腹 水 癌 細 胞 の エ ネ ル ギ ー 代 謝 に 関 す る 研 究*
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(2) 634. 西. 風. 桂. 子. 離 さ れ た癌 細 胞 ミ トコ ン ドリァ は 先 に 報 告 した 装. 用 い た13).即 ち腹 水 癌 細 胞 をpackedml当. 置11)を用 い て そ の性 格 を検 当 し,分 離 法 の 検定 に供. プ ロ テ アー ゼ を 含 む 分離 液(0.25M. した.即. Trie‑HCl buffer, 0.1mM. ち,白 金 回 転 酸 素 電 極 法 に よ る酸 素 消 費,. EDTA,. りmgの. Sucrose, 10mM 0.05%. BSA,. pH. 90゜ 光 散 乱 に よ る ミ トコン ドリア の容 積 変 化,螢 光. 7.4)に0℃15分. 法 に よ る ピ リジ ン ヌ ク レオ チ ドの酸 化 還 元,こ. 洗 滌 した.プ ロ テ ア ー ゼ処 理 され た癌 細 胞 は5倍 量. の三. 者 を 同 時 に 測 定 記 録 出来 得 る装 置 を用 い て種 々 の試 薬 に よ る変 化 度 合 を求 め,ミ. トコ ン ド リア のintact. さ を 示 す と云 わ れ る酸 化 的 リン酸 化(呼 ADP/O比12))を. 吸調 節 比,. 反 応 液(0.05〜0.1. M Sucrose, 20mM. Trio‑HCI buffer, 0.1mM これ に適 時3mM. EDTA,. K‑phosphate. Cl2を 加 え, 25℃ は シグ マ 製 をTrie. 7.4)を. 下,全 量2m1で. Mg. 7.4に. モ ジ ナ イザ ー に よ りホ モゲ. 方 法14)に準 じて ミ トコ ン ド リア を 分 離. した.こ の 分 離 過 程 は図1に 示 す 如 くで あ る.. て ミ トコ ン ド リア の収 量,活 性 に 影 響 す るが, 0℃ 15〜30分(遠. 沈 操 作 を 含 め て)の. 場 合,収. 量 はエ. ー ル リ ッヒ腹 水 癌 細 胞 に お いて は かな りよ く,こ れ. 測 定 した . ADP. bufferでpH. 離 液 で. プ ロテ ア ー ゼ の 処 理 は そ の量 及 び 作 用 時 間 に よつ. 用 い,. 7.4), 1mM. 沈,分. ナ イズ され,こ れ を 更 に6倍 に分 離 液 で 稀 釈,以 後. KICI, 10mM. pH (PH. の 分 離 液 中 でTeflonホ. Hogeboomの. 求 め た.反 応 液 と して はSucroee. 間 浮游 放 置 後,遠. し使 用 し. た.. に 比べ てAE‑130で. は悪 い.こ れ は もと もと細 胞 の. ミ トコ ン ド リア 含 量 が 異 な るの か も知 れ な い が,測 定 され た 活 性 か らみ れ ば 上 記 程 度 の処 理 で最 もよ く 実. 験. 結. 果. 定 常 的 な 活性 を もつ ミ トコ ン ド リア が 得 られ た.又,. 腹 水 癌 細 胞 よ り ミ トコン ドリア の分 離:腹 水 癌 細 胞 よ りの ミ トコ ン ドリア の分 離 は通 常 の ラ ッ ト肝 よ. BSAを. 分 離 液 よ り除 くと活 性 の 良 い も の が 得 られ. ず, BSAに. りの 分離 法 で は分 離 が 困 難 で あ る.こ れ は先 づ 第 一. よ る保 護 作 用15)が観 察 され た.. プ ロテ ア ー‑ぜを 用 い て 分 離 した ラ ッ ト肝 ミ トコ ン. に癌 細 胞 膜 が 破 壊 され ない た め と考 え られ る の で,. ド リア の 活性 変 化:癌 細 胞 膜 破 壊 の 目的 で 使 用 せ る. 細 胞 膜 破 壊 の た めに プ ロ テア ーゼ(長 瀬 産 業 製)を. プ ロテ ア ー ゼ を ラ ッ ト肝 よ りの ミ トコ ン ドリの分 離. Fig.. 1. Diagram. contained All. processes. 0.25M were. of. isolation. sucrose, carried. process. 0.1mM out. of. EDTA, at. 0•Ž.. ascites 10mM. tumor trio-HCl. mitochondria. buffer. The (pH. 7.4). preperation and. 0.05%. solution BSA..
