微生物学実習 6日目
[計p.13] ６日目 HT
供試菌の同定 細菌汚染検査
[実験IV]
薬剤感受性試験の確認 [実験IIID]
生化学的性状試験4 (カタラーゼ試験・オキシダー ゼ試験)
[実験I-IV]
供試菌の判定
◇実習室の清掃・点検
[実p.24] 抗生物質と耐性菌
抗生物質産生菌
（カビや放線菌など）
自然界には、抗生物質を産生する様々な微生物が存在 する．
[実p.24] 抗生物質と耐性菌
抗生物質産生菌
（カビや放線菌など）
自然界には、抗生物質に対して抵抗性を持つ様々な微 生物が存在する．
薬剤耐性菌
[実p.24] 耐性菌の出現要因
細菌を含め、全ての生物は遺伝的に変化しうる．
DNA(遺伝子)の特性
突然変異 外来遺伝子の獲得
[実p.24] 耐性菌の出現要因
現代社会では抗生物質が広く使われ，ときには乱用さ れているため，細菌は常に抗生物質にさらされている．
選択圧
家畜
ヒト
摂南 薬局 おだいじに〜
[実p.24] 耐性菌の出現要因 DNA(遺伝子)の特性 選択圧
ほとんどの細菌は抗生物質で死滅するが，薬の効果に 抵抗する性質を持つものも出てくる(耐性菌)．
例：MRSAやMDRPなど
[実p.24] 耐性菌の多様性 菌株によって、耐性を示す薬剤の種類や、耐性 の強さが異なる。
感受性
A耐性
B耐性 A,B耐性
[実p.24] 耐性菌の多様性
同種の細菌でも、「株」ごとに薬剤感受性が異 なる(遺伝的な多様性がある)。
ペニシリン オキサシリン オフロキサシン
MSSA-1 感受性 感受性 感受性
MRSA-001 耐性 耐性 感受性
MRSA-002 耐性 耐性 耐性
臨床分離株の薬剤感受性は、検査しないと分からない
[実p.24] 耐性菌の多様性
DNA
リボソーム
細胞壁 細胞膜
細胞壁合成酵素の変異 排出装置の強化
耐性化機構
リボソームの変異 DNAジャイレースの変異
分解酵素の生産
RNAポリメラーゼの変異 RNA
[実p.24] 抗生物質の使用量と耐性菌
Ａ病院 Ｂ病院
ペネム系を多用 マクロライド系を多用
ペネム耐性菌 マクロライド耐性菌
[実p.24] 抗生物質の使用量と耐性菌
病院
環境 一般市民
[実p.25] MSSAとMRSA
メチシリン感受性黄色ブドウ球菌
MSSA: Methicillin-susceptible Staphylococcus aureus メチシリン耐性性黄色ブドウ球菌
MRSA: Methicillin-resistant Staphylococcus aureus
MRSAにはメチシリン以外の抗生物質にも 耐性を示す菌株が多い(多剤耐性菌)
[実p.25] 1濃度ディスクの判定 阻止円の大きさを測定し，[実p.25表]にした がって[Rep.35]に判定結果を記入する．
薬剤名 阻止円の直径（mm）
耐性 中間 感受性
ベンジルペニシリン（PC） 28 29
セファゾリン（CEZ） 14 15-17 18 オキサシリン（MPI） 10 11-12 13
バンコマイシン（VCM） - - 12
[計p.12] 薬剤感受性試験の測定
◆阻止円の有無・耐性菌の有無を観察 し，各菌の各種抗生物質に対する感受 性を判定する[Rep.35]．
＊それぞれの阻止円は「各班2枚の平 均値」を求める．
[計p.12] 1濃度ディスク・薬剤感受性試験
ディスク周囲に出来た阻止円の直径を測定し，表に従って薬剤 感受性の測定を行う．
阻止円：ディスクの周囲に菌が生育していないところ
（透明になっているところ）．抗生物質の種類によっ て，阻止円の大きさが異なる．
[計p.12] 1濃度ディスク・阻止円の測定
阻止円が円形の場合：直径を測
定する． 阻止円が歪んでいる場合：最大直
径と最小直径を測定し，その平均 値を求める．
注意1：隣接する阻止円と重なってしまった場合は，重なってい ない領域で平均的な直径を推定すること．
注意2：阻止円を測定する際に，物差しなどが汚染しないように すること．
[実p.22&計p.12] カタラーゼ試験 オキシドール（３％過酸化水素水）と混ぜて、
カタラーゼによる酸素の発生（気泡）を確認す る．
1. 寒天培地上のコロニー（細菌）に過酸化水素 水を1滴，滴下する．
2. 直ちに気泡が出るのを観察し，結果を記録す る．
チトクローム系を持つ好気性菌および通性嫌気 性菌の大部分はカタラーゼが存在する．
[実p.22&計p.12] カタラーゼ試験
本実習の供試菌では，いずれも陽性となる．細菌が生 きているのを確認する．
２週間お疲れ様でした
[実p.22&計p.12] オキシダーゼ試験 酸化還元試薬（パラフェニレンジアミン）で，
色調の変化を確認する．
[実p.22&計p.12] オキシダーゼ試験 細菌内の電子伝達系で働くチトクロムオキシ ダーゼ酵素の存在を同定する．
嫌気性菌 通性嫌気性菌
好気性菌
チトクロムオキシダーゼ酵素は好気性菌にのみ存在する．
[実p.22&計p.12] オキシダーゼ試験 1. 寒天培地上のコロニー（細菌）にパラ
フェニレンジアミン溶液を1滴，滴下 2. コロニー色の変化を確かめる． する．
オキシダーゼ陽性なら、
色が濃くなる
[計p.12] 供試菌の同定
◆8種類の供試菌A~Hについて，大腸菌，緑膿菌，プロ テウス菌，サルモネラ菌，メチシリン感受性黄色ブド ウ球菌，メチシリン耐性黄色ブドウ球菌，表皮ブドウ 球菌，枯草菌のいずれであるかを同定する（Rep. 37）．
Rep. 27を参考にして、あてはまる菌種を選びます
[計p.13] 器具の点検と後始末
◆使用した器具を洗浄する．
◆各班，実験台・流し台を清掃す ること．
◆実習室に忘れ物がないことを確
認する（特に引き出しの中）．
[計p.13] 器具の点検と後始末
白衣について：
本日は実習終了日になるので，白衣を持ち帰ってくだ さい．実験中に白衣や衣服などに菌液が付着した可能 性がある場合は，他の洗い物と別にしてハイターで洗 濯して下さい．
塩素系 酸素系 どちらもＯＫ
