mL （3.0×103_{CFU!test）ないし 1.0×10}5_{CFU!mL（1.0×10}4 CFU!test）以上で陽性であり，キット間の感度の違 いは検出感度試験と同様の傾向でみられた（Table 5）． 以上の検出感度試験については再現性を確認した． 4．供試菌株の性状の比較 検出感度試験に用いた A 群多糖体抗原を有する菌 9 株，また C，G 群 S. dysgalactiae subsp. equisimilis それぞれ 1 株の生化学的性状は多くの項目で同じで あったが，PYR 試験は S. pyogenes のみ陽性であり， Voges-Proskauer（VP）試験は S. anginosus ，S. constel-latusのみが陽性であった．バシトラシン試験は，す べての S. pyogenes と今回供試した A 群および G 群 S. dysgalactiaesubsp. equisimilis で陽性（sensitive）であっ た．

S. dysgalactiaesubsp. equisimilis については，多糖 体抗原の違いによる生化学的性状の差異はバシトラシ ン試験以外には認められなかった． 考 察 S. pyogenesは健康小児の咽頭からも 5∼20％ 程度 検出され１０） ，かならずしも検出感度が高いキットが臨 床上有用な検出キットであるとは判断できない可能性 がある．また患者の免疫状態，菌の病原性など，感染，

Table 3 Comparison ofsensitivity（CFU/mL）of8 rapid diagnostic kits for detecting group A streptococcus to Streptococcus pyo-genes isolated from clinicalsource

Streptococcus pyogenes（0304-1265）T-1

1×103 3×103 1×104 3×104 1×105 3×105 1×106 Name ofkit － － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ QuickVue Dipstick Strep A（Sumitomo Seiyaku BiomedicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ TESTPACK Plus STREP A（ABBOTT JAPAN Co.,Ltd）

－ － － － ＋－ ＋－ ＋＋ CLEAVIEW STREP A（Nihon Schering K.K.）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ QuickVue STREP A（Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ ImmunoCard STAT!STREP A（TFB,INC.）

－ － － － － ＋－ ＋

DIPSTICK ‘Eiken’ STREP A（Eiken ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ Rapid Testa Strep A（DaiichiPure ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ StatCheck Strep A（KAINOS Laboratories,Inc.）

Streptococcus pyogenes（0309-610）T-2

1×103 3×103 1×104 3×104 1×105 3×105 1×106 Name ofkit － － － － ＋ ＋＋ ＋＋ QuickVue Dipstick Strep A（Sumitomo Seiyaku BiomedicalCo.,Ltd.）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ TESTPACK Plus STREP A（ABBOTT JAPAN Co.,Ltd）

－ － － － － ＋－ ＋＋ CLEAVIEW STREP A（Nihon Schering K.K.）

－ － － － － ＋－ ＋＋ QuickVue STREP A（Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd）

－ － － － － ＋ ＋＋ ImmunoCard STAT!STREP A（TFB,INC.）

－ － － － － ＋－ ＋

DIPSTICK ‘Eiken’ STREP A（Eiken ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ Rapid Testa Strep A（DaiichiPure ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ StatCheck Strep A（KAINOS Laboratories,Inc.）

Streptococcus pyogenes（0312-22）T-28

1×103 3×103 1×104 3×104 1×105 3×105 1×106 Name ofkit － － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ QuickVue Dipstick Strep A（Sumitomo Seiyaku BiomedicalCo.,Ltd.）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ TESTPACK Plus STREP A（ABBOTT JAPAN Co.,Ltd）

－ － － － － ＋－ ＋

CLEAVIEW STREP A（Nihon Schering K.K.）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ QuickVue STREP A（Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ ImmunoCard STAT!STREP A（TFB,INC.）

－ － － － － － ＋ DIPSTICK ‘Eiken’ STREP A（Eiken ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － － ＋ ＋ ＋＋ Rapid Testa Strep A（DaiichiPure ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ StatCheck Strep A（KAINOS Laboratories,Inc.）

