抗 腫 瘍 活 性

31 6

金 沢 大学 十 全 医 学 会 雑誌 第

9 3

巻 第

2

号

31 6

⁻

3 2 9

く

1 9 8 4 1

ダ祝S Oろ戊Cね^rg祝 椚 乃 祝 Cge 戊fび 別 の抗 腫 瘍 活 性 ^に 関す ^る研 究

金

沢

大 学 大 学

院

医 学

研

究科 歯 科

^口 腔

外科 学 講 座

く

指 導

^こ 玉

井健

三

教 授I

渡 部 好 造

く昭

和

^{5 9}

年

² 月 1 7 日

受 付う

今 臥

F u s o b a c t e r i u m n u C l e a t u m の

培 養

上

清

か ら

得

ら れ た

抽 出物 質

^に

対

す る

抗 腫 瘍 活性

^に つ い て

研

究

し た

^． 抽 出物 質

は

，

エ タ ^ノ

^ー

^ル

沈 殿， 等電 点 沈 殿， 蛋 白 分 解酵 素 処

理 に よ り

得

ら れ た

沈殿 分 画

と し て

実 験

^に

供

し た

．

そ の

結 果， 培 養

上

清

^に 6 0

％

エ タ ノ

^ー

ル を

添 加

し

， 得

ら れ た ^エ タ ^ノ

^ー

^ル

分画

は

，

工C R

系

^マ ウ ス の E h r li c h

癌 細 胞

の

腹 水 癌， 固型 癌，

ま た S a r c o m a 1 80

細 胞

の

固 型 癌

^に

対

し て

明

ら か な

抗 腫瘍 活 性

を 示 し た

^．

^エ タ ノ

^ー

^ル

分画

を p H 4

．

0 に

調 整

し

， 得

ら れ た p H 4

．

0

沈 殿 分 画

は

，

E h r li c h

腹 水痛

^に

対

し て

明

ら か な

抗 腫瘍 活 性

が

見

ら れ た

．

さ ら に

，

p H 4

^．

0

分 画

を プ ^ロ ナ

^ー

ゼ

処

理 し

， 遊 離 核 酸 除 去 私 限外 炉 過

を お こ な

っ

た

．

そ の プ ^ロ ナ

^ー

ゼ

処

理

分画 く

^{T F T}

⁻

^{3 1 0}

1

を E h ^r li c h

癌

^お よ び S a r c o m a 1 80 の

腹 水 癌， 固型 癌

^に

対

し て

作 用

さ せ た と ^こ ろ

，

さ ら に

強

^い

抗 腫 瘍 活 性

が

得

ら れ た

．

ま た

， 他

の

分 画

に つ い て も

検 討

し た

． 癌 細 胞 移植 後，

4

句

8

週 間

^の

観 察

^で は

，

T

ノ

C

く％フ

で

比較

す る と

， 対 照 群

に

対

し て

治 療 群

で は

，

1 3 1

％^句

1 8 8

％

を 示 し た

．

こ の よ う な

惰 性

を

持

^つ

物 質

の

問題 点

や

抗腫 瘍 物 質

^の

本態

^{に つ い} て も

考 察

し た

．

K

_{e y} w o r

d

s

A

n t

i

_t u m o r a c t

i

v

i

_{t y}

， G

r a m

⁻

n e g ^a t

i

v e a n a e r o

b

e s

_， F

n u c

l

e a t u m

．

微 生 物

に よ る

抗腰 瘍 性^．制 癌 作

用 に つ い て の

研 究

は

，

従来

か ら

多数

み ら れ る が

，

そ の

大 部 分

は

好気 性 菌

^に よ る

報 告

で あ り

^ト

^川

，嫌 気 性 薗

に よ る

抗 腫 瘍性

の

研 究

は

，

C わ ぶ わゼ d 由

¹

^い お よ び d 乃戊e 和 占 f c C o り 朋 e み 戊C ね ガ 祝 椚

^{1 2}

I を

除

い て は

皆 無

で あ る

．

口

腔 内 常 在 菌

で

あ

る 爪 睨 血 血 抑 加 乃 紹 鋸 血 ^{血 仰} の

培 養

上

浦 液 中

^に

抗 腫 瘍活 性

を

見

^い

出

し

，

タン 捌 捉 克 血 お 椚

E O

^t

31

株

の

培 養

上

清 液 中

か ら

， 抗 腫 瘍物 質

^の

抽 出

を

試

み た

^． 抽 出 時

^の

各 段 階

に お け る

抽 出 物 質

に つ い て

，

E h r li c h

癌 細 胞

お よ び S a r c o m a 1 8 0

細 胞

の

担 癌

^マ ウ ス を

用

^い て

， 腹 水癌

^お よ び

固型 癌

^{に つ い て}

，

そ の

抗 腰 瘍悟 性

を

検 討

し た

^．

材 料

お よ び

方

法 工

^． 使

用

菌 株

使 用 菌 株

は

， 白板 症

を

有

し た

患者

^{の 口}

腔 内

^か ら

分 離^． 固定

し

， 金 沢 大 学 医学 部 歯科

