イントロダクション 2 CELLestial シリーズ蛍光顕微鏡法フローサイトメトリーマイクロプレートアッセイセルベースアッセイによるリード化合物の同定やスクリーニング! 4 つのメインカテゴリに分類されるアッセイを幅広くラインアップしています細胞の生死 / 増殖パスウェイアッセイ化合物のア

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CELLestial

®

シリーズ

蛍光セルベースアッセイ

細胞の生死 / 増殖　パスウェイ

_p.

3 酸化ストレス、抗酸化物質、スカベンジャー

_p.

7 細胞応答 / 細胞毒性　パスウェイ

_p.

9 タンパク質凝集

_p.

14 細胞の生死 / 増殖　パスウェイ

_p.

3 酸化ストレス、抗酸化物質、スカベンジャー

_p.

7 細胞応答 / 細胞毒性　パスウェイ

_p.

9 タンパク質凝集

_p.

14

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2 イントロダクション

セルベースアッセイによるリード化合物の同定やスクリーニング！

CELLestial

®

シリーズ

蛍光顕微鏡法、フローサイトメトリー、マイクロプレートアッセイ

4 つのメインカテゴリに分類されるアッセイを幅広くラインアップしています。 ● 細胞の生死／増殖パスウェイアッセイ化合物のアポトーシス、ネクローシスおよびオートファジーへの影響をモニターできます。 Annexin V 結合の変化、ミトコンドリア膜の電位変化、核凝集、オートファゴソーム形成、細胞膜 integrity の変化を解析します。・ GFP-Certified™ アポトーシス／ネクローシス検出キット ………　page 3

・ Nuclear-ID™ Blue/Red 細胞生死判定試薬／ GFP-Certified™ ………　page 3 ・ Organelle-ID™ RGB III アッセイキット ………　page 4 ・ Cyto-ID™ long-term cell tracer キット ………　page 4 ・ Nuclear-ID™ 細胞周期判定キット／ GFP-Certified™　 ………　page 5 ・ Nuclear-ID™ Green　クロマチン凝縮検出キット ………　page 6 ● 酸化ストレス、抗酸化物質、スカベンジャーアッセイ化合物の活性酸素種、スーパーオキサイド、一酸化窒素、ペルオキシナイトライトへの影響をモニターできます。・ Total ROS/Superoxide　検出キット ………　page 7 ・ ROS/RNS　検出キット ………　page 8 ● 細胞応答／細胞毒性　パスウェイアッセイ化合物の細胞機能や細胞生存への影響をモニターできます。細胞生存、細胞増殖、細胞毒性、ミトコンドリア活性を解析します。・ FluoForte™ カルシウム　アッセイキット ………　page 9 ・ Mito-ID™ 膜電位／細胞毒性　キット ………　page 10 ・ Lyso-ID™ Red 細胞毒性　キット／ GFP-Certified™ …　page 11 ・ eFluxx-ID™ 多剤耐性アッセイキット ………　page 12 ・ Cyto-ID™ オートファジー検出キット ………　page 13 ● タンパク質凝集アッセイタンパク質が環境ストレス (pH や温度の変化など）により、引き起こされる凝集を解析できます。・ ProteoStat® タンパク質凝集アッセイ　………　page 14 ・ ProteoStat® アグリソーム検出キット　………　page 15 図１：　細胞内における化合物のトラップ機構や細胞内局在を示す（G. Morissette et al., 2008 を抜粋・変更）。ΔΦ M= ミトコンドリア内膜の negative membrane potential。エンゾライフサイエンス社の蛍光セルベースアッセイをそれぞれの細胞内のターゲットのところに示す。 (page3） (page11） (page7, 8） (page10） (page5） (page5） (page6）

