塚 本 真 惇 (受付：昭30年12月8日）

StreptolysinSのTrypanBlue処置 家兎血液像に及ぼす影響に就て

金沢大学医学部薬理学教室（主任：岡本肇教授）

塚 本 真 惇

(受付：昭30年12月8日）

91

緒 言

1942年当研究室に於て松田1）は溶連菌溶血毒2）岡本教授等7a)b)c)d)により<6Streptoly‑

素StreptolysmSの一般薬理学的性状に関すsmSの本質はPolynucleotide構成の核酸属で る研究に於て;CStreptolysinSには溶血作用のある' と論結されている事，及び

外に摘出腸管並に子宮に対し強い緊縮作用を呈3)TrypanblueがStreptolysmSに対し する性質もある 事を実証したが，何分動物は特異的拮抗作用を発揮し，其の前処置を受けた 微量のStreptolysmS注射で直に崩血死に陥る動物はStreptolysinSによる崩血死から完全に ため，溺来十数年を経ていながら:I:Strepto‑ 免れる事が伊藤教授8)によって実証されている lysmSが動物自体に対し尚如何なる薬理的活事，の三つに思を致し

性を有する物質であるかの問題に就ては何等考Trypanblue処置家兎に於てStreptolysmS

査されなかった処である．（並にAg‑StreptolysinS‑COmplex)による 今 回 私 は 崩 血 死 を 防 禦 し て 血 液 像 の 変 化 僕 係 を 追 究 す る 1）露母核酸には軽度ながら白血球増加をと云う実験を行った処,StreptolysmS(並に 起させる作用がある事がAmes(1897年)2), Ag‑StreptolysinS‑COmplex)の注射が血液像 Ewald(1913年)3),Neymaml(1917年)4), の上に白血球の顕著なる増加を反映影響する事 DOanetal.(1928年)5,6)等によって報告されを実証し得た．即ち本論文は其の成績の記載で

て お り ， 又 あ る ．

1．StreptolysinSに齢ける実験 実験材料及び実験方法

1）実験動物:一定期間飼養した2kg前後の健常家1%酵母核酸加ブイヨン」30時間培養液より岡本教授 兎 を 使 用 ． 等 7 b ） の 方 法 に 準 じ て 分 離 し た 1 6 ， − 分 屑 （ 以 下 之 を 2)Trypanblue:1%水溶液に対し100｡C,301‑N‑F‑StrePtolysin‑fraction9)或は単にSt−Sと 分の滅菌処置を施したものを使用す。も略記す）を供用す．本精製St‑S標品の性状につい

3）精製StrePtolysinS:溶連菌、ぐS‑株 のての要点は7《1,9.

＊尤もその間に，原田（金沢大学医学部耳鼻咽喉科学教室業績集,315頁,1952）によってStreptolysinS崩 血死動物の病理組織学的検索が行はれているが，この研究では 家兎並にMausに於てStreptolysinS溶血 の二次的現象として肝及び腎に急速且高度の脂肪変性，混濁腫脹が起り，又心筋の蝋様変性，脾実質の壊死が 起るが,Trypanblueを注射しておくと溶血はもとよりこのやうな退行性変性も起らない といふ結果が得 られているのであるから，これはStrepto'lysinSが溶血作用以外に薬理学的活性を有する事を証明している ものでないわけである．

【 1 M

92

−−−−画.画一.ー今一一一一一一一一一一一一一一一一

塚 本

一一●−−−−−−

a)類白色無晶形の粉末で,水に易溶（中性),鉱酸

,f；̲

沈澱性でMononucleotideを含まず．Orcinol反応陽 性,Feulgen反応陰性，蛋白反応陰性．本品はSt−S 以外に酵母核酸及び非働化StreptolysinSを混有 するものと考えられる．

b)家兎赤血球に対する試験管内溶血限界濃度は 1:40,000,000で，其の10mg静豚内注射で家兎は2

〜3時間内に高度のHemoglobinemia及びHemo‑

globinuriaを起して蕊死し,50mg注射では1時間内 外で崩血症のもとに死す．

St‑S50mg(10mg/ml液5ml)による崩血死は Trypanblue20〜30mg(1%液2〜3ml)の前処置 で完全に防除せられる．

本実験では專ら此のSt‑S標品を10mg/ml(即ち

実 験

第1図は家兎に対し,RNA‑Na50mg(mlO mlaqua)の静脈内注射を行った後，血液像の 逐 次 的 検 査 を 行 っ た 成 績 で あ る ． 即 ち

