関 す 研究 産生 管 オ 高 け 壁 実験 血圧 ト 血

金 沢 大学 十 全 医 学 会雑 誌 第9 8巻 第1 号 _{3 卜 4 7} く1 9 8 9フ

実 験高血 圧ラ ッ トにおける血管^{壁アン ジ}オテン シ ^ン H 産 生 ^に 関 す ^る 研 究

一 腸 間 膜 動 脈濯 流系に おける検討 ^一

金沢^大学 内科 学 第二講 座く宅任こ竹田亮 祐 教 授I

松 原 隆 夫

く平成¹ 年1 月1 8 日受 付I

血 管壁^{レニ ン ー} ア^ンジ オ テン シ ンくr e nin⁻a ngiot_{e n s}in，R⁻AI 系^の血圧調 節^に果た す役 割を解 明す る目 的で， 各種 実験 高血 圧 ラ ット を 用^い た腸 間 膜 動 脈 濯 流 実 験において． 血管 壁アンジ オ テ^{ン シ ン} く^{a n}giote n sin， A N GI H塵 生を検 討し た一 さ らに_， アンジ オ テン シ ンI 変 換 酵素 阻害 剤 く^{a n}gi ote n sin I

C O n V e rting e n zym einhi bito r， A C E Iい^か， 血管 壁 A N G II 魔 性に及ぼ す効 果^につ いて も検 討し た^． 検体 は， A N G H の特 異 抗 体を用^いた， 高感 度^ラジ オ イム ノアッセイ法^にて測 定し， 検 体^{の 一} 部は． 高速 液 体ク^{ロ マ} ト グ ラフ ィ ^ー法^にて同 定し た^． 両 側 腎 摘 出 く^{n e}phr e ctomi z ed r at_， Ne x巨評で は． 血 焚^{レニ ン}活

性 くpla s ma r e nin a cti vit y，P R AJ， 血 祭A N G II が著 明^に抑 制さ れて い たにも か か わ ら ず， 血 管 壁

A N G II は， 5 5 ．6 士9 ．3_{p g}lhく平 均 値土樽 準誤 割 と^コ ント^{ロ ー} ル群と同 程 度に産 生さ れ ていた． ま た，

A C EI 投 与^によっ て， 血 圧は1 4 2 士1 2m m H _g か ら1 0 1士 7 m m H g と有 意^に低 下しくp く0 ^．0 1l， 血 管 壁 A N G II 産 生も1 9⁻5 士5．5p glh と有 意に抑 制さ れ たくp く0^．0 11^． デ オ キ^{シコル チコス}テ^{ロ ン}食 墟 高 血 圧 く^{de o x}yc o rtic o ste r o n e a c etate⁻tr e ated r at，D O C封 群で は， P R A ， 血 祭ア^ルド^ステ^ロ ン洩 度 くpla s m a

a

l do ste r o n e c o n c e ntr atio n，P A Cl と共^に． 血 管壁A N G II 産 生も減 少し て^お り， A C E l 投与^にて も有 意な降圧効 果は認め ら れ な か^った^． 糖 質^コルチコイ ド高血圧 くde x am etha s o n e⁻tr e ated r at， De xI 群で は， P R A， 血 祭 A N G H 濃 度^は著 明^に増加し て^いた が， 血 管 壁 A N G II 産 生は む し ろ抑 制^{さ れ てい} た． ま た，． Ac E I 投与^にて有 意な降 圧 効 果が認め ら れ た^■ ま た， 外 因 性の^エ ンド^セリ^ンく^{e n}dothelin，