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細胞の生死／増殖　パスウェイアッセイ

GFP-Certified

™

アポトーシス／ネクローシス検出キット

Nuclear-ID

™

細胞生死判定試薬

1 画面でアポトーシス細胞とネクローシス細胞を判別可能！

1 チューブで実験完了！

3

● GFP 発現細胞や、他の緑色の蛍光タンパク質と併用できます。 ● 健康な細胞、初期アポトーシス細胞、後期アポトーシス細胞、ネクローシス細胞を見分けます。 ● 細胞死パスウェイ解析や毒性研究に最適　　　検出波長：アポトーシス細胞（Annexin V-EnzoGold）（黄）Ex/Em: 550/570 nm ネクローシス細胞（7-AAD）（赤） Ex/Em: 546/647 nm 　本キットは、GFP や FITC のような検出波長が緑色のプローブによる蛍光シグナルのオーバーラップを最小化するようにデザインされています。 EnzoGold を結合した Annexin V は誘導された細胞の細胞外表面上のホスファチジルセリンと結合することによりアポトーシスを検出します。同様に、ネクローシス検出試薬（7-AAD）は細胞膜 integrity のロスを検出します。　本試薬は細胞透過性のある核酸染色用青色蛍光色素と、死細胞の核を染色する細胞不浸透性の赤色蛍光色素のミックスです。2 種類の蛍光色素を同時に配合することにより蛍光顕微鏡や共焦点顕微鏡で細胞の生死を判定できます。図１： GFP、Annexin V-EnzoGold、7-ADD の励起・蛍光スペクトル図 2： GFP を発現する HeLa 細胞を 2 µM のスタウロスポリンでアポトーシスを誘導し、4 時間後に本キットを用いて細胞を染色した。（A）正常細胞、（B）初期アポトーシス細胞、（C）後期アポトーシス細胞、（D）ネクローシス細胞構成内容 • アポトーシス検出試薬 (Annexin V) • ネクローシス検出試薬 (7-AAD) • アポトーシス誘導試薬 (Staurosporine) • 10X Binding バッファー

Enzo Life Sciences, Inc.　　　　メーカー略号： ENZ　

品名品番包装希望販売価格

GFP-Certified™ Apoptosis/Necrosis Detection Kit for microscopy and flow cytometry

ENZ-51002-25 1 Kit (25 assays) ￥21,000 ENZ-51002-100 1 Kit (100 assays) ￥52,000

Nuclear-ID™ Blue/Red Cell Viability Reagent (GFP-Certified™) ENZ-53005-C100 100 µL (1,000 assays) ￥35,000 Nuclear-ID™ Blue/Green Cell Viability Reagent ENZ-53004-C100 100 µL (1,000 assays) ￥35,000 Nuclear-ID™ Red/Green Cell Viability Reagent ENZ-53006-C100 100 µL (1,000 assays) ￥35,000

図１：生細胞の核を青色に染め、死細胞の核を赤色に染める。 ● 他の細胞マーカーと併用可能 ● GFP 発現細胞での使用に最適　　　検出波長：生細胞（青） Ex/Em: 350/461 nm 死細胞（赤） Ex/Em: 571, 619/639 nm

Hot

488 laser line

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細胞の生死／増殖　パスウェイアッセイ

4 Organelle-ID

™

RGB III アッセイキット

Cyto-ID

™

long-term cell tracer キット

ゴルジ体から小胞体への分子輸送＆分泌パスウェイ解析に！

生細胞を安定にラベリングしてトレース可能に！

● 生細胞を使ったゴルジ体および小胞体のアッセイに ● 優れた耐光退色、耐光変化 ● 分泌膜輸送やオルガネラインテグリティのモジュレーター解析に ● 生細胞の迅速かつ安定なラベリング色素 ● 細胞接着・遊走アッセイに最適 ● 細胞毒性なし検出波長： Cyto-ID™ Red Long-Term Cell Tracer 試薬（赤） Ex/Em: 450, 570/ 583 nm 　他社のゴルジ体標識色素と比べて、本キットのゴルジ体標識色素（緑色）は小胞体の染色を最小にして、ゴルジ体の局在をより正確に示します。小胞体の標識色素（赤色）は、high fidelity で緑色蛍光プローブと一緒に使用することを前提にデザインされています。　本キットは、HeLa 細胞、Jurkat 細胞、MDCK 細胞、U2OS 細胞への使用を検証済みです。

　Cyto-ID™ Red Long-Term Cell Tracer キットは非共有結合による独自の細胞ラベリング技術です。赤色蛍光色素が細胞の脂質膜に入り込み安定にラベリングします。ラベリングバッファーは哺乳類細胞と等浸透圧で、有機溶媒や界面活性剤は含みません。

構成内容

• Organelle-ID RGB™ Reagent III (lyophilized)

• 10X Assay バッファー１

• 50X Assay バッファー 2

構成内容

• Cyto-ID™ Red Tracer Dye

• 4X Labeling バッファー • 10X HBSS 図１： Organelle-ID RGB™ を用いて MDCK 細胞を染色。ゴルジ体を緑色（Golgi-ID™ ) に染め、小胞体を赤色（ER-ID™）に染め、核を Hoechst 33342 で染めた。図１：