^口

腔 外 科 学教 室 保 存 菌 株

と し た 且 刀 祝C J e 戊 ね 一肌 E O

⁻

3 ¹

株

を

実験

^に

供

し た

^．

工 工

． 培 養

上

清

吉

夜

^の

調 整

且 乃 鋸 C ね d と 鋸 研 K O

⁻

3 1

株

を T F

培 地^{川 ．}

1 5 m l の

中試 験 管

^で 3 7

⁰

C

^．

4 8

時間 培 養後，

T F

培 地⁻

1 5 m l の

中試験 管

で 3 7

⁰

C

^．

2 4

時 間 培 養

し

，

T F

血 液寒

天

平 板 培地

^に 塗

抹

し た

． 塗沫 後，

3 7

⁰

C

^．

4 8

時 間 培 養

し

，

T F

培地 ^．

¹ 5

m l の

中 試験 管

^に

釣 薗後，

3 7

⁰

C

^．

4 8

時 間培 養

し た

．

さ ら に

，

そ の

後，

1 0 0 m l

容

量 の カ ル チ ャ

^ー

ボ ト ^{ル に}

作 製

し た T F

培 地

10 0 m l で 3 7

⁰

C

^．

2 4

時 間前 培 養

し た

菌液

を 2

，

0 0 0 m l

容

量 の

培 養 瓶

^に

作 成

し た T F

培 地

2

，

0 00 ^m l

中

^に

移植

し

，

3 7

⁰

C

^．

4 8

時 間 本培 養

し た

^． 本 培 養 後， 無 菌 的

^に 4

，

5 0 0 X g

^．

2 0

分 間冷 却 遠

心 し

， 培 養

上

清液

と

菌 体

に

分離

し

， 実験

^に

供

し た

．

m

^．

^エ タ ノ

^ー

ル 分 画 ^の

調 整

冷却 遠 心 後

^の 上

帝液

^に

，

エ タ ^ノ

^ー

^ル

濃 度

が 6 0

％

と な る よ う に し

， 授拝 後，

4

⁰

C 下 で

^一 夜 静置

し た

． 静 置後，

無 菌 的

に 1 0

，

0 0 0 ^X g

^．

2 0

分 間 冷 却遠

心 し

， 得

ら れ た

沈 殿 物

に エ チ ^{ル エ}

^ー

テ ^ル を

加

え

， 乾 燥

し

，

エ タ ノ

^ー

ル

分 画

と し て

実 験

^に

供

し た

．

A

n t

i

t u m O r a C t

i

v

i

t y ^o

f E b

s o

b

a c i e r

i

u m n u c

l

e a t u m

K O⁻3

1 s t r a

i

n

． E

o z o

W

a t a n a

b

e

， D

e p ^{a r} t

^．

m e n t o

f D

e n t o

⁻O

^{r a}

l S

^{u r} _g ^{e r} y

く^{D i}

^{r e c t o r ニ}

^P

^{r o}

^{f． K}

^{e n z o}

^T

^{a m a}

ⁱJ^，S

^c

^h

^{o o}

^l

^o

^f

^{m e}

^di

^c

ⁱ

^{n e}

^，K

^{a n a z a w a}

U

n

i

v e r s

i

_{t y}

．

F

．

n u c l e a t u m の

抗 腫 瘍 活性

に

関

す る

研 究

肌

等

電 点 法 ^に よ る

抗 腫 瘍 物質

^の

抽 出

エ タ ^ノ

^ー

^ル

分画

に P B S

く

p h o s p h a t e b u ff e r s o l u t i o n

，

p 王 i 7

^．

⁰ う ⁵ 0 0 m l を

加

え

，

1

規 定

の

水 酸 化

ナ ト リ ウ ム

酒 液

で p H を 8

^■

0 と し た

後，

4

⁰

C

下

^で

^一 夜 静 置

^し

，

4

，

5 0 0 X g

^．

2 0 分

間冷 却 遠 心

^し

， 得

ら れ た

沈 殿 物

^に P B S 1 50 m l を

加

え

，

p H 8

^．

0 の

沈 殿 分画

と し

実験

^に

供

し た

．

一 方， 分 離

し た 上

清 掛

^こ 10

規 定

^の

塩 酸

を

加

え

，

p H を 8

^．

0 か ら 6

．

0 に

調整 後，

4

⁰

C

下

^{に て}

再

び

^一夜 静 置後，

同様

^に 4

，

50 0 X g

^．

2 0

分 間 冷 却遠 心

し た

^． 得

ら れ た

沈

殿

物

^に P B S 1 5 0 m l を

加

え

，

こ れ を p H 6

．

0 の

沈殿 分 画

と し て

実 験

に

供

し た

．

同様

^に し て

，

p H 4

．

0 の

沈殿 物

^お よ び p H 2

^．

0 の

沈

殿

物

を

作 成

し

， 各