Streptococcus pyogenes（0406-611）T-4

1×103 3×103 1×104 3×104 1×105 3×105 1×106 Name ofkit － － － ＋ ＋ ＋＋ ＋＋ QuickVue Dipstick Strep A（Sumitomo Seiyaku BiomedicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ TESTPACK Plus STREP A（ABBOTT JAPAN Co.,Ltd）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ CLEAVIEW STREP A（Nihon Schering K.K.）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ QuickVue STREP A（Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd）

－ － － － ＋ ＋ ＋＋ ImmunoCard STAT!STREP A（TFB,INC.）

－ － － － － ＋－ ＋

DIPSTICK ‘Eiken’ STREP A（Eiken ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋ ＋ ＋＋ ＋＋ Rapid Testa Strep A（DaiichiPure ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ StatCheck Strep A（KAINOS Laboratories,Inc.）

Streptococcus pyogenes（0406-1254）T-12

1×103 3×103 1×104 3×104 1×105 3×105 1×106 Name ofkit － － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ QuickVue Dipstick Strep A（Sumitomo Seiyaku BiomedicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ TESTPACK Plus STREP A（ABBOTT JAPAN Co.,Ltd）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ CLEAVIEW STREP A（Nihon Schering K.K.）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ QuickVue STREP A（Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd）

－ － － ＋－ ＋ ＋ ＋＋ ImmunoCard STAT!STREP A（TFB,INC.）

－ － － － ＋－ ＋ ＋ DIPSTICK ‘Eiken’ STREP A（Eiken ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ Rapid Testa Strep A（DaiichiPure ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ StatCheck Strep A（KAINOS Laboratories,Inc.）

