トスビラ、ノ純樺分離法二就テ

3695

砲水クロラrル、鷹月二体ル「水レプ

   トスビラ、ノ純樺分離法二就テ

金澤害科大學細菌學教室（主任谷教授）

專攻生杉  本  兵  太

  〔昭和10年7月4日受附 特別掲載）

       日 第1章 緒  言 第2章 分離法務備費験

 第I節 塘菌液二対シ砲水クロラ     ーノレ」 添カ回ノ糞O果・

 第2節 牛凝固培地及ピ固形平板     圭普地二割シ砲水クロラー      レ」添カロノ糞。男ミ

  第1項 實験方法   第2項 實験成績

   I 第1回年凝固培地内移植     實験ノ成績

   II第1回固形牛板増地二於     ケル純捧分離成績   m 第2回年凝固培地内移植

次

   實験ノ成績

  工V第2回固形牛板培地二於ケ    ル純棒分磁成績

  V 第3回年凝固増地内移植實    臓ノ成績

  V工第3回固形牛板培地上二於     ケル純緯分離成績

 賃…；3i……筒 韮製掘蕃エ董藪重ノ」、ヨ舌

第3蓑 砲水ク団ラールJ懸月二由     ル純棒分離成績

第4童豫備費験及ピ本質験ノ成績     ノ総括

第5章 緒  論     文  猷

       第1革緒   言

 水レプトスピラ」略記「水L」）ノ純樺分離ハ極メテ困難ナリシモノニテ，1930年跳ilewskア

（1Jノ報告ヲ見ル昌，民ハ從來知ラレタル純緯株トシテん〕gereL1，（Erlangen），Uh1．Dhuth u．Zue1zer．2，lB乱e正mam皿Zue1zer−4，SchO旺ne正u．Mochta・L3，Shio脇wa1・（Tokio），丁肌assow．

2．ノ13株ヲ學ゲ居ル皇過キズ．是等ノ大部分ハA㎎e・e・ノ細菌濾過器法二由リ濾過純樺分 離セラレタルモノテルモ，濾過法ノミ島ヨリテハ純樺分離ハ不可能ニシテ，濾過培養セラレ タル者ノ殆二・ド全部ハ雑菌ト混交護育シ來タリ，上記ハ偶然ノ所産ナリト素フモ過言ナラ ズ．然ル皇由利氏ハ泰西二先タチ1928年二於テ跣二確實ナル方法ヲ案出シ，之二由リテ物メ テ純粋分離ヲ爲シ得ルニ到レリ．而シテ本分離法ハ良法テルモ，操作中細菌濾過器ヲ使用ス ルノ煩アルヲ以テ，他二細菌濾過器ヲ使用セサル方法ヲ求メシニ，A由msky㈹氏ノ糞便寒天 法，Hirsch㈹氏ノ「オリゴヂナミー」作用ノ銅耐性利用法及ビ北岡氏し5）ノ側枝附試験管法ア

リ，余ノ複誠二体レハ前2者ハ信ヲ置ク皇足ラズ，後者ハ確カニ濾過法ヲ要セザルヲ以テ良 法ナリト構シ得可キモ，被検水ヨリノ純粋分離率ノ黒占二列リテハ，寧日由利氏法皇及バザル 感アリ，鍾二於テ獺百二良法ヲ案出セント企テ，増菌液ヨリ直接二，叉ハ濾過セスシテ移植        【295〕

セラレタル不純rリ；・ゲル寒天水L株ヨリ出利氏寒天平板培地上二純粋分離操作ヲ試ミタル モ，常二寒天面二迅速二摘救護育スル雑菌二抑止セラレテ水L秩ノ聚落Iノ襲生ヲ示サズー敬 二此ノ雑菌護育阻止ノ員約二｛利氏培地二砲水クロラール」ヲ添加セルニ，途二共ノ培地上 ニテ純粋分離ノ目的ヲ達シテ濾過法ヲ除外スルコトニ成功セリ．然レドモ愉ホ余ノ方法㈹二 鉄鮎アリ，ソバ増菌液ヨリ直接二家兎血清カロ0，526「リンゲル寒天二鱒植スルモ護育率極メテ 小ナルコトニシテ，勢ヒ被検水ヨリノ純粋分離率ガ総鱒二於テ小ナルコトヲ冤ルル能ハザル 鯨ナリ．敬二条ハ更二此踏ヲ改良セント欲シ，砲水クロラール」ヲ添加セル牛凝固培地ヲ使用 セルニ鱒植率ヲ極メテ大ニスルコトヲ得テ，爲メ昌被検水ノ半数以上二歳キ純粋分離ヲ成功 スルニ到レリ．由利氏及ビ余ノ由利氏法複試ノ成績ハ純粋分離率14劣内外ナリ．之二比較シ テ格段ナル進歩ト構シ得可ク，且文戯二牛凝固培地二砲水クロラール」ヲ添加セル實験例ヲ 見ザルヲ以テ；裁二詳細二報告セント欲ス．

       第2章分離法務傭實験

 實験ノ目的及ビ順序 本務臓實験ノ目的ハ水L純粋分離二対シ砲水クロラール」ヲ鰹用シテ，英ノ使用 効果ヲ糠シ，同時二使用量及ピ使用方法ヲ決定セントスルニアリ．而シテ本製備費験ハ先二報告セル余ノ 砲水クロラール」躍1用水L純棒分離法ノ順序二従ヒダルモノニシテ・1先ヅ水Lヲ被粧水中ニテ櫓菌セγ メ，之ヨリ直接固形甲板培地上二純粋分離擬作ヲ試ムルモ，砲水クロラール」含有ノ有無ヲ間ハズ殆ソト 全部失敗二終ルヲ常トシ，且ツ壇菌液中二テハ2ケ月内外ニテ水Lガ消失ス可キ運命ヲ有スルヲ以テ，何 等カノ方法ニテ之ヲ綴様セサル可カラズ．此目的ニハ不純ナルマ・一時牛凝固培地内二轄培シ。其所二移 植ノ代ヲ累ネツ・砲水クPラール」ヲ添加セル固形苧板培地上二純粋分離操作ヲ行ハントスルモノナリ．