Jurkat 細胞を Cyto-ID™ Red Tracer 試薬を用いてラベリングした。図 2：小胞体（赤色）、ゴルジ体（緑色）、核（青色）の 3D イメージ。ゴルジ体と小胞体の空間での関係を示すこの 3D イメージは structured illumination method を用いて作成した。Carl Zeiss 社の Apotome を使用している。

Cyto-ID™ Red long-term cell tracer kit for flow cytometry

and fluorescence microscopy ENZ-51037-K025 1 kit (25 assays) ￥30,000 Cyto-ID™ Green long-term cell tracer kit ENZ-51036-K025 1 kit (25 assays) ￥30,000

Organelle-ID™ RGB III assay kit ENZ-51032-K100 1 Kit (100 assays) ￥52,000

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細胞の生死／増殖　パスウェイアッセイ

Nuclear-ID

™

Red 細胞周期判定キット／ GFP-Certified

™

フローサイトメトリーにより細胞周期を判定

5

● 生細胞、透過処理済細胞、固定細胞に使用可能 ● 薬剤処理による細胞周期ダイナミクスの変化をモニター ● GFP（緑色蛍光プローブ）に最適検出波長： Nuclear-ID™（赤）Ex/Em: 568nm/ 637nm 　Nuclear-ID™ Red 細胞周期判定キットは、サンプル中の G0/G1 期、 S 期、G2/M 期の細胞の割合を測定し、sub-G0 期の細胞を定量することができます。倍数性レベルを示す細胞株や正常細胞株を透過処理した細胞や固定化した細胞、および精細胞の DNA 研究に最適です。　Nuclear-ID™ Red 試薬は生細胞密度のレンジが 1 X 105_{～　5 X 10}5 cell/mL の範囲で評価しています。　本キットはフローサイトメトリーによる細胞周期の阻害や誘導を解析する簡便な解析方法です。　細胞周期を M 期に同調させるノコダゾールが含まれます。構成内容

• Nuclear-ID™ Red Cell Cycle 検出試薬

• Nocodazole Control • 10X Assay バッファー図１：生細胞を薬剤（Etoposide、Aphidicolin または Nocodazole）で処理して各期における細胞周期進行を解析した。図 2：核（赤色）とミトコンドリア（GFP 発現；緑色）の 3D イメージ。核とミトコンドリアの空間での関係を示すこの 3D イメージは structured illumination method を用いて作成した。Carl Zeiss 社の Apotome を使用している。

構成内容

• Nuclear-ID™ Green Cell Cycle 検出試薬　

• Nocodazole Control　

• 10X Assay バッファー

緑色蛍光でフローサイトメトリーにより細胞周期を判定

検出波長：　Nuclear-ID™ （緑）　Ex/Em：　503 nm/531 nm

Nuclear-ID™ Red Cell Cycle Kit (GFP-Certified™)

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細胞の生死／増殖　パスウェイアッセイ

6 Nuclear-ID

™

Green　クロマチン凝縮検出キット

クロマチン凝縮を蛍光顕微鏡観察やフローサイトメトリーでモニター

● 凝縮クロマチンの蛍光検出によるアポトーシス解析 ● 細胞死パスウェイ解析や薬剤／毒性研究に最適 ● 正常細胞に比べてアポトーシス誘導細胞の凝縮クロマチンを　 40 倍強く蛍光染色 ● 洗浄不要の簡単プロトコール検出波長：Nuclear-ID™（緑）Ex/Em: 503nm/ 531nm 　Nuclear-ID™ Green クロマチン凝縮検出キットは、アポトーシスの兆候のひとつであるクロマチン凝縮を迅速簡便に検出するキットです。このキットは DNA に挿入される蛍光色素を含み、この蛍光色素はアポトーシス細胞の凝縮クロマチンを強く染め、一方、生細胞の正常クロマチンを薄暗く染めます。この染色パターンは蛍光顕微鏡観察やフローサイトメトリーによるアポトーシス細胞と正常細胞の識別を可能にします。　アポトーシス誘導化合物の試験やクロマチン凝縮のステージのモニターにお使いいただけます。　アポトーシス誘導試薬のスタウロスポリンが含まれます。構成内容 • Nuclear-ID™ Green 検出試薬 • 50 nmoles, アポトーシス誘導試薬 (Staurosporine) • 10X Assay バッファー図１：蛍光顕微鏡でクロマチン凝縮を観察した。HeLa 細胞を 0.2% DMSO で処理（コントロール；A）、もしくは 2 µM スタウロスポリンで処理し（B)、5 µM Nuclear ID™ Green 試薬で染色した。アポトーシス細胞の凝縮クロマチンを強く染色し（矢印）、一方、正常細胞の非凝縮クロマチンを薄暗く染色した（A)。図 2：アポトーシスの過程でのクロマチン凝縮の各ステージ