1）赤血球は注射後5日目迄は軽度ではある が漸減(6Mm.→5Mill.）し,7日目では相 当恢復しているが，血色素では殆ど異変がな

い．

2）白血球はRNA‑Na注射2時間目(7,000) より増加し初め，12時間を頂点(25,000;正常 値の3.5倍）として徐々に減少し，4日目で殆 ど注射前の値(8,000)に復帰している．而して 此の場合の白血球の分類は第1表に示した様に

偽エオジン嗜好性白血球（桿状核白血球十分葉

状白血球）の増加（注射前10％から注射後12時 間目には65％）が特に著明であった．

第2図はTrypanblue30mg(m3mlaqua) 注射実験の成績であるが，ここでは

1）赤血球は注射前の6Mill.から4時間後 に5Mill.迄に減じ，以後3日目迄は大体此の 状態にあって，次に増加し初め6日目で注射前 の数に復帰しているという経過であるが，此の 様な変化が血色素測定値には極微しか反映して

4%水溶液）として使用した．

4）酵母核酸:Polynucleotide核酸に白血球増加 を起させる作用がある事はAmes,9)Ewald,3, Neymann,4)Doaneta1.5'等によって実証されている 処から，本研究では比較考査に資すべく酵母核酸>::を 以っての実験を併行せしめた．即ちSodiumyeast riboucleate《Merck''(以下RNA‑Naとも記す)を 10mg/ml(即ち1%中性水溶液）として使用した．

尚St‑S溶液,RNA‑Na溶液及びTrypanblue 液は何れも耳殻静豚に注射した．

5）血液像の検査：採血は耳殻静豚より行ひ，其の 都度，型の如く赤血球数，血色素量,(Sahli),並に

白血球数及びその分類の検査を行った．

成 績 いない事，

2）白血球では注射後一過性に軽度の減少を 示すだけで，間もなく恢復し，其の数及び分類 上（第2表参照）に殆んど異変がない事, が注目すべき点である．

因に第3図及び第3表はSt‑S50mgの単独 注射によって家兎が40分で崩血死した場合の成 績であり，又第4図及び第4表はSt‑S4mg注 射に対しては家兎はよく耐え，而も血液像に殆 ど異変が認められなかった実験例を示したもの である．

以上の予備的実験の成績に鑑みて,Strepto‑

lysmSのTrypanblue処置家兎血液像に及ぼ す影響の実験では，家兎に対するTrypanblue の投与量を20〜30mg;StreptolysinSの投与 量を50mgとし，

a)先ずTrypanblue液を注射し,10夕を 経てSt‑S液を注射した場合と，

b)Trypanblue液とSt‑S液との混液を 注射した場合に就て，

血液像の変化状況の逐時的検査を行う方針を

＊1931年Jackson｡O）等の臨床実験以来，酵母核酸をアルカリ水解に附して得られるMononucleotideの 混有物（即ち所謂Pentnuceleotide)がAgranulocytosis並にLeucopeniaの治療に応用されている事は 周知の事実である．

【 2 】

StreptolysinSのTrypanBlue処置家兎血液像に及ぼす影響に就て

−−−−一一一一一一一

93

と っ た ． 即 ち

第5A図はTrypanblue20mg(m2ml aqua)の静注後,10分を経てSt‑S50mg(m5 mlaqua)の静注を行った実験例である．今其 の所見を摘記せば，

赤血球：注射前の赤血球数は5Mill.であり，

此が注射後に急激なる増加を示し12時間目に 6.5Mill.となり以後漸次減少の経過を辿り,3日 目の4MiⅡ、を境として再び増加，然して7日 目で正常値に復帰している．

血色素：軽微ではあるが前記赤血球に於ける と大体平行した様な変動経過が見られる．

白血球：変動は特に顕著である．即ち当初 10,000程度から注射後1時間で3,000に減少し ているが,此は一時的であり，4時間目より増加 に転じ，12時間目には35,000となり，更に増加 して24時間目に64,000(即ち正常値の6倍）と 最高に達す．次で減少の経過を辿るが，而も5

