奈良教育大学学術リポジトリNEAR
家兎の妊娠, 分娩及び発育過程における血液成分の 変動に関する研究（１）
著者 中牟田 正幸
雑誌名 奈良教育大学紀要. 自然科学
巻 15
号 2
ページ 129‑153
発行年 1967‑02‑28
その他のタイトル Studies on the variation of various blood components during pregnancy, parturition and development of foetus and infant in domestic rabbits
URL http://hdl.handle.net/10105/3321
sk&i&fr<D£X]KM1rzmR ( 1)
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Studies on the variation of various blood components during pregnancy, parturition and development
of foetus and infant in domestic rabbits
Masayuki NAKAMUTA
(Laboratory of physiology and. hygiene, Nara University of Education, Nara, Japan) (Received Sept. 30, 1966)
The present study was undertaken to investigate the variation of various blood components during pregnancy, parturition and lactation, and develop- ment of foetus and infant, and also to compare with the quantitative difference between the foetal and maternal blood componets in domestic rabbits.
The animals, Japanese white rabbit, used in these studies were 102 female adu- lts, 521 foetuses and248 infants, and they were fed on identical feeding condition.
The blood samples collected from were measured quantitatively by using the photoelectric colorimeter for the following components, that is, 1) moisture, 2) total protein and its fractions, 3) fat, total cholesterol and lecithin,4) blood
sugar, 5) non-protein nitrogen, urea nitrogen, amino-acid nitrogen and uric acid, 6) chlorine, sodium, potassium, magnecium and inorganic phosphorus, and, 7) alkaline phosphatase. The results were as follows;
A. The variation of various blood components during pregnancy, parturition and lactation.
1) The serum moisture concentration increased gradually during pregnancy and reached the maximum level at parturition, but thereafter it began to decrease. 2) Total plasma protein concentration decreased markedly during pregnancy and reached the minimum level at parturition, but thereafter it began to increase gradually. In the absolute concentration of its protein fractions, albumin and 7-globulin decreased markedly during pregnancy and
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reached the minimum level at parturition, but thereafter it began to increase. A- globulin did not showe a marked change during pregnancy, but it began to increase after parturition and reached the maximum level on 10 days and then decreased gradually, /^-globulin increaaed markedly during pregnancy and reached the ma- ximum level on 10 days after parturition, but it began to decrease gradually. On the other hand, fibrinogen remained fairly constant level throughout whole periods of pregnancy, parturition and lactation. 3) Fat, total cholesterol, lecithin and blood sugar concentration in the serum decreased markedly during pregnancy
and reached the minimum level at parturition, but thereafter it began to
increase. 4) Non-protein nitrogen, urea nitrogen and uric acid concentration
in the serum decreased during pregnancy and reached the minimum level at
parturition, but thereafter it began to decrease. 5) Chlorine, sodium, potassium, magnecium, calcium and inorganic phosphorus concentration in the serum dec- reased gradually during pregnancy and reached the minimum level at parturition, but thereafter it began to increase. 6) Alkaline phosphatase concentration in the serum incresed markedly during pregnancy and reached the maximum level at parturition, but thereafter it began to decrease gradually. And these blood componects described above recovered gradually to normal on about 30-40 days after parturition.
B. The variation of various blood components during development of foetus and infant.
1) The serum moisture concentration decreased gradually during development of foetus and infant. 2) Total plasma protein concentration increased markedly during development of foetus and infant. In the absolute concentration of its pro- tein fractions, albumint, a-and /3-globulin increased markedly during development of foetus and infant, but ^-globulin of them reached the maximum level on 10-20 days after birth and thereafter it began to decrease slightly. V-globulin began to appear slightly in the serum on 25 days foetal age and it reached the maxi- mumlevel in newborn, but thereafter it decreased till 20 days after birth and then again increased gradually. On the other hand, fibrinogen remained fairly constant level during development of foetus and infant. 3) Fat, total cholesterol and lecithin concentration in the serum decreased markedly during development of foetus and infant, total cholesterol and lecithin concentration of them reached the minimum the level on 10 days after birth and thereafter it began toincre- ase gradually. 4) Blood sugar concentration in the serum decreased gradually during development of foetus and infant, but it reached the minimum level on 10 days after birth and then began to increase markedly. 5) Non-protein
nitrogen- and amino-acid nitrogen concentration in the serum increased
markedly during development of foetus and infant, but amino-acid nitrogen concentration of them reached themaximum level on 5 days after birth and thereafter it began to decrease. On the other hand, uric acid began to appear slightly in the serum on 5 days after birth and its concentration increased
gradually during development of infant. 7) Alkaline phosphatase concentration in the serum increased markedly during development of foetus and infant, and it reached the maximum level on 10 days after birth, but thereafter it began to
decrease markedly. And these blood components described above reached to
the abult level on 2~3months after birth.
