ラット胚盤胞内細胞塊の分離と培養について

( 東 女 医 大 誌 第54巻 第 9

号

)

頁 883-891 昭和59年9月) 63

〔 学 会 〕

東京女子医科大学学会

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回例会

日 時 昭 和59年 5月22日(火〉午後1時30分より 場 所 東 京 女 子 医 科 大 学 本 部 講 堂 1.ラット廃盤胞内細胞塊の分離と培養について (第二解剖)舘 澄 江 げっ歯類のlEE盤胞は一層の栄養芽細胞と内細胞塊か らなり，内細胞塊は将来，胎仔と胎仔外組織の一部を 形成する.ラット妊盤胞が子宮内膜に着床すると，内 細胞塊は原始内陸葉と外lEE葉に分化する.他方，栄養 芽細胞は胎仔性胎般に分化する.マウスlEE盤胞から分 離された内細胞塊のinvitroにおける分化能について は， Suraniら(1978)による報告があるが，ラット脹 の培養は一般に困難であり， ラット匪盤胞についての 同様の報告は従来なされていない. 今回演者は，ラット匪盤胞より内細胞塊を分離・培 養することに成功し， in vitroにおける分化能につい て予備的な結果を得たので報告する. ラット内細胞塊の分離法は， Suraniら(1978)のマ ウスにおける内細胞塊分離法を改変して用いた.妊娠 5日目の着床前期駐盤胞を子宮腔より採集し，Caイ オ ノ ホ アA-23187(2

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1O~5M) を含む Dulbecco 改変 MEM(DMEM)液またはCMRLl066液で約30分間処 理後， 0.5%pronase液で透明帯を除去し，洗糠過程で pipettingをくり返すことにより，内細胞塊を選択的に 分 離 し 得 た . 得 ら れ た 内 細 胞 塊 をDMEMま た は CMHL 1066液に30%牛胎仔血清を加えた培養液で、数 時間培養すると，内腔を生じ，単層の肩平な細胞から なる小胞が形成された..培養15時間後，これら小胞は シャーレ面に接着する，lEE細胞質中には，ラット匹細 胞特有のplaque構造が残存し，原始内佐葉の分化は 誘起きれない.35時間後，内腔は完全に消失しており， 扇平な細胞としてシャーレ面にspreadし，栄養芽細 胞に分化したと思われる像が得られた. 一方，ラット匪盤胞そのものを同じ培養液中で培養 すると，

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時間後栄養芽細胞は内細胞塊を中心にして 広く spreadした.lEE盤胞腔はすでに消失し，栄養芽細 胞におおわれた内細胞塊は，一層の原始内匪葉と外匪 葉細胞塊に分化し，両lEE葉聞に基底摸の形成が見られ た 以上の結果から，現在の培養条件は分離された内細 胞塊の栄養芽細胞への分化を促進し，目壬葉形成は誘起 しないことが知られた.しかしながら，内細胞塊が栄 養芽細胞に包囲されている場合は，栄養芽細胞への分 化は抑制され，lEE葉形成の誘起されることが示唆され た 質問 〔薬理〉野本照子(座長〉 トロホプラストがシャーレ表面にspreadingするこ ととそれ以前のトロホブラストの性質はちがうのです か? 応 答 (第二解剖〉舘 澄 江 晴乳類初期圧の割球分化は，桑実lEE割球間に内腔(lEE 盤胞腔〉を生じた時点から始まり，この時期の，IfEは，IfE 盤胞と呼ばれます.lEE盤胞には最外層に一層の細胞か らなるトロホプラストと内側の内細胞塊が区別されま す.この時期の匪盤胞はinvivoでは子宮腔内で乳遊 状態にあり， トロホプラスト細胞も少なくとも形態学 的には顕著な変化を示しません.lEE盤胞が子宮内膜に 着床すると， トロホプラスト細胞は増殖し，内膜侵襲 を開始します.一般にinvitroにおけるトロホプラス ト細胞のspreadingはinvivoにおける内膜侵襲の開 始に相当するものと考えられています.従ってシャー レ表面へのspreadingの開始はトロホプラスト細胞が 内膜侵襲という能動的機能に対応する性質をもち始め たという意味で，それ以前のト戸ホプラスト細胞とは 違っております.マウスでは内細胞塊を分離・培養し た場合， spreadingせず匹葉の分化(内座葉，外庇葉〉 がおこることが報告されておりますが，今回のラヅト の実験では内細胞塊がspreadingをおこしたのでトロ ホプラスト様の分化が行なわれたと考えられます. ラットの場合現在私の用いている培養条件下では内細 胞塊細胞の匹葉の分化はトロホプラストに包囲されて

-883-64 いる状態でのみ起こり得るものと推測されます. 2.モ ル モ ッ ト 摘 出 十 二 指 腸 に お け る pGlu-His -Pro-amphetamine (TRH-Amphetamine)の作用 (薬理学)

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古 川 恭 子 ・ 野 本 照 子 pGlu-His-Pro-amphetamine (TRH-A)はI.N.S.E. R.M.の化学薬理部門において合成され，その中枢効果 は報告されているが，末梢作用については未知である. 今回，協同研究により本化合物のモルモッ卜摘出十二 指腸に対する効果を検討したので報告する.