unit：CFU（colony forming unit） /ml ＋＋：Strong-positive

＋：Positive

＋－：The trace at the test band position were observed －：Negative

Ta bl e 4 R ea ct io n of t he e va lu tio n of β -h emo ly tic s tr ep to co cc al s tr ai ns o th er t ha n G ro up A st re pt oc oc cu s（1 ×1 0 6 C F U/ mL ）w ith 8 r ap id d ia gn os tic k its fo r de te ct in g gr ou p A st re pt oc oc cu s St at C he ck St re p A （K A INOS La bo ra to ri es , In c. ） R ap id Te st a St re p A （D ai ic hi P ur e C he mi ca l C o. , L td .） DI PS TI C K E ik en ’ STR E P A （E ik en C he mi -ca l C o. , L td .） Immu no C ar d STA T! STR E P A （T F B , I NC .） Qu ic k Vu e STR E P A （Wa ko P ur e C he mi ca l I nd us tr ie s, Lt d） C LE AV IE W STR E P A （ N ih on S ch er in g K . K .） TE STP AC K Pl us STR E P A （A B B OTT JA-PAN C o. , L td ） Qu ic k Vu e Di ps tic k St re p A （ Su mi to mo S ei ya ku B io me di ca l C o. , Lt d. ） Sp ec ie s（S tr ai n No ） － － － － － － － － St re pt oc oc cu s ag al ac tia e（G ro up B s tr ep to co cc i）（0 40 2-26 58 ） － － － － － － － － St re pt oc oc cu s an gi no su s（G ro up C s tr ep to co cc i）（2 00 3X -3 ） － － － － － － － － St re pt oc oc cu s co ns te lla tu s（G ro up F s tr ep to co cc i）（S M2 00 4-2） － － － － － － － － St re pt oc oc cu s dy sg al ac tia e su bs p. eq ui simi lis（G ro up C s tr ep to co cc i）（2 00 3C -V 1） － － － － － － － － St re pt oc oc cu s dy sg al ac tia e su bs p. eq ui simi lis（G ro up G s tr ep to co cc i）（2 00 3G -1 ） －：N eg at iv e 発症には多くの要因が関与するため，どれほどの検出 感度が適切であるか断定することはかなり困難であ る．しかし一般的に咽頭炎を発症する菌量は 1.0×105 CFU!mL と考えられているため，少なくともこの濃 度で陽性となることは臨床上必要と考えられる．これ を基準とすると，今回の検出感度試験において，すべ て の 菌 株 で 1.0×105_{CFU!mL（1.0×10}4_{CFU!test）ま} で検出されたのは，クイックビューディップスティッ クストレップ A，テストパック・プラスストレップ A，ラピッドテスタ ストレップ A，スタットチェッ ク ストレップ A の 4 キットであった．これら検出 感度は，すでに報告されている成績と同様の結果で あった１）∼６） ．S. pyogenes については T 型別の違いによ り感度に若干の差を認めたが，これは A 群多糖体抗 原の量に関わるものと思われる．しかしながら T 型 別と A 群多糖体抗原量との関連についてはほとんど 検討されていないので，詳細は不明である．ただ，こ れら 4 キットの場合，いずれの株に対しても 1.0×104 CFU!mL（1.0×103_{CFU!test）以下で陽性を示したも} のはなく再現性も認められるので，感度的に健常者レ ベルで偽陽性となる可能性は低いと考えられる． A 群迅速診断キットは，以前はラテックス凝集法 が主流であったが，現在は検出感度や操作性，反応時 間など様々な面で優れているイムノクロマトグラ フィー法が採用されている．今回検討を行った 8 種の キットも，すべてイムノクロマトグラフィー法であり， いずれのキットも抽出時間と反応時間を合わせても 5 分から 7 分で判定でき，検査開始から 10 分以内とい う短時間で診断が可能である．また 12 カ月以上室温 での保存が可能であり，包装単位も 10∼30 検体と少 なく，コンパクトである．しかしながら，形状がプレー ト型のストレップ A テストパック・プラスおよびク イックビューストレップ A，カード型のクリアビュー ストレップ A は，他のストリップ型に比べ廃棄物の 量がやや多い．これらのことも考慮し，各施設に適し たキットを選択する必要があると考えられる． Lancefield はレンサ球菌を菌体細胞壁に由来する C 多糖体の抗原性の相違に基づく血清学的分類法により 20 群に分類したが１１） ，この分類の多くは 1 つの群に分 類されるのが 1 菌種というわけではなく，複数の菌種 がその群に分類されることが知られている．臨床由来 の A 群多糖体抗原を有する溶血性レンサ球菌はヒト への病原性，分離頻度などから S. pyogenes が大部分 を占め，A 群溶血性レンサ球菌といえば S. pyogenes と考えられてきた．しかし実際は S. pyogenes 以外に も Anginosus group の一部が A 群多糖体抗原を保有 し，更に従来 C 群もしくは G 群を保有するとされて いた S. dysgalactiae subsp. equisimilis の中にも A 群を

Table 5 Comparison ofsensitivity of8 rapid diagnostickitsfordetecting group A streptococcusto Group A streptococcusother than Streptococcuspyogenesisolated from clinicalsource

Streptococcusanginosus（SM2003-1） 1×103 3×103 1×104 3×104 1×105 3×105 1×106 Name ofkit － － － － ＋－ ＋＋ ＋＋ QuickVue Dipstick Strep A（Sumitomo Seiyaku BiomedicalCo.,Ltd.）

－ － － － ＋－ ＋＋ ＋＋ TESTPACK PlusSTREP A（ABBOTT JAPAN Co.,Ltd）

－ － － － － ＋ ＋＋ CLEAVIEW STREP A（Nihon Schering K.K.）

－ － － － ＋－ ＋＋ ＋＋ QuickVue STREP A（Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd）

－ － － － ＋－ ＋＋ ＋＋ ImmunoCard STAT!STREP A（TFB,INC.）

－ － － － － ＋ ＋＋ DIPSTICK ‘Eiken’ STREP A（Eiken ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ Rapid Testa Strep A（DaiichiPure ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ StatCheck Strep A（KAINOS Laboratories,Inc.）