E TJ ^によ る昇圧 反応を， 摘 出し た腸 間膜 動脈を 用^いて検 討し た ところ， 用 量依 存 性^に E T によ る昇圧 反 応が増 大し， E T の血管 収縮 作用 は A N G II よ り強 力で あ^った^． ま た，E T によ る昇圧 反応は^，A N G II ア ナ^ログくA N G II a n alogu e ニA II A l によって も抑 制さ れ な か^っ た^． 以 上 の結 果よ り， 血管 壁^{に お い}て も A N G II が産 生さ れ ている^こと が 示 さ れ， Ne x 群^では， そ の昇圧機 構^に， 血管 壁 ^{R −A} 系が関 与し て^い る^こと が 示唆さ れ た^一 ま た， 血 管 壁 R⁻A 系は， 腎R−^{A 系と は独立 し て}機 能し てし¹ること が 示 さ れ， 生 体 内の血圧調 節 機 構^のひ とつと し て重 要な役 割を担^{って い}る^こと が推 察さ れ た． さ らに_， A C E工 は， 腎 R⁻A 系の みな らず血管壁 R⁻A 系に対し て も抑 制効 果を有す る^こと が 示唆さ れ た^． ま た， E T は A N G H よ り強^い血 管 収 縮 作 用を有し て^いること が 示 さ れ た^． し か し な が ら， 受 容 体^{レ ベル で の} A N G 工I との

相互作用 は少な く， かつ外 因 性^の E T 投 与によ る 血管 収縮反応^には， 血管 壁R⁻A 系^の関 与は少な^{い こ} と が推 察さ れ た．

K ey ^{w or}ds v a s c ul_{a r} r e nin^．a ngi ^{ote n sin s}y^ste m

， e Xp^{e r}im e ntal h_{y p}e rte n sio n r at， a ngi ^{ote n sin I} c o n v e rting ^{e n z}y^{m e}， e ndothelin

3 5

A b br e v atio n s 二A II A ， a ngi ^{ote n sin II a n alo}g^{u e}三A C E ， a ngi ^{ote n sin I} c o n v e rting ^{e n z}y^{m e} i A C E I_， a ngi ^{ote n sin I} c o n v e rtin _g e n zy^{m e} inhib ito ri A N G， a ngiote n sinニ B K ， br ad_yk inini D e x_， de x a m etha s o n e三 D O C A_， de o xy^{c o r}tic o ste r o n e a c etateニ E T ， e nd oth el in _i H P L C，

3 6

腎^の傍 系 球体 細胞で合成さ れ る^{レ ニ} ンは， 血 中^に分 泌さ れ る と主に肝で生 成さ れ る ア^ンジ オ テ^{ン シ}ノ ^ー ゲ ンく^{レ ニ ン}基 質1 を加 水 分 解し， ア^ンジ オ テ ^{ン シ ン} くa ngi ot．^{e n sin， A N GI I を産 生す る− A N G I は， 肺，} 乳 前 立 臥 脳な ど^に存 在す る アンジ オ テ^{ン シ ン}エ変 換 酵 素 くa ngiot_{e n s}in I c o n v e rting e n zy^{m e}，A C El ^に ょ り． C 末 端か ら^{ヒ ス}チ ジン^一口 イ シ ン の ジペプ チ ド を遊 離し， オ ク 夕^べ プ チ ド である A N G H に変 換さ れ る． さ ら^に． A N G l王 は， 血 管， 腎， 副 腎， 心 な ど^に 働き， 血 管収 縮， ア^ルド^ステ^ロ ン生 合 成 促 進， プ^{ロ ス} タグラ^ンデイ ン合 成 刺 激 等^の， 種^{々 の}生理作 用を有す ること が知ら れ て^いる^{． こ}の よ う な古 典 的な循 環ホ^ル モ ン系と し て の^{レニ ンー}ア^ンジ オ テ^{ン シ ン}く^{r e n}in^．a ngi⁻

ote n sin，R⁻Al 系^に加え て， 近 軋 腎以外^に R⁻A 系の

各構成^{要 素が存 在す ること が確 認さ れ，}

L −

pa r a c rin e^，，， L L

a uto c rin e

，，と して作用して^tlる可能 性が 示唆され て^いる．

まず， 腎外^{レ ニ ン に}関しては， 以 前よ り， 多くの組 織^{に レニ ン}様 活 性が認め ら れ る^こと が知ら れ て^い た が， 其の^{レニ ン}である か， カ テ プ^{シ ン}D な ど の類似し た作用 を有す る非 特 異 的^プロ テ ア ^ー ゼ活 性な のか_， 両 者の分 離， 同定が困 難で あっ た^■ そ の後， アフ ィ ^ニ ティ ^ー ク^ロマ ト グ ラ^{フ ィ の}応 札 ^モノ ク^{ロ ー} ナ^ル抗 体 の開発^1l， レニ ンの精 製^2一によ り， レ ^ニンの特 異 的な同 定が可 能と な り， 直 接 的ラ ジ オ イ^{ム ノ}アッセイ法や免 疫 組 織 化 学 的 方 法^{な ど を}用^い ， レ ニ ン の主 要 産 生 部 位 である乳 顎 下 腺の軋 脳， 下 垂体 前 葉， 甲 状 臥 前 立 臥 副 腎， 精 巣， 大 動 脱 腸 間 膜 動 脈^針サ等の組 織^に

