ニンニクのフィトンチッドによる食品の損傷

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(1)Title. ニンニクのフィトンチッドによる食品の損傷. Author(s). 山田, 正二; 入部, 恵; 菅原, 久美子. Citation. 北海道教育大学紀要. 第二部. C, 家庭・養護・体育編, 40(1): 1-8. Issue Date. 1989-10. URL. http://s-ir.sap.hokkyodai.ac.jp/dspace/handle/123456789/6671. Rights. Hokkaido University of Education.

(2) . Ｌ. 北海道教育大学紀要（第２部Ｃ）第４０巻第１号. 平成元年１０月ｏｃｔｏｂｅｒ，１９８９. ｉｌｉＩＣ）ＶｏｉｄｏＵｎｉｖｅｉｌｏｆＨｏｋｋａｔｙｏｆＥｄｕｃａｔ − Ｎｏｏｎ（ＳｅｃｔｏｎｌＪｏｕｒｎａｒｓ．４０．ｌ. ニンニクのフィトンチッドによる食品の損傷. 山. 田. 正. 二・入. ００２札幌市. 恵＊・菅. 部. 原. 久美子＊＊. 北海道教育大学札幌分校家政学科. ，＊現在札幌市立西野中学校 ”００４札幌市. 静修短期大学生活科学科. ｉｃｌｉｃｅｓｏｆＬｉｖｅｒｂｙＰｈｙｔｏｎｃｉｄｅｓｏｆＧａｒｉｎｇｏｆＳ１ＡｂｓｅｎｔＳｐｏｉｌ. ｉＹＡＭＡＤＡ，Ｍｅｇｕ］ｍｉＮＹＵＢＵ＊ａｎｄＳｈｏｊ. ＫｕｍｉｋｏＳＵＧＡＷＡＲＡ＊＊. ｉｉｉｄｏＵｎｉｌｔｙｏｆＥｄｕｃａｔｏｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｏｍｅＥｃｏｎｏｍｉｖｅｒｓｅｇｅｃｓ，Ｈｏｋｋａ，ＳａｐｐｏｒｏＣｏｌＳａｐｐｏｒｏｏ０２＊ＰｒｅｓｅｎｔａｄｄｒｌｉｎｏＪｕｎｉｏｒＨｉｇｈＳｃｈｏｏｅｓｓｓｈ．，Ｓａｐｐｏｒｏ０６３，ＮｉキホＤｅＰａｒｉｌｌｉｉｉｔｍｅｎｔｏｆ工ｉｖｏｒＣｏｅｇｅｎｇＳｃｓｈｕＪｕｎｅｎｃｅ，ｓａＰＰｏｒｏｏ０４，Ｓｅ. Ａｂｓｔｒａｃｔ. ｌｉｆｅｃｔｌｅｆｉｉｄａｃｓｏｆａｎｅｘｔｒａｃｔｏｆｇａｒ帆′ ｏｃｅｈａｖｅｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｂａｃｔｅｒ．Ｔｈｅｉｏｃｉｄａｌｉｄｅｒｅｄｔｈａｔｔｈｅｂａｃｔｅｒｌｉｆｅｃｔｓｓｅｅｍｅｄｔｏｅｘｔｅｎｄｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓｏｆｇａｒｃｅｆ，Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｗｅｃｏｎｓｌｆｏｏｄｓｔｏｗｈｉｉｂｌｉｒａｃｔｗａｓａｄｄｆｅｃｔｃｈｔｈｅｅｘｔｅｄｓｏｐｏｓｓａｂｕｔａｌｅｆｓｎｏｔｏｎｌｙｄａｍａｇｅｂａｃｔｅｒｙｓｐｏｉｌｉｌｉｉｔｈａｎｉｂｔｙｃｅｄｌｉｖｅｒｗａｓｉｎｃｕｂａｔｅｄｗｉａｎｄｃａｕｓｅｌｏｓｓｏｆｎｕｔｒｉｅｎｔｓ．Ｔｏ・ｅｘａｍｉｎｅｔｈｅｐｏｓｓ，ｓｌｉｉｆｇａｒｌｉｃｅｄｌｖｅｒｃｈｌｅａｋｅｄｏｕｔｏｆｔｈｅｓａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｏｃａｎｄａｍｏｕｎｔｓｏｆｓｏｍｅｎｕｔｒｉｅｎｔｓｗｈｉｉｄａｎｄｉｉｎｉｌｉｏｎｗｅｒｅｅｓｔｉｍａｔｅｄ．Ｔｈｅｙｉｎｃｃｏｔｃａｃｉｎｇｉｎｃｕｂａｔｄｕｒｕｄｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ｔｏｔａｌｓｕｇａｒｓ，．ｎｉｉｔｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｎｄｎｏｎｅｏｆｔｈｅｍｌｏｎｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｔｈａｎｃｏｎｔｒｏｌｅａｋｅｄｍｏｒｅｂｙａｄｄａｌｋａｌｔｈｏｕｔｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｗｉ，ｌｉｌｉｉｖｅｒａｆｔｅｒｉｎｃｕｂａｔｅｄｗｉｔｏｆｇａｒｔｈｔｈｅｅｘｔｃｓｈｏｗｅｄＨｉｒａｃｔｏｌｏｇｉｃｅｄｌｃｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｏｎｓｓｆｉｆｈｉｍｉｉｌｙｌｉｔｔｅｄｔｏｓｕｒａｃｅｒｅｇｏｎｏｔｅｏｒｇａｎ，ｒｃｔｃｈｗｅｒｅｓｖｅｒｗｈｉｍｉｎｕｔｅｄａｍａｇｅｓｏｆｔｉｓｓｕｅｏｆｌｌｗｉｄｅｄｗｅｌＴｈｅｆｉｎｄｉｎｇｓｃｏｉｎｃｉｔｈｔｈｅａｂｏｖｅ‐ｍｅｎｔｉｏｎｅｄｒｅｓｕｌｔｓ，ｔｙｉｓｏｆｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓｕｎｄｅｒｉｉｃｃａｕｓｅｄｈｅｍｏｌｙｓ・ｉｎａｓｏｔｏｎｉｓｉＴｈｅｅｘｔｒａｃｔｏｆｇａｒｌ. ｉｎｇｍｅｃｈａｌｕｅｆｏｒｉｎｖｅｓｉｇａｔｆｅｒｓｏｍｅｃｔｉｏ距ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅ．ｒｃｈｓｅｅｍｅｄｔｏｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔ，ｗｈｉｌｉｆｅｃｔｏｆｇａｒｉｏｃｉｄａｌｅｆｆｔｈｅｂａｃｔｅｒｃｎｉｓｍｓｏ，. （１）.

(3) . 山田正. 二・入部. １. 緒. 恵・菅原久美子. 論. 高等植物によって産生され，他の生物の生育を抑制したり，あるいは死に到らしめる物質を総称してフィトンチッドという．我々はさきにニンニク中に細菌の増殖を抑制するフィトンチッドが存在することを証明し，食品にニンニクを添加することが香辛料あるいは強壮剤としての意義に加え）て，防腐効果をももたらすことを示した，１）はいくつかのフィフィトンチッドの作用機構の全容はいまだ明らかにされていないが，谷田貝２トンチッドの構造と殺菌力の関係を調べて，その作用は細菌の細胞膜を破壊することによるらしいと推論している．もしそうであるならば，食品にニンニクを添加したばあいに食品組織が破壊されて栄養素などの漏出をもたらし，食品としての価値を低下させることが懸念される，そこで本研究では，まずモデル実験として，赤血球にニンニクの成分を作用させたときに，赤血球膜がニンニクのフィトンチッドによって破壊されて溶血することを示した．次に，食品の一例としてレバースライスを実験材料にえらび，ニンニク成分を加えることによって組織がいかなる損傷を受けるか，そしてそれによってレバーの構成要素，とりわけ栄養素の損失はどの程度のものであるかを検討したので，以下にその結果を報告する．. １１. 実験方法. １．ニンニク搾汁液の調製ニンニクは市販の生鮮ニンニクとチューブ入りの加工おろしニンニクを使用した．生鮮ニンニクは剥皮後おろし金でおろした．以下両者とも共通に，木綿さらし布に包んで搾汁し，搾汁液を定性用ろ紙でろ過してニンニク搾汁液とした．３）２．溶血試験実験当日に採血したヒトの血液を生理的食塩水で洗浄した後，元の血液の１０倍量の生理的食塩水に均一に分散させた．ＮａＣＩ濃度が等張の１４５ｍＭ′になるよう調製した緩衝液（塩化ナトリウム１４５ｍＭ，塩化カリウム５ｍＭ，塩化マグネシウムｌｍＭ，塩化カルシウムｌｍＭ，ブドウ糖１ｏｍＭ，リン酸ナトリウム塩５ｍＭ）に，生鮮ニンニクおよびチューブ入り加工ニンニク搾汁液を最終濃度で０∼５％になるようにそれぞれ添加した後，上記の希釈赤血球懸濁液を０，ｌｍｌずつ加え，全量を５ｍ１とした，これを０Ｃの水浴中で３０分ないし１３７２０分振とうした後，２０分間遠心分離し，その上清を波長，０ｏｏｒｐｍで１４３０ｎｍで比色測定した．赤血球膜の破壊が著しいほど，血色素が上清に多く溶出してくるため測定値が大きくなる．３．レバー構成要素の浸出試験. （）試料液の調製１試料に供するブタレバーは実験当日加工されたものを小売店より購入した．ブタレバーを用いた理由は，通常レバーにニンニクを添加することが多いという実用性を考慮したこと，および組織が均一であって実験材料として扱いやすいことである．（２）.