C. The quantitative differences of various components between the maternal and foetal blood.
1) The serum moisture concentration was higher in the foetal than in the ma- ternal serum. 2) Total protein concentration was lower in the foetal thanin the maternal plasma. Albumin, a-and /3-globulin concentration were lower in the foetal than in the maternal plasma protein and also Y-globulin concentration lower in
the early foetal than in the maternal plasma protein, but it was higher in the foetal at full term than in the maternal plasma protein. There were no signi-
ficant difference in fibrinogen concentration between the foetal and maternal plasma protein. 3) Fat, total cholesterol and lecithin concentration were higher in the foetal than in the maternal serum. 4) There wereno significant differences in chlorine, sodium, potassium and magnecium concentration between the foetal
and maternal sera, but calcium and inorganic phosphorus concentration were
always higher in the foetal than in the maternal serum. 5) Blood sugar
concentration was slightly lower in the foetal than in the maternal serum. 6) Amino-acid nitrogen concentration was always higher in the foetal than in
the maternal serum, whereas non-protein nitrogen and urea nitrogen concentration were lower in the early foetal than in the maternal serum, but they were higher
in the foetal at full term than in the maternal serum. 7) Alkaline phosphatase concentration was higher in the foetal than in the maternal serum.
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目 次
緒 言 第1章 実験方法
第2葦 妊娠,分娩及び泌乳時における血液成分の変動 第1節 実験材料
第2節 結果及び考察 第1項 水分量の変動
第2項 総血祭蛋白濃度及び血栗蛋白分層の相対比と濃度の変動 第3項 脂肪及び類脂質量の変動
第4項 血糖量の変動
第5項 各種非蛋白窒素量の変動 第6項 各種無機物量の変動
第7項 アルカ.)性フオスファタ‑ゼ量の変動 第3節 摘 要
第3章 胎児及び幼児の発育過程における血液成分の変動 第1節 実験樹料
第2節 結果及び考察 第1項 水分量の変動
第2項 総血祭蛋白濃度及び血祭蛋白分層の相対比と濃度の変動 第3項 脂肪及び類脂質量の変動
第4項 血糖量の変動
第5項 各種非蛋白窒素量の変動 第6項 各種無機物量の変動
第7項 アルカリ性フォスファクーゼ量の変動 第3節 摘 要
総 括 文 献
緒 言
妊娠から分娩及び泌乳にいたる母体の形態学的変化に関しては,従釆人はじめ家畜においても 多くの人により十分に解明されてきたが,その生化学的変化,ことに物質代謝を中心とした諸問 題には未知の分野が多い. 噛乳動物はその種類によって生理現象を異にするが,いづれにせよ 短期間に胎児を発育させ,しかも分娩及びこれに続く授乳期に備えて,母体の物質代謝に種々の 変動がおこることが推察される.
近年,産婦人科穎域においてこの種の研究がさかんになり,物質代謝に関与する血液中の諸成 分について研究が行なわれているが,他方家畜についての研究は非常に少ないようである. す なわち Larson and Kendall (1954, 1957)が牛 Friedell (1951)が豚の血祭蛋白分層に ついて, Merill and Smith (1954)が牛の白血球及び血糖について, Baumann and Holy
(1926)及びPopjak (1946)が家兎の脂質について,中卒田(1954.1955. 1956.1958. 1959. 1960) が山羊の血液細胞,アミノ酸窒素及び家弟の血液細胞,血柴蛋白分層について,また五斗
(1956)が家畜ではないがマウスの血祭蛋白分層について報告しているにすぎない.
ところで人における研究成績を通覧すると,供試個体の生活,環境,食事,栄養及び年令など がそれぞれ異なり,また同一個体について継続的な測定がほとんど行なわれていないため,研究 者により同一成分についても増加するとするもの,減少するとするもの,あるいは変動しないか 動揺するとするものなどがあって一定しないことが多い.
つぎに胎児は母体と密接不可分な関係にある独特な生活個体として,また幼児は生後の授乳に よって独立した生活個体として,いづれも急速な発育過程をたどるが,これらの胎児及び幼児に おいて,血液中の諸成分がどのように変動するかについての研究が非常に少ないようである.
Wintrobe and Shumacher (1936)が各種動物における胎児,申牟田(1959)が家兎胎児及び 幼児,石井(1951)が仔山羊の血液細胞の変動について,またMoore et al (1945)が豚胎児, Barboriak (1958)が山羊及び緬羊胎児 Howe (1921), Orcutt and Home (1922), Jameson et al (1942), Hansenetal (1942)が仔牛, Poison (1943)が仔馬, McCarthy (1938)及び Charwood et al (1948)が仔羊, House (1961)がハムスク‑幼児の血祭蛋白分層の変動につい ての報告がある. しかし胎児と母体の間に存する血液成分の量的差異については,従来から各 種動物において比較的に報告がある. McCarthy (1938)が緬羊の血条蛋白について, Aron
(1924)が牛,豚,家兎,犬, Brandstrup (1929)が家兎, Kito (1919)及びCorer (1928.1930) がラットの血糖について, Barcrott and Popjak (1944)が緬羊の脂質について, Snyder Hoskins (1928)が家兎 Slemons and Morriss (1916.1917)が犬の非蛋白窒素について, Needham (1931)が牛,豚,犬のカルシウム,クロール,無機燐及び鉄について報告してい
る.もともと人と家畜では晴乳動物であるという共通性以外は生理的に種々の点で異なり,また 同じ家畜でもその種類によって同様のことがいえる.