簡ホ各成績ハ項ヲ分チテ記載シアルヲ以テ，各實験ノ同頁序及ピ連絡ラー讃諒解スルニ稽困難ナラニ！ト考 へ。第1表ヲ添附セリ．

第1表 純粋分離順序

記載順序

實験回 使用株

⊥ L 1       一 一     I       ■ 1 … 一

第・節1鯛實験、 被検水 櫓 菌       嬉 菌．株

・」 牛凝固培地内へ移植 初代不純株

第2節

・1 第1回

固形平板増地上二純捧分離 純棒様初代。

H工1 ・牛凝固培地内へ移植． 2代不純株

第2節 _一・一一

謔Q回

IV 固形培地内上二純粋分離 純樺株初代。

一    一  」  1  I

川H＾山一

V

第2節 」 V工 2代不純株 ^L     一  L       ． I         一 I     ■       止

固形雫板増地上二純棒分離 純捧様初代。

○印ハ次回實験二使用セズ．

         第1節 増菌液二対シ砲水クロラール」添カロノ効果

 實験方法 1〕被粧水 降雨無キ日ノ早朝二水田，用水及ピ井戸等ヨリ約250㏄ヲ乾熱滅菌セル硝子紙 二採集ヅ來タレリ．（鶴子瓶ハ諸材料ノ混和最ハ左程正確ナルコトヲ要セサリシヲ貝テ，．容量300㏄ 投薬       〔296】

砲水クロラール」懸月二体ル「水レプトスピラ」ノ純緯分離法二就テ 3697

紙ヨリ目盛正確ナル者ヲ選出使用セリ〕、2）20％糞便水 糞便ハ豫メ秤量セル大ナル「ベツヘルグラス」

：排泄シ，再ピ秤量シテ糞便ノ責竈ヲ知リ，之二5倍ノ水蓮水ヲ加へ鶴子棒ニテ押シ漬シ皮ク混和溶解 シ，之ヲ眞鎌箭（嚢所用茶漉ヲ使用セリ）ニテ濾過シ，1時間蒸氣滅菌（100℃）セリ．3）3％寒天 水道 水二基天3％ヲ加へ煮沸溶解シ，使用ノ便宜上7㏄宛試験管二分注シ，上記ノ如ク滅菌セリ．4）10％砲 水クロラール」水溶液 使用ノ都度薪シク調製ツ別段滅菌セズ．5）實験方法 採集瓶ノマ・被楡水250 0c二20％糞便水30㏄及ピ3％溶解悪天的20㏄（上言已分注寒天3本）ヲ加へ，良ク瓶内ニテ振盤混和シ 之ヲ100㏄宛3個パコルベソ」二配分シ110％砲水クロラール」水ヲ第1「コルベ：／」二〇・7㏄〔O・07％〕・第

2「コルベソ」二0・5㏄（α05％〕，第3「コルベソ」ニハ全然加ヘズ（0％〕，之等3種ノ糞梗塞天水ヲ夫々4枚 ノ「シャーレ』二2こ㏄宛分配シ，30℃ノ囎巣二納メテ2週間放置シ，英ノ成績ヲ観察セリ．

 賢験成績：先二報告㈹セルガ鋼ク，余ハ水L糟菌法二対シHindle 丁〕異ノ糞便水ヲ改良 シ，之二寒天ヲα2％皇カロヘ検出率及ビ増菌度（「シヤー1／」内二於ケル護育度）ヲ高ムルコト ヲ得タルモ、筒ホ砲水クロラール」ヲ加ヘナバ，更二良成績ヲ得可シト期待シ，本質験ヲ爲セ ルモノナルガ，其ノ成績ハ豫期二反シ，第2表ノ如ク，砲水クロラール」添加（略記，抱加）

第2表砲水クロラール」カロ糞便寒天水増菌成績         昭和9年11月22日

増菌液胞

5 瞼水 番彊ヤ＿＼レ山＼番帆、

綜合成績

水クロラ_一ル％別

123456789101112

鯉」

樵牽1水 檎計

11 _{一一 d一一十一一冊一十一}

被 _一^． ヤ 2

一十一生十・H・一一冊一一一

は07％ 水 ス ^レ」

с虚ｪgス百

｡織率

喧L麗ヤ＿1

3 1

一一 y一一十十一そ十 一一

4

一一一一

¥±十一純一一十

1

一一 y一一十十十一｝十十一

2

一一 y土一仕｝．一一十一

皿05％ 3

一一一一 ¥代一一冊一十一

4

一一 ¥十一一仕一十代一一

1

一十十十十十十一科十十一

O・％ 2

±十一一十十十一十代一一

（魏加） 3

■十一一・什．一十・七十

4

一・ y±一一十一仕一±一

糾 1覗野20條以上  什 1覗野10−20條  十 1視野1−10條 土 敷視野二1傑

％別検出率ハ，0．07％ニテハ75劣，0．05％ニテハ66％，O％ニテハ91名ニシテ砲水クロラ・ル」

非添加二於テ成績最良ニシテ90名以上ヲ検出セリ．余ハ期ル少数ノ實験ニテ3者ノ優劣ヲ憶 断スルモノニ井ザルモ，増菌法二対シテハ砲水クロラール」添加ノ効果著明ナラサルモノト 認メ，旦ヅ添カ題セストモ増菌成績良好ナルヲ以テ，砲水クロラール」添カロノ煩ヲ遊ケ，増菌       【297】

