々 の 検 査 法 の 開 発 ・普 及 に よ り膵 癌
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(2) 502. 高. 倉. 範. 尚 膵 癌 組 織(2〜3g/wet. 実 験 に 供 した. 2.腫. 瘍 特 異 抗 原 の 抽 出12)(図2). weight)を. 酵 素 阻 害 剤(aprotinin caproic PBS. acid. 600mg/ml)を. pH7.3)中. 含 む 緩 衝 液(0.02M. で は さ み で 細 切 し た 後,. 心 洗 浄(1,500rpm,. 10分)す. に つ き, Veronal. Buffer(pH7.5,. dium. 0.375g,. chloride. barbital. る.こ. の)28ml,. 0.01M. hydrate,. 2ml,. 遠 心 し,こ. sodium. chloride. hexa 0.08g. stirrerで0〜4℃. で4時. の あ と10,000rpmで60分. 間冷凍. で2日. ら に10.000rpmで50分. こ の 上 清 の 下1/3と. so. deoxychloride. の 上 清 を0〜4℃. 透 析,さ. の 沈 渣10ml. 0.575g,. magnesium. magnetic. 遠. 蒸 留 水 に と か した も. sodium. 間 か く拌 し,こ. 3回. barbital. acid. 85gを1,000mlの. を 混 ぜ,. 蛋 白分 解. 20KIE/mlとE‑amino. 間 生 食 で. 間 冷 凍 遠 心 し,. 沈 渣 をcrudeな. 膵癌 特 異 抗. 原 と し た.. 3.. Ouchterlonys'. double. immunodiffusion. test 0.01M. Tris‑HCl. polyethylene. Buffer(pH7.4)100mlに. glycol. 2g,. 0.001M. agarose. gelを. gを 加 え た0.7% 抗 血 清 をmoist 応 させ た.抗. 図1. 特異的抗POA血. 清の作成法. 検 体 は,胎. chamber内. 癌 患 者 血 清,胎. 常 ヒ ト血 清 を 用 い た.さ. 抗AFP血 4.免. Ferritinと. らに,. の異 同 を検 す. 清,抗Ferritin血. 清,. 清 と 反 応 させ た.. 疫 電 気泳 動. Barbiral. 5%. い,室. 0.035%. agarose. 抽 出 液,抗. USA)に. て, 0.065. Buffer(pH8.6)に1%. sucrose,. versal. filmに. agarose,. EDTAを. 加 え たUni. 試 料 抗 原 と して胎 児膵. 血 清 と し て 特 異 的 抗POA血. 温 で90V,. せ, POAの 5.. 児 肝 抽 出 液,. 児 膵 抽 出 液 を市 販 の 抗CEA血. 電 気 泳 動 装 置(Corning社, M. 間反. 清 を 用 い,. 正 常 膵 抽 出 液,正. AFP,. 体 と. 癌 組 織 よ り抽 出 し た. 膵 癌 特 異 抗 原,膵. る ため に,胎. 清 を用. 55分 間 通 電 し, 24時 間 反 応 さ. 電 気 易 動 度 を検 し た,. gel filtration. 胎 児 膵 抽 出 液 をSephacryl (2.6×35cm)を 11.0ml/hr,. fractionを. S‑300. 用 い, PBS(pH7,2)に 1 fraction. ister pumpを. 膵癌特異抗 原の抽出法. 0.037. で 室 温 で48時. 血 清 は 特 異 的 抗POA血 児 膵 抽 出 液,膵. POAとCEA,. 図2. EDTA 用 い,検. 3.47mlと. 設 定 し てgel 特 異 的 抗POA血. Column. てflowrate な る よ うper. filtrationし,各 清 とOuchterlony.
