剖 検 肝 肝組 織 内 抗原 索 検

剖検^{肝にお け る肝 組}織内 ^{H B} 抗 原^の 検索

Ⅱ^.肝 細胞核 内 ^{H Bc} 抗 原^の 出 現 と

ス テ ^ロ イ ド剤投与と^の関係

金沢 大 学 医 学 部 病理学 第二講 座_{( 主 任} ^: 太 田 五 六教授)

広 瀬 鎮 郎

( 昭和5 2年7月29 日受付)

従来^{か ら.} 免疫 抑 制状 態^にあ る個 体は H B ウイ^ル ス の持 続的 ^{c a r r}ie r にな り易^{い こ}と が強 調さ れて い る^. 更^に最近で は, 腎 移 植 例^のよ うに免疫 抑 制 剤を大 量^に投与さ れ た個 体^では. 肝 組織 内^の H B^c 抗 原が H Bs 抗 原に 比較して優 勢^であ る^こと が報 告さ れて い

る^l). 今 臥 著 者はス テ^ロイ ド剤を最期 投与し^, 免 疫 抑制状 態^にあ る と考え ら れ る血 中 H Bs 抗原 陽 性^の慢 性肝疾 患患者^の剖 検肝 を 材料と して, ス テ^ロイ ド大量 投与 軋 中 等量 投 与 群^, 少量 投 与 群^に区 分し^･ 免疫 抑 制剤非 投与 群と^の問に, 肝 組 織 内 H Bs ^｡ H Bc 抗 原^の 出現状 態及 び 出現 頻 度^{につ い て}相 違が な^{い か} ど う か を 比較し. 特^{に ス テロ} イ ド剤が肝 組 織 内^の H Bc 抗 原^の 出現^にどのよ う な影響を与えて いる かに注 目して t 本 研究を行な^った^.

検 索 対 象 および方 法 1 . 検 索対 象

金沢 大学病理学 教室^で過 去5 年 間^に剖検し た種^{々 の} 慢性肝疾患^のう ち, 生前^の血 中 H Bs 抗 原 陽 性例2 9例 を対象と L た. 血 中 H Bs 抗原^の検 出^{は, R I A} 法^に よる も^の25例^. S R I D 法^によ る も^の4 例^であ^っ た, 対 象例29 例^の疾患別内わ け は. 肝ガ^ンを伴う肝硬変が1 0 恥 肝硬変 9 例, 肝 ガ^ン3 例^, 慢 性 非 活 動 性肝炎3 例, 慢 性活 動性 肝 炎1例^, 胆 管^{ガ ン}3 例 (内2 例 は肝

硬変を伴う) であ^った. 年 令 別^では1 5才^〜7 7才^, 平 均 53.4才^, 性 別^では 男性27人, 女性2人^であ る.

2 , 検 索方 法

ホル マ リン固 定肝 材 料か ら新し く 2 カ所ず^つ 1 ^{c m}

×1c m の肝 切片をき_り出し^. 伊 藤^{2 ) の}方 法^に よ り^,

流 水々洗 後5 % ゼ^{ラ チン}溶 液 中^に10 時 間^{, つづい て10}

% ゼラ チン溶液 中^に8 時 間ひ た し た肝切 片を ド ライア イ^ス, ア セ トンで冷却し た‑70 ^GcIl ^ヘ キサ ン に て 凍 結さ せ^. そ れ を ク リ オ^スタ ^ット^{に て}4 〟 に薄 切し, 型 通り 蛍光抗 体 直接 故^によ り^. 肝 内 H Bs ^｡H Bc 抗原^の 検 索を行な^った.

蛍 光標 識 抗 H Bs ラ^ベル抗体は, 精製 H B^s 抗 原を 家 兎^に免疫して得た抗 血 清を, a伍nit y^･Chr o m atogr^‑ aphy に て と 卜 の血 清 成 分^に対 する抗体を除 去し た家 兎 抗 H Bs 抗 血 清を用^{い て .} 型^のご と く F I T C を標 識し たも^の ( F^/P ⁼ 1) を用^いた. ま た蛍 光 榛 識 抗 H Bcラベ ル抗 体は. ヒ ト由 来^の抗 H Bc 抗 体を 用 ^い.