著者は以上のような諸点に着目して実験を企てたが,その要綱を具体的に記述すれば次のとお りである.実験動物としては家弟を用いた.これは1)妊娠から分娩及び離乳までの期間が短い ため,血液中の諸成分が季節的影響により変動しにくい, 2)供試個体を同一条件のもとで飼養 しやすい, 3)供試個体間の変異を少なくするため,同一実験で同一母体から産まれた成兎を継 続的に使用しやすい, 4)胎児血液の採取に適している 5) 1腹の産仔数が多いため,幼児血 享夜の採取に適していることなどの理由によるものである.
著者(1959)はかって物質代謝には直接の関係が少ないとしても生理的には重要な意義を有す る血液細胞が妊娠,分娩,泌乳及び胎児,幼児の成長に伴ってどのように変動するかについて詳 細に報告した.そこで本研究は1)水分量, 2)総血柴蛋白濃度及び血祭蛋白分屑の相対比と濃 皮, 3)脂肪,総コレステロール及びレシチン量, 4)血糖量, 5)残余窒素,尿素窒素,尿酸 及びアミノ酸窒素量, 6)クロール,ナトリウム,カリウム,カルシウム,マグネシウム及び無 機燐量, 7)アルカリ性フォスフ7クーゼ量などを分析した.
著者は実験を大別して3部門に分け,まづ第1に上記の諸成分が妊娠,分娩及び泌乳に伴って どのように変動するか,第2に上記の諸成分が胎児及び幼児の発育過程においてどのように変動 するか,第3に胎児とその母の間に存する上記の諸成分にどのような差異があるかについて追究 し,それぞれにおける諸成分の変動の原因並びに意義を考究しようとつとめた.
ところで各種血液成分量の増減を考えるには,それが絶対量の増減であるかあるいは血祭容積 の変動に基づく相対的な変動であるかを明らかにする必要がある.従来の研究によると,妊娠時
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は循環血液量,とくに循環血祭童が著しく増加することか‑ら,相対量の変動と共に絶対量の観点 からも考察を加える必要があると考えられる.
以上の実験の結果,著者は家兎における上記血液成分が妊娠,分娩及び泌乳に伴い,また胎 児,幼児の発育過程においてどのように変動するか,さらに胎児とその母体の間に存する上記血 液成分にどのような差異があるかを究明した.本報は以上のような企画によって実施した研究の 患采をとりまとめたものである.
第1章 実験方法 1)水分の定量法
水分の定量は一般法として広く用いられている空気乾燥法を採用した.アルミニューム皿を蓋 と共に105‑Cの乾燥器に入れ,約1時間乾燥後,デシケ‑タ一に移して放冷し秤量した.この 操作を秤量皿が恒量に達するまで反覆した.つぎに血清約1gを秤量血に秤量し,上記と同様に 恒量に達するまで乾燥した.計算法を示すと次のとおりである.水分(%)‑Wl‑W./W!‑Wo XIOO ただし, W。は秤量皿の重量(g), Wiは試料をとって秤った時の重量(g), W,は恒量に 達した時の重量(g)である.
2)血果蛋白分屑の相対比及び濃度の測定法 a.総血祭蛋白濃度
泳動分析に用いる血祭は0.4%クエン酸ソーダ液を混入しているため,蛋白屈折計(日立製) を用いると正確な値を得ることがでもないので,別途に少量宛採取した血清についてその濃度を 測定し,つぎにこの測定値と泳動分析を行なって得た相対比の値から絵血祭蛋白濃度を求めた.
b.試料の調製と泳動法
遠心分離を行なって得た血祭はVeronal緩衝液(pH 8.6,イオン濃度0.06)を用いて透析 した後,その蛋白濃度が1.5‑2.0g/dl (若い胎児の血祭蛋白濃度は低いので0.8‑1.2g/dl)に なるように稀釈し,上記の緩衝液を外液として4oCの冷蔵庫中に20時間以上透析した.
調製した試料はHT‑B型Tiselius電気泳動装置を使用し,操作条件として恒温槽温度8 ‑ 12oC,電流3.5mA,電圧98‑112 Volt,泳動時間73‑78分のもとに泳動を行なった.
C.血祭蛋白分屑の相対比及び濃度
まづ各分屑の面積を測定し,全蛋白に対する各分屑の相対比を求め,さらに給血渠蛋白濃度に それぞれ相対比を乗じて各分屑の濃度を算出した.
3)脂肪及び類脂質の定量法
王l.階Ift‑
この成分の定量はHuerga et al (1953)の記載にしたがった.目盛付試験管にプロア試薬 9.5ccを滴下し混和, 50‑60‑C温浴中に30分間おいた後室温に冷却し,プロア試薬を添加して IOccとし混和後浪過した.この上澄液1ccを試験管にとり沸騰水浴上で蒸発させ,これに p‑Dioxan 1.5ccを加え沸騰水浴上1分間おいた後室温に冷却し,さらに8%硝酸液5ccを加え 30分放置した.この潤湿度を660m/iの波長でblankを100?の透過率にあわして被検皇色液の 透過率を読み,標準グラフから脂肪量を求めた.定量は光電比色計(日立製)を用いて測定した
(以下各成分の定量は上記比色計を用いて測定した).
