Blood & Vessel
1989
20:537
(537-544)
原
著
組 織 プ ラ ス ミ ノ ー ゲ ン ア ク チ ベ ー タ ー 活 性, 抗 原
お よ び プ ラ ス ミ ノ ー ゲ ン ア ク チ ベ ー タ ー イ ン
ヒ ビ タ ー一1抗 原 に 対 す る諸 種 生 化 学 検 査 値
の 影 響 に つ い て の 統 計 学 的 検 討
山
田 誠
一*
山 田 利津子*
石
井
明
治**
笹
又
美 穂*** 渡
辺
俊 一***
Statistical
analyses
of influences
of biochemical
parameters
exerted
on tissue plasminogen
activator
activity,
antigen
and PAT-1 antigen
in blood samples
Seiichi YAMADA*,
Ritsuko YAMADA*,
Akiharu ISHII**
Miho SASAMATA*** and Shun-ichi WATANABE***
Key words: statistical analysis, biochemical parameter
in blood,
healthy
volunteer,
tissue
plasminogen
activator,
plasminogen activator inhibitor-1
(PAI-1)
We determined tissue plasminogen activator (t-PA)
activity, antigen, and
plasmino-gen activator inhibitor-1
(PAT-1) antigen levels, and performed the statistical
analyses
of correlation with biochemical parameters used for physical
check up in 81 volunteers
hospitalized for healthy examination.
Transaminases
(GOT, GPT), r-glutamyl
transpe-ptidase (1-GTP), zink sulfate turbidity test(ZTT),
thymol turbidity test (TTT), leucine
aminopeptidase
(LAP), lactate dehydrogenase(LDH),
total cholesterol (TC),triglyceride
(TG), high-density
lipoprotein cholesterol (HDL), uric acid (UA), calcium (Ca),
crea-tinine (CRN), fasting blood sugar (FBS) had significant correlation with t-PA activity,
antigen, and PAI-1 antigen. A canonical correlation
coefficient was significant between
the object variables (t-PA activity, antigen, index and PAT-1 antigen)
and the
explan-atory variables (GOT, GPT, TC, TG, CRN, UA, Y-GTP, HDL, FBS).
The results
suggest that fibrinolytic balance (t-PA, PAT-l) in blood may be affected by the
*聖 マ リ ア ン ナ 医 科 大 学 臨 床 検 査 医 学 教 室 〔〒213川 崎 市 宮 前 区 菅 生2-16-1〕;Department of Laboratory Medicine, St. Marianna University School of Medicine, Kanagawa, Japan.
** 同 産 婦 人 科, Department of Obstetrics and Gynecology, St. Marianna University School of Medicine, Kanagawa, Japan.
***山 之 内 製 薬 株 式 会 社 中 央 研 究 所, Bioscience Research Laboratories, Yamano-uchi Pharmaceutical Co., Ltd, Tokyo, Japan. 受 付: 1989. 1.7. 受 理: 1989. 10. 3.
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血 液 と 脈 管 第20巻 第6号
meters of the liver function, the uricotelic metabolism, the hyperlipidemia, or the hyperglycemia.
は じ め に
血 管 内 凝 固 線 溶 活 性 は 非 常 に 多 く の 因 子 の 関 与 の も と に そ のHomeostasisが 保 た れ て い る と 考 え ら れ, そ のBalanceの 崩 壊 が 発 病 の Triggerに な り う る こ と は 充 分 に 推 察 で き る こ と で あ ろ う. 近 年, 新 し く線 溶 に 関 与 す る 因 子 と し てTis-sue plasminogen activatorや そ のInhibitors (PAI-1, PAI-2, PAI-3)等 が 発 見, 精 製, 同 定 さ れ, 治 療 や 診 断 に 用 い られ よ う と し て い る. こ れ ら の 因 子 の 中 でt-PAお よ びPAI-1 は 主 に 血 管 内 皮 細 胞 に 存 在 し, 運 動 負 荷 や 精 神 的 ス ト レス 時 な ど 様 々 な 生 理 的 状 況 下 で 血 中 へ 放 出 さ れ, 恒 常 性 を 保 っ て い る と 考 え ら れ る. しか し, 病 的 状 態, 例 え ば 糖 尿 病1), 肝 疾 患2), 虚 血 性 心 疾 患3), 脈 管 の 閉 塞4)な ど で は, t-PA 活 性 は そ の イ ン ヒ ビ タ ー と と も に 大 き く変 動 す る こ と が 多 く の 研 究 者 に よ っ て 報 告 さ れ て い る. 今 回 わ れ わ れ は 健 康 成 人(血 清 生 化 学 検 査 値 異 常 者 を 含 む)を 対 象 と し て 血 中t-PA活 性 値, お よ び 血 漿 中t-PA抗 原 値, PAI-1抗 原 値 を 測 定 し, 同 時 に 測 定 し た 血 清 生 化 学 検 査 値 と の 相 関 に つ い て 分 析 し, 血 清 生 化 学 検 査 所 見 の 変 動 がt-PA活 性 値 や そ の イ ン ヒ ビ タ ー(PAI-1)抗 原 に 及 ぼ す 影 響 に つ い て 検 討 した.1. 対 象 お よ び方 法