^{々 の}

沈 殿 分 画

を

実 験

^に

供

し た

．

V

．

プ ロ ナ

^ー

ゼ

処

理 に よ る

抗

腫

瘍 物 質

^の

抽出

p H

処

理

後

の p H 4

．

0

沈殿 分 画

に P B S

く

p H 7

^．

O

1

2 0 0

m l を

加

え

，

1

境 定

^の

水 酸化

ナ ト リ ウ ^ム

溶 液

^に て p H を 8

．

0 に

調整 後，

プ ロ ナ

^ー

ゼ

く

プ ^ロ ナ

^ー

ゼ E

，科研 化 学，

東京

1 を

沈殿 量

^の

約

¹

％

^に な る よ う に

添 加

し た

．

こ れ を

，

3 7

⁰

C

^．

2 4

時 間処

理

後， 再

び 1 0

，

00 0 X g

^．

2 0

分 間冷 却遠

心 し

， 得

ら れ た 上

浦 液 成 分

^{に エ タ ノ}

^ー

^ル を

加

え

，

そ ^{の エ} タ ノ

^ー

ル

濃 度

が 6 0

％

と な る よ う に し た

^． 再

び 1 0

，

0 0 0 ^X g

^．

2 0

分 間遠

心

⁻

し

， 得

ら れ た

沈殿 物

に

再 留水

を

加

え

，

C l イ オ ^ン

型

イ オ ン

交 換 樹 脂

^{カ ラ ム D o w e x I X}

4 を

使

用 し

， 核 酸

^の

除 去

を お ^こ な っ た

^．

さ ら に

限外 炉

過

膜 く

U K 50

， 東 洋折 紙， 東京ン

を

使

用 し

， 加

圧

炉過

を ^{お こ} な

^っ

た

．

そ の

後

0

^．

2 ノ

^上

の ミ リ ポ ア フ ィ ル タ

^ー

く

東洋 折紙， 東 京フ

を 用 ^{い て}

無 菌 炉過 後， 凍 結 乾 燥

し

，

実験

に

供

し た

^． 得

ら れ た

物 質

を T F T

⁻

3 1 0 と

命 名

し た

．

Vl

．

E h r li c b

癌 細 胞

お よ ぴ S a r c o m a 1 8 0

細 胞

^の 調

整

7 日

目

ご と に

_， 生後

⁴ 過 ^の 工C R

系

マ ウ ^ス

く

1 8

^へ

2 0 g

う

で

継 代 培 棄

し た E h r li c h

癌 細 胞

お よ び S a r c o m a 1 8 0

細 胞

を

無 菌 的

^に

採 取

し た

． 白

血

球 算定 基 準

^{に し た が っ}

て そ ^の

細胞数

を

算定

し

， 適

量 ^の

滅菌生

理

食

塩

水

を

加

え

， 約

1 0

⁶

c e ll s

ノ

m l の

細 胞 浮 遊 液

と し て

， 各 実験

^に

供

し た

．

V IT

．

担

癌

^マ ウ ^{ス の} 調 整

腹 水 癌 実験

^の

場合

は

，

生

後

5 退 く2 0

^句

2 2 g

l

の 工C R

系

マ ウ ス の

腹 腔 内

に

，

至

適 細胞 数

^に

調 整

し た E h r li c h

癌 細胞

ま た は S a r c o m a 1 8 0

細 胞

の

浮 遊 液

0

．

5 m l を

移 植

し た

，

4 8

時 間経 過 後， 調 整

し た そ れ ぞ れ ^の 生

成物

の

懸 濁 液

⁰

^．

^{5 m} l を

腹 腔 内

に

投与

し た

．

固

型

癌

の

場 合

は

， 生 後

6

週

く 2 5

^へ

3 0 g

う

の 1 C R

系

^マ ウ ス を

使

用 し た

．

マ ウ ス の

背部

を

電動 式

バ リ カ ^{ン に} て

剃毛

し

，

ヒ ビ テ ^ン ア ^{ル コ}

^ー

ル に て

消毒 後，

マ ウ ス の

皮 下

^に

適

量 の

細 胞 数

^に

調 整

し た E h r li c h

癌 細 胞

^{ま た は} S a r c o m a 1 8 0

細 胞

^の

浮 遊 液

0

．

2 m l を

移 植

し た

^．

4 8

時 間経 過 後，

マ ウ ス の

前 肢

上

腕

^二

頭 筋部

^に 調

整

し た そ れ

3 1 7

ぞ れ ^の

生 成 物

^の

懸 濁 液

0

．

2 m l を

投与

し た

^．

Y m

． 抗 腫瘍

活

性

^の

判定

各実 験 群

^に お い て

， 腹 水 癌

の

場 合

^は

，

3 0

^へ

3 5 日

間

の マ ウ ス の 生

存

匹

数

を

観察

し

， 実験 癌細 胞

を

移 植

し た 日 よ り 以

後

^の マ ウ ス の

生存

日

数

^に て

抗

腫

瘍効 果

を

判 定

す る こ と と し

， 実

験

群

の

平 均 生存