Streptococcusconstellatus（SM2004-1） 1×103 3×103 1×104 3×104 1×105 3×105 1×106 Name ofkit － － － － ＋ ＋＋ ＋＋ QuickVue Dipstick Strep A（Sumitomo Seiyaku BiomedicalCo.,Ltd.）

－ － － － ＋ ＋ ＋＋ TESTPACK PlusSTREP A（ABBOTT JAPAN Co.,Ltd）

－ － － － － ＋ ＋＋ CLEAVIEW STREP A（Nihon Schering K.K.）

－ － － － ＋－ ＋ ＋＋ QuickVue STREP A（Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd）

－ － － － ＋ ＋＋ ＋＋ ImmunoCard STAT!STREP A（TFB,INC.）

－ － － － － ＋ ＋＋ DIPSTICK ‘Eiken’ STREP A（Eiken ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － － ＋ ＋＋ ＋＋ Rapid Testa Strep A（DaiichiPure ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － － ＋ ＋＋ ＋＋ StatCheck Strep A（KAINOS Laboratories,Inc.）

Streptococcusdysgalactiaesubsp.equisimilis（2003X-1） 1×103 3×103 1×104 3×104 1×105 3×105 1×106 Name ofkit － － － ＋－ ＋＋ ＋＋ ＋＋ QuickVue Dipstick Strep A（Sumitomo Seiyaku BiomedicalCo.,Ltd.）

－ － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ TESTPACK PlusSTREP A（ABBOTT JAPAN Co.,Ltd）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ CLEAVIEW STREP A（Nihon Schering K.K.）

－ － － ＋－ ＋ ＋ ＋＋ QuickVue STREP A（Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ ImmunoCard STAT!STREP A（TFB,INC.）

－ － － － ＋－ ＋＋ ＋＋ DIPSTICK ‘Eiken’ STREP A（Eiken ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ Rapid Testa Strep A（DaiichiPure ChemicalCo.,Ltd.）

－ － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ StatCheck Strep A（KAINOS Laboratories,Inc.）

Streptococcusdysgalactiaesubsp.equisimilis（0402-2366） 1×103 3×103 1×104 3×104 1×105 3×105 1×106 Name ofkit － － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ QuickVue Dipstick Strep A（Sumitomo Seiyaku BiomedicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋ ＋ ＋＋ ＋＋ TESTPACK PlusSTREP A（ABBOTT JAPAN Co.,Ltd）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ CLEAVIEW STREP A（Nihon Schering K.K.）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ QuickVue STREP A（Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ ImmunoCard STAT!STREP A（TFB,INC.）

－ － － ＋－ ＋－ ＋ ＋ DIPSTICK ‘Eiken’ STREP A（Eiken ChemicalCo.,Ltd.）

－ － ＋－ ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ Rapid Testa Strep A（DaiichiPure ChemicalCo.,Ltd.）

－ － － ＋－ ＋ ＋＋ ＋＋ StatCheck Strep A（KAINOS Laboratories,Inc.）

unit：CFU/ml ＋＋：Strong-positive

＋：Positive

＋－：The trace atthe testband position were observed －：Negative 保有する菌株が存在することが，共同研究者の勝川ら を始め７） 近年次々と明らかにされてきている８）９）１２） ． A 群迅速診断キットはその名の示すとおり，A 群 多糖体抗原をターゲットとした免疫学的検査法であ り，S. pyogenes 以外の A 群多糖体抗原を有する菌も 陽性反応を呈すると考えられる．今回の比較試験にお いても，A 群多糖体抗原を有する Anginosus group および S. dysgalactiae subsp. equisimilis のすべての菌 株において，S. pyogenes と同程度の検出感度を認め た．このことは本キットの偽陽性に繋がると考えられ