聖 マ リア ン ナ 医 科 大 学 付 属 病 院 健 康 管 理 部 受 診 者81名(男 性55名, 女 性26名), 年 齢32∼ 64歳 を 対 象 と して, 午 前9時 に 通 常 の 駆 血 法 で 採 血 し た. 採 血 直 後 に, 全 血 の 一 部 は ク エ ン 酸 ナ ト リウ ム を 含 む ト リス 塩 酸 緩 衝 液 で4倍 に 希 釈 し た う え, t-PAに 対 す る モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体(SP-322)5)を 付 着 さ せ たdipstickを 投 入 し て 室 温 で1時 間 反 応 させ た. 反 応 後dipstickは 0. 05%Tween 20を 加 え た ト リス 塩 酸 緩 衝 液 で 洗 浄 し, t-PA活 性 値 の 測 定 ま で4。Cで 保 存 し, 残 り の 血 液 は 血 漿 と し てt-PA抗 原 お よ びPAI -1抗 原 値 の 測 定 ま で-800Cに 保 存 し た. t-PA活 性 値 の 測 定: 血 中t-PAと 反 応 させ たdipstickはlys-plasminogen, BrCN一fibrin-ogen, 合 成 基 質S-2251を 含 む 反 応 液 と と も に 37Cで4時 間incubateし, 生 成 したP-nitro-anilineをspectrophotometerを 用 い て405 nmで 検 出 して, 標 準 曲 線 か らt-PA活 性 を 算 出 し た. t-PA抗 原 値 の 測 定: 一 次 抗 体 と してSP-322, 二 次 抗 体 と し て ビ オ チ ン化anti-gost hu-man melanoma t-PA polyclonal antibodyを 用 い てstreptavidin-biotin peroxidase複 合 体と基 質 と して3, 3', 5,5, -tetramethylbenzidine を 用 い てELISA法 で 測 定 し た.
PAI-1抗 原 値 の 測 定: Biopool社(Sweden) Table 1 Bivariate regression models
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製 試 薬, PAI測 定 キ ッ トを 用 い て 測 定 した. 血 清 生 化 学 検 査 値: 全 血 の 残 り は 血 清 と し た
う え で 総 蛋 白(TP), 総bilirubin(TB), 直 接 bilirubin(DB), GOT, GPT, LDH, alkaline phosphatase(ALP), TC, TG, CRN, urea nitrogen(UN), UA, chloride(CL), sodium (Na), potassium(K), LAP, r-GTP, amylase (AMY), TTT, ZTT, HDL, HbA1, HbAlc, magnesium(Mg), Ca, FBSに つ い て, 三 菱 油 化B. C. L. 株 式 会 社 に 依 頼 して 測 定 した.
t-PA index: t-PAの3パ ラ メ ー タ ー(t-PA 活 性 値 ・抗 原 値, PAI-1抗 原 値)を 解 釈 す る う え で, 生 体 内t-PA活 性 状 況 を 知 るindicator
と し てt-PA indexを 考 案 し た. (t-PA index)_(t-PA activity(ng/ml))/ (t-PA antigen(ng/ml))X100
統 計 学 的 方 法: 通 常 の 方 法 で 各 測 定 値 の 平 均 値 と 標 準 偏 差 を 算 出 した. 相 関 係 数 の 算 出 はt-PAの3パ ラ メ ー タ ー お よ びt-PA indexの お
の お の と 各 生 化 学 検 査 値 に つ い て 行 っ た. 二 変 Table 2 Data of biochemical parameters, t-PA activity, antigen, and PAT-1 antigen
levels in subjects for healthy examination, as compared to normal volunteers.
n=81
* The each normal range (mean+2SD) was determined by 50 volunteers having the normal values of biochemical parameters.
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血 液 と 脈 管 第20巻
第6号
量 が 非 線 型 の相 関 を示 す 場 合 は, 尖 度, 歪 度 を
最 小 限 にす る た め に, 対 数, 逆 数, 自乗, 平方
根 等 の変 数 変 換 を行 い, それ らの変 数 に よ って
算 出 され る11種 類 の相 関 関数(表1)と
相 関 係 数
を 求 め, こ の うち相 関 係 数 の最 も高 い もの を 最
大 相 関 関 数 と した. 算 出 した相 関係 数 の有 意 性
はt一検 定 を 用 い て 検 定 した. 多 変 量 解 析 の なか
で 正 準 相 関 分 析 法 を 用 いて, t-PA活
性, 抗 原,
PAI-1値,
t-PA indexを
目的 変 数, 各 生 化 学
検 査 値 を 説 明 変 数 と して 正 準 相 関 係 数 を 算 出 し
た. 各変 数 は 歪度, 尖 度 を 最 小 とす るた め に,
予 め 対数, 逆 数, 自乗, 平方 根 等 の 変 数 変 換 を
行 った. 正 準 相 関 係 数 はwilks
の Lamdaを
用 い たBartletの
方 法 に従 い,
Z2検 定 によ りそ
の有 意 性 を検 定 した.