あ ら か じ め抗 核 抗体^, 抗 肝 抗体 等^の各種 自己抗 体^, 抗

e 抗 体等が陰 性^{であ ること を}確認し た もの に型^の如く F I T C を標 識し たも^の(F^/P ⁼ 1) を 用^いた.

ステロイド剤 投与 量による 分類;29 例は生 前^に使 用 さ れ た^{ス テロ}イ ド別^の総 量が, Pr ednis olo n e に

換 算して, 30 0 0m g以上を大量 投与 群^. 1 0 0 0 ^〜3 000m g を中等^量投 与 群^, 1 0 0 0m g以下を少量投与 群と し.全然 使 用さ れて いな か^った 症例を非 投与 群と し た^. 尚 種^々

の ス テ^ロ イ ド剤を Ⅰ〕r ednis oIo n e に換算す る時^に は. rindelo n O.5^m g は Pr ednis olo n e 5m g に .

de c adr o n e O^.7 5m g が pr ednis olo n e 5^rng に.

Pr edo nin e は量 的^には pr ednis olo n e と同じであ る と^いう井村^3)の文 献^にし た が ^っ た. 対 象 例2 9例 中^.

ス テ^ロ イド剤 大 量 投 与 群は 4 例 ( 肝^ガンを 伴 う肝硬変 2 例, 慢性 活 動 性 肝 炎1 例. 肝硬変1例) ^. 中 等患投

Im m u n ofiuor e s c e nt stud_y of H B_{A g i}ⁿ live r tiss ues of a u tops y c ase s [ . The relati^{o n} betw e e n the ap pe a r a n c e of HBcA g in t he n uclei of liv er c eu a nd corticoste r oi d t^･

re atm e nt.s h iz u o H ir o s e,2nd Dep^{a r}tm ent of Pat h^olog y (D ir e cto r ‥Prof. G . O hta), Scho ol

Of M edicin e, K a n a z a w a Unive r si t y ^.

表 1 肝 組織 内H Bs ^･H Bc 抗 原^の検 索 (^血中H Bs 抗 原 陽性 剖検 肝 材 料 使用例)

】 ^T

症例 番り･ ^{診 断 名}

F

F令^.性 別璧^{ステロイ ｢ 剤} l

の 掩 類

総 故

プレドニ

ゾロン に 抽笠 IJ7^■1

投 与^】

期 間

投与'■ ^中断

期間 死亡 固

潤

九 l

併 用療 法

強さ 分 布様 式霊芝雛;^竺ち

■訝1

H

ゾ

ス レ

テ 人ド

ロ 傲^ニ

イ投 ゾ

ド与ロ

剥 離^ン 3 0 00

【唱 以

土 ロ

2

甲^′型L,C +hep

C A H

5 1才 占 Pr ednis olo n e 3 18 0 咽 2 0 0 日 経口 隔日 +

6 5 日 ⁺ / ^{+ 小 葉 型} 凹

細 胞質辺 え ん型 ⁺ i 6 6 ^丁 R iI tdelo n e 3 10 8咽 湖 日

】^{経 口}l^連日担

+ / ^{冊 小 葉型} _細鮎品㌫型^川

【十 【

n

3

4

甲^′里L.C +hep

甲^′型 L.C

47 エi^{Pr edr 】is olo l l e 4 00 0Ⅶ 36 6 日 経 口 連日 + ァザ チ オブリ6 3 0 0叫ン!l + 単細 胞型 紬讐現謹ん}中 ^空