ノ日的ニハ砲水クロラール」ヲ使用セザルコト・セリ．本務備費験二於テ番號8ヲ除キ11個 ノ水ヨリLヲ検出セルモ，1番ハ（士）ナリシ爲メ除キ，英他ノ10個ノ被検水ヨリ得タルlO株 ノ壇菌株ヲ實験株トシ，原被検水ト同番號ヲ附シテ次ノ諸賢験二移レリ．

     第2節 牛凝固培地及ビ固形平板培地二対シ砲水クロラール」添カロノ効果

 第1項實験材料及ピ實験方法 1〕砲水クロラール」添加牛凝固培地〔略記，抱和牛凝固培地）檜菌株 及ピ不純林膨植用トγテ本論文ノ圭饅ヲ爲ス實験培地ニシテ，10％家兎血清和O．5％水道水寒天〔I・ノ譲育

ヲ顧慮シ食麗O・2％混和）二砲水クロラール」ヲO・1％，O・07％及ピO・05％二添加γ・高暦ト爲セル者ナリ・

英ノ調製ハ水遣水100㏄二食醒0．29「及ピ寒天O．59rヲ混ジ1時間100℃二蒸氣滅菌シ，直テニ10％砲水ク ロラール」水ラエ・O㏄（α1％L0・7㏄（α07％〕反ピ0・5㏄（0・05％〕ノ3最別二添加シテ，60℃下二冷却シ來 タルヲ特チ，非働性家兎血清IαO㏄ヲ注加シ．次デ滅菌ピベツト」ニテ口径約18mmノ試験管二10㏄宛分 注セリ．2）砲水クロラール」非添加竿凝固培地（略記，非抱加年凝固路地〕上記ノ対照トシテ砲水ク

ロラール」非添加増地ハ礎來不純水I一株鱒樋用トシテ用ヒラレタル1O％家兎血清和O．5％「リンゲル寒天ヲ 上記同様二分注ツチ使用セリ．3）砲水クロラール」添加固形平板塔地（略記，抱加雫板培地）純捧分 離操作ヲ行フ平板塔地ニシテ前報告ノ如ク，2％水道水寒天（Ph7・O）100coヲ溶解シ，之二10％砲水クロ

ラール」0・6㏄〔O・06％）ヲ添加シ，60℃下二冷却シ來タルヲ待チ，非働性家兎血病10㏄ヲ加へ，直径45m m内外ノ「シャーレ」二分注，平板ト爲セリ．4〕砲水クロラール」非添加固形苧板培地（略記，非抱加 平板培地）上記牛板増地二勤照トγテ，同組成寒天苧板培地二砲水クロラール」ヲ添加セズ使用セリ．

5〕使用櫓菌株水L増殖ノ最盛期蔓ロチ2週間目二於テ，譲育無数ナルモノハI橿繊弱ニシテ運動弱ク，

1視野10−15傑ノ中等度駿育ノ者ハL鶴モ稽大ニッチ運動盛ナルヲ口テ，駿育藪ヨリ寧回生活カニ重キ ラ置キ，中等度護育，運動大ナル者ヲ選ビ，該當條件ナキ時ハ護吉敷大ナルモノヲ探レリ．6）移植方法 竿凝固培地内ヘバ原培地ヨリ「ピベツト」ニテ0．5㏄宛静二派桂表面二注ギ，叉純粋分離ノ目的二固形平板 増地上ヘノ移植ハ1白金耳ヲ英ノ中央二直線状二塗抹セリ・7〕苧琴亨苧琴亨啓誓で響琴 上記ノ如ク

シテ移植セラレタル者ヲ25C二於テ培養シ，5日後ヨリ時々観察シテ，1O日目ヲ以テ最終ト爲シ，成績ヲ 制定セル者・ニシテ，牛凝固培地二於ケル者ハ曙視野装圏下二鏡楡ツ1視野1條以上ノ者ヨリ陽性トシ，固 形苧板培地二於テハ肉眼ニテ刊麗1シL特有ノ集落ヲ酸生セルラ陽一性トセリ．8〕純棒分離操作 第1代 平板培地上二於テハL集落ノ線賦織｛o，ハ雑菌ヨリノ離隔不充分ナルヲ以テ，之ヲ不純ナルマ・更二第2代 平板培地上二移シ・懸菌ヨリ充分離隔シ來タルヲ特チ・白金耳ニテ其ノ線状総ヲ寒天片ト共二釣1取シ・5

％家兎血清水二移シテ純捧分離ヲ行フモノニシテ。詳細八文駅（6）ヲ参照セラル可シ．

      第2項實験威綾

 I．第1回年凝固坪地内移植實験ノ成績1從來ノ経験二由レハ，一旦牛凝固増地内へ榑 植セラレテ護育セル不純水L妹ノ累代移植ハ比較的容易テルモ，増菌液ヨリ直接牛凝固培地 内ヘノ初代鱒植ハ困難ニシテ，移植率大ナラズ．敬二条ハ此鮎ヲ改良セント欲シ，牛凝固堵 助二抱加シ不純水L株ノ移植率二対スル砲水クロラール」添加ノ効果ヲ實験セル者ニシテ，此

ノ實験ヲ以テ本論文ノ主眼トス．

 使用培地ハO．1，α07及ビα05％ノ抱和牛凝固培地及ビ非抱加増地トシテ10名家兎血清加 0，526「クンゲル寒天ノヰ種ヲ州ヒテ比較實験ヲ行ピタリ．實験株ハ前實験ニテ増菌シ來タリ