レニ ンが存 在す る^こと が確 認さ れ た^一 さ らに_， 遺 伝子 工学の発 展に よ り， レ ニ ン m e S S e nge r R N A くm R⁻ N Al．^{も， 脳， 副 腎， 心， 精 巣， 卵 巣， 顎 下 駄 血管} 壁^刀8Iにて同定さ れ， 腎 外組 織で^レニ ンが産 生さ れ てい る^こと が明らかと な ^った^． ま た， A N G の唯^一 の前 駆 体である アンジ オ テ^{ン シ}ノ ^ー ゲン に お い ても ^m R N A が， 肝以外^の， 腎， 副 腎， 脳， 脊 臥 大 動 脈， 腸 間膜 動 脈， 心房， 臥 胃， 脾， 大 腸， 卵 巣^に同定さ れて い る^9，川． A C E は， 主に肺血管 内 皮細 胞に局 在し ている が^{1 1l，}肺 以 外^にも， 大 動 脈， 腎 動 脈， 腸 間 膜 動 脈， 腎 皮 質， 脳な どに存 在す る^こと が， イ ヌ， サ^ル， 家 軋 ^ヒ ト の組 織^{に お い}て証 明さ れ^{て い}る^{1 2 ，．} A N G に関し て も， 脳， 副 腎， 腫 瘍 組 織な ど^{1 3川 ，} お よ び血 管 壁^に存 在し て^いること が， ウ^シ大 動 脈 内 皮 細胞 培 養^{によ る}検 討^にて証 明さ れ て^いる^{1 6−．} し か し な が ら， 組 織 R⁻A 系

原

の調 節 機 構や 生 理作用に関し て は未だ充 分^に解 明さ れ て お らず， 腎 R^．A 系と関 連^{に つ い}て も不 明な点が多

い ．

一方， A N G 工I の生 理作用^の代 表 的な もの の ひ と っ に血 管 平 滑筋 収 縮 作 用^{が あ}げら れ る が， そ の主な作 用 部位は， 末 梢 抵 抗 血 管で あ り， 生 体 内^にお け る血圧 調 節 機 構， 特^に昇 圧 系^にお^いて重 要な役割を演じ てい る^． そ^こで， 血 管壁 R⁻A 系の血 圧 調 節^に果た す役 割を 解明 す る目 的で， 各 種 実 験 高 血 圧ラッ ト を 用^いて， 末 梢 血 管^{モデルで あ る}腸 間 膜 動 脈^にお け る A N G H 産 生を測 定し た^．

A C EI は， 今日， 降圧 剤と し て広く臨 床で 用^いら れ ている が， 同 時^に， 生体 内^にお け る A N G 工I 産 生が，

アンジ オ テ^{ン シ ン}I 変 換 酵 素 阻 害 剤 く^{a n}gi^{ote n sin} I

c o n v e rting e n zy^{m e}inh ib ite r，A C EIJ ^によ り． 影 響さ れ る か否か に つ いて も検 討し た^．

一 九 最 近． ブ タ大 動 脈 内 皮細 胞 培 餐 系^によ り． 血 管 作 動 性^ペ プ チ ド で あ る^{エ ン}ドセリ^ンく^{e ndothe rin，} E Tl が単 離， 同 定さ れ た^用。 E T は ラット^において A N G H よ り強 力な血 管 収 縮 作用 を有し て^いること が 報 告さ れ て お り^畑， 今 回そ の昇 圧 反 応 性を， 各 種 実 験 高 血 圧ラット^において比 較検 討し た^，