b.総コレステロール
この成分の定量はacetic anhydride法(1938)を採用した.特殊ヒヨレステロ‑ル管にプロ ア試薬を12cc入れ,これに血柴0.2ccを滴下し振遭後遠心して上澄液を得た.この上澄液を30cc 容コルベンに移し蒸発乾滴させ,これに小量のクロロホルムを加え溶解した.これを定量的に別 のヒヨレステロ‑ル管に移し,他に1本のヒヨレステロール管を用意しblank用として,各々へ 5ccの目盛までクロロホルムを加えた.つぎに各々へ新しくつくり放冷した無水酷酸,硫酸混液 を加え,栓をして50oCの温浴中に45分放置後冷却した.これを660mJAの波長でblankを100%の 透過率にあわして被検皇色液の透過率を読み,標準グラフから総コレステロ‑ル量を求めた.
C. レシチン
この成分量はまづリポイド燐の定量を行なった後,その値から求めた.リポイド燐の定量は aminonapthol sulfonic acid法(1982)を採用した 20cc容メスコルベンにプロア試薬9ccを 入れ,これに2倍に稀釈した血清0.5ccを混和し,沸騰させた後室温に放冷し,ついで20cc目盛 までプロア試薬を加えた.これを遠心分離した後,試験管に上澄液2ccとガラス玉1個を入れ蒸 発させ,内容が0.5ccに減少したら10規定硫酸0.5ccを添加し加熱した.溶液が透明になるまで過 酸化水素1滴を加えて加熱を反覆した.透明になったら蒸潜水2ccを加え煮沸するまで熱してか
ら室温に放冷し,この液をIOcc目盛試験管に移し,他の1本の試験管には10規定硫酸液0.5cc及び 蒸溜水5ccを入れblank用とした.各々へ2.5%モリブデン酸アンモニウム液0.5cc宛を混和, ついでアミノナフト‑ルスルフォン酸液0.5cc宛を添加,最後に各々へ8ccの目盛まで蒸潜水で 薄めて栓をし転倒混和後暗室に10分放置した.これを660m〃の波長でblankを100?の透過率に あわして被検皇色液の透過率を読み,無機燐用の標準グラフからその値に3を乗じリポイド燐量 を求めた.このリポイド燐量に50を乗じ7こものが求めるレシチン量である.
4)血糖の定量法
この成分の定量はFolin‑Wu氏法(1920)を採用した.試験管にH:規定硫酸液8ccと2倍に稀 釈した血清0.5ccを入れ混和後10%タングステン酸1ccを滴下し栓をして振渡し濃過した. 2本 のFolin‑Wu検糖管を用意し, 1本に渡液2cc宛を入れ,静かに混和後煮沸水浴中に8分間つけ ,ただちに流水中で冷却した.これにモリブデン酸試薬2cc宛を加え,つぎに全量が25ccににな るまで蒸留水を加え混和し10分放置した.これを500m/iの波長でblankを100%の透過率にあわ して被検呈色液の透過率を読み,標準グラフから血糖量を求め2倍した.
5)各種非蛋白窒素の定量法 a.残余窒素
この成分の定量はkjeldahトnessler法(1937)を採用した. 15cc容遠心管に蒸潜水4ccを入れ, これに2倍に稀釈した血清1ccを混和後5%トリクロ‑ル酷酸液5ccを滴下し振畳して遠心した.
試験管に上澄液5cc,酸化剤2.5cc及びガラス玉1個を入れ,溶液が淡音色透明になるまで過酸 化水素1滴を加え加熱した.一万,他の酸化管にblank A として酸化剤2.5ccを入れ,両管を 氷水に10分放置後,各々へ蒸潜水IOcc宛を加えた.氷水につけた状態でnessler試薬IOcc宛を添 加し,ついで氷水から取りだして各々の25cc目盛まで蒸潜水を加え混和後,ふれたび氷水に5分 つけてから室温に10分放置した.これを430m//,の波長でblankを100%の透過率にあらわして被 検呈色液の透過率を読み,標準グラフから残余窒素量を求めて2倍した.
b.尿素窒素
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この成分の定量はurease‑nessler法(1942)を採用した. 2本の試験管を用意し,各々へ約 2mg宛のurease粉末を入れておき, 1本には2倍に稀釈した血清1ccを,他の1本には蒸 潜水1ccを加え,後者をblank用とした.各々に0.05モル第2燐酸ソ‑ダ液0.5cc及び蒸潜水1.5cc 宛を加え混和, 40oCの温浴中に15分っけてから蒸潜水5cc, 規定硫酸液1cc及び10%タングス テン酸ソーダ液1cc宛を加え混和後潰過した.これらの上程液を他の2本の試験管にそれぞれ1
・cc宛とり,蒸潜水18cc及びnessler試薬1cc宛を混和し15分放置した.これを500mfiの波長 で blankを100%の透過率にあわして被検里色液の透過率を読み,標準グラフから尿素窒素量を 求めて2倍した.