る．実際，今回比較実験に用いた Anginosus group 2 株は，A 群迅速診断キットにて陽性であり，培養で は S. pyogenes が認められなかった咽頭拭い液から分 離されている．またレンサ球菌以外でも，ある Neisse-ria 属で A 群多糖体抗原を有することが報告されてい る１）_． 小児の細菌性咽頭炎の原因菌は S. pyogenes が多く を占めるため，咽頭拭い液を 5％ 炭酸ガス培養し，ヒ ツジ血液寒天培地上でβ 溶血を示すバシトラシン試 験陽性の比較的大きなコロニーのレンサ球菌を見つ け，A 群多糖体抗原を有していることを確認すれば， S. pyogenesと同定しても問題はなかった．しかし A 群多糖体抗原を有する S. dysgalactiae subsp. equisimilis の存在が明らかとなり，誤った同定をしてしまう可 能性がでてきた．今回供試した A 群 S. dysgalactiae subsp. equisimilis は，ヒツジ血液寒天培地上で S. pyo-genesとよく似たコロニーを形成し，βGUR，RIB，PYR を除き，生化学的性状もほぼ同じであった．さらに S. pyogenesのスクリーニングに使用されるバシトラシン 試験も陽性であった．バシトラシン試験については， G 群の 15∼55％ が陽性と言われていることから１）１３） ，A 群 S. dysgalactiae subsp. equisimilis も G 群 S. dysgalac-tiae subsp. equisimilis と同程度の陽性率であると考え られる．

共同研究者の勝川ら８）

は，A 群 S. dysgalactiae subsp. equisimilisは emm 型別 stg 485 であり，これは G 群が 保有するとされているため，G 群の細胞壁多糖体を作 る遺伝子の変異により発生したと推測している．また Kalia ら１４） は S. pyogenes のある大きな DNA 断片 が G 群菌の染色体 DNA に移動し，その結果 G 群菌のゲノ ムが A 群菌の DNA と本来 G 群菌が持っていた DNA とのモザイク状に変化したものと推定している．従っ て，このモザイク状化した S. dysgalactiae subsp. equisi-milisの中に A 群抗原を持つものが出現したという推 定も可能である．微生物検査技師などからは迅速診断 キットで A 群陽性であったのに，同時に採取された 咽頭拭い液の培養で S. pyogenes が検出されないとい う声をよく耳にするが，同定に際しては以上の点を念 頭に置き，少なくとも PYR などの生化学的性状によ り菌種を確認することが必要である． C，G 群溶血性レンサ球菌については，以前よりス トレプトリジン O（SLO）を産生する菌が存在するこ とが知られており，著者らも以前報告した１５） ．又稀で はあるが猩紅熱を惹き起こす例があることも報告され ている１６） ．更に近年 G 群レンサ球菌による劇症型レン サ球菌感染症が増加している１７） ．則本ら１８） は G 群レン サ球菌による劇症型レンサ球菌感染症で先行して咽頭 拭い液からレンサ球菌を検出したと報告しているが， 一般的に侵入門戸の一つとして咽頭も挙げられてい る．わが国では今のところ G 群レンサ球菌による劇 症型レンサ球菌感染症の殆どが S. dysgalactiae subsp. equisimilisと考えられる１９） が，このように本菌は従来 考えられていた以上に重篤な感染症の起炎菌と見られ る．A 群 S. dysgalactiae subsp. equisimilis の浸淫度は