日

数く

T

l

と

対 照群

の 平

均生 存

日

数く

C

う

の 比

，

す な わ ち T

ノ

C ^x lO O に よ っ て

抗 腫瘍 効 果

を

判 定

し た

^．

固

型

癌

の

場 合

は

，

5

^へ

8

週 間

の ^マ ウ ス の

生 存

を

観 察

し

， 抗

腫

瘍 活 性

を

判 定

し た

．

ま た

， 背 部

に

形 成

し た

固

型

癌

^の

腫瘍

^の

大

き さ ^こ

長 径 く

m m

l

と

短 径 く

^{m m}

l

を

^一 定期 間

ご と に

測 定

す る こ と に よ り

，腫 瘍 重量

を

算 定

し

，

抗

腫

瘍 活性

を

判 定

し た

．腫 瘍重 患

^は

，次

の

式

^に し た が っ

腰 瘍 重 量く

^m g

う^こ墜啄鱒郵

^m

吋

^X

印 蜘

2

成 績

I

^．

F

^．

n u c l e a t u m E O

⁻

3 1

株

^の

培 養

上

清 液

エ タ

ノ

^ー

ル 分 画 ^の

抗 腫瘍

活

性

1

．

E h r li c h

腹 水癌

へ の

作

用

I C R

系

の マ ウ ス に

調 整

し た E h r li c h

癌 細 胞

5

^．

O X l O

⁶

c e ll s

l

m o u s e を

腹 腔 内

^に

移 植

し た

^．

^エ タ ノ

^ー

ル

分 画

を ^マ ウ ^ス

当

た り 0

^．

5

，

1

^．

0

，

2

^．

0

，

3

^．

O m g

ノ

m o u s e の 4

段 階

^{に つ い} て

，

そ れ ぞ れ を 0

^．

5 m l の

滅菌生

理

食塩水

に

懸濁

し

，移 植

⁴ 8

時 間後

よ り 1 日 1

臥

7 日

間連続 腹 腔 内

^に

投与

し

， 抗

腰

瘍 活 性

を

検 討

し た

．

実験 群

は 1

群

1 0 匹 を

使

用 し た

．

こ の

結果， 表

1 に 示 す ごと く

， 滅菌

生 理

食塩 水

を

投与

し た

対 照 群

の マ ウ ^ス は

，

1 1 日

目

よ り 2 2 日

目

ま で の

間

に

全

て 腫

瘍

死 し

，

そ の

平 均 生 存

日

数

は

，

14

．

6 士3

．

3 日 ^で あ

っ

た

．

こ れ に

対

し て

，

0

．

5 m g

l

m o u s e

投 与 群

で は

，

8 日

目

よ り ^マ ウ ス の 腫

瘍

死 を

認

め

，

25 日

目

で

全

て の マ ウ

ス ほ

腫 瘍

死 し

， 対

照

群

の そ れ と

類 似

し た

成 績

で 平

均 生 存

日

数

も 1 5

．

8 士 5

−

3 日 で あ っ た

^．

1

^．

O m g

l

m o u s e

投 与 群

^で は

，

マ ウ ス の

腫瘍

死 は

対

照

群

^の そ れ ^に

類 似

し

，

平

均 生 存

日

数

も ¹ 7

^．

0 士 5

^．

7 日 で

あっ

た

．

2

．

O m g

l

m o u s e

投与 群

^{で は}

，

マ ウ ス の

生 存

日

数

が 3 1 日

目

ま で

認

め

， 平 均生 存

日

数

は 2 3

⁻

6 士 6

^．

9 日

，

ま た 3

^．

O m g

I

m o u s e

投 与 群

の ^マ ウ ス の

平 均

生

存

日

数

は

，

2 4

．

7 士 5

．

3 日 で

あ^っ

た

．

こ の

成績

^は

，

マ ウ ス

当

た り ^の

投 与 量

が

増加

す る に し た が

っ

て

， 平均 生 存

日

数

も

延長

す る

成 績

で あ

^っ

た

．

ま た T

I

C

く％1

は

，

0

^．

5 m g

l

m o u s e

投 与群

^{で 1 0 8}

^．

²

％，

1

．

O

m g

l

m o u s e

投 与 群

で 1 1 6

．

4

％

と

抗 腫瘍 活 性

は

認

め ら れ な ^か

^っ

た

^．

し か し

，

2

^．

O m g

l

^{m o u s e}

投 与群

^で 1 6 1

^．

6

％，

3

^．

O m g

l

^m o u s e

投 与 群

で 1 6 9

．

2

％

と い う

著

し い

抗 腫 活性

が

認

め ら れ た

．

31 8

2

^．

E h r li c h

同

型

癌

へ の

作

用

以 上 の

実験 結果

よ り

，

E h r li c h