C.尿酸
この成分の定量はcyanide‑urea法(1945)を採用した. 30cc容コルベンにM:規定硫酸8ccと 2倍に稀釈した血清1ccを入れ,ついで10%タングステン酸ソーダ液1ccを添加しながら混和後 潰過した. 25cc容目盛試験管2本を用意し, 1本には渡過液3ccを,他の1本には蒸潜水3ccを blank用として準備した.各々へ1滴宛0.25%フ1ノールフタレン,アルコール液を加え,混和
しつつMo規定苛性ソ‑ダ液を滴下し, permanent pink色にした.さらに5cc目盛まで蒸潜水 で稀釈し 2%瑚酸液1cc宛と0‑5%ナフトヒノンスルフォン酸ソーダ液2cc宛を加えると呈色 調は赤樺色となった.そこで沸騰水につけた後流水で冷却し, 20cc目盛まで蒸潜水で薄め, acid‑formoldehyde液1.7cc宛及び0.05モルチオ硫酸ソ‑ダ液1.7ccを加え,つぎに25cc目盛まで 蒸溜水を加え混和後,室温に10分放置した.これを470m〃′の波長でblankを100?の透過率にあ
わして被検皇色液の透過率を読み,標準グラフからアミノ酸窒素量を求め2倍した.
6)各種無機物の定量法
a.クロール
この成分の定量は diver‑iodate法(1949)を採用した. 2本の試験管を用意し, 1本には燐タ ングステン駿液4.8ccと血清0.2ccを入れ,他の1本にはblank用として燐タングステン酸液5cc を入れ,各々へ約60mg宛の沃慶酸銀を入れて栓をし振盤後遠心した.上澄液0‑5cc宛を5ccのメ スコルベンにそれぞれ移し,各々へ約4cc宛の蒸湛水及び20‑/沃度ソーダ液1cc宛を加え,さら に各々の目盛まで蒸溜水を加え混和後, 25oCの温浴中に10分放置した.これを430m/iの波長で blankを100%の透過率にあわして被検皇色液の透過率を読み,標準グラフからクロール量を求 めた.
b.ナトリウム
この成分の定量はuranium zink acetate法(1949)を採用した. 15cc容遠心管に血清0.2ccを入 れ, 6規定硫敢液0.2ccと硝酸液O.lccを加えた後,塩化カルシウムの飽和水につけ130oCで約15 分熱した.溶液が無色透明になるまで過酸化水素1滴を加え熱した.この溶液に酷顧ウラニウム 亜鉛試薬8ccを加え混和後遠心した.上澄液を捨ててから約2ccのアルコ‑ル洗液で沈澱を洗っ た後遺もし,ついで上澄液を捨ててエーテルで沈澱を洗い遠心した.上澄液を捨てた管を35oC の定温器に数分おき,エーテルを蒸発させた後,蒸溜水をIOcc加え沈澱が完全に溶解するまで混 和した.つぎに遠心して不溶解成分を沈澱除去した上澄液を試験管に移し 25‑Cの温浴中に2‑
3分つけてから, 430mmの波長で蒸潜水を100 %の透過率にあわして被検呈色液の透過率を読 み,標準グラフからナトリウム量を求めた.
C. カルシウム
この成分の定量はphospate法(1935)を採用した.遠心管に5倍に稀釈した血清1ccと5%
トリクロ‑ル酪酸液9ccを混和後遠心した.別に2本の遠山管を用意し, 1本には上記上澄液3 ccを,他の1本には5%トリクロール酷酸液3ccを入れblank用とした.各々へ苛性ソーダ液 0.3cc宛を加え5分放置後,第3燐酸ソーダ液0.3ccを加えてから一時間放置し遠山した.つぎに
洗液2cc宛を加え沈澱を撹拝し,遠心を行なって上澄液を捨て同様の操作を反覆した.これにト リクロール醇酸3ccを加え沈澱を溶かし,モリブデン酸試薬0‑5ccとアミノナフト‑ルスルフォ ン酸液0‑5ccを加え,さらに各々の8cc目盛まで蒸潜水を加え擾拝後, 10分暗所に放置した.こ れを990m〝の波長でblankを100%の透過率にあわして被検呈色液の透過率を読み,無機燐用の 標準グラフから1.94倍してカルシウム量を求め5倍した.
d.無機燐
この成分の定量はaminonaphthol sulfonic acid法(1949)を採用した.遠心管に2倍に稀 釈した血清1ccを入れ,これに5%トリクロ‑ル醇酸液9ccを加え混和後逸hLtz. 2本の試験 管を用意し, 1本には上記波液3ccを,他の1本には5%トリクロール酷敢液3ccを入れ,各々
へモルブデン酸試薬0.5ccとアミノナフトールスルフォン酸液0.5cc及び蒸潜水4ccを加え混和 後, 10分暗所に放置した.これを660m〟の波長でblankを100%の透過率にあらわして透過率
を読み,標準グナフから無機燐量を求めて2倍した.