5 6 昌 be c こ1J^rr)I l e 3 01 5 ^間 9 2日 経口 連日 +

10 E】 ⁺ / ^{+ 単細 胞却 轍 鮒び まん豊里】甘}_喜^司

ス テ ^Lf^ユ (

ロ 等^プ

イ 臆^レ

ド投ド

剤 与^ニ 群ゾ

ロ ン 10 00

†叫 3 0 00u

l〔q

5 乙 型L.C +hep l

4 2 告 De c adr o n e 14 7 4^†伯 5 6日 経 口

筋 注 連日 連日 連日

十

4 5 日 ^十 / ^{+ 単細 胞型} 細 胞質 内 服撃弓^‑∃

/ ^十∃引

6 甲^′型 L.C 6 5 凸 Rinde】o n e 13 6 0mq 2 1日 + 摘 脾 術

1 1 カ月 前 /

7 C A H

+hep

6 4 占 De c adr o n e Ⅰ28 6mg 2 4日 経口 経口

十

7トラ フ^ール

1 2 g^{r +}i

朴岳

単細 胞型 細 胞質 内局在型

十び ま ん型 ^十童

斗

1 i

Ⅶ

8

9

甲^′型 L.C 5 3 竃

De c adr o n e 十 Pr ednis olo n e

1 15 6¶的 4 6日 連日 H

十 / ^{帯 状型 細 胞 那 闇}∵

乙^′型 L.C 5 9 芭 Pr ednis o】o n e

‖

1 00 0一拍 3 3 日 経口 連日 ^十l

十

./

/

+ 小 葉型 膜 型

H

田 禁¹F魂⁰

虔･イ座 ろ l

甲型 L.C

4 6 9

De c adr o n e + R i【ldel^{o n e}

l ∝IO 喝 3 2 日 経 口 連日 ♯【^{帯 状型 細 胞質 内局在十膜 尊皇 型 +}

n ^{6 5 占 Pr ednis olo n e 1 0 00 咽 3 2E】 経 口 連日 十 // 甘l 小 葉 型} 細胞質内^{膜 壁}びまん 型^{十 +}

ス プ

テ少^レ

一 書

イ枚 ^ニ

ド与ゾ 剤 割 ロ

ン 10 0 0

口以 下

田 ^{甲型 L.C 5 5 a De c adr o n e 4 6 9m 9 IO日 経口 連日 +}‡

+

.^/ /

≠

+

礪^:痛:型 細 胞質 周辺 型 十∃ q

田 ^{C I A H 4 7 a Pr edD+is olo rl e}

Rjndelone

3 8 0叩 7 日 経口 連日 単 細胞 型 細胞質内びまん型

田 ^{乙′劉L.C 15 占 Pr ednis o】o n e 3 6 0鵬 1 4E】 経 口}

経 口

連日 / ^{+ 単 細胞 型 細 胞質 内局在 型} 面

田 ^{C I A H 5 1 石 Pr edo山n e 3 1 01鴫 2 0 日 連日 +} / ^{≠ 小 葉 型 細 胞質 内局在型}

田 ^乙型十b^Lep^.C 4 4 看･^{De c adr o n e 2 6 8咽 1 0F】 静江 連日 +} / ^{十 単 細胞型 細 胞質 内局在 型}

ス

テ ロ

イ ド 剤 非 投 卑

田 ^{C hC a r Cola ngio･ 63 占}

./ / / // / / / / ^{≠ 帯 状型 細 胞質辺 え ん 型} ｣^l

｣

18 bep 6 3 a / / / / /

/ / /

レ

レ

/

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一/

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/

/

/

/ ^{十 単 細胞型}

帯 状型

細 胞質 内局在型

19 甲^′型L.C

+ bep 58 占 / / / / / ^{≠ 膜 型} 面_ヨ

20 甲^′型 L.C

+ hep 77 岩 / / / / /

̀

/ / ^≠

廿

小 異ぎ 甲 膜 勲

宮刑

2 1

四

C I A Il 3 9 占 / / / / / /^/

/

/ ^{小 変ぢ1!} _細胞質内^{膜 劉}び まん里^{+ 十}芦

円凹

lp^′型L.C 5 2 昌 / / / /

/ /

/ / /'