癌

の

腹 水 癌

^に

対

し て

著

し い

抗 腫 瘍 活性

が

認

め ら れ た た め

， 次

^い で E b r li c b

癌

の

囲型 癌

に つ い て

抗

腫

瘍 活 性

を

検討

し た

．

本 実験

^に は 1

群

¹ 0 匹 で

検 討

し た

．

先

の

実 験

で

，

マ ウ ^ス

当

た り の

投 与 量

を

増 加

す る ^に し た が っ て

，

T

ノ

C

く％1

が

高

く な る

成績

で あ

^っ

た た め

，

マ ウ ス

当

た り の

投 与 量

を 3

^．

O m g

l

^{m o u s e} と 5

^．

O m g

l

m o u s e の 2

群

^{に つ い} て

検 討

し た

．

マ ウ ス の

背 部 皮 下

に E h r li c h

癌 細 胞

8

．

O X l O

⁶

c e ll s

l

m o u s e を

移惜

し

，

48

時 間経 過後

よ り

，滅菌生

理

食塩水

^に

懸

濁

し た ^エ タ ノ

^ー

ル

分画

の 0

．

2 m l を

担 癌

^マ ウ ス の

前 肢

上

腕

^二

頭 筋

に

，

1 日 1 回

連 続

7 日

間投 与

し た

^．

そ の

後，

8

週 目

^{の マ} ウ ス の

生存

匹

数

の

観 察

を も

^っ

て

， 抗腫 瘍 活 性

の

判 定

を お こ な っ た

．

こ の

精粗 表

2 ^に 示 す ごと く

， 滅 菌

生 理

食塩水

を

投与

し た

対 照群

は

，

3

週 目

よ り

腫 瘍 死

を

認

め

，

6

過 日

^で す ^べ て の マ ウ ス は

腫瘍

死 し た

．

一方，

3

^．

O m g

l

m o u s e

投 与 群

で は

，

4

週 目

よ り ^マ ウ ス

の

腫 瘍 死

を

認

め た が

，

8

過 日

で は 3 匹 の マ ウ ス の

生存

が

見

ら れ た

．

さ ら に

_，

5

^．

O m g

ノ

m o u s e

投与 群

で は

，

5

週 目

よ り マ ウ ス の 腰

瘍

死 を み た も の の

，

8

週 目

で 5 匹 の マ ウ ス の

生 存

を

認

め た

．

こ の う ち ¹ 匹 ^{の マ} ウ ス で は

， 背部

に

移植

さ れ た

腫 瘍

^は

消 失

し

， 完 全 治癒

を 示 し た

．

以 上 の

実 験 成績

よ り

，

エ タ ^ノ

^ー

^ル

分 画

に は

，

E h r li c h

癌

の

固

型

癌

の

実 験

^{に お い} て も

著

し ^い

抗

腫

瘍 活性

を

認

め た た め

，

さ ら に

固

型

癌

の

腫 瘍 重 量

^を

測 定

す る こ と に よ り

， 抗 腫 瘍 活 性

の

効果 判 定

を お こ な

^っ

た

^．

使

用 し た ^マ ウ ^ス は

，

1

群

を 1 0 匹 と し て

実 験

し た

．

前

回 ^の

実験 成 績

^で

，

5

．

O m g

l

m o u s e

投 与 群

が

抗

腫

瘍 活 性

を 示 し た た め

，今

回 の

実験

で は

，

5

^．

O m g

l

^{m o u s e}

投 与 群

に つ い て の み

腫瘍 重

量 を

測 定

し た

．

E h r li c h

癌 細 胞

7

．

O X l O

⁶

c e ll s

l

m o u s e を ^マ ウ ス の

背 部 皮下

^に

移 植 後，

4 8

時 間後

よ り ^エ タ ノ

^ー

ル 分

画

^の

懸濁 液

0

^．

2 ^m l を 1 日 ¹ 回

，

7 日

間 連 続

^マ ウ ス の

前

肢 上

腕

^二

頭 筋 部

^に

投 与

し た

． 癌 細 胞 移 植 後，

2

，

3

，

4

_，

6

週 目

の 腫

瘍

重 量 を

測 定

した と こ ろ

， 滅 菌

生 理

食

塩 水 を

投与

し

T a bl e l

^．

A n t i t u m o r a c t i v i _{t y} o f e t h a n o l f r a c t i o n

^a，

p r e p ^{a r e} d f r o m t h e c u l t u r

9

^{S u p e r n a t a n t}

O f F n u c l e a t u m s t r a i n K O

⁻

3 l o n a s c i t e s t y p ^e t u m o r o f E h r li c h c a r c l n O m a C e ll s i n m l C e

