＊2 ヒト滑膜細胞の増殖に及ぼす多血小板血漿の影響 ○ 矢谷 真也・中田 研＊・覚道 健治＊＊（大阪歯大・ 大学院・口腔外科第 2，＊ 大阪大学大学院医学系研究科健康ス ポーツ科学講座（スポーツ医学），＊＊ 大阪歯大・口腔外科第 2） 多血小板血漿（PRP）は早期の組織治癒および組織 再生を促すことを目的に歯科口腔外科や整形外科，形成 外科などの分野で多用され，社会一般にも認知度が増し てきている．また PRP はヒト脂肪由来幹細胞，ヒト真 皮線維芽細胞等さまざまな細胞に対して増殖を促進させ ることが過去に報告されている．しかしヒト滑膜細胞の 増殖に及ぼす PRP の影響については明らかではない． 今回我々は口腔外科領域において顎関節症および関連疾 患による滑膜組織の損傷に対する PRP の臨床的有用性 を検討するため，ヒト滑膜細胞に対する PRP の影響を 検討した． 材料は，検体を採取することについてインフォームド コンセントを得た患者（21 歳，男性）の膝関節内視鏡 手術から得られたヒト滑膜組織を用いた．ヒト滑膜組織 より分離精製した滑膜細胞を 37℃，5％ CO2条件下で
Dulbecco's modified Eagle's medium（DMEM）培 地 （10％ FBS 1 お よ び 1％ penicillinstreptomycine 添 加） にて平面培養した．健常なボランティア 1 名（29 歳， 男性）から採血を行い，2 回遠心法を用いて PRP を作 製した．また 0.5 Mol の塩化カルシウムと自己トロンビ ンを混合して activator の作製をした．PRP と activator を 10 : 1 で混合させることによって活性化を行い，活性 化多血小板血漿（aPRP）を作製した．実験には Pas sage 3∼Passage 7 の細胞を使用し，96 well dish に 1.0×103 cell/well で播種した．実験 1 として 5％ PRP,
5％ aPRP および 10％ FBS を加え，5 日間培養を行い Cell Counting Kit8（Dojindo）にて細胞数を測定した． また実験 2 として 1％, 5％, 10％, 20％ aPRP and 10％ FBS（control）で 1, 3, 5 days で培養を行い実験 1 と同 様の方法で測定した．実験 3 として 1％，5％，10％， 20％ aPRP お よ び 10％ FBS 中 の Interleukins（IL1β, IL6, IL8）の培養液中のタンパクの濃度を HTRF 法で 測定した．統計解析については各グループ間の比較には oneway ANOVA を使用し，有意差 p＜0.05 とした． 実験 1 において 5％ aPRP 群において有意に増殖を 認めた．実験 2 では 5％，10％ および 20％ aPRP は他 の群よりも有意に増殖を促進した．培養上清中の ILs の 産生量について，IL6 の産生量においては 5％ aPRP, 10％ aPRP, 20％ aPRP の濃度が高くなるにつれて有 意に上昇した．IL8 においても同様の傾向を認めた．実 験 1 の結果から aPRP の方が滑膜細胞をより増殖させ ることが判明した．このことは活性化時に血小板が破壊 され，その時に放出された PDGF 量が関係することが 考えられる．実験 2 より aPRP の濃度が 5∼20％ の濃 度でより増殖することが判明した．しかし実験測定期間 が 5 日と短いこと，PRP が高濃度になると細胞毒性が 示唆される報告があることなどから，より長期にわたる 観察が必要であることが考えられた．実験 3 の結果か ら，PRP の濃度を高くすることによって，滑膜細胞の 増殖率が高まるが，IL6 や IL8 も濃度依存的に産生が 高まり，このことによって滑膜炎が誘発される可能性が 示唆された． 以上の結果から滑膜組織の損傷に対する PRP の使用 については，関節破壊が危惧されるので，臨床応用する 際は更なる検討をしなければならないと考えられた．
Effect of plateletrich plasma on proliferation of human synovial cells Shinya Yatani, Ken Nakata＊ and Kenji Kakudo＊＊
（Graduate Sch. Dentistry（Second Dept. Oral and Maxillofacial Surgery） Osaka Dental Univ.,＊Medicine for Sports and Performing Arts（Dept. Health and Sport Sciences）, Osaka Univ. Graduate Sch. Medicine and＊＊Second Dept. Oral and Maxillofacial Surgery, Osaka Dental Univ.）
We examined that proliferation of human synovial cells using plateletrich plasma（PRP）. Surgical specimens of synovium were digested and liberated cells were suspended in Dulbecco's modified Eagle's medium. PRP was pre pared using the double spin method, and activated PRP（aPRP）was prepared with calcium chloride and autologous thrombin. We found that aPRP promoted proliferation of human synovial cells more than PRP and that it promoted proliferation in a concentrationdependent manner. However, proteins of IL6 and IL8 were upregulated in culture media. It is suggested that the use of PRP might risk articular destruction. We concluded that further investigation is needed into the clinical use of PRP.