Nuclear-ID™ Green Chromatin Condensation Detection Kit for

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酸化ストレス、抗酸化物質、スカベンジャーアッセイ

Total ROS/Superoxide　検出キット

活性酸素種とスーパーペルオキシドの産出をイメージング

7

● 生細胞中の活性酸素種（ROS) とスーパーオキシドレベルをモニター ● 過酸化水素、ペルオキシ亜硝酸、ヒドロキシラジカルを識別検出波長：酸化ストレス（緑）Ex/Em: 504 nm / 524 nm スーパーオキシド（橙）Ex/Em: 530 nm / 590 nm 　Total ROS/Superoxide 検出キットは、生細胞中の活性酸素種（ROS) の産出をリアルタイムに観察できます。キットは酸化ストレス検出試薬（緑色）とスーパーオキシド検出試薬（橙色）から構成されます。構成内容 • Oxidative Stress 検出試薬 • Superoxide 検出試薬

• ROS Inducer (Pyocyanin)

• ROS Inhibitor (N-acetyl-Lcysteine)

• Wash Buffer Salts

図 1：

蛍光顕微鏡観察による活性酸素種の形成プロファイリング。HeLa 細胞を pyocyanin で処理して本試薬で検出した。酸化ストレスレベルは緑色蛍光でモニターし、スーパーオキシド生成は橙色蛍光で検出。前処理として ROS 形成を阻害する ROS インヒビターの NAC で処理したサンプルの結果も示す。

図 2：

フローサイトメトリーによる活性酸素種の形成プロファイリング。Jurkat 細胞を pyocyanin で処理したものは ROS 産生とスーパーオキシド産生の両方のシグナルが強く検出し、TBHP で処理したものは ROS 産生のシグナルを強く検出し、アンチマイシン A 処理したものはスーパーオキシド産出のシグナルを強く検出した。

Total ROS/Superoxide Detection kit for microscopy, flow cytometry

and microplates ENZ-51010 1 Kit (200 assays) ￥32,000

酸化ストレス、抗酸化物質、スカベンジャーアッセイ

8 ROS/RNS　検出キット

蛍光顕微鏡で活性酸素種／活性窒素種をモニター

● 生細胞中の活性酸素種（ROS) と活性窒素種（RNS）をモニター ● スーパーオキシド、一酸化窒素、ペルオキシ亜硝酸を識別検出波長：酸化ストレス（緑）Ex/Em: 504 nm/ 524nm スーパーオキシド（橙）Ex/Em: 530 nm/ 590nm 一酸化窒素（赤）Ex/Em: 648 nm/ 666nm 　ROS/RNS 検出キットは、同時に活性酸素種（ROS) と活性窒素種（RNS）を検出することができます。3 種類の蛍光プローブの組み合わせにより、生細胞中のスーパーオキシドや ROS レベルを測定できるのと同時に、一酸化窒素合成酵素（NOS）活性やフリーの一酸化窒素をリアルタイムに測定も簡単にできます。構成内容 • NO 検出試薬 (Red)

• Oxidative Stress 検出試薬 (Green)

• Superoxide 検出試薬 (Orange)

• NO Inducer (L-Arginine)

• ROS Inducer (Pyocyanin)

• NO Scavenger (c-PTIO)

• ROS Inhibitor (N-acetyl-Lcysteine)