．

E ^t h a n o l f r a c t i o n

^a

I N u m b e r o f M e a n s u r v i v a l N u m b e r o f ^b

^l

く

m g

ノ

^{m o u s e}

I

^{m i c e u s e} d d a y s s u r v I V O r S T ノC

く％ン

0

^．

5 1

．

0 2

．

0 3

．

O P h y s i o l o g l C a l S a li n e

く

^{c o n t r o l}

l

O

n U

O

n U

O l l l l l

1 5

^．

8 士 5

．

3 1 7

^．

0 ^士 5

^．

7 2 3

．

6 ^士 6

．

9 2 4

．

7 士 5

．

3 1 4

．

6 ^士 3

^．

3

O

n U

O O

n U

a

ナ

E t h a n o l f r a c t i o n w a s o b t a i n e d b y d r y i n g t h e s e d i m e n t p r e c i p i t a t e d w i t h 6 0 ％ e t h a n o l

．

b

ナ

^{R e a} di ⁿ g ^w a s p e r f o r m e d o n t h e 3 5 ^t h d a y a f t _{e r} i n t r a p ^{e r} i t _{o n e a} l i n

j

^{e c t i o n o f t h e e t h a n o l} f r a c t i o n i n t o t u m o r

−

^{b e a r l n g m i c e}

^．

T a bl e 2

．

A n t i t u m o r a c t i v i _{t y} o f e t h a n o l f r a c t i o n p r e p a r e d f r o m t h e c u l t u r e s u p e r n a t a n t o f F n u c l e a t _{u m s} t _{r a} i _n K O

−

^{3 l o n s o li d t y p e t u m o r o f E h r l i c h c a r c i n o m a c e ll s i}

ⁿ

^{m i c e}

^．

E t h a n o l f r a c t i o n

^a

l N u m b e r o f

く

m g

ノ

m o u s e

l

m i c e u s e d

N u m b e r o f s u r v i v o r s a f t e r

3 ⁴ 5 7 8 w e e k s

3

．

0 5

^．

O P h _y s i o l o g ^{l C a} l

S a li n e

く

c o n t r o

り

0 9 0 1

1

0 9 9 0 1 9 0 1

1 0 9

n U

l

l

8 9 8

6 8 3

5 8

n U

5 3

6 5

a

J

E a c h _p r e p a r a t i o n w a s

gi Y

^{e n i n t r}

q

^{m u s c u l a r l y i n t o m 捕 C u l w bi c e p s b 7 71 n C hii e v e r y d a y f o r 7}

d a y ^s a f t _{e r s u} b c u t a n e o u s l n O C u l a t l O n O f 8

．

O x l O

⁶

c e ll s

舟

ュo u s e

．

F

^．

n u c l e a t u m の

抗 腫瘍 活 性

^に

関

す る

研 究

た

対

照

群

^で は

，

3

過日

よ ウ ^マ ウ ス の 腫

瘍 死

を

認

め

，

4

週目

^で は 2 匹 ^{の マ} ウ ス の 生

存

の み

認

め ら れ た た め

，

こ の 2

匹

に つ い て 腫

瘍

重 量 を

測 定

し た

．

こ の

結 果， 図

^{1 に} 示 す ご と く

， 対

照

群

^{の マ} ウ ス の

腰 瘍重

量 は

，

3 週

目

で

約

2

^．

5 ^X l O

⁴

m g で あ り

，

4

週 目

で は

約

7

^．

5 ^X l O

⁴

m g と 腫

瘍

重 量 の

増 加

が

著

し ^い

成 績

で あ

^っ

た

．

こ れ ^に

対

し て

，

5

．

O m g

ノ

^m o u s e

投与 群

^で は

，

マ ウ ^ス の

腫 瘍

形

成

^の

抑 制

が み ら れ

，

4

週 目

^で

約

¹

^．

O X l O

⁴

m g

，

6

過 日

^で は

変 化

が な か

っ

た

^． 対

照

群

と

処 置群

と の

間

^に は

， 明

ら ^か な

有 意 差

が

認

め ら れ た

．

図

2 は

， 本 実 験経 過 中

^の 3

週 目

^の マ ウ ス の

状 態

を 示

し ^{て い} る が

， 対

照

群

と 5

^．

O m g

l

^{m o u s e}

投 与群

と で は

，

明

ら か に

腫 瘍

の

大

き さ の

羞

が

認

め ら れ た

． 対 照 群

^の マ

ウ ^ス は

， 背部 全 体

が

腫 瘍

^{で お お} わ れ

，

マ ウ ス の 毛 並 み も 悪 く

，

悪

液質

^の

症状

が

認

め ら れ た

．

5

^．

O m g

l

^m o u s e

投

へ

ぎ

で

空

一

二 享 ご 雲

L

2

コ り

0 1 2 3 4 5 6

M

e e

k

s a

f

t e rs．c．

i

n o c u

l

a t

i

o n o

f E h

r

l i

c

h

c a r c

i

n o m ac e

l l

s

F i _g

⁻

1

^．

P e r i o d i c a l c h a n g e s o f s o li d E h r li c h t u m o r W e i

gh

^t i n m i c e a f t e r d a il y t r e a t m e n t s f o r 7 d a y ^s w

i t h e t h a n o l f r a c t i o n p r e p a r e d f r o m c u l t _{u r e} S u p e r n a t a n t o f F n u c l e a t u m K O