e.カリウム
この成分定量はcobaltinitrite法(1949)を採用した. 2倍に稀釈した血清1ccをIOcc日盛付 遠心管にとり,半飽和酷酸ソーダ液1ccを加え,つぎに新しく淀過した亜硝酸コバルトナトリウ ム試薬1ccを混和しながら滴下し放置後, 2ccの蒸潜水で管内壁を洗って遠心した.洗液2‑3 ccで沈澱を洗って遠心後上澄液を捨て,さらに70%ユタノ‑ル液 3ccを入れ,痩拝後遠JbL 上澄液を捨てた.この操作を反覆後蒸留水2ccを沈澱に加え,管を15分煮沸水洛中につけ,沈澱 が完全に溶けてから室温に冷却した.これに1 % choline choloride液1ccを加え,さらに飽和 フェロチアンカリ稀釈液1ccを加えると,緑の色があらわれる.一万,他の試験管には蒸溜水1 cc, 1% cholinecholoride液1cc及び飽和フェロチアンカリ稀釈液1ccを加えると,緑の色が あらわれる.一方,他の試験管には蒸潜水Ice, 1% choline choloride液1cc及び飽和フェロ
チアンカリ稀釈液1ccをこの唄に入れ混和Lblank用とした.そして各々‑IOcc目盛まで蒸潜水 を加えた.これを430m/iの波長でblankを100%の透過率にあわして被検呈色液の透過率を読 み,梗準グラフからカリウム量を求め2倍した.
f.マグネシウム
この成分の定量はtitan yellow法(1947)を採用した. 15cc容遠心管に蒸潜水4cc, 2倍に 稀釈した血清1cc及び27も規定硫酸液1ccを加え混和後,これに10%タングステン酸ソ‑ダ液1cc を滴下しながら振盤混和し遠心した. 2本のIOccメスコルベンを用意し, 1本には上澄液3cc を,他の1本には蒸溜水3ccをとりblank用とした.各々へメテール・レッド1滴を加え,これ にVIO規定苛性ソーダ液を1滴づっ黄色となるまで添加し,ついで5% sucrose液Ice, 2%
hydroxylamine hydrochloride液1cc及び1.5"/ら澱粉液1.5ccを噸次混和,さらに0.075%
titan yellow液1ccを混和した.最後に1.5苛性ソーダ溶液2ccを混和してから,各々がIOccになる よう蒸潜水を加え混和後, 25oCの温浴中に10分つけた.これを550m/iの波長でblankを100%の 透過率にあわして被検呈色液の透過率を読み,標準グラフからマグネシウム量を求め2倍した.
138 申 年 田 正 幸
7)アルカリ性フォスファタ‑ゼの定量法
この成分の定量はShinowara‑Jones‑Reinhart法(1942)を採用した. 3本の25cc目盛シ.) ンデルを用意し, A管にアルカリ性基質液4.5ccを入れ,これを38‑Cの温浴中に5分つけ,それに 血清0.5ccを加え混和後正確に1時間つけた.この1時間の後半にB管及びC管にアルカリ性基質 液4.5cc宛を入れておき,時間になったらA管を温浴中より取りだし, 3本の各々へ30%トリクロ
ール醍徴1cc宛をA, B, Cの頓に添加した.つぎにB管に血清0‑5cc及びC管に蒸潜水0.5ccを加 え栓をして振鹿後潰過した.これらの渚液3cc宛をIOcc目盛付試験管にそれぞれ入れ,各々へモ リブデン酸試薬0.5cc宛及びアミノナフトールスルフォン酸夜0.5cc宛をこの順に加え,さらに各 々の8cc目盛まで蒸潜水を加え混和後, 10分暗所に放置した.そこで660mの波長でC管をblank とし100%の透過率にあわせてA管の透過率を読み,無機燐用標準グラフからの値に1.2を乗じた
ものが求める無機燐量であり,これをaとし,また同様にB管の無機憐量を求め,これをbとし た.求める血清IOOcc中のアルカリ性フォスファクーゼ量(S‑J‑R単位)はa‑bである.
第2章 妊娠,分娩及び泌乳時における血液成分の変動 第1節 実験材料
実験に使用した動物は体重2.5‑3.OKgの成熟雌兎(日本白色種) 27頚で同一飼養条件のもと に飼育した.同一実験においては同腹姉妹の成兎3‑ 4頚を妊娠,分娩及び泌乳時を通じて継続 的に供試し7こ.血液は井妊時,妊娠時(5日目, 10日目, 15日目, 20日目, 25日目, 30日目)及 び分娩後(当日, 5 日日, 10日目, 15日目, 20日目, 25日目)を通じて一定時間に耳介静脈から 採取した.採取した血液は血祭または血清として用いた.なお哨乳は分娩後40日間行なった.
第2節 結果及び考察
血液中の諸成分が妊娠,分娩及び泌乳に伴なってどのように変動するかについて以下噸を追っ て記載したが,同一時期における結果が Table 1. Changes of serum moisture con‑
例のため統計処理を行なわなかった.
第1項 水分量の変動
血清中の水分量が妊娠,分娩及び泌乳に伴っ てどのように変動するかについて追究した結果 は第1表及び第1図に示すとおりである.
表及び図に示すように,水分量は妊娠15日か らしだいに増加し,分娩時に最高となるが,以後 は減少し,1カ月後には非妊時の水準に回復する.
妊婦における血液水分量の変動に関しては, 票田(1947)及び古貿(1949)の報告があり, それらの結果は大体妊娠3ケ月から しだいに 増加し 8‑9カ月に最高となり,分娩時に は非妊時に比較していくらか高くなると述べて いる.以上の結果と本実験で得られた結果をあ わせて考えると,妊娠に伴って水分量が増加す ることは両者ともよく一致するが,家兎では分
centration during pregnany, parturition and lactation.