• Wash バッファー

ROS/RNS Detection Kit for microscopy ENZ-51001-200 1 Kit (200 assays) ￥41,000

図 1： HeLa 細胞を 3 種類の蛍光プローブと反応させ（2 時間、37℃）、各試薬で誘導した（20 分間、37℃）。

Control

Pyocyanin,

0.1 mM

L-Arginine,

1 mM

Pyo/Arg

Peroxynitrite

ROS

Superoxide

NO

ROS

Superoxide

N

Peroxynitrite

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細胞応答＆細胞毒性　パスウェイアッセイ

FluoForte

™

カルシウム　アッセイキット

ハイスループット解析に最適なカルシウムインジケーター

9

● 混合するだけ！洗浄不要のカルシウムインジケーター ● オートメーション対応／ 37℃もしくは室温条件下で生細胞に色素をロード ● クエンチャー不要！リガンド - レセプター相互作用の干渉を排除検出波長：FluoForte™ （緑）Ex/Em: 490 nm/ 514 nm 　FluoForte™ カルシウムアッセイキットは、明るく高感度なカルシウムイオンインジケーターで、広域のターゲットに対してカルシウムの動員を検出することができます。FluoForte™ 色素であればシグナル強度が高いので、難しいとされる細胞やレセプターの優れた測定結果を得られます。　EC50 値や再現性は様々な GPCR の活性化について評価しています。FluoForte™ は他社のカルシウムインジケーターよりも 4 倍明るく、より強いシグナル（Z'-factor>0.75）が得られるので、被験化合物が弱いシグナル応答しか起こさないケースにもお使いいただけます。構成内容（品番：51017） • FluoForte™ Reagent

• Dye Efflux inhibitor （品番：51016）

• FluoForte™ Reagent

• Dye Efflux inhibitor

• Hanks’ buffer with 20 mM HEPES (HHBS)

図 1：

FluoForte™ 試薬を室温または 37℃条件下で細胞にロードした。

図 2：

4 µM の FluoForte™ 試薬または他社カルシウムインジケーター 100 µL を細胞と 37℃ で 1 時間インキュベートした。細胞を洗浄して dye efflux inhibitor と一緒に ATP を 1 µM になるように加え、蛍光顕微鏡で観察した。

FluoForte™ Calcium Assay Kit ENZ-51017 1 Kit (10 × 96 wells) ￥100,000 ENZ-51016 1 Kit (100 × 96 wells) ご照会

他社製品

FluoForte™ 試薬は膜透過性のアセトキシメチル（AM）エステルとして細胞に入る。細胞内に入ると、細胞内エステラーゼにより色素が加水分解される。膜不透過性で負電荷型になった色素はカルシウムイオンに結合でき、GPCR 活性時に細胞内から放出される。いくつかの細胞は色素を細胞外に輸送する Organic Anion Transporter を発現し、蛍光シグナルを減少させるので、キット構成品のインヒビターを加えて防ぐ。培養細胞を使った細胞内のカルシウム動員アッセイ原理。細胞外側細胞内側 FluoForteTM_がカルシウムイオンと結合して蛍光を発する。 ER からカルシウムイオンが放出される。細胞膜アニオントランスポーター

Hot

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細胞応答＆細胞毒性　パスウェイアッセイ

10 Mito-ID

™

膜電位／細胞毒性　キット

エネルギーステータスをフローサイトメトリーやイメージングでモニターできる

● 二色発光！ミトコンドリア膜電位低下時にプローブが橙（590 nm）から緑（525 nm）にシフト ● 簡単操作＆再現性が高い！光安定性も水溶解性も高い検出波長：Mito-ID™ 膜電位（橙 , 緑）Ex/Em: 510 nm/ 525 nm, 590 nm 　Mito-ID™ 膜電位キットはミトコンドリア膜電位状態によって緑またはオレンジの蛍光を発する陽イオン色素でミトコンドリア膜電位を測定します。励起細胞において、Mito-ID™ 膜電位検出色素は緑色蛍光モノマーとしてサイトゾルに局在し、また橙蛍光凝集体としてミトコンドリアに蓄積しています。　一方、ミトコンドリア膜電位が低下した細胞においては、Mito-ID™ 膜電位検出色素は主に緑色蛍光モノマーとしてサイトゾルに局在し、ミトコンドリア内の橙色蛍光は示されません。一般的に使用されている JC-1 と比べてミトコンドリア膜電位変化による感受性、水溶解性、光安定性に優れます。キットに含まれる cyanide m-chlorophenylhydrazone (CCCP) は、ミトコンドリア動態変化観察を可能にします。構成内容

• Mito-ID™ MP Detection Dye

• 10X Assay バッファー 1 • 50X Assay バッファー 2 • CCCP コントロール図 2： HeLa 細胞のミトコンドリアを Mito-ID™ 膜電位検出試薬で染色し、落射蛍光顕微鏡で可視化した。橙色蛍光凝集体はミトコンドリアに局在し、緑色蛍光モノマーは主にサイトゾルを染色した。図 1：一般的な蛍光マイクロプレートリーダーを用いて測定した。ミトコンドリア膜電位は、CCCP 濃度に応じて減少し橙シグナルの減少が示された。ミトコンドリア膜電位低下に対して Mito-ID™ 膜電位色素は JC-1 よりも少なくとも 10 倍感度が高い。