(4) . ニンニクのフィトンチッドによる食品の損傷. ３. レバースライス２５ｇに，生理的食塩水で５％濃度に希釈したニンニク搾汁液を４０ｍｌ加え，これｏＣの水浴中で２時間振とうした後３０ｏｏｒｐｍで３０分間遠心分離し上清をろ紙でろ過したもを２３，，，０Ｃに凍結保存し使用の都度自然解凍して実験に供したのを試料液とした．これを小分けして−２０．，なお，いったん解凍したものは再凍結せずに廃棄した．（）たんぱく質および糖質の測定２｝により測定したたんぱ）および紫外部吸収法（ＵＶ法）６）Ｂｉたんぱく質はＬｏｗｒｙ法４ｔ法５ｒｅ，，，ｕく質の定量をこのように３とおりの方法によって行った理由は，現在知られているいかなるたんぱく定量法に対しても，その測定を妨害する物質が存在することが知られているからである，本実験においてニンニク搾汁液とレバー浸出液を合した試料は極めて多種類の物質を含むので，その中のたんぱく質を定量する際にひととおりの方法のみによって測定すると，それらの物質の中のあるものによって妨害されて正しく真の値を測定できない危険が大きいと考えられるからである，｝により行った糖質の定量はＳｏｍｏｇｙｉ法７，. ）（３）ニコチン酸の測定８ｌｌｕｓａｒａｂｉｎｏｓｕｓ１ニコチン酸はＬａｃｔｏｂａｃｉ７‐５，ＡＴＣＣ８０１４を用いる微生物定量法によって定量し. た．基礎培地は日水製薬製ニコチン酸定量用基礎培地「ニッスイ」を使用した．３７±１℃で２０±２時間培養した後，６６０ｎｍの波長で比濁法によりニコチン酸含量を求めた．（４）アルカリフォスファターゼ活性の測定ｋａｌｉアルカリフォスファターゼ活性は，和光純薬製測定キットＡ１ｎｅｐｈｏｓｐｈａＫ‐Ｔｅｓｔｗａｋｏを用いてフェニルリン酸法により測定した．. なお，これらレバー構成要素の浸出は，いうまでもなくニンニク搾汁液を添加しないばあいでもみられるものである．また，使用するレバーによって浸出量は著しく異なった，従って実験の結果は，ニンニク搾汁液を添加したばあいの浸出量の，添加しない対照における浸出量に対する百分率で表わした，たんぱく質，糖質，ニコチン酸はレバーのみならずニンニク搾汁液中にも含まれている．そこで，ニンニク搾汁液を添加した時の試料中のこれらの物質を測定するばあいには，ニンニク搾汁液中のこれらの物質の定量を行ってその分を差し引いた．）４，組織学的検索９ニンニク搾汁液を添加したレバーを室温で２時間または１２時間振とうさせた．これをブアン氏液０”ｍの切片を作で固定後アルコール脱水，透徹してパラフィン包埋し，ミクロトームで厚さ５∼１００倍まで製した．マイヤーのヘマトキシリン染色液とエオシン液で核，細胞質をそれぞれ染色し，４の低倍率の顕微鏡で，ニンニク搾汁液を添加しないで室温または４℃の低温においたレバーを対照として組織の損傷を観察した．. （３）.