0 10 20 30 1 20 30 40 Days of pregnancy Days Postp肝turn Fig.l Changes of serum moisture concentration during
pregnancy, parturition and lactation.
娩時に最高となった.人と家兎では哨乳動物であるという共通性以外は種々の点で異なるから同 一現象を示すとは限らないが,この点は注目すべきことだと考えられる.このように妊娠及び分 娩に伴って血清中の水分量が増加す、ることは,胎児の成長が著しくなるにつれて,胎児及び羊水 に代謝水を生じ,これが勝帯を通じて母体の血清中に入り水分の増加をきたすと共に,これに応
じて化学反応がさかんになるためでないかと考えられる.
第2項 揺血祭蛋白濃度及び血祭蛋白分屑の相対比と濃度の変動 1)給血渠蛋白濃度
総血祭蛋白濃度が妊娠,分娩及び泌泌乳に伴 ってどのように変動するかについて研究した結 果は第2表及び第2図に示すとおりである.
表及び図に示すように,線血祭蛋白濃度は妊 娠15日から減少し,分娩時に最低となるが,以 後は増加し, 40日後には非妊時の水準に回復す る.
2)泳動像
非虹時における血祭蛋白分屑の代表的電気泳 動像を示すと第3図のとおりである.
Table 2. Changes of total plasma protein concentration during pregnancy parturi‑
tion and lactation.
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Fig.2 Changes of total plasma protein during pregnancy, parturition and lactation.
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Fig.3 Electrophoresis patterns of plasma protein in the normal adult rabbit (l:albumin, 12:αi‑globulin, 3:α2‑globulin, 4:β‑globulin,
5:fibrinogen, 6:γ‑globulin).
図に示すように,血祭蛋白は6個の分屑,すなわちDeutch and Goodloe (1945)の用語に したがって血祭albuminの易動度を100とすると,その易動度が小さくなる噸序にα1‑, α2‑
及びβ‑globulin, fibrinogen, γ‑globulinに分けることができる.
3)血祭蛋白分屑の相対比
血祭蛋白分屑相対比が妊娠,分娩及び泌乳に伴ってどのように変動するかについて追究した結 果は第3表及び第4図に示すとおりである.
a. albumin
albuminは妊娠25日から著しく減少し,分娩時に最低となるが,以後は増加し, 40日後には非 妊時の水準に回復する.
b. α‑globulin
α‑globulinはα1‑及びα ,‑globulinをあわせて示した.この分屑は妊娠中ほぼ同一水準を維 持するが,分娩前から増加しはじめ,分娩後10日に最高となり,以後はしだいに減少し, 40日後 には非妊娠時の水準に回復する.
C. β‑globulin
β‑globulinは妊娠15日から著しく増加し,分娩時に最高となるが,以後は減少し, 40日後に は非妊時の水準に回復する.
b. γ‑globulin
γ‑globulin は妊娠20日から減少し,分娩後10日に最低となるが,以後はしだいに増加するも のの非妊時の水準に比較してかなり低く, 40日後には回復する.
e. fibrinogen
fibrinoge王1は妊娠,分娩及び泌乳時を通じてはぼ同一水準を維持するが,分娩の直前,直後に おいてのみいくらか増加するようである.
Table 3. Changes of relative concentration in various plasma protein fractions during pregnancy, parturition and lactation.
albumin
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以上要するに,血祭蛋白分屑相対比において, albuminとglobulinについてみると, albumin は減少し, globulinは増加するが, γ一globulinのみは妊娠後期から授乳期にかけて,かなり減 少することを知った.
142 中 年 田 正 幸
0 10 20 30 10 20 30 40 Do‑ys of Pregnancy Days Postpartum Fig.4 Changes of relative concentration in various plasma protein fractions during pregnancy, parturition and lactation
4)血祭蛋白分屑の濃度
血祭蛋白についてのTiselius法による分析の結果は各分屑の総蛋白濃度に対する構成比であっ て絶対濃度を示したものではない.血栗蛋白分屑の変動を追究するた馴こは,各分屑の百分比は
もちろん,それと同時に濃度を知ることが生理的に重要な意義を有するものと考えられる.
そこで血祭蛋白分屑濃度が妊娠,分娩及び泌乳に伴ってどのように変動するかについて追究し た結果は第4表及び第5図に示すとおりである.
a. albumin
albuminの変動は相対比の示すものとはほぼ類似するが,総血祭蛋白濃度が妊娠15日から減少 するため,この時期から減少しはじめ,分娩時に最低となるが,以後は増加し, 40日後には非妊
時の水準に回復する.
Table 4. Changes of absolute concentration in various plasma protein fractions during pregnancy, parturition and lactation.
albumin
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b. α‑globuin
α‑globulinの変動は相対比の示すものと多少異なり,妊娠に伴っていくらか減少するが,分 娩後には増加し,分娩10日後に最高となり,以後は減少し,40日後には非妊時の水準に回復する.