シ2，3，4，5，6，7，9，10，H，及ビ12號ノ増菌「シャーレ」ヨリ適當ナルモノヲ遊ビ，上        【298】

砲水クロラール」腰月二体ル「水レプトスピラ」ノ純棒分離法皇就テ 3699

記4穣ノ培地二鱒植シ，25．Cノ艀奥向皇培養シテ，10日後二成績ヲ判定シ，第3表ノ1及ビ 2二記載セリ．之ヲ各例二就テ見ルニー最モ護有率ノ大ナリシハ，非抱加増菌液ヨリO・1％抱和 牛凝固坪地内二鱒植セラレタル場合室シテ，10株中7株稜育シテ70名ヲ示セリ．而シテ封焔非 抱和牛凝固現地内ヘノ移植率最良ナリシハαO枕抱加増菌液ヨリ轄植セラレタル例ニシテ・

g株申4株護育シ，4切ヲ示セリ．敬二鱒植用牛凝固増地二抱加セパ移植率ヲ1蝪喜増加セ シムルコトヲ知リ得タリ．又之ヲ綜合シテ観察シ，1）増菌液ノ側ヨリ見ルニ，非抱加増菌 液ヨリ各年凝固培地二樽植セラレタル場合二総数40木鱒植シテ21木護育シタルヲ以テ，護育

         第3表ノ1第1回年凝固現地内移植成績

      昭和g年12月7日移植

賓験株

増懐液 移植牛 番號2 3 4 5 6 7 9 10 11 12 _計

」

凝固培地■       …      …LL       I■

止       … 一   一」 一一

O．07％ αI％抱加

十十一一十十十〇十一

抱 O〃％抱加

十十一一一十十〇ロー

加

檜 O．05％抱加

十十一一十十一〇一一

菌

液

非抱加

十十一一十十一〇一一

0月5％ α1％抱加

。十十一一十十一十。1・

抱 0〃％抱加

o一一十一十十一一〇

加

櫓 O，05％抱加

O＋＋＋一一一一一〇

菌

液

非抱加 O＋＋一一十一一一0

非 0．1％抱加

十十十一十十十一十一

抱

加 α07％抱加

十十一十十十一一一一

檜

菌 1…％抱加1

十十一十十十一一一十

液

一非抱加 十十一一十一一一一一

○印 實験株無キ者  十 移植護育セル者ニシテエ覗野1條以上ヨリ陽幟．トセリ・

  護育林2，3，4，5，6，7，9．11及ピ12騎．

     第3表ノ2 第1回年凝固堵湖内移植成績綜合

牟凝固培地砲水クロラー

ル」％別 O．1％ O・07％ ^⑪。05％

非抱加

I  ■ I  ■1         ■

□■    L      1       ■ 一

増水1別   移植培地̲  駿育成績

駿同 駿同 ^{護同 駿同} 移譲同

菌クル ^㌔．

液口」

＼

^樋育

抱ラ％

各務繊＼ 敷％ 敷％ ^{敷％ 敷％} 藪敷％

■      一一一      I  L 一1  I  I 一 ■一      」一」

α・・％1 ・ 666

444 361850

O．05％ 「 8

562

321443

非抱加

770 550 660 330 402152

」 ■  1  一■一   一■    ＾ 上      一 L ■ 一    一■ 」 ■ 

総 計

1244 1348 1037

必要外ノ百分率ハ計上セズ、

【299〕

率最大52岩ヲ示シ，以下α07％抱カ嫡菌液ヨリハ50名，0．05％抱加増菌液ヨリハ43名ノ牛凝 固増地内移植率ヲ示セリ．2）茨二移植セラ1／タル孚凝固堵助ノ成績ヲ見ルニ最モ護育率大 ナリシハ0・1劣抱和牛凝固培地ニシテ移植総藪27本中18本製育シ，率66％ヲ得タリ．以下α05 劣抱加年凝固培地ハ48％，0．0柘抱カ絆凝固培地ハ仲劣ノ鱒植牽ニシテ，対照非抱和牛凝固 増地ハ2ク本移植シテエ0本（3晩）ノ最下位ナリ．之ヲ最上位ト比較スルニ約半数ノ劣成績ヲ示 セリ．是等ノ成績二由リ余ノ抱カ絆凝固培地ハ不純水L株移植二対シ良好ナル培地ナルヲ鋼 ルヲ得可ク，同時昌從來使用セラレタル0．5名rリンゲル寒天」ノ極メテ不適當ナリシハ明ナ リ．如上ノ實験ヨリ余ハ韓植用牛凝固増地二・砲水クロラール」ヲ0」％二添加スルヲ最良ト シ，増菌液ニハ添加セザルヲ可トスト信ズ．然レドモ0．1％抱和牛凝固増地ニテモ韓植陽性株 ノ全部ヲ襲育セシムルモノニ非ズ，5號株及ビエ2號ノ雨株ハ部ツチ0．05％及ピO．07名ノ抱加 年凝固培地内二護育シ來レリ．敬二不純株移植操作ニハ0．1％抱加ノ外皇補助トシテ，0．05劣 抱カロノ牛凝固培地ヲ併用スルヲ可トスベシ．余ハ比ノ實験包テ各培地ヲ通計シテ實験株10 株中10號株ヲ失シタルノミニシテ，9株ヲ牛凝固培地内呈移植スルコトヲ得タリ．是等ヲ不 純初代株ト爲シ，次回ノ賢駿二移レリ．

 II・第1回固形卒板培地二於ケル純樺分離ノ成績：増菌液ノ各ヨリ，撰鐸方法及ピ共他 ヲ上記ノ如クシテ，直接二固形平板培地上二純粋分離ヲ試ミタルニ全部陰性二終レリ．此騎 前報告伽ト同様ニシテ，警へ砲水クロラール」ヲ使用スルトモ増菌液ヨリ直接ナル平板培地 上ノ純粋分離ハ困難ナルコトヲ示スモノナリ．敬二水L純粋分離ノ實施二當リテハ増菌液ヨ