(3) 膵 癌 胎 児抗 原(POA)の testに て 反 応 さ せPOA分 proteinsのpartition係. 特 性 とその 免疫 組織 学 的研 究 に5分. 画 を同 定 し, marker. 間Vibrator上. 503. で 振 盪 さ せ, Dryerで. 数 と比 較 してPOAの. 分 子 量 を測 定 し た.. (4)染. 6.. 乾 燥 さ せ た 切 片 上 に特 異 的 抗POA血. POAの. 耐 熱性. 胎 児 膵 抽 出 液 を70℃ 抗POA血 7.螢. で 加 熱 処 理 し,特. 清 とOuchterlony. 異的. 免 疫 組織 学. 的検 討 常 膵4例,慢. を実 験 に供 し た.実. tuer. 験 操 作 は 以下 の. staining. rabbit. 10×8×5mm大. ice・acetoneの 以 後‑70℃. て37℃,. 間 凍 結 させ,. PBS,お. Scientific, Devision. 中(‑20℃)でMicrotomに. of. Inc)で 包 埋 し, Cryostat よ り4μmの. て 封 入 し,. Olympus社)に. よ びAnti. rabbit. serumを. 1.抗POA血. 清 に か え, 用 い,以. 厚 さの. 定. 果. 清 の 特異 性. Ouchterlony. testに. 清 は,. て 正 常 ヒ ト血 清,正. pH7.1〜7.2)で. が 証 明 さ れ た(図4).し. 間 固 定 し, stain 洗 浄 し,さ. ら. 常 膵. 児 肝 抽 出 液 と は 反 応 し な か っ た が,. 胎 児 膵 抽 出 液 と反 応 し,抗POA血 て5分. 下. 鏡 し た.. 結. 抽 出 液,胎. Paraformaldehydeに. て検. 家 兎 を 免 疫 し て 得 ら れ た 抗POA血. 切 片 と し た.. ing buffer(PBS. bufferに. BHF. は 同 様 の 方 法 で 染 色,検. 結 切 片 の作 製. Laboratories,. (3)固. 間,計5回Vibrator. 照 と して 特 異 的 抗POA血. 凍 結 させ た 試 料 を プ ラス チ ッ ク 包 埋 皿 に 入 れ,. Miles. 45分 間incubateし,. bufferで1回5分. な お,対. 以 下 で 保 存 した.. TISSUE‑TEK(Miles. に. か けmois. 鏡 し た.. ら に こ れ をDry. 中 に入 れ て5〜10分. て1回5. で 水 洗 し た.次. 螢 光 顕 微 鏡(model. の 新 鮮 組 織 片 をisopenthane. 45分 間in. bufferに. IgG(Dako社)を. chamberに. 清 をか. お き37℃,. ら にstaining. 上 で 水 洗 した あ とglycerin. 鮮 試料 の凍 結. を 入 れ た 金 属 容 器 に 入 れ,さ. (2)凍. chamberに. 分 間,計5回Vibrator上. 性 膵 炎 膵4例,. 如 くで あ る. (1)新. けmoisture. FITC‑anti. 胎 児 膵2例,正 膵 癌 膵6例. 色 と検 鏡(図3). cubateし,さ. testを 行 っ た.. 光 抗 体 間 接 法 に よ るPOAの. 乾. 燥 させ た.. 清の特異性. か し膵 癌 患 者 血 清 と は. 反 応 し な か っ た. 2.膵 (1). 癌 胎 児 抗 原(POA)の. 特異 性 と特性. Ouchterlony. て,胎. testに. 児膵抽 出 液. お よ び 膵 癌 組 織 よ り抽 出 し た 膵 癌 特 異 抗 原 と 特 異 的 抗POA血 し, POAと. 清 との そ れ ぞれ の沈 降 線 は 融 合 膵 癌 特 異 抗 原 は共 通 抗 原 で あ る こ. と が 示 さ れ た(図4). (2). Ouchterlony. は 抗CEA血. testに. 清,抗AFP血. て,胎. 児膵 抽 出液. 清,抗Ferritin血. 清 とは 反 応 せ ず, POAはCEA,. AFP,. Ferritin. と は 異 な る 胎 児 性 蛋 白 と 考 え ら れ た(図5). (3)免. 疫 電 気 泳 動 で,胎. 抗POA血. 児膵 抽 出 液 と特異 的. 清 の 沈 降 線 は α2〜β 領 域 に位 置 し た. (図6). (4). Sephacryl. S‑300. trationでPOAは29〜31 7),. marker. 螢光抗体 間接法 の染色 法. (5)胎. fractionに. proteinsのpartition係. して そ の 分 子 量 は 約20万. 図3. Columnに. よ るgel. fil. 溶 出 し(図 数 と比 較. と推 定 さ れ た(図8).. 児 膵 抽 出 液 を70℃. で 加 熱 処 理 し,特.
(4) 504. 高. 異 的 抗POA血. 清 とOuchterlony. testで. させ た が沈 降 線 は 出 現 せ ず, POAの. 倉. 範. 3.螢. 反応. 免疫組織学. (1)胎 児 膵 の螢 光 抗体 間接 法 に よ る染 色 を2. Ouchterlony's. anti‑POAと. 図5. 光 抗体 間接 法 に よ るPOAの. 的検討. 非耐 熱性. が 示 さ れ た.. 図4. 尚. double. immunodiffusion. test:. 胎 児 膵 抽 出液 お よ び膵 癌 組織 抽 出 液 の 間 に 互 い に融 合 す る沈 降 線 を認 め る. Ouchterlony's. double. 胎 児 膵 抽 出 液 はA‑POAと. immunodiffusion の み 反 応 し,. 図6. POAの. A‑CEA,. test: A‑AFP,. A‑ferritinと. 免疫電気泳動 パ ター ン. α2‑β 領 域(↑. 印)に 沈 降線 が認 め られ る. は 反 応 しな い.