細胞応答＆細胞毒性　パスウェイアッセイ

Lyso-ID

™

Red 細胞毒性　キット／ GFP-Certified

™

リン脂質症、オートファゴソーム、細胞毒性をモニター

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● リソソーム分解の障害をモニター ● 合成リン脂質アナログと一緒にインキュベーションすることなく薬物反応を解析 ● 前臨床薬剤安全性試験やin vitro 毒性試験に最適 ● 迅速反応　10-15 分間 ● 固定＆透過処理不要

　Lyso-ID™ Red　細胞毒性キットは 96-well マイクロプレートのセルベースアッセイで、生細胞中の薬剤または毒物誘導リソソームとリソソーム様オルガネラの障害を測定する迅速で定量性のあるアプローチです。

構成内容

• 10x dual color detection reagent

• Detection バッファー

• Verapamil control

• 10x assay バッファー

Lyso-ID® Red Cytotoxicity Kit (GFP-Certified™) for microplates ENZ-51015-KP002 1 kit (2 × 96 wells) ￥61,000 Lyso-ID® Red detection Kit (GFP-Certified™) for microscopy ENZ-51005-500 1 kit (500 assays) ￥35,000 Lyso-ID® Green detection Kit (GFP-Certified™) for microscopy ENZ-51034-K500 1 kit (500 assays) ￥35,000

図 1：

リソソーム障害活性のある化合物をスクリーニング。一般的な蛍光マイクロプレートリーダーを用いて測定した。U2OS細胞のEC50を評価した。本アッセイを用いて得られた高 Z-factor（0.87 / 100uM verapamil）は、優れた S/N 比を示す。図 2：リン脂質症に起因するリソソーム部分の変化。未処理の U2OS 細胞（A)、クロロキン処理細胞（B）、クロルプロマジン処理細胞（C）、ベルパミル処理細胞（D) の蛍光顕微鏡画像。これら 3 種類の化合物はリソソーム内でリン脂質の異常な蓄積を誘導することで知られている。結果として、層状体を示す。核を Hoechst 33342 でカウンター染色した。

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細胞応答＆細胞毒性　パスウェイアッセイ

12 eFluxx-ID

™

多剤耐性アッセイキット

MDR1、MRP1/2、BCRP をフローサイトメトリー解析

● 多剤耐性タンパク質（MDR1、MRP1/2、BCRP) を迅速・高感度・定量的にモニター ● 簡単プロトコール！混合してフローサイトメトリー解析するだけ ● 薬剤／毒性探索研究に最適 ● 一般的なフローサイトメーター（480 nm フィルター）で測定可能　eFluxx-ID™ 多剤耐性アッセイキットは、生細胞における多剤耐性フェノタイプの機能検出とプロファイリングのために設計されています。eFluxx-ID™ 検出試薬は 3 つの主な ABC トランスポータータンパク質全ての基質なので、細胞内のトランスポータータンパク質活性の指示薬として働きます。eFluxx-ID™ 検出試薬独自の AM エステルは、速やかに細胞膜を透過したのち細胞内エステラーゼによって加水分解される疎水性の非蛍光性化合物です。結果として得られるプローブは ABC トランスポーターによって能動的に排出されない限り、細胞の中に閉じ込められます。活性の高いトランスポーターを持つ細胞は、細胞からの試薬の能動拡散のために、より低い蛍光を示します。　本キットに含まれる、ABC トランスポータータンパク質特異的インヒビターを使用することにより、3 つの一般的なポンプを識別することが可能になります。特定の MDR トランスポーターの活性は、インヒビター存在下・非存在下それぞれの場合で蓄積された色素の量の違いによって解析されます。構成内容（品番：51029-K100）

• eFluxx-ID™ Green Detection Reagent

• MDR1 Inhibitor (Verapamil)

• MRP Inhibitor (MK-571)

• BCRP Inhibitor (Novobiocin)

• Propidium Iodide （品番：51030-K100）

• eFluxx-ID™ Gold Detection Reagent

• MDR1 Inhibitor (Verapamil) • MRP Inhibitor (MK-571) • BCRP Inhibitor (Novobiocin) • Propidium Iodide 図：多剤耐性アッセイの一例キットの使用手順に従って、CHO K1 細胞を、特定のインヒビター存在下・非存在下で eFluxx-ID™ Green（上段のパネル）もしくは eFluxx-ID™ Gold（中段のパネル）の検出試薬とインキュベートした。現れた蛍光は、フローサイトメトリーを用いて測定した。暗く色づけしたヒストグラムはインヒビターで処理したサンプルの蛍光を表しており、薄く色づけしたヒストグラムは未処理の細胞の蛍光を表す。蛍光の違いは、対応するタンパク質の活性（左上角の数字は MAF の値（多剤耐性活量因子）すなわち多剤耐性の定量的特性）の指標となる。カルセイン AM（MDR アッセイの一般的なプローブ、下段のパネル）は、BCRP 活性を検出することができない。

eFluxx-ID™ Green multidrug resistance assay kit ENZ-51029-K100 1 Kit (100 assays) ￥78,000 eFluxx-ID™ Gold multidrug resistance assay kit ENZ-51030-K100 1 Kit (100 assays) ￥78,000