リノ移植ハ牛凝固培地内ノミニ止メ，平板培地上ヘノモノ八省略スルモ可ナリト信ズ．

IIL第2回年凝固培地内移植實験ノ成績1今回ノ實験株ハ非抱加増菌液ヨリ移植セラレ タル0・1％抱カn牛凝固培地内初代不純株ノ7株及ビ0．05劣抱和牛凝固培地内初代不純株5號 及ビi2號ト合セテ9株ヲ用ヒ，使用培地ハ前回ノ威綾二由リ0，1％及ビ0．05完抱加及ビ対照

トシテ非抱加ノ3種ノ牛凝固培地ヲ用ピタリ．英ノ成績ハ第4表ノ如ク，O．晩抱和牛凝固堵        第4表 第2回年凝固培地内移植成績

      日石禾口g毛F12月18日

2345067911120

○ユ％抱加

十十十十十十十十一 8188

○月5％抱加

十十十十十一一十十

非抱加 十十十十十一十十口 ^。」η

   ○印 ハO・05％抱和牛凝固培地ヨリ移植英他ハO．ユ％抱加苧凝固培地ヨリ．

地内ニハ9株中8株護育シテ率88％ヲ示シ，O．05％抱加及ビ非抱加ノ方昌ハ9橡中7株ノ同 数護育シテ率77％ヲ示セリ．敬二3培地共略ボ同能率ナリト云フラ得可ク，水Lハ不純ノ マ・ナリト離モ，一旦増菌液ヨリ牛凝固培地二轄植スルコトヲ得ハ，以後ノ織株ハ牛凝固培 地ノ何種タルヤヲ間ハズ比較的容易ニナルモノト認ム．

      【300〕

砲水クロラール徳用二体ル「水レプトスピラ」ノ純粋分離法二就テ 3701

 Iγ第2回固形平板増地二於ケル純樺分離成績：前記初代不純株g秩ヲ抱加及ビ非抱加 平板培地上二第2回純粋分離實駿ヲ試ミタル皇，第5表二記載セルガ如ク抱加千板塀地上二

第5表第2回抱和平板培地上ノ純粋分離ノ成績

         12月18日

㌧

＼＼

2 3 4 5o 6 ⁷ 9 11工2o 計 第I代抱加牛板培地集

詞̀成 ^{一 一 十 一 十}

1

第2代抱加平板培地集

祉m純棒分離 ^{■ ● 純 ■ 純 i ■ ■ ● 2} 非抱加苧板培地集落形

ｬ

第2代抱加干梗培地純

̲分離 ^{■ ■ 純 ● ■ ■ ● ■ ● 1}  十 撃二集落形威セル者  純 第2代抱加牛板ニテ纏菌ト充分離隔セル者

○印 0．05％抱加牛凝固培地ヨリ移；植，他ハ皆ナO．1％抱加牟凝固培地ヨリ移楠、

於テ4號及ビ6號ノ2株聚落ヲ形成シ，殊二4號株ハ非抱加固形雫板増地上ニモ聚落ヲ護生 シタリ．然レドモ聚落ノ全部ハ充分雑菌ト離隔セザリシヲ以テ，第2代抱加平板増地上二雑 菌ト共二聚落ヲ移植シテ水二Lノ純聚落ヲ得タリ．其ノ率ハ僅カ22％ナリシモ，不純水Lハー 且牛凝固堵地内二移植セラルレバ漸次人工堵地内ノ護育能カヲ増シ，固形千板増地上ニモ聚 落形成ヲ螢ミ得ルモノナル可シ、而シテ4號株ガO．1％抱加牛凝固堵地ヨリ移植セラレテ非 抱加平板堵地二聚落ヲ形成セルハ頗ル興味アルコトニシテ，水L純樺分離二封シ抱加卒凝固 増地ノ効果ノ大ナルヲ示スモノトス．

V．第3回牛凝固増地内移植實験ノ成綾：最初ヨリノ實験株申前回昌於テ純粋分離ヲ完 了セル2株ヲ除キ，共他ノ7株ヲ以テ第3回移植實験株トシ使用増地ハ第2回ト同ジクO．1

％，α05％抱カロ及ビ封照非抱加ノ3牛凝固堵地ヲ用ヒ，移植實験ヲ行ヘルニ，各株共，全部 ノ茨代牛凝固堵地二輸堵スルコトヲ得タリ．帥チ移植ノ代ヲ累ヌルニ從ヒ，移植ハ釜々容易

トナリ特二抱加ノ必要ナキガ如シ．

 VI・第3回固形千板堵地二於ケル純樺分離成績：抱加牛板堵地ヨリ7株及ビ非抱カ聰ノ方 ヨリ5株ノ2代不純株ヲ探リ抱カ吸ビ非抱加固形干板増地上二純樺分離操作ヲ試ミタル昌，

第6表二示ス如ク，抱加固形千板靖地上ニハ原牛凝圃堵地ノ抱加ノ有無ヲ問ハズ4乃至5株 ノ聚落ヲ形威セシムルコトヲ得タリ．反之，非抱加固形干板堵地上二聚落ヲ形成セルハ0．1岩 抱加孚凝固堵地ヨリ移植セラレタルエ株ノミニシテ非抱加牛凝固塀地ノ聚落形威ハ全然陰性