/

川 / ^{+ 単細胞甲 細胞質 醐 f}

.訂^丁

四 田

乙 型 L.C

+bep 4 8 古 / / / /

/

u / ^{十 小}■^{壁型 細胞腰澗 心 悸} ｣

一

●･ 三●

･ 6 0 占 / /

/ / / ^{≠ 小 袋≡型 膜}て^{邸 以}の甲^{外の すべ} 面

群

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25

田

2 7

乙型L.C

十bep 5 d 学 /

/

/ / / /

/

/

/ /

/

/ /

7トラ フ^ーリ

9 g^{r +}

+

苗 斗べ†r^J

膜+ 托り ^† 細胞質内び まん や 乙型L^.C

十hep 5 2 帯 /

/

/

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てト ラ フ^‑ル

】2 g^r 阻紬胞甲 細胞 蜜柑^{l 】}川.^や

bep 6 5 a / / / //

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‑^{7トラ フ}ー^ル

避基鼠 ^{./ ノ/}

/

2 8 甲^′製L.C

+bep 4 g 石

4 2 Jl

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担 /

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ロ

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乙型Ⅰ一.C / .^{/ /}

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/

/ / 工^{フ /′/}

L.C ^ニ肝 雌変, hep ⁼ 肝ガ^ン, C A H ⁼ 慢軒 店動昭朝 雄. C I A 月⁼ 樹^̀川‑^{(.5 軌柑JI}L^{炎, C ho)a n}gt o c a r c^ニ 胆管ガン +; 軽度^{o r}少 軌∴ 町 中等度(】r 中等 軋 ≠; 強健^{( 汀}大 戦

与群は 7 例 ( 肝ガ^ンを伴う肝^{硬変1 臥 肝硬変4 例･} 肝ガ^ン1 例^t 肝 硬 変を伴う胆 管ガ^ン1 例)^･ 少 量 投 与 群は 5例 ( 肝^ガンを伴う肝 硬 変1 臥 肝硬変2 例^･ 非 活動性 慢性 肝 炎²例)^, 非 投 与 群は1 3 例 ( 肝ガ ^ン を伴 ぅ肝 硬変6 例^, 肝 硬変 2 例^. 肝ガ^ン2 例^･ 慢 性非 活 動 性肝 炎1 鰍 胆 管ガン2例) ^であ^った^･

結 果 ( 蓑 1 )

Ⅰ^. 肝組織 内 B Bs 抗 原の検 索

血中 H Bs 抗 原 陽 性 例2 9例 中^, 肝 組 織 内 H Bs 抗 原 陽性例^は25 例 (^{8 6.2 %} ) ^であ り^･ そ^の H Bs 抗 原は肝 細胞^の細胞 質^{に の}み証 明さ れ た･ ス テ^ロイ ド投 与 群^で

は16 例 申1 5例 (93^.8 % ) に H Bs 抗 原が検 出^{さ れt} 非 投与 群^{で の13}例 中10 例 (7 6^.9%) ^に比 較して ス テ^ロ イ ド投与 群^{で の} H B^s 抗 原 出現 率が や や高^{かった が･ 統} 計的^に有 意 差は な か^った( 表2)^･ H Bs 抗 原^の肝 組 織 内^の分布 様 式を小 葉型t 箱 状 型^, 単 細 胞型^に分 類し^･ 更^に肝細 胞^{レベ ル で の H Bs} 抗 原^の蛍 光 像^を細 胞質 内 び ま ん型, 細胞 質 内 局 在 型^, 細 胞 質 周 辺 型^, 細胞膜型 に分類し^て検討を加え た が, 各 症 例^{で の}分 布 様 式や R Bs 抗原^の蛍 光像は ま ち ま ち^であ り^{. ス テ ロ イ ド}投

与群と非投 与 群^では^っき り し た傾 向は見ら れ な か ^っ た^.

Ⅱ. 肝組 織 内 E Be 抗 原の検 索

対象例29 例 中^, 肝 内 H Bc 抗原 陽性 例^は16 例 (5 5^･2

%) ^であ り^, H Bc 抗 原は肝 細胞^の核^{に の}み証 明^{さ れ} た. そ して ス テ^ロ イ ド剤投 与 群^では16 例 中1 Ⅰ例 (6 8^.8

%) ^に H Bc 抗 原が検 出さ れ, 非 投与 群^の13 例 中5 例 (3 8^.5%) ^に比し て, 投与 群^{で H Bc} 抗 原が出現し易

い傾向が み ら れ た (P ^く0 ^.1)^. 更^にく わ し く検 討す る と. ス テ^ロイド大 量及 び中 等量 投 与^の2 群^では.1 1 例