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細胞応答＆細胞毒性　パスウェイアッセイ

Cyto-ID

™

オートファジー検出キット

生細胞中のオートファジー調節因子をフローサイトメトリーやイメージングで解析

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● 生細胞のオートファジーを特異的かつ定量的にモニター ● 一般的なフローサイトメーター（480nm フィルター）で測定可能 ● オートファジーパスウェイに影響を与える化合物で評価済み ● フローサイトメトリーにも蛍光顕微鏡法にも適用　Cyto-ID™ オートファジー検出キットは蛍光顕微鏡法やフローサイトメトリーにより生細胞中のオートファジーをモニターする、迅速で高い特異性と定量性を持ち合わせたアプローチです。Cyto-ID™ Green 検出試薬は、オートファジーの過程で生成される小胞を緑蛍光に染色し、オートファジーパスウェイを調節する様々な条件下での評価が可能です。オートファジーの誘導因子である Tamoxifen がコントロールとしてキットに含まれます。また、核の対比染色試薬も含まれます。構成内容 • Cyto-ID™ Green 検出試薬

• Hoechst 33342 Nuclear Stain

• オートファジー誘導試薬 (Tamoxifen, 50mM)

• 10X Assay Buffer

Cyto-ID™ Autophagy Detection kit ENZ-51031-K200 1 Kit (200 assays) ￥61,000

図 1：オートファジー細胞質内のある分子が膜で隔離され（phagophore）、二重膜小胞（オートファゴソーム、autophagosome）を形成する。オートファゴソームの外膜は続いてリソソームと融合し、オートリソソーム内でその内側の分子が分解される。図３： Cyto-ID™ オートファジー検出キットを用いたフローサイトメトリーベースのオートファジープロファイリング誘導していないコントロール Jurkat 細胞（赤）と 10 µM Tamoxifen 処理した Jurkat 細胞（青）。処理して 18 時間後、 Cyto-ID™ Green 検出試薬と一緒にロードして、洗浄操作を行わずにフローサイトメトリーで解析した。結果をヒストグラムで示す。コントロール細胞も染色されたが、ほとんどは低蛍光を示している。処理した細胞では、 Cyto-ID™ Green 検出試薬のシグナルが約 2 倍し、Tamoxifen による Jurkat 細胞内でのオートファジーの誘導が示された。図 2： HepG2 細胞を 10%FBS 入り EMEM、もしくは飢餓条件下で 37℃ 1 時間インキュベートし、 Cyto-ID™ Green オートファジー検出試薬と 37℃ 30 分間反応させた。FITC フィルターで蛍光顕微鏡観察した。飢餓条件が点状の細胞質構造の蛍光強度を増加させている。

Hot

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タンパク質凝集アッセイ

14 ProteoStat

TM

タンパク質凝集アッセイ

タンパク質凝集のハイスループット解析に

● 高感度で簡便な蛍光マイクロプレートアッセイ ● 幅広い pH とイオン強度レンジで測定可能　ProteoStat™ タンパク質凝集アッセイは pH、温度、凍結融解サイクルなどの環境の変化（ストレス）により引き起こされるタンパク質凝集を検出するのに便利なキットです。使用目的＊タンパク質凝集インヒビターの同定＊凍結融解サイクルによる凝集のモニター＊ウイルス不活性化後の保存条件検討＊タンパク質組成に対するバッファーや添加剤の有効性検証＊精製後の保存温度の検討構成内容 • ProteoStat™ 検出試薬 • ProteoStat™ ポジティブコントロール , 300 µg, Aggregate • ProteoStat™ ネガティブコントロール , 300 µg, Monomer