日目でも尚20,000程度を保持し，漸く8〜10日 目で正常値に復帰している．而して第5表は此

の場合の白血球分類成績であり，此を更に図示

したものが第5B図である。即ち此によって白 血球の増加は専ら偽エオジン嗜好性白血球の増 加に因ることを知る．（但し図表は偽エオジン 嗜好性白血球とエオジン嗜好性白血球とを合せ 顯粒性白血球として現わした。）

第6図は[Trypanblue20mg(in2mlaqua) +St‑S50mg(m5mlaqua)]の混液を注射 した実験例であるが，本例に於ける赤血球並に 血 色 素 所 見 は 前 記 第 5 図 実 験 に 於 け る そ れ と は やや趣が異り，注射後3日間に亘って微かに増 加の徴が認められただけであるが，白血球にあ っては注射直後より一時減少(7,000→2,000)す るも6時間目より増加に転じ，1日目で巳に正 常値を上廻り，4日目で最高値54,000(即ち正 常値の8倍）に達す．然し5〜6日目迄に殆ど 正常値に急下降している．而して第6表提示の 白血球分類成績から偽エオジン嗜好性白血球の 百分率が特に高い事が知られよう．

更に第7図はTrypanblue30mg(m3ml

aqua)の注射10分後にSt‑S50mg(m5mlaqua) の注射を行った実験例である．即ち本実験に於 ても亦赤血球並に血色素が注射後より3日間に 亘って一時的増加を来している点は第5図実験 に於けると大体同様である．他方白血球にあっ ても又，注射後に一時的減少(注射前が9,000‑>

注射後4時間目が4,000)を示してから急激なる 増加に転じ，24時間後に44,000(即ち正常値の 5倍)に達している．以後は3日目に24,000,4 日目には15,000という具合に徐々に減少して，

7日目で大体正常値に復帰，以後此の状態を保 持している．而して此の白血球の変化が主とし て偽エオジン嗜好性白血球の増加に基くもので ある事は第7表提示の分類成績から知られよ

う．

今本項の実験に於ける成績を要約すると，

1)Trypanblue30mgの注射は家兎血液 像（赤血球，血色素，白血球）に対して殆ど影 響する処がない．

2)StreptolysinS50mgの注射で家兎は 崩血症の下に急死する.4mg注射では家兎は 生存する，然しこの場合には血液像に変化が起 らない．

3)RNA‑Na50mg注射で赤血球数が一時 軽度に減少するが，此は血色素測定の上には殆

ど反映しない．

注射後間もなく白血球の増加が起り, 4日間 位で正常値に復帰する．而して此の白血球像の 変化は専ら偽エオジン晴好性白血球の増加によ

る．

4)Trypanblue20〜30mgを以って前処置 した家兎にSt‑S50mgを注射（両者の混液を 与えた場合も）すると一時的ではあるが赤血球 数並に血色素値の増加が起る場合もあり，又軽 度の増加しか起らない事もある．他方白血球の 方は注射直後極めて一過性の減少を示した後，

急激且高度に増加し，7〜10日で始めて正常値 に復帰する．而して此の場合も亦偽エオジン嗜 好性白血球の増加が特に著明である．

の如くなるのであるが，ここにTrypanblue

【 3 】

94 塚 本

一一一一一一一一一一三ー−

−−

処置家兎に対しStreptolysmSの注射を行った球増加(Leucocytosis)が起り，而も其の持続 場合には−−正常家兎に対するRNA‑Naを注亦長期に亘るという事実は最も注目に価する処

射した場合に対比して一極めて顕著なる白血である．

II.Ag‑StreptolysinS‑Complexに齢ける実験

浬母核酸並にStreptolysmSにあっては等によって実証報告された処であるが，然らば

何れも,Ag+と錯塩を形成する性質を有し， Ag‑StreptolysinS‑ComplexのTrypanblue

而もStreptolysmSではAg‑Complexの形処置家兎血液像に及ぼす影響如何，

成で完全なる耐熱化状態となる'，とは最近当研本項では此の問題に対し考査の歩を進めて得

究室に於ける清水11），正印9),山本12)，有沢13）， た成績に就て記載する．

実 験

RNA‑Na並に精製StreptolysinS(I‑N‑F‑frac‑

tion)にあっては，其のAgに対するComPlex形成 の量的関係は1mg対0.16mg(即ち0.1%RNA‑Na 或はSt−S水溶液10mlに対し0.1NAgNO露15ml