対 象^およ び方 法

王^． 対 象

体重約2 0 0g の雄 性ウ イ^スタ ^ー ラット を用^い， 血圧，

心 拍 数 測 定 帽 本 光 電， 束 剰 後^{， 以}下^の3群のラット を作 製し た^．

11 両 側 腎 摘 出 くn ephr e cto miz ed r at，Ne xl 群ニベ ント^{パ ル}ビ タ ^{ー ル}麻 酔 下^にて， 背 側を切 開^し， 腎 動 静 脈を結 染 衡 両側 腎を摘 出し た^{． こ の}際， 副 腎^に損 傷 を与え^ぬよ う細 心の注 意を払っ た， ま た， 腸 間 膜 動 脈 は^， 術 後3 日目^に取り出し た^■

2I デ オ キシコ ルチ ^{コ ス}テ^ロ ン 食 塩 高 血 圧 く^{de o−}

xyc o rtic o ste r o n e a c etate⁻tr e ated r at_，D O C Al 軋 片 側 腎 摘 出後， エタ^{ノー ル}， 落 花 生 油 く¹ ハ0 0 0， Vノ^wl

に溶 解し た D O C A 5 0m gくS igm a，St． Lo uis， U．S．A1．

を週^に1 回皮 下 投 与し， 4過 日に陽間 膜 動 脈を取り出 し た． 尚， そ^の間1 ％食 塩 水 飲 水と し た^．

31 糖 質コ ルチ ^コイ ド高血圧 くde x a m etha s o n e⁻tr−

e ated r at_，De xl 群芸5m g11 デ キ サ^メタ ゾンく和 光， 大 阪1 の飲 水と し， 4 日目^に陽 間 膜動脈を取り出し た^． 個^々の ラッ ト は， 1 日約5 0−^{1 0 0月 g のデ キ サ メタ ゾ}

m e s s e ng^{e r} R N A _ニ N A ，n O r adr e n alini N e x，

n eph r e cto m y 三P A C ， pla s m a aldo ste r o n e c o n c e ntr atio n i P R A ， pla s m a r e nin a ctivi_{t y i} R⁻A

sy^ste m ， r e nin⁻a ngi ^{ote n sin syste 町 S a r， S a r ala sini T F A ， trifru} O r O a C etic a cid high ⁻pr e S S u r e li_q^uid chr o m atog^{r a}ph_{y i} m R N A ，

血 管 壁ア^ンジ オ テン シ ンIl産 生に関す る研 究

ンを摂 取し て^いた^．

ま た． 上記 各群に お いて， 腸 間 膜 動 脈 摘 出前の2 日 間， A C E I である カ ブ ト プ リ^ルくCap to ril や， 三共 製 薬，

東 京I を 1 0^mgノkg 体 重， 経口投 与し た群も作 製し た．

工工^． 腸 間膜 動 脈^の満 流 実 験

M cGr ego r らの方 法^{1 91に}基 ずき， 当 教 室^にて若 干 改

良を加え た方 法^{抑 2 り}にて下 記の如く， ラッ ト腸 間 膜 動

脈の分 離およ び濯 流を施 行^{し た． ベ ン}ト^{パ ル} ビ タ^ー ル

麻 酔 下^にて開 腹 後， 2 3 G テフロ ン製カ^{ニ ュ ー} レ にて腸 間膜 動 脈にカ^{ニ ュ レ ー} ションし た． 1 5ml の ヘパリ^ン 添 加 Kr ebs⁻R inge r 液にて血 管 内腱の血 液を除 去し た 後た だ ちに， 腸 間 膜 動 脈を腸 管よ り分 離^し， 体 外^に取 り出し た^． ま た， この際 同 時^に大動 脈にも カ^{ニ ュ}レ ^ー ショ ンし， 採血 を施 行， 採取し た血 液に て血 祭^レニン

活 性 くpla s m e r e nin a ctivit y，P R A

．^{1， 血 祭アルドステ}

ロ ン濃 度 くpla s m a aldo ste r o n e c o n c e ntr atio n，P A CI，

血祭 A N G 工工濃 度を測 定し た．

取り出し た腸 間 膜 動 脈は． 3 7⁰Cに調 整し た^マ グヌ ス

腸 潜 流 装 置 く池 本理化， 束 射 内^に置き， 9 5％0払

5％C O2 で通 気し た Kr ebs⁻R inge r 辛夜 くNaC l l1 8m M ，

K C 1 4 ．75 ^m M ， CaC 12 2 ⁻5m M ， K H 2P O 41 ．2 m M ，

M _gS O41^．2^m M ，NaH C O，2 4．3^m M ，De xtr o s elg川^で 濯 流し， 濯 流 液は速やか に抽 出し た0 潜 流は． ロ ^ー