ナリキ．是等ノ事賛ハ水L純棒分離法二封シ抱加ノ効果ノ大ナルコトヲ認メシムル者ナリ、

余ハ今回ノ賢験二於テ2代不純株ヨリ5株ノ純樺分離株ヲ得タルヲ以テ，實験株7株畠封シ       【3㎝】

第6表 第3回平板培地上ノ純樺分離ノ成績      昭和9年12月29日

原培地

抱 和 牛 凝  固

非 抱 和 牛 凝 固

㌔L

A、

移植牛板培地   ㌔一㌔＿

抱和牛板培地上集落形成

非抱加z1三板培地上集落形成

抱和平板培地上集落形成

 2357911120 言卜 十＿十十十十＿1。

       一1

 一一一一十◎一一11

       i

−       1

■十 一 十 ・ 十 十 ・ 1 4

−      1

非抱加午板培地上集落形成 一 一  ・ 一 一  ・   o

兄テ第2代抱加平板培地上二葉藩ヲ形成セリ．

・印 第2回移植實験二際シ襲育陰性ナリシ爲メ實験様ナキ者．

○印 O．05％抱和牛凝固培地ヨリ他ハ全部O．1％抱和牛凝固培地

◎印 9號株ノミ非抱和牛板±普地二集落形成．

約ア0名ノ純粋分離率ト素フ可ク，不純水L株ハ牛凝固培地内鱒植2同二及ヘバ良ク人工培地 皇適膳シ，寒天ノ濃度2％皇及ブ固キ増地二於テスラ聚落ヲ形成シ得ルニ到ルモノナル可 シ．（第6表）

       第3節 豫備費験ノ小括

 余ハ第3回ノ分離實駿二及ピテ合計7株ノ純粋株ヲ得，純粋分離率58宕ノ高率ヲ學ゲタル ヲ以テ，純粋分離不能ノ不純水L株2株ヲ残セルモ，略ボ豫備費験ノ目的タル砲水クロラー ル」膳用ノ効果ヲ明ニセリト、曽、老シ，第3回ヲ以テ實験ヲ中止シクリ．而シテ重複ノ煩ヲ避 ケ，得タル成績ノ綜合観察ハ節7表ノー及ビ2二譲リ，裁二其ノ要鮎ノミヲ述ブレバ，i）

實騒材料ノ最モ好成績ヲ示セルバ，非抱カ輝菌液及ビ。」タ6抱カ絆凝固培地ニシテ，前者ハ91

％ヲ糟菌セシメ，後者ハ増菌株ノ鱒植二際シ共ノ70％ヲ護育セシメタリ．而シテ最下位ノ成 績ヲ示セル非抱カロ牛凝固培地ハ，英ノ率30名ナルヲ以テ，之ヲ上記ト比較セパ轄植二際シ砲 水クロラール」膳用ノ効果的ナルヲ諒解スルコトヲ得可シ．2）然レドモ増菌株ノ李凝固増 地ヘノ轄植ハ必シモ砲水クロラール」含量0．1％ヲ以テ唯一無二トナスモノニ井ズ，砲水クロ

ラール」二対スル耐性弱ク，ソノ0−0碗或ハ0−05宕含量二於テ褒育スルモノアリ，余ノ豫備費   第7表ノ1豫備費験ノ成績綜合表   験二於テ，総移植率ノ20％ハ，カ・ルモ

      瑠菌實験ノ成績

囎叩…抱加卜…抱加1非抱加ノナリキ 3）牛凝固培地内不純株ヨリ

被  糠檎、

   出水

簸  敷 12  9

同

率 75

楡、

出 数

回

牽

1檎1

出 鞍

同

率     ■

 一      一      1

・1

  66rユ1191

    −

    1      「     1         一

ノ平板橋地上ノ純粋分離率ハ牛凝固培地 内移植ノ代ヲ累ヌル毎皇増加スルヲ経験 セリ，師チ塘菌株ヨリノ純糖分離ハ皆無 テルニ初代不純林ヨリハ22％，2代不純 株ヨリハ頓二増加シク1％ヲ示セリ．北岡 氏ハ氏ノ枝附試験管法二由ル純粋分離實駿二開シテ，私信ヲ以テ同様ナルコトヲ逆ベラレク

      【302】

砲水クロラール」魔月二体兇「水レプトスピラ」ノ純棒分離法二就テ     3703

第ク表ノ2 移植及ピ純粋分離實験ノ成績

實 移 實

竿凝固培地内へ移植成績

殖 験 α1％抱加 α05％抱加

非抱加 3塔地

ノ通計 ^{純 同}

験 實 緯

株 護 同 護 同 護 同 駿 同 分 百

験 育 百 育 百 育 百 育 百 離

様 分 様 分 株 分 株 分 様 分

回 株 敷 駿 牽 数 牽 藪 牽 敷 牽 敷 牽

第1回1壇薗株

7170

3130

第2回1初代不鈍檬 _{9 8 7 77 7 77 9 100 2 22} 第3回 2代不純株 ⁷

7i

0．07％抱加ヘノ成績ハ省略セリ．

リ．以上ノ成綾ヨリシテ水1L純樺株ヲ獲得セントスルニハ弐ノ如キ操作ヲ最モ合目的ト信 ズ，帥チ増菌液ニハ抱水クロラール」ヲ混入セズ，増菌株ハ直二〇．1％及ビα05％抱カ絆凝固 堵地二韓植シ，此ノ堵地ヲ2回通過セシメタルモノヨリO．06％抱カロ平板堵地二塗抹堵養ヲ行

ヒ分離法ヲ講ズルナリ。

     第3章抱水クロラ□ル」藤用二．由ル純樺分離成績

増菌法ニハ豫備賞験ノ成綾皇從ヒ，抱水クロラールヲ膳用セザリシ爲メ，共鮎木研究ノ目 的外ナルガ如キモ，一共ノ威綾ハ純粋一分離牽二直接ナノし影響ヲ有スルヲ以テ，裁ニハ概要ヲ記 載スルコト・セリ．昭和10年2月末二於テ實験ノ前日及ビ営日ノ2目間二亘リ，被検水100

