家兎角膜上皮培養細胞の単純ヘルペスウイルス感染に及ぼすヒトインターフェロンβの効果

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オオ ニシ ユウ 氏名(生年月日〉 本 籍 学 位 の 種 類 学位授与の番号 学位授与の日付 学位授与の要件 学 位 論 文 題 目

大 西

裕 子 ( 医学博士 乙第661 号 昭和

5

9

年

5

月18 日 学位規則第

5

条第

2

項該当(博士の学位論文提出者〉 家 兎 角 膜 上 皮 培 養 細 胞 の 単 純 へ ル ペ ス ウ イ ル ス 感 染 に 及 ぼ す ヒ ト イ ン タ ー フ ェ ロ ンβ の 効 果 論 文 審 査 委 員 ( 主 査 〉 教 授 内 田 幸 男 ( 副 査 〉 教 授 吉 岡 守 正 ， 教 授 石 津 澄 子

論 文 内 容 の 要 旨

研究目的 最近， ヒト細胞由来のインターフエロン(I FN) の量 産が進み，純度の高い製品が得られるようになった. これに伴って臨床への応用として，本格的な治療試験 が行なわれつつある.眼科領域では，単純ヘルベス角 膜炎は薬物の点眼による病巣の変化が評価されやすい ことから， IFN の臨床試験に適した疾患である.基礎 実験として，家兎の実験的単純ヘルベス角膜炎におい て，病巣の拡大をヒト IFN 点眼が抑えるという報告が ある.種特異性を越えたこの現象が事実か否かを ni v i t r o でしらベた.すながち培養した家兎角膜上皮細胞 と単純へルペスウイルス (HSV) の系に及ぼすヒト I F N -β の影響を検討した.また IFN の効果は用いる 細胞とウイルスの組合せによって異なるとされるの で， 2， 3のヒトおよびウサギの細胞を比較対照として おいた 材料と方法 1.家兎角膜上皮細胞:体重

2kg

前後の幼若家兎を 屠殺後，摘出した眼球から角膜表層組織を採取して細 切した.この組織片とマルチプレートまたはチェン パースライドに植えた. 10% 仔牛血清加MEM 培地を 加え， 5 %C0 2下3C7" で培養し，単層培養を得た. 2 . 株細胞:継代歴を異にする 2種の HeLa-S3' FL およびウサギ腎由来のRK 13細胞を用いた. 3 . ウ イ ル ス : 樹 枝 状 角 膜 炎 の 病 巣 か ら 分 離 し た HSV-I 型を用いた. 4 . インターフエロン:東レ基礎研究所製ヒト IFN-βで，力価1. 0X10 6_{IU/ パイアル，比活性1. 0X10} 7_IU/ mg タンパクである. 5 . 50% 細胞変性効果法:単層培養の各細胞に IFN 希釈液を6時間または61 時間作用させたのち， HSV を1時間接触させ，細胞変性効果(CP むを観察した. CPE を50% に起こすIFN の濃度を求めた. 6 . 蛍光抗体法:前記の方法と同じく各細胞を IFN で処理し， HSV を接種した7時間後にとり出し，抗 HSV ウサギ蛍光標識抗体と反応させた.蛍光顕微鏡 下で特異蛍光を放っ細胞からなるusfoc を数えた.こ の値をIFN 処理と非処理の聞で比較し，感染ocusf 形 成の50% 阻止濃度を求めた. 結果 CPE 50法において，家兎角膜上皮細胞と RK 13細胞で、

はともに5000IU/ml であり， HeLa 細 胞 で は8000IU/

ml であった. FL 細胞で、は80IU/ml と低い濃度であっ

た

蛍光抗体法においては， IFN 処理による感染50% 阻

止は家兎角膜上皮細胞で、は5500IU/ml ，RK 13細胞と

HeLa 細胞ではそれぞれ， 5300IU/ml ， 8000IU/ml で

あった. IFN による前処理は6時間， 61時間とも同程度の抗 ウイルス効果を生じ特に差は認めなかった. 結語 IFN の作用の特徴は種特異性とされるが，ときに種 を越えることがある.本研究で家兎角膜上皮細胞への HSV 感染に対して， ヒトβFN-I のウイルス増殖抑制

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効果を認めた.効果は角膜に特徴的というのではなく， 家兎腎細胞由来のRK'3 細胞におけると同程度であっ た.またヒト羊膜由来の

FL

細胞では効果はすぐれ，

HeLa

細胞では効果は低く，大きな差があった. 以 上 の 結 果 は 家 兎 の 角 膜 へ ル ベ ス に 対 す る ヒ ト IFN 田βの点般の効果を支持するものであると考えた.

論 文 審 査 の 要 旨

本 論 文 は ヒ ト 線 維 芽 細 胞 由 来 の イ ン タ ー フ エ ロ ン が ， 培 養 し た ウ サ ギ 角 膜 上 皮 細 胞 に お け る 単 純 ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス の 増 殖 を 抑 制 す る 種 々 の 条 件 を 解 明 し た も の で あ り ， イ ン タ ー フ エ ロ ン の 角 膜 ヘ ル ベ ス 治 療 へ の 応 用 の 基 礎 と な る 学 術 上 価 値 あ る 論 文 と 認 め る . 主論文公表誌 家兎角膜上皮培養細胞の単純へルベスウイルス感染 に及ぼすヒトインターフエロンの効果 日 本 眼 科 学 会 雑 誌 第

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巻 第

3

号

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頁(昭和

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日発行〉 副論文公表誌 1)ヘルベス性角膜炎に対するヒト線維芽細胞イン ターフエロン点眼の臨床成績 一一IDU 点 眼 剤 と の 比 較 試 験 一 眼臨

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2 ) ヒト線維芽細胞インターフエロンの流行性角膜 炎に対する臨床効果 一一二重富検法による群間比較試験一一 眼臨

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(皮疹のない眼部帯状ヘルベス)

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結膜の展望一一

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年度一一 根科

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外眼部感染症に対する

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点眼液の効果 と至適濃度の検討 眼臨

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点眼液の細菌性外眼部感染症に対す る有効性，有用性の三重盲検法による研究 臨眼

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点目艮液の細菌 性外眼部感染症に対する効果 眼紀

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の細菌性角膜潰蕩(膿蕩〉などに対 する基礎的，臨床的検討 眼臨

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9 ) 眼球内悪性黒色腫の1例，診断上の問題点 臨眼

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乳頭血管炎と思われる

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症例について 眼臨

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