⁻

3 1 s t r a i n

．

C u r v e

く

^砂 1

，

t h e g ^{r o w} t h o f t u m o r i n u n t r e a t e d

C O n t r O l i C u r v e

く^国l，

t h e t u m o r g r o w t h i n t h e t _{r e a} t e d g r o u p

く

i n t r a m u s c u l a r a d ^{m i n} i s t r a t i o n w i t h 5 m g o f t h e f r a c t i o n f r o m 4 8 h r s a f t e r t u m o r c e ll s

i n o c u l a t i o n

J^．

31 9

与群

^{の マ} ウ ス で は

， 腫 瘍

は

縮

小 し

，

毛 並 み の

状 態

も

良 好

で あ っ た

．

3

^．

S a r c o m a 1 8 0

固

型

癌^へ

^の

作

用

以 上 の

実 験 成 腐

^{よ り エ タ ノ}

^ー

^ル

分 画

は

，

E h r li c h

痛

の

腹 水 癌

^お よ び

固

型

癌

に つ い て

著

し ^い

抗 腫 瘍活性

を

認

め た た め

，次

^い で S a r c o m a 1 80 の

固

型

癌

に つ い て

実 験

を す す め た

．

I C R

系

マ ウ ^ス

く

6

過l

^の

背部 皮 下

^に S a r c o m a 1 8 0

細 胞

の 6

^，

O ^X l O

⁶

c e ll s m o u s e を

移植

し

，

4 8

時 間後

よ り

，

3

．

O m g

l

m o u s e

，

5

．

O m g

l

m o u s e を ^マ ウ ス の

前 肢

上

腕

二

頭 筋

^{に 1} 日 ¹ 回

， 連 続

7 日

間投 与

を お ^こ な っ た

．

1

群

1 0 匹 ^に て

実験

した

．

こ の

結 果，表

3 に 示 す ごと く

，滅菌生

理

食 塩水

を

投 与

し た

対 照群

は

，

3

過 日

よ り ^マ ウ ^ス は

腫瘍

死 し

，

6

過 日

^で す ^べ て 腫

瘍

死 し た

^．

^こ れ ^に

対

し

，

3

^．

O m g

ノ

m o u s e

投 与 群

で は

，

3

週 目

よ り

腫瘍

死 を

認

め

，

7

週 目

で す ^べ て

腫 瘍

死 し た

．

ま た 5

．

O m g

ノ

m o u s e

投 与群

^で は

，

4

過 日

よ り

腫 瘍

死 を

認

め た が

，

7

過 日

で は 1 匹 の

生存

が み ら れ

，

し か も

背部

^に

移植

さ れ た

腫瘍

は

消 失

し

， 完 全治 癒

を 示

F i _g

．

2

．

T h e m i c e a t 3 r d w e e k a f t e r a d m i n i s t r a t i o n W i t h e t h a n o l f r a c i o n i n F i g

^．

1

^．

P h o t o g ^{r a} p h d e m o n s t r a t e s a n o b v i o u s d iff e r e n c e i n t u m o r s i z e