㏄ヲ内容100ccノ投藥瓶二探集シ來リ，大略 ㏄ヲ扮テ83ccヲ残シ，之二20％糞使水工Occ 及ビ溶解セル2％塞天7cc（前記分注塞天1本）ヲ混和シ4枚ノ「シヤーレ」二25cc宛分酉已シ テ30℃呈2週間放置シテ成綾ヲ観察セリ．之ヲ第8表二要記セルガ，英ノ検出率ハ74％ナ ルヲ以テ，梢小ナリ．恐ラクハ實験時期2月末二鶴シ被検水温度低カリシ爲ナラ：・ト推測セ

第8表糟菌成績

 昭和10年2月25日

探集場所

P舳内檎出被鰍番號 水  田≡ 22114ミ _@！  1

用   水

35， 36， 37， 38， 39， 40，42， 43， 44， 45， 46， 47，48， ξ9， 50， 51， 52， 53，

井戸水槽

^{1・舳・軋}

下   水

一 591 ■   ＾一      u一

潟 ^{1 1} 61

河   川 1い

合   計

【303】

ラル．両シテ得タル37株ノ水L株昌被検水番號ト同番號ヲ附シ，純樺分離操作ノ諸賢験二移

レリ．

       第2節純樺分離成績

 豫備費験ノ成績二從ヒ，α1劣及ビ0．05％二砲水クロラール」ヲ添加セルーO％家兎血清カロO−5

％水道水寒天培地内二前記37株ノ増菌液ヲ榑植シ，護育セル者ヲ更昌次代二移植シッ・他方 α06％砲水クロラール」加固形平板培地上二純粋分離操作ヲ施シ行キ，第3回實験昌到ツチ相 當敷ノ純粋株ヲ得タルヲ以テ幾分ノ不純株ヲ残セルモ，略ボ實験ノ目的ヲ達セリト認メ，以 後ノ實駿ヲ中止セリ．而シテ成績ノ詳細ハ第9表ノI，2，3及ピ4二記載セリ．余八本實験

呈於テ被検水50ヨリ26株甑チ52名ヲ純粋分離スルコトヲ得タリ．是等ノ成績ヲ第9表ノ4ノ 如ク綜合検討スル㍉不純株ノ牛凝固培地内移植實験ノ第1回實験成績ハ爾穣孚凝固培地内 ノ纏愛育株数ハ33株呈シテ共率89％テルモ，牛凝固増地内各自ノ箪凋護育株数ハ29株（78名）

及ビ24株（6切）ニシテ褒育勝率ノ間二相當ノ差アリ．第2回移植實験室ハ此差接近シテ87 名：ク8名トナリ第3回移植二及ヘバ各培地共實験株ノ100％ヲ護育セシメ，共産無キニ到レ

リ．叉固形平板増地上ノ純粋分離賢験二於ケル成績ハ第1回2％，第2回9％二上ル2，第 3回二列リ突然81名二増加セリ．自ロチ不純水L株ハ牛凝固培地内移植ノ代ヲ黒ヌル毎二人］：