II. 結 果 お よ び 考 案
健 康 診 断 受 診 者81名
の 生 化 学 検 査値 お よ び
t-PA活
性 値, 抗原 値,
index値, PAI-1抗
原
値 を 測 定 し, それ らの 平 均 値, 標 準 偏 差 を求 め
た. ま た, 生 化学 検 査値 の正 常 範 囲 は 本学 臨床
検 査 部 の 値 を 使 用 し た. t-PA活
性, 抗原,
PAI-1抗
原 値 の 正 常 範 囲 は 生 化 学 検 査 値 正 常
者50名(男33名,
女17名),
平 均 年 齢47.3±
9. 9歳 を, 別 に対 象 と して測 定 し平 均 値+2SD
で 示 した(表2).
次 にt-PA活
性 値, 抗 原値,
index値,
お よ
びPAI-1抗
原 値 お の お の と各 生 化 学 検 査 値 と
の最 大 相 関 関 数, 相 関係 数 と その 有 意 水 準 を 求
め た(表3, 4, 5, 6). 各 生 化 学 検 査 値 とt-PA
index値 と の相 関性 はt-PA活
性 値 ・
抗 原 値 との
Table 3 Maximum correlation functions between t-PA activity and biochemical parameters in blood.
Blood & Vessel 1989 20:541 Table 4 Maximum correlation functions between t-PA antigen
and biochemical parameters in blood
Table 5 Maximum correlation functions between t-PA index and biochemical parameters in blood
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血 液 と 脈 管 第20巻
第6号
Table 6 Maximum correlation functions between PAI-1 antigen and biochemical parameters in blood.
Table 7 Canonical correlation analysis between t-PA and biochemical parameters in blood
Eigen value: 0.550
Blood & Vessel 1989 20:543 相 関 性 を 充 分 反 映 した も の で あ っ た. GOT, GPT, r-GPT, TG, UA, HDLはt-PA活 性, 抗 原, index値 お よ びPAI-1抗 原 値 の い ず れ と も 有 意 な 相 関 を 示 し た. 正 準 相 関 分 析 で はt-PA活 性 値, 抗 原 値, indexお よ びPAI-1抗 原 値 を 目 的 変 数, GOT, GPT, TC, TG, CRN, UA, r-GTP, HDL, FBSを 説 明 変 数 と し た 時, 有 意 な 一 個 の 相 関 係 数 が 得 ら れ た(表7). Juhan-Vague等4)はPAIとTGが 相 関 す る こ と を, ま たOseroff等6)はPAIとHDLの 相 関 に つ い て, さ ら にColuci等7)は 黄 疸 の 患 者 に お い て 血 清bilirubinとPAI活 性 が 相 関 す る こ と を 報 告 し た. Gran等8)は 心 筋 梗 塞 とt-PA活 性 の 関 連 に つ い て 報 告 し, 石 川 等9)は 静 脈 う っ血 負 荷 試 験 に よ るt-PA活 性 値 の 変 動 と 大 動 脈 硬 化 の 程 度 が よ く相 関 す る と 述 べ た. そ こ で 今 回 わ れ わ れ は 健 康 診 断 受 診 者 を 対 象 と し て 午 前9時 に, 通 常 の 駆 血 法 で 採 血 して 血 中t-PA活 性 ・抗 原 値 ・PAI-1抗 原 値 を 測 定 し, 同 時 に 測 定 し た 血 清 生 化 学 検 査 値 と の 相 関 に つ い て 分 析 し た. そ の 結 果t-PA活 性 値 はFBS, GOT, GPT, r-GTP, ZTT, TG, UA, DB, CRN, HDLと, t-PA抗 原 値 はFBS, GOT, GPT, r-GTP, TG, UA, DB, TC, LAP, TTT, HDLと 有 意 な 相 関 を 示 し た. ま た こ れ ら 相 互 の 関 係 を 考 慮 し た 値 と し て, t-PA index値 はFBS, GOT, GPT, r-GTP, ZTT, TTT, TG, UA, Ca, DB, TC, CRN, K, LAP, HDLと 有 意 な 相 関 を 示 し た. PAI-1抗 原 値 はGOT, GPT, r GTP, TG, UA, Ca, CRN, AMY, HDLと 有 意 な 相 関 を 示 した. 二 変 量 回 帰 式 で 相 関 の 高 い 変 数 を 用 い た 正 準 相 関 分 析 で は 一 個 の 有 意 な 正 準 相 関 係 数 が 得 られ た. 目 的 変 数 をt-PA活 性 値 ・抗 原 値 ・index, PAI-1抗 原 値 と し, GOT, GPT, TC, CRN, UA, r-GTP, HDL, FBSを 説 明 変 数 と して お の お の 一 つ の 固 有 方 程 式 で 表 す こ と が で き た. ま た 基 準 化 し た 係 数 よ り 目 的 変 数 群 で はt-PA indexが, 説 明 変 数 群 で はTC, FBS, CRN, TG, γ-GTPの 順 に 重 み の あ る 組 み 合 せ で あ っ た. こ れ ら の 生 化 学 検 査 項 目 は 肝 機 能, 脂 肪 代