C. β‑globulin
β‑globulioの変動は妊娠時において相対比の示すものとほぼ類するが,分娩後はかなり異な り,妊娠に伴って増加し.分娩後10日に最高となるが,以後はしだいに減少し, 40日後には非妊 時の水準に回復する.
d. γ一globulin
7‑globulinの変動は相対比の示すものと多少異なり,妊娠に伴って減少し,分娩時に最低と なるが,以後は増加し, 40日後には非妊時の水準に回復する.
e. fibrnogen
fibrinogenの変動は相対比の示すものと多少異なり,妊娠,分娩及び泌乳時を通じてほぼ同一 水準を維持する.
以上要するに,血祭蛋白分屑濃度において, albumin とglobulinについてみると, albumin は著しく減少するが, globulinはほとんど変動がなく,ただγ‑globulinが妊娠中期から授乳期 にかけて減少した.したがって総血祭蛋白濃度の低下はalbuminの減少によるものでglobulin は関係しなかった.
妊娠及び分娩時における総血祭(清)蛋白濃度と血祭(清)蛋白分層の相対比及び濃度の変動 に関しては,人において多数の報告があるが,家畜についての研究は非常に少なく,わづかに Larson and Kendall (1951. 1954)が牛について,またFriedell (1951)が豚について報告し
IM 中 卒 田 正 幸
0 10 20 30 ユ 20 30 40 Days oj Pregnancy Days Postp叶turn.
Fig.5 Changes of absolute concentration in various plasma protein fractions during pregnancy, parturi‑
tion and lactation.
ているにすぎない.まづ総蛋白濃度についてみると,その濃度は動物の種類により,また研究者 によって必ずしも同一結果を示さないが,妊娠時は非妊時に比較して減少し,著者の家兎におけ る実験でも妊娠中期から減少し,分娩時に最低となり,以後は増加することを知った.妊娠時の 低蛋白現象に関しては,人において妊娠時に蛋白需要が増加することからして,相対的蛋白欠乏 症による低蛋白血症をきたすものと説明さてれいたが,沢崎及び竹内(1962)が実験的に妊娠時 は非妊時に比較して貯蔵蛋白が増加しており,けっして低蛋白血症でなく,むしろ循環血液中の 総蛋白量では増加していると証明した.このような総血祭蛋白濃度が減少することは,主として 血液水分量の増加により血祭が水分で稀釈されたためであって,その低下はalbuminの減少に よるものでありglobulinの増減は認められなかった.つぎに血祭蛋白は動物の種類によって構 成する蛋白質及び組成量が異なる. Deutchがこれら血祭蛋白のいづれの分府が妊娠,分娩及 び泌乳に伴ってどのように変動するかについて追究した.まづ妊婦における血祭(清)蛋白分 層の変動についてみると,研究者によって結果が一致しない場合が多いが,それらの成績を綜合 すれば,絶対量において albuminは減少し, α一globulinはやや増加し, β‑globulinはやや
増加し, β‑globulinは増加し, γ‑globulinは変わらず,またfibrinogenは増加するようで ある.他方;牛において albumin,βl一及びγi‑globulinは変わらないが, α‑・β2‑及び γj‑globulinは減少し,また豚において, γ‑globulinのみが増加し,他の分層は変わらないと 述べている.とくに年では分娩4週間前に総血祭蛋白量が10‑30%減少するのは, γ‑globulin が初乳として乳醇でつくられる時にそちらの万に移行するためであると説明している.
以上の結果と本実験で得られた結果をあわせて考えると,動物の種類によって各分層の変動が 著しく異なった.著者の家兎における実験結果についてみると,絶対量において albuminは 妊娠中期から減少し,分娩時に最低となるが,以後は増加し, α一globulinは妊娠時いくらか減 少するが,分娩後は授乳申かなり増加し, β一globulinは妊娠中期から増加し,分娩後は授乳中著
しく増加し, γ‑globulinは妊娠中期から授乳期にかけてかなり減少し,またfibrinogenは妊娠, 分娩及び泌乳時を通じてほぼ同一水準を維持した.そこでalbuminとglobulinの関係におい
て.絶対量ではalbuminは減少し, globulinは変わらず,したがって総血祭蛋白濃度が妊娠 及び分娩時に減少することは albuminの変動によるものであると確認した.とくに家兎にわ けるγ‑gobulinの変動は他の動物の示すものと異なり,妊娠中期から授乳期にかけてかなり減少 するが,これは母体血祭中のツーglobulinが妊娠に伴って免疫体として胎盤を透過し,胎生期間 中にすでに胎児‑移行し,またそれと共に分娩が近づくにつれて母体血液中のγ‑globulinが免 疫体として乳腺に移行するためであると考えられる.家兎における血液中のγ‑globulinが他の 動物(喫菌類を除く)と異なって胎盤を透過して胎児血液中に移行することは, Grosser (192 7)及びFlexner and Gellhorn (1948)が各種動物の胎盤についての組織学的相違から推察し て,家兎の胎盤がhaemoendothetial typeであるためだと考えられる.
Table 5. Changes of fat, total cholesterol and lecithin concentration in the serum during pregnancy, parturition and lactation.
Total cholesterol (mg/dl )
Lecithin (mg/dl )
