PCIF1, a novel human WW domain‑containing
protein, interacts with the phosphorylated RNA polymerase 2
著者 范 紅
著者別名 Fan, Hong
journal or
publication title
博士学位論文要旨 論文内容の要旨および論文審査 結果の要旨／金沢大学大学院医学研究科
volume 平成15年7月
page range 32‑32
year 2003‑07‑01
URL http://hdl.handle.net/2297/15779
学位授与番号 学位授与年月日 氏名 学位論文題目
甲第1571号 平成15年３月25日 苑紅
PCIＦ１，anovelhumanWWdomain-containingprotein，interactswiththe phosphorylatedRNApolymeraseⅡ
(ヒト新規ＷＷドメイン蛋白質PCIF1はリン酸化ＲＮＡポリメラーゼⅡに結合する）.
教授 教授 教授
山本 福田 山本 健龍論文審査委員 主査
副査
博
内容の要旨及び審査の結果の要旨
ＲＮＡポリメラーゼ、最大サプユニットｃ－末端領域（CTD）は、種々のＣＴＤキナーゼによってリン 酸化されることにより、ｍＲＮＡ前駆体の転写とプロセシングのカップリングに重要な働きを持つことが 明らかになって来ている。本研究では、転写とｍＲＮＡプロセシングをカップルさせている分子機構に アプローチするために、リン酸化CTDと直接結合するヒト新規因子を同定し機能解析を行った。
ヒトHepG2細胞由来の発現ｃＤＮＡライブラリーを、３２Ｐラペルしたリン酸化ＣＴＤ蛋白質をプローブと して用いたB1otoverlay法によってスクリーニングし､PCIF1(EhosphorylatedQD二nteractingEactor l)と名付けた新規蛋白質を同定した。ヒトPCIＦ１が以下の性質を有することを見いだした。
ＬＷＷドメインを有する７０４アミノ酸からなる蛋白質で、そのＷＷドメインのアミノ酸配列はｕ細胞 周期調節及び細胞癌化に関与していることが示唆されているヒトＰｉｎｌのＷＷＦメインと非常に高 い相同性を有する。
２PCIＦ１はｉｎｖｉｔｒｏに於いて、ＷＷＦメインを介して組み換えＣＴＤ蛋白質に直接結合し、その結合能 はＣＴＤリン酸化によって著しく増強する（約２０倍)。さらにPCIＦ１は、ｉｎｖｉｔｒｏに於いて内在 性のリン酸化RNAポリメラーゼＩＩと特異的かつ安定的に結合する。
3．ＦＬＡＧタグを持つPCIＦ１を発現している細胞を用いた免疫共沈降実験によって、PCIＦ１が細胞内に 於いても内在性リン酸化ＲＮＡポリメラーゼ、とｗｗドメインを介して特異的に会合することが見 いだされた。またヒト培養細胞の蛍光二重染色によって、PCIＦ１は主に細胞核質に局在し、リン酸 化ＭＡポリメラーゼ１１の局在と概ね一致することが示された。
4．PCIＦ１のmRNA発現には顕著な組織特異性は認められず、ユピキタスな発現パターンを示した。
以上の知見から、ヒトPCIＦ１はリン酸化ＲＮＡポリメラーゼＩＩと特異的に結合する新規Ｗドメイン 核蛋白質であることが明らかとなり、リン酸化ＣＴＤとの結合を介してＲＮＡポリメラーゼⅡの活性を 調節している可能性が示唆された。
本研究は、遺伝情報発現制御に関与することが示唆される新規ヒト因子を同定したものであり、学 位授与に値すると評価された。
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