(3) 腹 水 癌 細 胞 の エ ネル ギ ー代 謝 に 関す る研 究. 635. Table 1. Activities of oxidative phosphorylation in rat liver mitochondria and in ascites tumor mitochondria linked succinate. The ADP/O ratio was calculated from the amount of oxygen consumption by the added ADP and respiratory control index was indicated by the ratio between the rates of respiration in the presence of ADP and in its absence.. 過程 に用 い て その 影 響 を 観 察 した.即. ち,ラ. ッ ト肝. 細胞を 軽 くあ ら 目に ホ モ ジナ イズ した の ち,と れ に プ ロテア ーゼを 細 胞1g当. り1mgの. 量 で 加 え, 0℃. 吸調 節 比3.5で (図2).又. あつ て,著. しい 変 化 は み ら れ な い. 種 々の 試 薬 に よ る膨 潤 収縮 及 び ピ リジ. ン ヌ ク レオチ ドの 酸 化還 元 の 度 合変 化 も両 者 間 で 著. 15分 作用放 置後,対 照 に プ ロテ ア ー ゼ を加 え な い も. しい 差 は み られ な か つ た.し か し24時 間0℃ 0.25M. のを と り,両 者 よ り同 時 に 別 個 の遠 沈 管 で ミ トコ ン. Sucrose中 で のaging効. 果 は 対 照 ミ トコ ン ド リア で. ドリアを分 離 した.正 常 の ラ ッ ト肝 ミ トコ ン ド リア. はADP/0比2.0と. の コハ ク酸 基質 下 の酸 素 消 費,90。. 構 造 的 観 察 の 指針 と もな り得 る呼 吸 調 節 比 は2.5と. 光 散 乱 変 化,即. 分 離 時 と同 様 の 活 性 が み られ,. ち膨潤収縮 及 び ピ リジ ン ヌ ク レ オチ ドの 酸 化 還 元 の. 約 半 分 に 減 少 した に過 ぎ な かつ たが,実 験 群 ミ トコ. traceは図2に 示 す 如 くで あ る.こ の場 合, ADP添. ン ド リア で はuncouplingが. 加 によ り測 定せ られ るADP/0比. とな り僅 か の 調 節 比 し か み ら れ ずADP/O比. それ ぞれ2.1,. 及び呼吸調節比は. 3.8で あ る.一 方 プ ロ テネ ー ス処 理. osymetricに. み られ 呼 吸 調 節比 は1.2 は. は 測 定 出来 難 くな つ た.こ のagingに. と もな つ て膨 潤 収 縮 変 化 及 び ピ リジ ン ヌ ク レオ チ ド. 画分 の ミ トコン ドリァ の そ れ はADP/0比2.1,呼. の 酸 化還 元 変 化 もそ の差 が対 照 と実 験 群 に観 察 され Fig.. 2. The. dria. oxygen of. pyridine. KCI,. mitochondria. liver. one aging. Left hour on. traces. 0•K in. 7.4. were. 0. 25M. テ アー ゼ の 処理 は分 離 され た ミ トコ ン ド リア が単 時. in 0.02M. EDTA. and. 10mM. 25•K.. Uper. traces. and. under. at. from. traces. at. the. time 20. hours. リジ ンヌ ク レオ チ ドの酸 化 還 元 変化 も正 常. 分 離 ミ トコ ン ド リア と同 傾 向同 程 度 認 め られ,そ の 活 性 面 に おい てintactと. 云 え る ことが 明 らか とな. つ た.. treated. at. 同 様 の 酸 化 的 リン酸 化能 が認 め られ,又 同 時 に膨 潤 収 縮,ピ. traces. proteinase. recorded right. の結 果 か ら,分 離 過 程 に お け る プ ロ. 間 内 に使 用 され れ ば,正 常 分 離 の ミ トコ ン ドリア と. fluorescence. sucrose,. mitochondria. and. A),. simultaneously. 0.1mM pH. た(図2).こ. mitochon. (trace. relative. 0.1M. isolated. aging. liver. oxidation-reduction. measured. MgC12,. control. rat. and in. were. buffer,. to. (B). contained. 