かなり広い範囲に広がっているものと見られ８） ，本菌 の咽頭からの検出も意義があるものと考える． Anginosus group はβ 溶血するものもあり，膿瘍形 成性疾患の原因菌として，また市中肺炎など呼吸器感 染症の起炎菌としても注目されている２０） ．また少数で はあるが上気道炎の原因菌としても報告されてい る２１） ． 以上のことから，A 群迅速診断キットの使用に際 しては，S. pyogenes 以外にも A 群多糖体抗原を有す る菌が存在することを念頭において検査を行う必要が あると思われる． また最後にメーカーの添付文書についても内容の変 更を求めたい．今回検討した 8 社のメーカーの添付文 書は 2001 年 1 月から 2005 年 7 月の間に改訂されたも のであるが，S. pyogenes 以外にも A 群多糖体抗原を 有する菌が存在し，本キットに陽性を示すことについ ては言及していない．A 群多糖体抗原を持つβ 溶血 性レンサ球菌が数菌種存在することはこれらの添付文 書の改訂時期より以前に判明している訳であるから， 当然この点について文面で言及するべきである． 前述したとおり，こうした添付文書の不備などが微 生物検査技師やその報告を受ける医師の間に時として 混乱を招いている状況があり，添付文書の改善並びに 改訂のため必要な追加検査などの早急な実施を望みた い． 文 献 1）保科 清，都もと子，小野正恵，鈴木敦子：ク リアビューストレップ A による A 群溶連菌抗原 迅速診断の有用性に関する検討．小児科臨床 1995；48：2275―8. 2）保科 清：A 群溶連菌抗原検出法．臨床と微生 物 1995；22：683―6. 3）藤川 敏，武谷広子：新しい A 群レンサ球菌迅 速診断キット CREARVIEW STREP A の臨床的 検討．小児内科 1995；27：1691―4. 4）甲田雅一，宇田川郁子，福原敦子，竹内美香，田 村恵子，松崎廣子： Streptococcus pyogenes（A 群 レ ン サ 球 菌）迅 速 診 断 キ ッ ト と し て の ク リ ア ビュー・ストレップ A の評価．臨床と微生物 1997；24：365―9. 5）藤田之彦，岡田知雄，荒川千賀子，高橋秀夫，武 隈孝治，河島尚志，他：Immunochromatographic assay（スタットチェック ストレップ A）に よる A 群β レンサ球菌抗原迅速検出法の検討．医 学と薬学 2003；50：347―51.

6）川上小夜子，斧 康雄，柳川幸重，宮澤幸久： 免疫クロマグラフィー法による新規 A 群溶血性 レンサ球菌抗原迅速検出キットの基礎的，臨床 的性能評価．JARMAM 2003；14：9―16. 7）Bert F, Lambert-Zechovsky N：Analysis of a

case of recurrent bacteraemia due to group A

Streptococcus equisimilis by pulsed-field gel elec-trophoresis. Infection 1997；25：250―1. 8）勝 川 千 尋，田 丸 亜 貴，森 川 嘉 郎：Lancefield の A 群 抗 原 を 保 有 す る Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis ．感染症誌 2002；76：155― 60. 9）下島優香子，遠藤美代子，奥野ルミ，向川 純， 村田 以 和 夫，諸 角 聖：Lancefield 血 清 型 A 群 抗 原 を 持 つ Streptococcus dysgalactiae subsp.

equisimilis．日細菌誌 2002；57：221.

10）奥山道子，下山洋子，中島邦夫：大阪市内 1 小 学校の健康学童の咽頭分離溶血性レンサ球菌（A， B，C，G 群）の 長 期 的 観 察（1980∼1992 年）． 感染症誌 1994；68：656―64.

11）Lancefield R.C．：A serological differentiation of human and other groups of hemolytic strepto-cocci. J Exp Med 1933；57：571―95.

12）Claudia M.B, Gerhard H, Norbert S, Reinhard Z, Rudolf L：Characterization of blood culture iso-lates of Streptococcus dysgalactiae subsp.

equisi-milis possessing Lancefield s group A antigen. Journal of Clinical Microbiology 1999；37： 4194―7.

13）福原淳子，甲田雅一，宇田川郁子，小林準一，松 崎廣子：A 群溶血連鎖球菌スクリーニング法と してのバシトラシン感受性試験の信頼性．臨床 検査 1995；39：1099―101.