(5) . 山田正ｒ二・入部. 恵・菅原久美子. １１１実験結果および考察１．溶血試験溶血試験の結果を表１に示す．この表ではＮａＣＩ濃度ｏｍＭにおける溶血率を１００％として，ニンニク搾汁液の各濃度における溶血率の値を示してある．等張の緩衝液中で赤血球を振とうしたので，ニクニク搾汁液を添加しない時，すなわち最終濃度が０％のばあいは溶血率は極めて低い値を示している．ニンニク搾汁液濃度を上げてゆくと，その濃度依存的に溶血率は増大していった．すなわち赤血球の膜がニンニク搾汁液中のフィトンチッドの作用を受け，溶血が促進されたといえよう．また若干ではあるが生鮮ニンニクによる方が，加工ニンニクよりも溶血率が大きい傾向がみられた，さらに表には示していないが，振とう時間を１２０分間に延長すると溶血率が全体にやや上昇したが，ニンニク搾汁液濃度との関係は３０分間振とうしたばあいと同様であった．表１. ニンニク搾汁液の種類. ニンニク搾汁液による溶血試験＊. ニンニク搾汁液最終濃度％. 生鮮ニンニク搾汁液. 溶. 率＊＊. 血％. ０. １，６. １．２５. ５．Ｏ. ２．５. ９．６. ５. ２２．５. ０. １．７. チューブ入り加工ニンニク. １，２５. 搾汁液. ２．５. ３．４８．９. ５. ，. １７，Ｉ. ＊振とう時間３０分の結果＊＊ＮａＣＩ濃度ｏｍＭにおける溶血率を１００として相対値で表わしてある．. ２．ニンニク添加によるレバー構成要素浸出量の変化前述の溶血試験によって，ニンニクは等張において細胞膜を破壊することが認められた，ニンニク搾汁液が食品の組織や細胞膜を損傷した場合，細胞中に含まれる栄養成分が浸出し，大きな損失を招く．. ● ，. ．. ，対してはいかなる影響を与えるかを調べるための一つの方法，そこで次に，食品の組織や細胞膜にとして，，食品構成要素の浸出に対するニンニク搾汁液添加の影響を調べた．結果は表２に示し，．これを図示したのが図１である．いずれもニンニク搾汁液無添加の時の浸出量を１００として，ニンニク搾汁液を添加した時の浸出量をそれに対する相対値で示してある．たんぱく質はＬｏｗｒｙ法，Ｂｉｔ法，紫外部吸収法の３法により測定したが，３法による測定結果ｕｒｅに差異はなかった．レバースライスにニンニク搾汁液を添加した時のたんぱく質の浸出量は，添加しない時のそれ，すなわち１００％と有意差はなかった．これは生鮮ニンニク搾汁液においても加工おろしニンニク搾汁液においても同じであった．しかしながら，加工おろしニンニク搾汁液を添加し（４）.

(6) . にリ. ニンニクのフィトンチッドによる食品の損傷表２. ニンニク搾汁液によるレバー構成要素の浸出量出. 浸. 量. 加工おろしニンニク搾汁液添加時. 生鮮ニンニク搾汁液添加時たんぱく質. Ｌｏｗｒｙ法. １０５．５± ７．８. ７７．６±１４．０. Ｂｉｕｒｅｔ法. １０２，６± ６．９. ７８．９±１２．４. ＵＶ法. １１５，３± ８．９. ８２．６± ９．３. 質. ８３，０±１０．５. ９２，３±１８．９. 酸. ９０，５±１７．３. １０２．６±１４．５. 糖ニ. コ. 率＊％. 比. チ. ン. アルカリフォスファターゼ活性. ６６．６± ５，９６７，９士９．４・＊浸出量比率はレバーにニンニク搾汁液を添加した時の浸出量をニンニク搾汁液を添加しない時の浸出量に対する百分率で表わしてある，. （％）１００. 冊鮭軸泊邸５０. ０，たんばく質. 糖. ニコチン酸. 質. ・. フアオルスカフリアァ. タＴゼ. 図１ニンニク搾汁液添加によるレバー構成要素の浸出たんぱく質については３法による測定値をまとめてある．白棒，対照；斜線棒，生鮮ニンニク搾汁液添加：黒棒，加工おろしニ．ンニク搾汁液添加. （５）.