1mM. Tris-HCI. to. on. change. nucleotides (C). medium. refer. effect. consumption. intensity the. aging. Swelling-shrinkage. of. 腹 水 癌 細 胞 よ り分離 せ る ミ トコ ン ド リア の性 状: プ ロ テ アー ゼ 処 理 に よ つ て エ ール リ ッヒ腹 水癌 細 胞. sucrose.. よ り分 画 さ れ た ミ ト コ ン ド リ ア の コ ハ ク 酸,. トグル ター ル酸,ア. α‑ケ. ス コル ビ ン酸 基 質 下 の酸 素 消 費,. 膨 潤 収 縮 変 化,ピ. リジ ンヌ ク レオ チ ドの 三 者 の 同時. 測 定 記 録 を 図3に. 示 す.コ. ハ ク 酸,. α‑ケ. 一 ル 酸 ア ス コル ビ ン酸 基 質 下 のADP/O比 2:3:1で ADP/O比,呼 α‑ケ. あ る が エ ー ル リ ッ ヒ ミ トコ ン ド リア の 吸 調 節 比 は コ ハ ク 酸 基 質 下2.0,. トグ ル タ ー ル 酸 基 質 下2.8,. ン 酸 下1.5,. トグル タ. は 理論 値. 1.5を. 示 し, ADPに. は 膨 潤 収 縮 変 化 と又,ピ. 3.5,ア. 3.2,. ス コル ビ. よ る これ ら 傾 向. リジ ンヌ ク レオ チ ドの酸 化.
(4) 636. 西. 風. 桂. 子. Fig. 3 The records of oxygen consumption(trace A), swelling-shrinkage change (B) and relative fluorescenceintensity change (C) in mitochondria isolated from Ehrlich ascites tumor. Incubation medium are as shown in Fig. 2 except 0.05M sucrose.. 還 元 状 態 と共 軛 して 観 察 され,ラ. ッ ト肝 ミ トコン ド. リア と 同一 傾 向 が 示 さ れ た.し か しphase1に. お. け る膨 潤 収 縮16)は正 常 ラ ッ ト肝 ミ トコ ン ド リア よ り. Figs.. 5. and. shrinkage. 6. Simultaneous. (A),. relative. fluorescence. mitochondria. もか え つ てADPに され た.又,. よ る感 受 性 が 大 きい よ うに 観 察. phase IIの 膨 潤16)は 正 常 ラ ッ ト肝 ミ. トコ ン ド リア と異 な り,例 え ば 図4に 示 す如 く多 量 の オ レ イ ン酸 に よ る膨 潤 は誘 起 し難 い.又 ヌ ク レ オ チ ドのPiに. ピ リジ ン. dria in. (Fig. the. KC1, Tris-HC1. medium 1mM. 5). These. and traces. contained. MgC12, buffer,. (C). swelling. of. (B) of. and. rat. AH-130. were. liver. mitochon. recorded. at. sucrose,. 0.02M. 0.05M. 0.1mM pH. of. consumption. intensity. (Fig. 6).. traces. oxygen. EDTA. and. 25•‹. 10mM. 7.4.. よ る酸 化 度 合 が や や 低 く,基. 質 に よ る還 元 度 合 が 大 き くみ られ た.オ. レイ ン酸 に. よ る酸 化 度 合 も多 量 に添 加 して も起 き難 い. Fig.. 4. Effect. of. large. amount. of. oleate. on. Ehrlich ascites of measurement. tumor mitochondria. Conditions are as shown in Fig. 3 except. that. medium. incubation. 図5はAH‑130腹. does not contain MgC12.. 水 癌 細 胞 よ り 分 画 せ る ミ トコ. ン ド リァ の 記 録 を 示 す. AH‑130は. その 起 源 が ラ ッ. ト肝 の故 に,正 常 ラ ッ ト肝 ミ トコ ン ド リア と の 比 較 が 可能 と され るが,そ 1.8,呼. の 呼 吸 活性 は 若 干ADP/O比. 吸 調 節 比3.0と 低 く観 察 され た.又,. phase I. の 膨 潤 収 縮 及 び ピ リジ ン ヌ ク レオ チ ドの酸 化 還 元. 度 合 変 化 も あ ま り大 差 は 認 め ら れ な か つ た が,し し 多 量 のuncoupler(オ よ るphase. IIの. レ イ ン酸,. Ca++)の. か. 添加 に. 膨 潤 は エ ー ル リ ッ ヒ腹 水 癌 よ り の. ミ ト コ ン ド リ ア 同 様 誘 起 し 難 た か つ た..