を加へる）である事から，9,'1)本実験では

1)Ag‑StreptolysinS‑Complex並にAg‑RNA‑

Complex溶液としては,StreptolysinS或は酵母

実 験

先ず第8図及び第9図は夫々Ag‑RNA‑Com‑

plex50mg(RNA‑Na50mgmlOml+0.5N AgNO30.15ml)及び[10mlaqua+O.5N AgNO30､15ml]混液の家兎血液像に及ぼす影 響を考査して得た成績である．即ちここでは

1)Ag‑RNA‑Complex50mg注射後赤血球 が6Min.より4Mill.台に急減し漸く4〜5日 目より恢復の傾向を示している．而して血色素 の方でも軽度ではあるが先ず漸減し，次で恢復 する徴が見られる．白血球は注射前7,000のも のが2時間目より増加し初め12時間目で25,000 程度となり，以後漸減の経過を辿り4日目で大 体正常値に復している．（第8図）

2)AgNO3自体の注射でも相当顕著な赤血 球減少が起り,Ag‑RNA‑Complex注射に於 けると類似した経過を辿っており，就中此の場 合には血色素の明かな減少が認められる．他方 白血球の方では,Ag‑RNA‑Complex実験に於 けるよりはやや劣っているが，一過性増加が起

方 法

核酸100mgを蒸溜水10mlに溶解,之に0.5NAgNOw 0.3mlを加へた澄明溶液（即ち10mg/ml)を夫々調整

使用した．

而して文献l）を按ずるにAg−塩注射でもLeucocy‑

tosisが起るといふ記載がある処から，

2）蒸溜水10mlに0.5NAgNORO.3mlを加へた 溶液を以ての対照実験を行った．

成 績

っているという所見であるが，（第9図）今此 等両成績と前項第1図RNA‑Na50mg注射の 実験成績を夫々相対比照合すると,Ag‑RNA‑

Complexの血液像に及ぼす影響の実験では RNA‑NaとAgNO3との両者の影響が相加わ った様な処が見られよう．

尚第8表及び第9表は夫々Ag‑RNA‑Com‑

plex及びAgNO3の注射実験に於ける白血球 分類成績であるが，何れに於いても偽エオジン 略好性白血球の増加が支配的である事が知られ

よう．

処で第10図はTrypanblue30mg(m3ml) の静脈注射後10分を経てAg‑StreptolysmS‑

Complex50mgを注射した実験例であるが，

赤血球及び血色素に於ける減少の経過は大体 Ag‑RNA‑Complex50mg注射に於けると其の 軌を一つにして居り，其の間差異する処がない に対し，白血球では所見大いに異り,Ag‑Stre‑

ptolysmS‑Complex注射後一時白血球は減少

【 4 】

StreptolysinSのTryPanBlue処置家兎血液像に及ぼす影響に就て ⁹⁵

(7,000→3,000)するが,12時間目より漸増し 初め3日目には50,000(即ち注射前の7倍）に 達し，以後急減し，5〜6日目より再度増加し 7日目の30,000を頂点として減少の経過を辿り 15日目に漸く正常値に復帰している．而して此 の白血球増加が専ら偽エオジン嗜好性白血球に よるものである事は第10表の分類成績から看取 されよう．

又第11図は[Trypanblue30mg(m3ml) +Ag‑StreptolysmS‑Complex50mg(in5 ml)]混液の注射実験に於ける成績であって，

此の場合は赤血球,血色素,白血球の変動は前記 実験例に於ける程には顕著ではないにしても，

注射10日後迄白血球の増加が続き，而も此が偽 エオジン嗜好性白血球の増加によっているとい

う所見である．

今本項実験に於ける成績の要点を摘記する

と，

1)Ag‑RNA‑Complex50mg注射家兎では 或る程度の赤血球及び血色素の減少が起る．而 して白血球は同量のRNA‑Na注射に於ける程 度に増加する．

2)AgNO3によっても亦赤血球及び血色素 の減少が起る．而して白血球はRNA‑Na程で はないが軽度に増加する．

3)Trypanblue30mgを以って前処置した 家兎にAg‑StreptolysinS‑Complex50mgを 注射すると赤血球及び血色素の減少が起る．他 方白血球は注射直後に於ける一過性の減少に次 で急激且高度に増加し，10〜15日目ではじめ て正常値に復帰する．而して此の場合偽エオジ ン嗜好性白血球の増加が支配的である．