培地二通廠愛育スルニ到ルモ ニシテ，艮ク豫備蟹験ノ成績ト・致セリ．

第9表ノ1 第1回移植及ビ純粋分離操作ノ成績        昭和10年3月12日

移 _{α1％ O．05％ 固} 移 _0−1％ α05％ 固 」移

殖 殖 殖 α1％ 0−05％ 固

培 抱 抱 形 培

抱 掩 形 培

地 地 地 抱 抱 形

質験 ^加 加 賓験 ^{加 加} 實験 ^{加 加}

株 牛 牛 牛 株 牛 牛 雫 株 牛 牛 牛

番 凝 凝 番 凝 凝 番 凝 凝

鑓． ^{固 固 板 號 固 固 板} 瞭 ^{固 固 板}

16 _{十 十}

■ 32 十 十 一 48 十 十 ，

17 十 十

1

18 _{一 一 ・} 36 十 十 一 50 _十 十 ■

20 _{十 ■ ・} 37 _十 十 十 51 _十 十 ・

2i 一 ■ 一 38 _一 十 ・一 52 _{一 ■ 一}

22 一 十 一 39 _十

■ 一 53 _{十 一 一}

23 _十 十 40 _{一 一 一} 55 _{十 一 一}

25 十 ■ 一 42 _{十 一}

口 56 _{十 十 一}

26 十 十 一 43 十 十 一 58 _一 十 一

27 十 十 ■ 44 _{十 一 一} 59 十 _{一 口}

28 十 十 一 45 十 十 一 61 _十

一 一

29 十 十 一 46 _十 十 一

31 _{十 十 ■} 47 _{一 十 ■}

【醐】

砲水クロラール」鰹月二体ルr水レプトスピラ」ノ純捧分離法二就テ     3705

第9表ノ2 第2回移植及ビ純樺分離操作ノ成績

    3月22日

移 _{O．1％ O．05％ 固} ^＼移 _0．1％ α05％ 固 移

殖 殖 殖 ^α1％ O・0脇 固

培 抱 抱 形 培 _抱 抱 形 増

地 地 地 抱 抱 形

加 加 貢験 加 加 實験 ^{加 加}

牛 孚 苧 株 竿 牛 竿 _株 牛 牛 雫

凝 擬 番 凝 凝 番 凝 凝

固 固 板

號 ^{固 固 板} 號 ^{固 固 板}

、

16 _{十 十 一} 32 _十 十 一 48 _十 十 一

17 十 十 一 35 _{十 十}

・ 49 十 十 ・

20 十 十 十 36 _{一．・ 一 一} 50 十 一 ■

22 十 一 一 38 十 十 ■ 51 _{十 十 ，}

23 _{十 ■}

F

25 十 十 一 42 十 十 一 55 _一 十 一

26 _十 十 十 43 _{十 十 一} 56 十 一

27 _十 十 一 44 十 十 一 58 _一 十

28 十 十 一 45 十 十 ■ 59 _{■ ・ 一}

29 _{十 十 ■} 46 十 一 一 61 十 十 一

31 十 十 一 47 _{十 十 一}

第9表ノ3 第3回移植及ビ純糟分離操作ノ成績

   4月2日

O．1％

抱 加 牛 凝 固

O・05％

抱 加 牛 凝 固

固

形 苧 板

ぷ

株＼

番、號＼

0．1％

抱 加 牟 凝 固

0．05％

抱 加 牛 凝 固

固

形 午 板．

移 殖

 培  地

實験

橡

番 號

O．1ヲ6  0・05％

抱抱 加．加

議憲

固j固

固

形 午 板

16 十 十 十

一32

17 _{十 十 十} 35 十 十 十 48 十 十 十

22 十 十 十 38 十 十 十 49 十 十 十

23 十 十 一 39 十 十 十 50 十 十 一

25 十 十 十 42 _{十 十} 十 51 十 十 十

27 十 十 十 43 十 十 十 55 十 十 十

28 _{十 十 十} 44 _十 十 十 56 十 十 十

29 _{十 十}

■ 45 十 十 十 58 _十 十 十

31 十 十 ■ 46 十 十 一 61 _{十 十 十}

【305】

第9表ノ4 本實験ノ綜合成績

責 移  不 ^{移 α1％抱加年}_{凝固増地内} ^{α05％抱加孚}_{凝固培地内} ^{爾牛凝固培地一}_{ノ通計成績} ^ﾅ形平板_増地上二 被ノ

植 純

二 實

壌嚢霞 護護霞 護護譲 鈍純

験   ^{株使用 培} _験 ^{育育墓株夏簑 育育墓株夏簑 育育蔓株募簑}

棒棒

分分

二 、

5052

セ 養

回 ル  代 ^{敷 勤リ}

敷革敷 敷率藪 籔率籔 敷率

第1回

櫓 菌 株

29788 ²⁴⁶⁴¹³ 33894

第2回

初代不純株

28874 25787 ^3093 2

第3回

2代不純株

271000 271000 2281

百分率端籔ハ全部切捨テタリ．

第10表 全饅ノ綜合成績

豫備實験 本實験 ^綜合成績

I ■

被 純 分 被 純 純 総一 総 総

緯 離 棒 分

被 純 純

橡 瞼 離 捧 分

分 百 分

百 瞼 分 離

水 離 分 水 離 分 水 離 百

籔 歓 率 籔 敷 率 数 籔 率分

I

12 7 58 50 26 52 62 33 53

      第4章 豫備資験及ビ木質験ノ成嶺ノ総括

豫備賛験二於ケル純樺分離率ハ58％，本實験二於ケル純樺分離率ハ52％ニシテ，繭實験ヲ 通計セバ総被検水数62二封シ纏純樺分離藪ハ33株，53％ナリ．故昌余ハ自然界二水Lヲ求メ テ被瞼水ノ約牛藪ヨリ水I・純粋株ヲ得タリト云フ可ク，此ノ爾實験ハ共二索候塞冷ノ候ナリ

シカバ検出率ノ小ナリシ影響ヲ受ケ純粋分離率モ小ナリシガ如ク推測セラル・ヲ以テ，愉ホ 温唆ナル季節昌於テ再實験ヲ行ヘバヨリ多クノ純樺分離株ヲ得可シト確信ス．

      第5章結  論

余ハ水L純樺分離二濾過器ヲ使用スルノ煩ヲ除去セ1・ト欲シ，雑菌ノ護育防止皇抱水クロ ラール」ヲ使用シ，略余所期ノ目的ヲ達スルヲ得タリ．印チ，先ヅr0．2％塞天加2．O彩糞便水』

ニテ増菌法ヲ講ジ，弐デ，之ヨ灯0」％及ビ0・05宕抱水クロラール」加10％家兎血清，0．5宕 水道水塞天」二簿植シ，此ノ牛凝固靖地ヲ2回通過セシメタル不純L株ヲ『0．05％乃歪0．07％

抱水クロラール」加10名家兎血清2％水道水塞天牛板」上二塗抹堵養ヲ行フニァリ．

此方法ヲ以テ紬菌濾趨籍ヲ用フルコトナク被検水62種ヨリ33株（53劣）ノ純樺分離二成功セ

リ．

      【306】

砲水クロラール」魔月二体ル「水レプトスピラ」ノ純棒分離法二就テ 3707

欄筆二臨ミ終始御懇篤ナル御指導ト．目一ツ御校閲ノ努ヲ腸リタル恩師谷教授二割シ深ク感謝ス、

      文   戯

1）Bgsi1ew8ky，Zbl．工Bakt．lBd−116，S．1凪（1930）一  2）由利，日本微生物學雑誌，趾22，

S．1369。（1928）．  3）A曲msky，Zbl．f．1Bユkt．1Bd．112，S．476．（1929〕．  4）Hirso此Zeits．

f・Imm・正吐71，S・45軌（1931〕、   5）Ki屹。k田，Zb】．i1B皿kし1Bd．122，S．314・（］931〕・   6〕

杉本，十全曾艦誌，Bd・40，S．2432。（1935）1   7）HiI1dle，I；r．m・工V，12，P57・（1925）・

【30リ