(5) 腹水癌細胞 のエネルギー代謝に関す る研究. 637. 較 に お い て も認 め られ て い る21).し か し,代 謝 調 節 考. 按. と密 接 に 関係 が あ ると さ れ る ミ トコン ドリアの 容 積. 癌細 胞 よ り分 離 され た ミ トコン ド リア に つ い て の. 変 化 に お い て16)19)20),酸 化 的 リ ン 酸 化 能 とcouple. 研究 はそ の組 成 に 関 す る研究 と解 糖 と呼 吸 の 関係,. してphase. 即 ちCrabtree eff㏄tか ら種 々 の見 地 で 観 察 さ れ,. ン ドリア の それ と余 り差 が な い に も か か わ らず,. Iの 膨 潤 収 縮 は 正 常 ラ ッ ト肝 ミ ト コ. その含 有物 質 及 び 活 性 に は若 干 の量 的 変 化 は あ るが. unconperで. あ る オ レイ ン酸22), Ca2+23)ら の 薬剤 に IIの 膨 潤 が著 し く起 り難 い こと は,上. ほとん ど正常 の もの との 差 が 認 め られ て い な い.最. よ るphase. 近,癌 ミ トコン ド リア が種 々の膨 潤 試 薬 に対 して極. 記AH‑130,エ. めて反応 し難 い こ とが報 告 さ れ て い るが17)18),ミ ト. 肝 よ り分 離 され た ミ トコ ン ド リア に観 察 さ れ,共 通. コン ド リア のintactさ. な 性 状 と考 え られ る.こ のphase. を示 す酸 化 的 リン 酸 化 能 に. ー ル リッ ヒ腹 水 癌 及 びDAB発. 癌部. IIの 膨 潤 度 合 に. つ いての関 係 は明 らか で な い.一 般 に癌 細 胞 よ りの. つ い て の 観 察 は後 述 の 論文 が 追求 す る.又 癌 よ り分. ミ トコン ド リア をintactな. 離 の ミ トコ ン ド リア は 概 して分 離 直 後 の還 元 型 ピ リ. 呼 吸 調 節 能 を 有 す る状. 態 で分離 す る こ とは困 難 と さ れ て お り,は. た して. ジ ン ヌ ク レオ チ ドの状 態 が正 常 ラ ッ ト肝 ミ トコ ン ド. 得 られ た ミ トコン ド リア が そ の もの 固 有 の 性 状 を. リア の そ れ よ り も低 く,基 質 に よ る還 元 能 が 大 き く. 有 して い るもの か,分 離 過程 に お け る変 化 を 受 け て. 異 な る よ うに見 受 け られ るが,こ れ は今 後 の 詳 細 な. い る ものか充 分検 討 す る必要 が あ る.し か も ミ トコ. 測 定 を 試 み な け れ ば な ん と も云 え な い.. ン ドリアの示 す形 態 変 化 は 酸 化 的 リン酸 化 の 中間 体 総. と密接 な関係 が認 め られ る19)20)ことか ら も充 分 考 え ね ばな らぬ点 と云 え る.又 癌 ミ トコ ン ド リア と正 常. 1)エ. 括. ール リッ ヒ腹 水癌 細 胞 及 びAH‑130腹. 水肝. のそれ とを比 較す る に して も,対 照 と起 源 を 一 とす. 癌 細 胞 よ りの ミ トコン ド リァ の分 離 を 種 々の 方 法 で. る ものでな ければ あ ま り意 味 を も た ぬか も知 れ な い.. 行 な い,そ れ らの 分離 法 を ミ トコ ン ド リア の 酸素 消. この点 ミトコン ドリア と して よ く研 究 され て い る ラ. 費, 90゜ 光 散 乱 に よ る容 積変 化,ピ. ッ ト肝 ミ トコン ドリア とAH‑130ミ. チ ドの 酸 化還 元 変化 を 同時 測 定 出来 得 る装 置 を 用 い. トコ ン ド リアを. 比較 す るこ とは意義 が あ る.著 者 は この 目的 で 著 者 ら考案 の酸 素消 費, 90゜ 光 散 乱 に よ る ミ トコ ン ドリ アの容積変 化,還 元 型 ピ リジ ン ヌ ク レオ チ ドの変 化. て 検 討 した. 2)癌. 細胞 を プ ロテ アー ゼ処 理 に よ り破 壊 し,ミ. トコ ン ド リア を 分画 す る 方 法 で 定 常 的 にintactと. を三者 同時 に測定 し得 る装 置11)を用 いて 腹 水 癌 細 胞. 云 え る酸 化 的 リン酸 化能,呼. よ りの ミ トコン ドリア の分 離 方 法 の検 討 を 行 な つ て. コ ン ド リア が 得 られ た.. 来 たが一応定 常 的 な状 態 の ミ トコン ド リア の分 離 に. リジ ン ヌ ク レオ. 3)腹. 吸調 節 能 を有 す る ミ ト. 水 癌 細 胞 の ミ トコン ド リア を 正 常 ラ ッ ト肝. 成 功 した.し か し,こ れ で も まだ 収 量 等 の点 で 不 充. ミ トコ ン ド リァ と比較 した時,呼 吸 調 節能 は 同程 度. 分 であ り,更 に 研究 を進 め る必 要 が あ る.. で あ るが 若 干ADP/O比. プ ロテアー ゼ を用 い て定 常 的 に分 離 され 得 る癌 ミ トコン ド リアの 呼 吸活 性 は分 離 後 単 時 間 内 に使 用 す れ ば,分 離 過程 中 のagingを とは 出来 ない が,充. 全 く考 慮 外 に お くこ. 分intactな. ミ トコ ン ド リア と. して実験 材 料 とな り得 る もの と考 え られ る. AH‑130. 4)腹. が 低 い.. 水 癌 ミ トコ ン ド リア のphase. 1の 膨 潤 収 縮. 