b e t w e e n t h e c o n t r o l g r o u p a n d t h e t r e a t e d g r o u p

^．

32 く j

渡

し た

． 投 与量

が 3

．

O m g

ノ

m o u s e

，

5

^．

O m g

l

^{m o u s e} と

増 加

す る に し た が

^っ

て ^マ ウ ス の

生存

日

数

の

延 長

が み ら れ る も の の

，

E h r li c h

癌

の

固

型

癌

^に

比 較

す る と

，

そ の

活 性

は

低

^い

値

で あ っ た

．

H

． 等電 点 法

に よ る

沈殿

分

画

^の

抗 腫瘍

^活

性

F

^．

矧 肌 滋 仇 お 肌 K O

⁻

3 1

株 培 養 上 清 液 中

の エ タ ノ

^ー

ル

分 画

は

，

E b d i c b

癌

の

腹 水癌

お よ び

固

型

癌

に

対

し

，著

し い

抗

腫

瘍 特性

を 示 し

，

さ ら に S a r c o m a 1 8 0 の

固 型癌

^に

対

し て も

抗腫 瘍 括 性

^が

認

め ら れ た た め

， 等 電 点 法

^に よ り

抗腫 瘍 物質

の

抽 出

に よ る

精製

を お ^こ な ^い

，

そ の

抽 出 物 質

に つ い て

検 討

し た

．

本 実 験

に は

， 対 照群

と し て P B S

く

p H 7

^．

0

フ

を

投 与

し た

．

ま た

，

マ ウ ス は 1

群

2 0 匹 と し て

実 験

し た

．

1

^．

_p H 2

．

0

^．u

8

．

0

分 画

の

活 性

王C R

系， 生後

5

退く

2 0

^旬

2 2 g

I

の ^マ ウ ス の

腹 腔 内

に

調 整

し た E h r li c h

癌 細 胞

の 5

^．

5 ^X l O

⁶

c e ll s

l

m o u s e を

移 植 後，

4 8

時間 経 過後

よ り

， 等 電 点 法

^に よ り

得

ら れ た

抽 出 懸 濁 綬を

0

．

5 m l

ず

つ マ ウ ス の

腹 腔 内

^に

，

1 日 1 回 7 日

間 連 続 投 与

し た

．

3 0 日

間

の マ ウ ス の

生 存

匹

数

を

観 察

し

， 抗 腫 瘍 活性

を

判 定

し た

．

こ の

結 果， 表

4 に 示 す ご と く

，

P B S を

投 与

し た

対 照

群

^の マ ウ ^ス は 8 日

目

よ り 腫

瘍

死 を

認

め

，

1 5 日

目

で

全

て の マ ウ ス は

腰 瘍

死 し

，

そ の

平均 生存

日

数

は 9

^．

9 士 2

^．

3 日 で あ

っ

た

．

p H 2

−

0 の

沈

殿

分 画投 与 群

で は

，

8 日

目

よ り 腫

瘍

死 を

認

め

， 対照 群

の そ れ と

同^一

で あ

っ

た が

， 全

て の マ ウ ス の

腫瘍

死 は 2 6 日

目

で あ り

， 平 均 生 存

日

数

は 1 2

．

8 士 5

．

2 日 で あ

っ

た

^．

p H 4

^．

0 の

沈殿 分 画 投 与 群

^で は 1 2 日

目

よ り

腰瘍

死 を

認

め

， 対

照

群

^の そ れ よ り

， 腫瘍増 殖

^の

抑 制

が み ら れ

，

そ の

平均 生 存

日

数

は 1 6

^．

0 士 3

^．

0 日 で あ っ た

．

ま た

，

p H 6

^．

0 の

沈 殿 分 画 投与 群

^で は 9 日

目

よ り 腫

瘍

死 を

認

め

， 平 均 生 存

日

数

は 1 3

．

5 士 5

^．

0 日 で あ っ た

．

p H 8

．

0 の

沈殿 分 画 投 与 群

^で は

，

平

均 生存

日

数

は 6

^．

2 士 3

^．

3 日 で あ

^っ

た

．

ま た

，

T

ノ

C

く％1

を

求

め る と

，

p H 2

．

0 の

沈

殿

分画投 与 群

で は 1 2 9

−

3

％

と

抗 腰 瘍 活 性

は み ら れ な ^か

^っ

た が

，

P H 4

．

0 の

沈殿 分 画投 与 群

^で は 1 6 1

^．

6

％

と

著

し い

抗

腫

瘍 活 性

が

認

め ら れ た

．

ま た

，

P H 6

．

0 の

沈 殿 分 画投 与 群

^に

お い て も 1 3 6

．

4

％

^の

抗

腫

瘍 悟性

が

得

ら れ た

．

以 上 の

実 験成 績

よ り

， 等電 点 法

に お け る 至

適

p 王 i は 4

^，

0 で あ

^っ

た た め

，

エ タ ノ

^ー

ル

分 画

を た だ ち に 1 0

規 定

の 塩

酸

に て p H 4

．

0 と し

， 同様

^の

実験

を お ^こ な

^っ

た

0 使

用 し た E h r li c h

癌 細 胞

は

，

4

^．

7 ^X l O

⁶

c e ll s

ノ

m o u s e を用 ^い

T a bl e 3

．

A n t i t _{u m o r a c} t i v i t y ^o f e t h a n o l f r a c t i o n p ^{r e} p a r e d f r o m t h e c u l t u r e s u

p

^{e r n a t a n t o f} F n u c l e a t u m s t r a i n K O

⁻

3l o n s o lid _{t y p} e t u m o r o f S a r c o m a 1 8 0 c e l l s l n m i c e

．

E t h a n o l f r a c t i o n

^a

I N u m b e r o f

く

m g

l

m o u s e

I

m i c e u s e d

N u m b e r o f s u r v i v i v o r s a f t e r

2 3 4 5 6

3

．

0 5

^．

O P h _y s i o l o g l C a l

S a li n e

く

c o n t r o I

J

0 0 0 1 1 1

9

n U

8 1 0

ハ U

O l l 1 0 0 0 1

1 1

7 9 5

3 4 2

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豊 忠言

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豊

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5 士 5

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2 士 3

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R e a di n g w a s p e r f o r m e d o n t h e 3 0 t h d a y ^a f t _{e r} i n t _{r a} p e r i t o n e a l i n

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