エ 器 鶚 器 器

以上StreptolysmS及びAg‑Streptolysm

結 本研究ではTrypanliueのStreptolysinS 溶血に対する拮抗現象を利用して,Streptoly‑

smS及び其のAg‑Complexの家兎血液像に 及ぼす影響如何に就ての詳細なる吟味検討が行

S‑ComplexのTrypanblue処置家兎血液像に 及ぼす影響の実験成績を通覧して注目せられる は,StreptolysmSと其のAg‑Complexとで は必ずしも一致した作用を示さず，

1）共通点：白血球の増加がSt‑S及びAg‑

St‑S‑Complexに共通して起る現象である．

2）相異点：赤血球に対する影響ではAg‑

St‑S‑Complexでは減少的にあるに対しSt‑S では寧ろ増加的である．

という異同点があるが,Ag‑RNA‑Complex及 ufAgNO3でも￨司程度の赤血球減少が起り得 る事に徴して,Ag‑StS‑Complexによる赤血球 の減少は寧ろAg+の影響性に帰すべきもので あろう．

尚厳密に吟味するならば，実験材料の項に於 て触れた様に本研究に供用された精製Strepto‑

lysmS(即ちI‑N‑F‑Streptolysm‑fraction) は化学的純品ではなく，核酸並に非仇化Stre‑

ptolysmSを混有しているという事情もある が,RNA‑Na自体による白血球増加が其の程 度に於ても亦持続性に於ても,StreptolysmSの それに対して比較にならぬ程劣っている処から I‑N‑F‑Streptolysin‑fractionによって惹起さ れた白血球増加がStreptolysmS自体の有する 生理的作用性の顕現であると断じて先ず間違い ない処といえよう．

論議の程は兎も角として,Trypanblue処置 家兎に於けるStreptolysmSによる崩血死を 防禦して血液像の変化関係を追究して，顕著な る白血球増加が起る事の実証がもたらされた事 は,StreptolysinSが核酸属である事を裏書き するものであって，亦甚だ興味ある知見であ

る．

論

われた．そしてその結果としてStreptolysmS 及びAg‑StreptolysmS‑Complexが白血球増 加作用を呈し，その効力に於てRibo‑核酸より も遥かに優越するものがある事が実証された．

【 5 】

96

−−−−−−■一一

塚

文

1）松田研斉：日本薬物学雑誌，36，17]，1942.

2)Ames,0.andHuntley,A.A.:J.Am.M.A., 29,472,1897.3)Ewald,G.:Ztscher.Exp.

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6)GoodmanandGilman:ThePharmacological BasisofTherapeutics,1145,1952.

7)a)Okamoto,H､:Jap.J・Med.Sci..IV.Phar‑

macol.,12,167,1940.b)0kamoto,H.,Kyoda, S・undito,R､:Jap.』・Med・Sci.,W.Pharmacol., 14,99,1941.c)岡本肇，松田研斉，京田進：

日本薬物学雑誌,33,370,1941.d)岡本藍：

【 6 】 本

−−−−

献

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Med.,220,729,1939.11)清水隆作：薬学 雑誌（印刷中）12）山本泰一：十全医学会雑 誌（印刷中）13）有沢和夫：十全医学会雑誌

（印刷中)14)Heffter:Handbuchd.Exp.

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Tablel．InHuenceofsodiumyeastnucleateupon theleucocytepictureofrabbit

罫一二四一曙認く

Fig．1.Infiuenceofsodiumyeastnucleate uponthebloodpictureofrabbit

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Table2・Influenceoftrypanblueuponthe leucocytepictureofrabbit

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Table3 Fig．3．

InfluenceofstreptolysinSupon thebloodpictureofrabbit

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Fig．5A.

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Fig.5B.

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Fig.6.InfluenceofStreptolysinSand trypanblueuponthebloodpictureofrabbit

Table6.

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Table7.

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36 46

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40 48

５１ ０５０５５５０●●●●●●０５

41 44

６２ ０５５５５００●●●●●●０５

46 41

５１

Table8.

InfiuenceofAg‑RNA‑Complex upontheleucocytepictureofrabbit Fig．8.

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InfiuenceofAg‑RNA‑Compl

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Table9.

InfluenceofAgNO3uponthe leucocytepictureofrabbit Fig．9．

InfiuenceofAgNOguponthe

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３２

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