• 10X ProteoStat™ assay buffer

タンパク質は pH の値、温度、バッファー、光、酸素、攪拌、凍結融解サイクルなどのストレスによりミスフォールドがおこり凝集します。ProteoStat™ タンパク質凝集検出試薬はタンパク質サンプル中の凝集を定量化できます。ProteoStat™ タンパク質凝集検出試薬は分子ローター色素で、タンパク質凝集がない場合プロペラのように回転して蛍光を発しません。色素が凝集に結合して固定され、回転運動がゆっくりになると、蛍光を発します。タンパク質の疎水性部位を露出してアンフォールディングを測定する他の環境感受性色素とは異なり、疎水性化合物や界面活性剤の干渉がわずかです。アッセイ原理 Assay Workflow 図 1：ProteoStat™ 検出試薬もしくはチオフラビン T を用いた抗体凝集の検出比較抗ヤギ IgG 抗体（ウサギ）（4.26mg/mL）を HCl 溶液（pH2.7）中、80℃ 90 分間インキュベートし凝集させた。

ProteoStat™ Protein Aggregation Assay ENZ-51023-KP002 1 Kit (2 × 96 wells) ￥70,000

　ProteoStat™ Thermal shift stability assay kit ENZ-51027-K400 1 kit (400 assays) ￥70,000 ストレス（pH, 温度 , 凍結融解サイクル等）色素から fibril に結合し、蛍光 ProteoStatTM 色素添加

熱ストレス条件下でタンパク質凝集をアッセイ

構成内容

• ProteoStat™ TS Detection Reagent (1000X)　

• β -Lactoglobulin コントロール

(15)

タンパク質凝集アッセイ

ProteoStat

®

アグリソーム検出キット

アグリソームやアグリソーム様凝集体をフローサイトメトリーやイメージングで解析

15

● セルベースアッセイによる薬剤応答アッセイ　実際の生細胞条件下での神経変性疾患に関与するインヒビターを同定可能 ● 信頼性が高く簡便　非生理的なタンパク質のミューテーションや遺伝子組み換え細胞株不要 ● 固定化細胞アッセイ　凝集したタンパク質とアグリソーム形成に関わる様々なタンパク質間の相互作用を解析可能 ● フローサイトメトリーでアグリソーム蓄積を簡単定量構成内容 • ProteoStat®Aggresomed 検出試薬

• Hoechst 33342 Nuclear stain

• Proteasome Inhibitor (MG-132) • 10X Assay Buffer 図１：フローサイトメトリーによるアグリソーム解析 Jurkat 細胞を 5 µM MG-132 で一晩 37℃誘導したものと mock を用意。処理後、細胞を固定し ProteoStat® 試薬とインキュベートした。フローサイトメトリーで検出したヒストグラムを示す。 MG-132 処理細胞では、赤色蛍光シグナルが約 3 倍増加した。　ProteoStat™ アグリソーム検出試薬はアグリソーム形成時に産出される小胞内で凝集タンパク質と結合して蛍光を発します。この試薬はオートファジーパスウェイやプロテオソームパスウェイを変調することが知られている様々な条件下で評価済みです。　インダクションやカーゴパッケージングのようなオートファゴゾームによる分解反応、小胞の形成、融合および分解のステップで起こる分子プロセスを解析することができます。　プロテアソームインヒビターの MG-132 がポジティブコントロールとしてキットに含まれます。また、核の対比染色試薬も含まれます。図 2： ProteoStat® 試薬で検出されるアグリソームは FITC 標識ユビキチン抗体と共通の局在を示す。

ProteoStat® Aggresome detection kit for flow cytometry and

fluorescence microscopy ENZ-51035-K100 1 Kit (100 assays) ￥43,000

　Cyto-ID™ Autophagy detection kit ENZ-51031-K200 1 kit (200 assays) ￥61,000 　Proteasome 26S degradation kit BML-PW8950-0001 1 kit (96 assays) ￥40,000 　Ubiquitin activating kit BML-UW0400-0001 1 kit (96 assays) ￥22,000 　Ubiquitin conjugating kit (HeLa lysate-based) BML-UW9915-0001 _{(20 x 50 µl reactions)}1 kit ￥98,000 　Ubiquitinylation kit BML-UW9920-0001 _{(50 x 50 µl reactions)}1 kit ￥70,000

CELLestial

シリーズ

蛍光セルベース アッセイ

細胞の生死 / 増殖 パスウェイ

p.

3

酸化ストレス、抗酸化物質、スカベンジャー

p.

7

細胞応答 / 細胞毒性 パスウェイ

p.

9

タンパク質凝集

p.

14

細胞の生死 / 増殖 パスウェイ

p.

3

酸化ストレス、抗酸化物質、スカベンジャー

p.

7

細胞応答 / 細胞毒性 パスウェイ

p.

9

タンパク質凝集

p.

14

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