Posted at the Institutional Resources for Unique Collection and Academic Archives at Tokyo Dental College, Available from http://ir.tdc.ac.jp/
Title
コラーゲンゲルを用いた筋芽細胞シートに対する間葉系
細胞の影響
Author(s)
吉元, 利仁; 芹川, 雅光; 山本, 将仁; 阿部, 伸一
Journal
歯科学報, 116(3): 244-244
URL
http://hdl.handle.net/10130/4013
Right
目的：頬粘膜癌などの広範な粘膜摘出後に咀嚼・嚥 下機能を回復させるためには，粘膜直下に存在する 筋層を再構築させる必要がある。現在，我々は上皮 細胞シートと筋芽細胞シートの間に間葉系細胞の層 を挟んだ，より正常組織に近い三層構造の積層シー ト作製に取り組んでいる。積層シートが組織として 機能する上で特に筋層の再構築が重要となるが，こ れまで細胞シートを長期培養した場合の筋層をはじ めとするシートの動態に関してはあまり分かってい ない。そこで，本研究では筋層の構築において筋芽 細胞と間葉系細胞の関係に着目し，長期培養によっ て生じる筋芽細胞に対する間葉系細胞の影響につい て検討した。 方法：６ウェルプレートインサート上に日本家兎か ら採取した骨格筋筋芽細胞を撹拌したコラーゲンゲ ルを播種したもの，筋芽細胞層の上にコラーゲンゲ ルを積層したもの，筋芽細胞層の上に日本家兎から 採取した間葉系細胞を撹拌したコラーゲンゲルを積 層したものを用意し，間葉系細胞と共培養した時の 適切な培養条件の検討並びに間葉系細胞との共培養 の有無による影響について検討を行った。２週間隔 で６週まで培養後シートを回収し，組織学的な観 察として H-E 染色と免疫組織化学的染色，また m-RNA レベルでの筋芽細胞に関連した遺伝子発現に ついて RT-PCR を行った。 結果および考察：H-E 染色像からは，長期培養を 行っても継時的に細胞数が多くなっている様子が観 察できた。日本家兎由来骨格筋筋芽細胞は，長期培 養において間葉系細胞との共培養により Desmin や CollⅣの発現に増加傾向が見られた。RT-PCR から は，Pax７や CD３４などの未分化性因子の発現が長 期でも認められた。また，細胞増殖性因子である IGF は４週と６週の間葉系細胞との共培養でのみ発 現が認められた。骨格筋筋芽細胞シートに対する間 葉系細胞の影響については，さらに詳細な検討が必 要であるが，長期培養を行っても細胞の増殖性や未 分化性因子の発現が維持されていることや，間葉系 細胞と共培養した時のみ IGF の発現が認められる ことから，長期培養を行うことによっても間葉系細 胞の存在により筋芽細胞層の増殖・成長に影響を与 えている可能性が考えられた。 目的：要支援や要介護になる前段階である「虚弱」 の概念が提唱され，予防策が検討されている。中で も，進行性および全身性の骨格筋量および骨格筋力 の低下を特徴とするサルコペニアは「虚弱」の主要 因であり，注目を集めている。近年，マクロファー ジが加齢性の筋委縮（サルコペニア）の発症を抑制 することがわかってきた。しかしながら，高齢者献 体を用いて全身の筋委縮を評価した報告はなく不明 な点が残されている。そこで今回我々は，咽頭筋， 後輪状披裂筋，オトガイ舌筋，咬筋，棘下筋，外肛 門括約筋の６つの筋におけるマクロファージの密度 と筋線維の直径を検索することにより，高齢者献体 の筋委縮についての評価を試みた。 方法：試料として東京歯科大学所蔵の高齢者解剖実 習用献体１４体（７２∼９３歳，平均８３歳）が用いられた。 それぞれの献体から咽頭筋，後輪状披裂筋，オトガ イ舌筋，咬筋，棘下筋，外肛門括約筋を摘出後，通 法に従いパラフィン包埋を行い，連続切片を作製し た。CD６８抗体により免疫組織化学的染色後，筋内 におけるマクロファージの密度を算出した。また， 免疫組織化学的染色に用いた切片から，各筋の筋線 維の直径を計測した。 結果および考察：各筋内におけるマクロファージの 大きさは１０μm より小さいものが大多数を占めた。 しかしながら，輪状咽頭筋や後輪状披裂筋，外肛門 括約筋においては１０μm より大きなマクロファージ も少数ではあるが認められた。また，咽頭，喉頭の 筋線維におけるマクロファージ密度は，舌，肩，肛 門より５∼６倍大きかった。一方，直径８０μm を超 える太い筋線維は，１４体中２体の咽頭，喉頭，肛門 括約筋にのみ観察された。その他の部位において は，筋線維の直径は８０μm よりも小さいことが明ら かとなった。したがって，咽頭や喉頭の筋にマクロ ファージが多く存在することが，加齢性の萎縮（サ ルコペニア）の進行に対して抑制的に働いていると 考えられた。