ラ^ー ポンプくM a ste rfle x，Colo，C h ic ag^o，U^．S^．Aン^． を 用 い

， 同 時^に潜 流圧 を， 圧 ト ラン スデ ^{ュ ー} サ ^ー く日本 光 電， 東 割 ^にてモ^ニ タ^ー し た0 濯 流 速 度は^， 4mlノmin に設 定し， 濯 流 圧は， 平 均3 0m m H g であ^った^． 尚，

濯 流 前に， ノ ルア ドレナ リ^ンくn o r adr e n alin，N AH 三 共， 東 刹 1 ノノ m Ol にて， 腸 間膜 動脈^の反応 性を確 認 し た^．

Me a s u r e r n e nt of v a s c ula r A I I g^{e n e r a}tio n

胎S e nte ric a rte rie s p^{r e}p^{a r a}tio n

匹^rfu 駅d wit h a er ated Kr ebs⁻Ringe r s olutio nく3 7⁻cl くg^{a s s ニ} 5 電 0 つ2 9 5 篭 0が

く^{C O n S}ヒa n亡 f lo w r aヒe 4 mlノ^minI

C Ol le cヒed 匹^rfu s a亡e

芦^{ほ S} 址r 仇ゆ ^飴打^払k _C1 8 c a止ri嘩声

e xtこa Cted

m e亡ba mlノ^{v aヒe r}ノ^{でE A} く8 0ノ^19．9ノ^0．1． v oVv oII R m

Fig^．1^， F lo w she et of e xtr a ctio n pr o c edu r e of

a ngi ote n sin II．

3 7

m ． 検_体の抽 出およ び 測定

Sep⁻Pak C⁻1 8 カ ラムくWate r s a s s o ciate s， M ilfo rd M a s a chu s et tst U．S^．AJ をメタノ ^ー ル 3ml， Kr ebs⁻R⁻ inge r 液1 0 血 で洗浄 後，6 0分 間 分の潜 流 液を通し た^， 0^■1％ト リ^{フ ル} オ^ロ酢 酸 く^tri fr u o r o a c etic a cid，T F AI l Oml を通し た後， メタ^{ノ ー ル}ノ蒸留 水ノT F A 溶 液 く8 0 ハ9^．9ノ0^．1， Vノマけ5ml で 2 回抽 出し， 凍 結 乾 固^{し た．} 凍 結乾 固し た検 体は， 0^．2 M リ^ン酸緩 衝 液⁴⁰叫^{1 で}再 溶解し， A N G H の測 定に用^いたく図1ト

A N G II は， 1 2 S

I A N G II くN E N Re s e a r ch Pr 。du^． Ct_， Bo sto n， u S^．AJ⁻， 特 異 抗 体 く^IgG^．A Il⁻1， IgG Co rpo r atio n，N a shville，U ．S^．A1^． を 用^いた^ラジ オ イム

ノアッ セイにて測 定し た。 Bo u ndlFr e e 分 離は， 正常

家 兎 抗血私 家兎 r グロブ リ^ン抗 血 清を 用^いた^二抗 体 傭 ⁻ ラ ジ オ ア イソト ^ー プ研 究軌 東 和 ^によ り行っ

た^． アッ セイ感度は， 1 0p gl ml， A N G I との交叉括 性 は 1 ％以下であり^， A N G m との交叉活 性は1 0 0％で あ^った^．

ハ

王

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． 一

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E l^ut 土O n t i^me く^mlnl

F ig^．2． H igh ⁻pr e S S u r e li_quid chr o matogr aphy

くH P L Cンelu sio n pr ofile^． Up pe r pa n n el sho ws a uthe ntic A N G II， a nd lo w e r pa n n el sho ws pe rfu s ate of the is olated r at m e s e nte ric a rte rie s．