変 化 及 び ピ リジ ンヌ ク レオ チ ドの酸 化 還 元 変 化度 合 は呼 吸 変 化 と平 行 して,正 常 ラ ッ ト肝 ミ トコ ン ド リ ア と同 傾 向に み られ大 差 は認 め られ な か つ た. 5). Uncouplerに. よ るphase. IIの 膨 潤 は 癌 ミ ト. 及 びエ ール リ ッヒ腹 水 癌 細 胞 よ りの ミ トコン ド リア. コン ド リアに お い て は そ の変 化 度 合 が 低 く,誘 起 し. の呼 吸活 性 は 正 常 ラ ッ ト肝 ミ トコ ン ド リア の呼 吸 活. 難 い.. 性 と極 めて類 似 して お り, Hela細 ン ド リア の如 きADP添. 胞 よ りの ミ トコ. 加 時 の緩 慢 な 呼 吸13)は 認. め ら れ な か つ た.し か しADP/0が. 若干低い よう. に 観 察 さ れ た,こ の こ とは 先 に報 告 したDABに よ る発 癌 部 位 と 非 癌 部 位 の 肝 ミ トコン ドリア の比.
(6) 638. 西. 風. 桂. 文 1) Crabtree, H. G.:. 献. Observation on the carbohy. 13). drate metabolism of tumors. Biochem. J., 23,. ウ ム,. 2) Kun, E., Talalay, P. and Williams-Ashmann, H. G.: Ehrlich ascites tumors, I. The enzymic and metabolic activities of the ascitic cells and the ascitic plasma. Cancer Research, 11, 858, 1951. 3) Warburg, O.:. On respiratory. impairment in. Glycolysis Biochim.. Biophys. Acta, 30, 384, 1958. 5) Chance, B. and Hess, B.:. Regulatory me Li. factors in glycolysis of ascites tumor. cells. J. Biol. Chem., 234, 1029, 1959. mitochondria.. 杉 村 隆:最 9,. 1110,. 小変異肝 ガン. 蛋 白 質 ・核 酸 ・酵 素. 1964.. 内 海,山. of Ehrlich ascites carcinoma cells. Cancer Rese. 葉,大. 原,山. 20) Packer,. 13,. L.:. 113,. Relation between mitochondrial. 本:ミ. トコ ン ド リ 胞化学 シンポ. 1963.. Metabolic and structural state of. mitochondria. I. Regulation by adenosine dipho sphate. J. Biol. Chem., 235, 242, 1960. 21) Yamamoto, G., Utsumi,. 18, 1026, 1958.. 10) Utsumi, K.:. 本,稲. ア の 膨 潤 収 縮 と 酸 化 的 燐 酸 化.細 ジ ウ ム,. tion. VI. The effect of fatty acids metabolism. K.:. K.. and Nishikaze,. Studies on swelling-shrinkage. and oxida. swelling induced by inorganic phosphate and. tive phosphorylation of liver mitochondria of. accumulation of p32 in mitochondrial. rat fed 3'-methyl-4-dimethyl-aminoazobenzene.. tion. Acts Med. Okayama, 11). 16, 317, 1962. 19). 9) Scholefield, P. G.: Studies on fatty acid oxida. arch,. long-chain fatty acids. Acts, Med. Okayama,. Biochem.. Biophys. Res. Comm., 17, 294, 1964. 8). Size and shape transformations. 18) Utsumi, K., Ohara, S., Yamamoto, G., Inaba, K., Urakami, H. and Yamamoto, G.: Mito chondrial swelling and uncoupling activity of. A Crabtree-like effect with iso. ascites tumor. 1962.. cles during chemical carcinogenesis.II. Further evidencefor their involement in the mechanism of carcinogenesis. The swelling of rat liver mitochondriaduring feeding of aminoazodyes. J. Biophys. Biochem. Cytol., 7, 49, 1960.. enzymes in the ascites cell.. chanisms in carbohydrate metabolism. III.. lated. 67,. 胞か らの ミ. 素 化 学 ジ γ ポジ. in intact mitochondria. J. Cell Biol., 18, 487, 1963. 