博士（獣医学）岡田 学位論文題名
マレック病ウイルスによる
T 細胞リンノヾ腫発症機序に関する研究 学位論文内容の要旨
宰
マレ ック病(MD)は、ヘ ルペス ウイル ス科に 属するマ レック 病ウイ ルス(MDV)により 引き起こされる ニワトりの悪性Tリンパ腫である。本疾病はこれまでワクチンにより制御されてきたが、近年、ワクチン接種 鶏においてもMDを発症する例が報告されており、MDVの強毒化が懸念されている。本研究では、マレック 病(MD)の りンパ 腫発症 機序の 解明を目 的とし て、マ レック 病ウイ ルス(MDV)が コード する発癌遺伝子 meqに着目し、その発現動態と機能の詳細を明らかにすることを試みた。まず第1章で、meqの新規スプライ ス産物Ameqを同定し、その詳細な発現動態と性状について解析した。次に第2章では、AMeqのMDV溶解感染 期における機能についての検討を行った。そして最後に第3章では、発癌初期における宿主の癌抑制因子p53 に 対 す るMeqやAMeqの 関 与 に つ い て 検 討 し た 。 そ れ ぞ れ の 詳 細 は 以 下 の 通 り で あ る 。
1）MDV感染細 胞にお いて、meqあるいはL‑meqの新規スプライス産物と考えられるAmeqを同定した。この 転写産物より発現するAMeqは、ロイシンジッパーの一部および転写;7t,lt化領域の大部分を欠損しており、
MeqやL‑Meqの転写活性化能を負に調節する因子として働く可能性が考えられた。MD由来腫瘍細胞株にアポ トーシスを誘導したときにAMeqの発現が上昇すること、またAMeqはMeqおよびL‑Meqに結合し、その機能を 抑制することが示され、AMeqによるMeqおよびL‑Meqの機能抑制とその結果としてのアポ1．．シスヘの関与 が示唆された。
2）MD由来腫瘍細胞株に細胞溶解性感染を誘導したところ、Ameqの発現が上昇していた。また細胞溶解を 起こ してい るMDV感染ニワトリ胎児線維芽細胞においてもAmeqの発現は上昇していた。さらにMDV強毒株 感染鶏においても、観察期間を通じてAmeqが検出されたことから、MeqやL‑Meqの潜伏感染維持への関与に 対 し ても 、AMeqが負の 調節因 子とし て働き 、溶解感 染の誘 導に関 与して いる可 能性が 考えら れた。
3）Meqはp53に結合し、その機能を抑制することが示唆されているが、その機能抑制の分子機序として、Meq やL‑Meqによるp53の発現量の低下が示された。この発現量の低下はプロテアソーム阻害剤の添加により回避 できることから、MeqやL‑Meqがプロテアソーム経路を介したp53の分解に関与することで発癌初期のp53不活 化 に 働 い て い る 可 能 性 が 示 唆 さ れ た 。AMeq自 身 はp53の 分 解 に は 関 与 し て い な か っ た 。
以上の成果より、MeqおよciL‑Meqは宿主細胞内でp53の分解に関与し、種々の遺伝子の転写調節を通じて MDVの潜伏 感染お よびりンパ腫の発症に寄与していること、また、AMeqはMDV感染細胞の細胞死や溶解感 染への移 行およ ぴMDVの複製に関与していることが示唆され、そのメカニズムとしてMeqおよUL‑Meqの機 能抑制が考えられた。病態メカニズムの解明は、すなわち新たな疾病制御戦略の構築に役立っ。MDの病態発 現機序に関して、依然として不明な点は多く残されているが、本研究はMDの病態進行の分子機構の一端を明 らかにし、今後の本疾病の制御に有益な知見を提供したと考える。
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学位論文審査の要旨
主 査 准 教 授 大 橋 和 彦 副 査 教 授 高 島 郁 夫 副 査 教 授 堀 内 基 広 副 査 名 誉 教 授 小 沼 操
学 位 論 文 題 名
マ レ ッ ク 病 ウ イ ル ス に よ る T 細胞リンノヾ腫発症機序に関する研究
マレッ ク病ウ イルス(MDV)は鶏に悪性T細胞リンパ腫を主徴とするマレック病(MD)を 引き起こす。MDはワクチンにより制御されてきたが、近年、ワクチンブレークが野外で 報告さ れてお り、MDVの強毒化が懸念されている。そこで本研究では、MDVによるり ンパ腫 発症機 序の解明 を目的として、MDVがコードする発癌遺伝子meqに着目して、
meqの新規スプライス産物Ameqを同定し、その詳細な発現動態と性状および病態進行 における機能について解析した。
最初 に、MDV．感染細胞において、meqあるいはL‑meqの新規スプライス産物として Ameqを同定した。この転写産物がコードするAMeqは、ロイシンジッパーや転写活性化 領域の大部分を欠損しており、MD腫瘍由来細胞株にアポトーシスを誘導するとその発 現 が上昇 するこ とが示さ れた。 またAMeqはMeqやL‑Meqに結合 し、そ の転写活 性化 能を 抑制することが示され、AMeqによるMeqやL−Meqの機能抑制と、その結果として のアポトーシスヘの関与が示唆された。
細胞 の腫瘍 化やアポ トーシ スの制御 には、癌 抑制遺 伝子産物であるp53の役割が重 要で あり、Meqはp53に結 合しその機能を抑制することが示唆されている。本研究で は、 その機 能抑制機 序とし て、MeqやL―Meqがプロテアソーム経路を介してp53の分 解を 促進して発現量を低下させることが示された。しかしAMeqはp53の分解には関与 していなかった。
次 にMDVに よ る細 胞 溶 解性 感 染 に おけ るAmeqの 役割 を 検 討し た 。 細胞 溶 解 性感 染 を 誘 導し たMD腫 瘍 由 来細 胞 株 や 、MDV感染 鶏 胎 仔線 維 芽 細胞 でAmeqの 発現 が 上昇 し、MDV強毒株 感染鶏 でも、観 察期間を 通じてAmeqが検出されることが判明し た。 以上より、AMeqはMeqやL−Meqによる潜伏感染維持に対しても、負の調節因子と して溶解感染の誘導に関与する可能性が示された。
以 上 よ り、Meqお よ びL−Meqは宿 主 細 胞内 で 種 々の 遺 伝 子の 転 写 調節 を 通 じて MDVの 潜 伏 感 染 お よ ぴ り ン パ 腫 の 発 症 に 寄与 す る が、AMeqはMeqやL―Meqの 機 能 抑 制 を 通 し てMDV感 染 細 胞 の 細 胞 死 や 溶解 感 染 への 移 行 およ びMDV複 製 に関 与することが示された。
本 研究 に よ り、MDV発 癌遺伝子 であるmeqの新 規転写産 物(Ameq)が同 定され 、そ
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