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方法〕雄 性モルモット〔体重250-350g)の摘出十二指腸切片を 用い， 19重の張力を負荷し32'CのLocke液 中 に お け る張力の変化を等尺性に記録した. 〔結果および考察

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1)モルモット摘出十二指腸は TRH-A 1O-6_{M以上の濃度により収縮反応を示した.} この反応はC63.6X 10-5Mの前処置により影響をう けず， hyoscine 2.5

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1O-7_{Mの前処置により弛緩に転} じたがtetrodotoxin10-6_{Mの前処置により完全に阻} 止された.即ち， TRH-Aは定性的にはTRHと同様に 腸 管 神 経 叢 の コ リ ン 作 動 性 神 経 の 神 経 末 端 か ら の ACh遊離を介する収縮を誘起することが示された.し か し 用 量 一 作 用 曲 線 か ら え たTRH-AのpD2値 は 4.70でTRH(pD2値 ，7.70)の1/1000の親和性であっ た.2) TRH-A 10-4_{Mに対する反応は， TRH 10-}7_M の前処置により完全に岨止されるが， amphetamine 10-4_{Mの前処置では約50%回害された.3) TRH 10-}6 Mに対する反応はamphetamine10-6_，10-5_{， 10-}4_Mの 前処置により用量依存性に阻害された.一方向じ濃度 のamphetamineの 前 処 置 はKCl40mMに よ る 収 縮 のphasic，tonic両相に対し有意な影響を与えなかっ た.4) amphetamine 10-6_{， 10-}5_{Mはモルモット十二} 指腸の張力に変化を与えず， 10-4_{M により小さな収縮} を示す標本が観察されたが，この反応はtetrodotoxin に よ り 阻 害 さ れ な か っ た . こ れ ら の 結 果 か ら am-phetamineは モ ル モ ッ ト 十 二 指 腸 の 腸 管 神 経 叢 に 対 しintrinsicactivityを示さず，またCaイオン動態に 影響しないで， TRH受容体に対してantagonistとし て作用することが示された.モルモット摘出十二指腸 に対するTRH-Aの作用が，中枢効果とは異り， TRH より低力価であったが，その理由として， TRH-Aの amphetamine部分が，母化合物TRH-AのTRH受容 体に対する効果を妨げている可能性が考えられる. 追加 ( 薬 理 〉 古 川 恭 子 研究の今後の展望としてTRH受容体に対する am-phetamineの阻害効果における構造一活性関連につい て検討をすすめる予定である. 3.コナヒョウヒダニDermatophagoidesjarinae の生活史におよぼす湿度の影響 (寄生虫学)

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松 本 克 彦 ・ 岡 本 雅 子 コナヒョウヒダニの個別飼育を温度25'C，湿度を各 85%R.H. (KC])， 76%

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H. (NaC])， 61%R.H. (NH4 N03)， 60%R.H. (NaHS04)， 37% (K2C03)でおこ なった.内径1cm高さ2.5cmの ガ ラ ス 管 の 一 方 を 漉 紙，他方を丸カバーグラス〔φ18mm)で、閉じ(マニキュ アで封〉飼育容器とした.煮干し，エピオス1: 1の混 合 物 ほ ぼ2.4mgと24時 間 以 内 に 産 卵 さ れ た 卵1個 づ つを容器内に入れた.鮮化日数は各湿度で差がなく， 平均8.0-8.4日であり，

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際化率は80-93%であった. 37%

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H.では，勝化率80%であったが，幼虫で総て死 亡した.幼虫期聞は85%，76%で各8.4，8.1臼であっ たが， 61%では10.2日， 60%で9.9日と延長した.前若 虫期間は各湿度とも， 10日以内で終了する群(通常前 若虫〉とほぼ2週以上かかる群(延長前若虫〉とがあっ た.76%通常前若虫の割合が一番高く， 52.6%であっ たが，他の湿度では低くなった.後若虫期間は76%R. H. (NaCJ)では全例が7日以内(平均5.6日〉に成虫 となったが，他湿度では成虫化が遅延するもの〔延長 後若虫〉が出現した.卵から成虫までの成虫化日数は 76%

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H.が最短で39.6士5.4日〔最短29日，最長60日〉 で あ っ た が ， 以 後86%

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H.44.7士5.8日， 60%R.H. 57.l:t13.1日， 61%

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H. 70.7士10.9日の順であり，と くに61%R.H.での最長は122日かかった.また， この 成虫化日数には雌雄差は認められなかった.成虫の寿 命は湿度によって異なり，最長は76%R.H.の135.7士 47.9日 で あ っ た が 最 短 は86%

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H.の79.7士27.1日で あった.雌寿命は雄寿命より長く，最長個体は76%R. H.の雌で378日であった. 質問 (薬理〉野本照子(座長〉 最後の部分のメス，オスのところでメスの寿命が378 日だったが，ダニで生存にオス，メス差があることの 意 味 に つ い て ? 応答 ( 寄 生 虫 学 〕 松 本 克 彦 雌雄の寿命に関して差がありますが，今までのとこ ろその意味はわかっておりません. 4.オリンパスAU500による尿中成分(尿酸，Ca*， Mg叶 の 自 動 化 に つ い て (臨床中央検査部〉 O四 反 田 都 ・ 平 木 一 嘉 ・ 田 中 富 子 ・ 星 川 喜 江 ・ 上 田 英 敏 ・ 荻 三男・ ~884 一一