申10 例 (90^.9%) ^に肝 内^に H Bc 抗原^が検 出^{さ れ, ス}

テ^ロイ ド少 量 投 与 群 (20% 陽性)と非 投 与 群(3 8 ^.5 % 陽性)^{と を}合わ せ た18 例 中6 例 陽 性(33^.3%) に比較し て. ス テロイ ド中等 量及 び大 量 投 与群^{で の} H B^c 抗 原 出現 率が有 意に高か^っ た(P <0^.01) ( 表²) . ス テ ^ロ イ^ド大 量及 び中等 量 投与^の2 群^のな かで唯^{一 の} H Bc

抗原 陰 性例 ( 症 例5) は^‑ ス テ^ロイ^ド中等 量投 与 群^に 属し, 途 中4 5 日間^{の ス テロ}イ ド剤^の中断 期 問が あ^っ た ことに留 意す^べきであ りt ま た蛍 光抗 体 法^では細胞 質 内局 在 型^の H Bs 抗 原が単 細 胞 性^に認め ら れ た ( 写 真 1)^. ま た少量 投 与 群^では 5 例 中1 例^に. 非 投 与 群^で は13 例 中5例^に H Bc 抗原が検 出さ れ た が^, これ らの H Bc 抗 原 陽 性例 6 例 中⁵ 例^では, 少 数^の H Bc 抗 原 が単 発 性に認め ら れ た^. 残り 1 例 ( 症 例20) ^{では H Bc} 抗 原が肝 細 胞^の核^の中に大 量^に検 出さ れ ( 写 真2)^.

一方 H Bs 抗 原^の検 索^でも, 膜 型及 び細 胞質 内^{び ま ん} 型^の H Bs 抗 原が大 量に出現して いた( 写 真3) ^.

Ⅲ^. 肝 組 織 内 ⅢBs 抗 原と H B^e 抗 原の量 的 関 係に つい て

2 9 例 を 肝 組織 内に H Bs 抗 原^のみ が陽 性 例^. H Bs

抗 原と H Bc 抗 原^の両 者 共 陽性 例^{, H Bc} 抗 原^{のみ が} 陽 性例, 両 者 共 陰性 例に分類し検討し た^. 更に両 者 共 陽 性例に^つい ては, 蛍 光 抗体 法^{で の} H B^s 抗 原, H Bc

抗 原^の陽 性 細胞 数や蛍 光^の強さ を比較^{し, H Bs} 抗 原 が H B^c 抗原よ り優 位^であ る症 例(H B sAg > H BcAg)

, H Bs 抗 原^{と H Bc} 抗 原が は ば同じであ る 症例 (H BsA_{g ≒}H B^cAg)^, H Bc 抗 原^{が H Bs} 抗 原よ り も 優 位^であ る症 例 (H BsAg< H BcAg) ^に細 分し た ( 蓑 3 ) . ス テ^ロイ ド大量及 び中等 量 投 与群^では, 両 者 共 陽 性例が 1 1例 中 9 例 (81 ^.8 %) で あ り^{. ス テロ イ ド}少 量及 び非 投与群^の18 例 申6例 (33 ^.3%) ^に比 して, 前

表2 蛍 光 抗 休 法に よ る肝 組 織 内 H B s ^･ H B c 抗 原^の検 索 (血中H Bs 抗 原 陽 性 剖 検例^にお け る)

瑠註^｣ 釈^{庵例 数 H}鎧誹^施例数

ス フ ロ

イ ド 剤 投 与 群

大 量

投 与 群 ⁴ / 4 (1 0 0 % ) 4 / 4 ( 1 0 0 % ) 6 / 7 ( 8 5^.7 % ) 中 等量

投 与 群 ⁶ / 7 (8 5.7 %) 少 量

投 与 群 ⁵ / 5 (1 0 q % ) 1 / 5 (20 % ) 計 _{1 5 / 1 6} (9 3^.8 % ) 1 1/1 6 (68.8 %)

ス テロイ ド剤

非 投 与 群 ^{1 0}/1 3 (7 6^.9% ) 5/1 3 (3 8^.5 %)