(7) . ６. 山田正二・入部. 恵・菅原久美子. たばあい，浸出量がむしろ対照よりも少ない傾向がみられた．糖質，ニコチン酸についてもレバーにニンニク搾汁液を添加した場合と，レバーのみの場合とで有意差はみられなかった．また生鮮ニンニクと加工ニンニクの両者を比較しても差はなかった．アルカリフォスファターゼは疾病等によって肝臓組織に損傷が起ると，肝臓から血液中に出てくるので，肝臓障害の有無を臨床的に判定する場合の指標とされるものである，今回の実験においてもレバー組織の損傷を鋭敏に反映すると考えて，栄養素ではないが測定を行った．結果は表２にみられるように，ニンニク搾汁液添加によりレバーからの浸出がむしろ抑制されることを示していた．しかしそのようなことが起ることは考えにくいことで，ニンニク搾汁液がアルカリフォスファターゼの活性を阻害した等の理由で，正確な測定が妨害された可能性も除外できな . これまでの実験結果はすべて，ニンニク搾汁液をレバーに添加したばあいのレバー構成要素の浸出量を，ニンニク搾汁液を添加しないときと対比させて表わしてきた，しかし，栄養源としてレバーを考えるとき，レバー全体が保有している栄養素の保存中の損失が，ニンニク搾汁液を添加することによってどのように変動するかを知ることは重要である．そこでレバー構成要素の浸出試験において，レバーから浸出し，したがって通常の調理においては廃棄されてしまう部分に含まれる栄養素の量が，レバー全体に含まれているそれの量のどのぐら０）に示されている値を使用いを占めるかを計算した．レバーに含まれる栄養素の量は，食品成分表１して計算した．結果は表３にみられるように糖質，ニコチン酸の損失率は，ニンニク搾汁液を添加したばあいも添加しないばあいも，たんぱく質にくらべわずかながら上回っていた．しかし，いずれにおいても栄養素の浸出量は，レバー全体に含まれる量の１０分の１程度であり，しかもニンニク搾汁液添加の有無によって差は認められなかった．表３. ニンニク搾汁液を添加することによって起るレバーからの栄養素の損失栄対. 照. 養素の損失率＊％. 生鮮ニンニク搾汁液添加. 加工おろしニンニク搾汁液添加８，２士３．Ｏ１２．７±５．Ｉ. たんぱく質＊＊. １０，３±２．５. １１．４±２．２. 糖質ニコチン酸. １５，６±４．５. １４，５±１．Ｏ. １８．１士３．４１９．６±２．４＊レバーから浸出した量のレバー全体に含まれる量に対する百分率で表わしてある，＊＊たんぱく質の測定結果は３法によるものをまとめてある，. １６．８±５．２. ３．組織学的検索ニンニク搾汁液を添加して２時間および１２時間振とうした場合に，ニンニク搾汁液と接触していたレバーの表面の組織の損傷は，作用させなかったものよりも少し大きく，組織が一部剥離している部分および剥離しかかっている部分がところどころに認められた．しかし損傷はレバーの表面だけにとどまり，内部組織にまでは及んでいなかった（図は省略）．したがってレバー全体からみるとニンニクの添加による組織の損傷はごく一部に限られていたといえる．この観察は，ニンニク搾汁液を添加することによってレバーの構成要素の浸出が増加することはないという前述の実験結果と一致していた，今回の実験では，たんぱく質，糖質，ニコチン酸およびアルカリフォスファターゼというレバーを構成している要素の内のごく一部について，ニンニク搾汁液を添加したときの浸出量の動向を調. （６）.