17) Arcos,J. C., Griffith, G. W. and Cunningham, R. W.: Fine structural alteration in cell parti. J, Biol. Chem., 234, 2421, 1959.. 7) Sauer, L. A.:. HeLa細. tochondria. I. Swelling-shrinkage mechanisms. Metabolic control. Wu. and Racker, E.:. 17,. 381,1960. 16) Packer, L.:. mechanisms. IV. Effect of glucose on the steady state of respiratory. 貴:. correlate with oxidative phosphorylation in mi. of metabolic pathways in the. Ehrlich ascites carcinoma cells. I. and respiration (Crabtree effect).. 住,奥. 15) Borst, P. Mitochondriafrom Ehrlich ascites tumor cells. J. Biophys. Biochem. Cytol., 7,. 4) Ibsen, K. H., Coe, E. L. and Mckee, R. W. Interrelationships. 原,増. 14) Hogeboom,G. H.: Methodsin Enzymologyvol. I, 16, 1955, Acad. Press. New York. cancer cells. Science, 124, 209, 1956.. miting. 小 林,萩. Fコ ン ド リ ア の 調 製 と 性 質,酵. 536, 1929.. 6) Ray,. 子. 内 海,山 光 散 乱,. 本,浦 Pyridine. 上,西. 風:. 17, 259, 1963.. nucleotidesの. 193,. 螢光及酸 素消費 山 医学 会雑 誌. 1964.. C. R.:. The respira. chain and oxidative phosphorylation.. vances in Enzymol.,. 17, 65, 1956.. Ad. Effect of sodium oleate on. the metabolism and size of rat liver mitochon dria. Acta Med. Okayama, 23) Utsumi,. 12) Chance, B. and williams, tory. Acta Med. Okayama, in press. 22) Yamamoto, G.;. Mitochondriaの90゜. 量 変 化 の 同 時 測 定 装 置 の 試 作.岡 76,. Pi frac. K.:. 18, 247, 1964.. Mitochondrial swelling induced. by Cat 4 and inorganic phosphate and its related phenomena. 1964.. Acts, Med. Okayama,. 18, 189,.
(7) 腹 水 癌 細 胞 の エ ネル ギ ー代 謝 に 関す る研 究. Studies I.. on the. A method. energy. metabolism. to isolate. the. and. biological. their. of ascites. mitochodria. from. 639. tumor tumor. cells cells. activities. By Keiko NISHI KAZE Department of pathology, Okayama University MedicalSchool SUMMARY The method of separation of tumor cell mitochondria (Ehrlich ascites cell and rat hepa toma cell, AH 130) by treating tumor cells with proteinase, by which the mitochondria are retained in a biologically active state, has been reported. The mitochondria thus obtained proved to have the normal activities of oxidative phosphrylation and respiratory control. The respiratery control of these mitochondria was nearly the same as those of liver mitochond ria from normal rat but rather low in ADP/O ratio than the later. The tumor cell mitochondria also showed nearly a normal potency in the swelling at phase I and the oxidation-reduction of pyridine nucleotide, but the swelling at phase II which is induced by adding uncoupers such as oleate and Ca++, was markedly low as compared with that of rat liver mitochondria..
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