14）Kalia A, Enright MC, Spratt BG, Bessen DA： Directional gene movement from human-pathogenic to commensal-like Streptococci. In-fect. Immun 2001；69：4858―69. 15）奥山道子，下山洋子，中島邦夫，八田宏之，奥 田 清：健康学童における咽頭溶血性レンサ球 菌の保菌状況と血清抗体値との関係について．感 染症誌 1989；63：1231―43. 16）児玉博英，城野 晃，田中英子，小島良平，久 保田憲太郎，猿倉玲子：G 群溶連菌による猩紅 熱とその感染経路について．日公衛誌 1972； 19：299. 17）第 26 回衛生微生物技術協議会溶血性レンサ球菌 レファレンスセンター会議資料．：2005 年 7 月. 18）則本和伸，稲田有史，横山貴司，植山 徹，山 本広光，野上恵嗣，他：G 群溶連菌による上喉 頭炎により TSLS（Toxic Shock-Like Syndrome） 症状を呈し死亡した 1 例．日臨救医誌 2002； 5：237.

19）Hasikawa S, Iinuma Y, Furushita M, Ohkura T, Nada T, Torii K, et al.：Characteri-zation of group C and G streptococcal strains that cause Streptococcal Toxic Shock Syndrome. J Clin Mi-crobiol 2004；42：186―92.

20）藤木 玲，川山智隆，力丸 徹，大泉耕太郎：3 年間における Streptococcus milleri group 呼吸 器 感 染 症 の 臨 床 検 討．感 染 症 誌 2002；76： 174―9.

21）山城 哲：“ Streptococcus milleri group”の呼吸 器感染症における臨床的意義に関する研究．感 染症誌 1991；65：1419―28.

Evaluation of Rapid Diagnostic Kits for the Detection of Group A Streptococcus to Streptococcus pyogenesand Streptococcus spp. with Lancefield s Group A Antigen Noriko MITSUNO１） , Tomohiro HARI１） , Nobuyoshi TAMAGAWA１） , Juichi ITOI１） , Eiji IKEDA１） , Kazuko HAMASAKI１） , Chihiro KATSUKAWA２）

& Michiko OKUYAMA１） 1)_{Department of Clinical Laboratory, Osaka-City General Hospital,}

2)_{Department of Microbiology, Osaka Prefectural Institute of Public Health}

We studied the basic performance of eight rapid diagnostic kits for the detection of Group A streptococ-cus by immunochromatography under the same conditions. Kits were the ; QuickVue Dipstick Strep A (Su-mitomo Seiyaku Biomedical Co., Ltd.), TESTPACK Plus STREP A (ABBOTT JAPAN Co., Ltd), CLEAVIEW STREP A (Nihon Schering K. K.), QuickVue STREP A (Wako Pure Chemical Industries, Ltd), ImmunoCard STAT! STREP A (TFB, INC.), DIPSTICK Eiken STREP A (Eiken Chemical Co., Ltd.), Rapid Testa Strep A (Daiichi Pure Chemical Co., Ltd.), and StatCheck Strep A (KAINOS Laboratories, Inc.).

Four of these kits, i.e. QuickVue Dipstick Strep A, TESTPACK Plus STREP A, Rapid Testa Strep A, and StatCheck Strep A showed sensitivity at 1.0 105_{CFU!mL (1.0 10}4_{CFU!test) with all of S. pyogenes tested,}

while the Anginosus group and S. dysgalactiae subsp. equisimilis with Lancefield’s group A antigen showed sensitivity very similar to S. pyogenes.

Of these strains, S. dysgalactiae subsp. equisimilis formed a β-hemolytic colony resembling that of S. pyo-geneson sheep blood agar, and was sensitive to bacitracin. It is thus indispensable to identify the colony us-ing biochemical tests such as the PYR (pyrrolidonylarylamidase production) test.

In using rapid diagnostic kits for the detection of Group A streptococcus, it is important to rule out the possibility of Group A streptococcus other than S. pyogenes in throats.

Severe invasive group-G streptococcal infections are increasing recently. Concerning S. dysgalactiae subsp. equisimilis, it is especially important to conduct these identification tests.