(8) . ニンニクのフィトンチッドによる食品の損傷. べたにすぎない．しかし，これらの物質の動態をみることで全体の傾向をみていると考えて大きな誤りはないと考えている．それは，これら４つの物質は化学的性質，生理的役割およびレバー中の含有量もそれぞれ全く別個のものであるにもかかわらず，類似の動向を示したことによる，また組織学的観察もこれを裏付けていた．溶血試験において，ニンニク搾汁液は等張の状態で細胞膜を損傷し，溶血を促進した．特に生鮮ニンニク搾汁液を添加した際には，この傾向が顕著であった．著者らが，先にニンニク搾汁液中に抗菌作用のあるフィトンチッドの存在を示したが，ここではその作用を溶血試験という異なった系でも示すことができた点興味深く，今後フィトンチッドの作用機序の解明を行うためのひとつの手段となり得るかもしれない，いっぽうレバーに添加した場合は，その中のたんぱく質，糖質，ニコチン酸などの栄養成分の損失が増加することはないということが確認された，このように，ニンニク搾汁液の作用が赤血球に対するばあいとレバーに対するばあいで著しく異なるのは，それらにおける細胞の集合状態が大きく関係していると思われる．赤血球の場合は１個１個の細胞がばらばらの状態で懸濁しているため，ニンニク搾汁液中の成分が一つ一つの細胞膜に対して作用できるのに対し，レバーにおいては細胞は集合して塊を形成しているため，表面に存在する細胞の膜にのみ作用し，損傷をうける細胞の割合は全体からみるとわずかなものであったと推察できる．ニンニクの作用が食品の内部にまで及ばなかったこと，表面のみであったことは，組織学的にも確認できた．これらのことよりニンニクは細胞膜に損傷を与える作用を有しているが，レバーのような食品においては，ニンニクを添加することによって起る栄養成分の浸出の増加はほとんどみられず，組織の損傷もわずかで表面だけにとどまるものであった．また生鮮ニンニク搾汁液，加工おろしニンニク搾汁液を比較した場合，赤血球の細胞膜に対する作用にはいくぶん違いがみられたが，レバーに対してはどちらも同傾向の作用を示した，赤血球溶血試験においてみられた差異が，加工おろしニンニクを製造する過程でフィトンチッドの一部が逸散してしまったために生じた可能性も考えられるが，製造方法が明らかにされていないので現段階では推測の域を出ない，ニンニクが防腐作用をもつことから，食品の細胞膜を損傷し栄養成分の損失を招くことが懸念されたが，以上の結果よりニンニクを添加することにより栄養成分の損失が増加することはなく，防腐効果をも期待してのニンニクの有用性はさらに拡大したと考えてよいであろう．. Ｗ. 要. 約. ニンニクが赤血球細胞膜に与える影響を調べ，さらにニンニク搾汁液をレバースライスに添加した際の栄養成分の浸出量について検討し，以下のような結果を得た，（１）ニンニク搾汁液は赤血球の等張溶血を促進する作用があり，特に生鮮ニンニク搾汁液においては顕著であった，）ニンニクを添加することによって，食品中のたんぱく質，糖質，ニコチン酸，アルカリフォス（２ファターゼの損失が増加することはない．（３）ニンニクを添加することによるレバー組織の損傷はわずかであり，表面組織にのみとどまり内部には及ばない．. （７）.

(9) . ８. 山田正二・入部. 恵・菅原. 久美子. ｉｌｌｉ最後に本研究を行うにあたりＬａｃｔｒａｂｎｏｓｕｏｂａｃｕｓａｓを分与してくださいました，北海道大学. 農学部応用菌学教室にお礼を申し上げます．. １）菅原久美子・山田正二：静修短大紀要 − ９（１９８８）２１５（１９８４２）矢田貝光克：フレグランスジャーナル６）１２ｉｇｕｃｈｉ１９８２）１１７３３）Ｔａｎｏｃｈｅｍ．９１（．Ｂｉ，Ｍ．，Ｍ．，Ｓａｋａｇａｍｉ，Ｔ．：Ｊ，Ａｉｋａｗａ. １９８１）ｐ５４）菅原潔，副島正美生物化学実験法（第７巻）蛋白質の定量法″ ．９，学会出版センター（５）向上：ｐ．７９ｌ１９５７）４４７６）ＬａｙｎｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏ．３（，Ｅ．：Ｍｅ. １９）ｐ６９７）小原哲二郎，鈴木隆雄，岩尾裕之，．食品分析ハンドブック″ ．２０４，建吊社（ ″ １１）ｐ３５８）日本ビタミン学会編，．ビタミン学実験法１９８５．３．水溶性ビタミン，東京化学同人（）ｐ１９６３一研究室編，食品・栄養実験書″ ９）東北大学農学部食糧化学科，１６７，光生館（１）１０）科学技術庁資源調査会編，．四訂食品成分表″ ９８５，女子栄養大学出版部（. （８）.

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