(5) 膵 癌胎 児抗 原(POA)の. 特 性 と その 免疫 組織 学的 研 究. 505. 例 に行 っ た が,胎 児 膵 細胞 の細 胞 質 が強 く陽性. 中 分化 型 管状 腺 癌3例,低. に染色 された(図9).. で あった.染 色 を行った6例 すべ て が陽 性 に染 色. 分 化 型 管状 腺 癌1例. され た が,陽 性 に染 色 され る細胞 は,分 化 度 の. (2)正 常 膵 の螢 光 抗体 間接 法 に よ る染 色 を4 例 に行 っ た が,正 常 膵細 胞 は線 房細 胞,膵 管 上. 高 い管 腔 形 成 を示 す腫瘍 細 胞 で,し か も その 陽. 皮,ラ 氏島 細胞 ともどもすべ て陰性 であった(図. 性 部 分 は細 胞 質 に限 られ て お り,間 質,管 腔 内. 10).. は染 色 され なか った(図12,. (3)慢 性 膵炎 膵 の 螢 光抗 体 間 接法 に よ る染 色. 13, 14).ま た 同 じ. 膵 癌 組織 で も分 化 度 の低 い管腔 形 成 を示 さな い. を4例 に行 った が,正 常膵 と同 様 に陽 性 所 見 は. 腫 瘍 細 胞 は わず か に染 色 され るの み で あ り(図. 認 め られ な かっ た(図11).. 15),壊 死 の 多 い腫 瘍 細 胞 は陽 性 に染 色 され な か っ た(図16).ま. (4)膵 癌 組織 の螢 光抗 体 間接 法 に よ る染色 を 6例 に行 った(表1).男. 性4例,女. 性2例,年. 令 は48歳 か ら72歳 で膵 頭部 癌5例,膵. た腫 瘍 近 傍 の随 伴 性 膵 炎 組. 織 の染 色 で も陽 性 所 見 は得 られ な か った.す な わ ち,膵 癌 胎 児 抗 原 はす べ て の膵 管 癌 で 一様 に. 体 尾部 癌. 1例 であった.組 織 型 は 高 分化 型 管状 腺 癌2例,. 生 成 さ れ るの で は な く,分 化度 の違 い に よ り生 成 に差 が あ り,む し ろ分 化 度 の低 い膵 癌細 胞 に. 図7. Sephacryl. S‑300. column(2.6×35cm)に. る胎 児 膵homogenateの 11.0ml/hr. よ. 溶 出 パ タ ー ン(流 速. 図8. 1管3.47ml). POAの. 分 子 量(Sephacryl. よ る ゲ ル 濾 過 法). 表1. 膵. 癌. 症. 例. S‑300. columnに.
(6) 506. 高. 倉. 範. 尚.
(7) 膵癌 胎 児抗 原(POA)の 比 べ,分. 特 性 と その 免疫 組織 学的 研 究. 化 度 の 高 い 膵 癌 細 胞 で よ り多 く生 成 さ. れ る こ と が 示 唆 さ れ,ま. た腫 瘍 細胞 にお け る そ. の 局 在 は 細 胞 質 内 と考 え ら れ た.. 抗 原 の 存 在 が 支 持 さ れ, 1979年9月 national logy. Society. and. 1.膵. 察. 蛋 白(oncofetal は,癌. antigen)が. あ る.胎. 児性 蛋 白. 細 胞 に お け る抗 原 性 変 化13)の 一 つ で あ る. antigenic. reversionの. 結 果,癌. 化 に 伴 って 出. 現 して く る とい わ れ て お り,こ. れ ら の う ち α‑. fetoprotein(AFP)やcarcinoembryonic tigen(CEA)な. ど は,現. 在,肝. an 癌,大. の 診 断 に 広 く利 用 さ れ て い る.一. 腸癌 な ど. 方,膵. 癌 と胎. 児 膵 に 共 通 な膵 癌 胎 児 抗 原(Pancreatic fetal antigen,. POA)の. onco. ら4)に よ っ て は じめ て 報 告 され た. Banwoら. は,. 家 兎 に 免 疫 して 抗 血. 清 を 得,こ. れ を正 常 ヒ ト膵,ア. す る と,ゲ. ル拡 散 法 で 胎 児 膵 お よ び 膵 癌 のho. mogenatesと. 反 応 し,さ. ル ブ ミ ンで 吸 収. らに この吸 収 抗 血 清. は 膵 癌 患 者37例 の う ち36例(97%)の. 血 清 と反. 応 し,膵 癌 以 外 の 患 者 血 清38例(慢 急 性 膵 炎5例,胆 硬 変 症5例,大 癌2例)で. 性 膵 炎12例,. 石 に よ る 閉 塞 性 黄 疸6例,肝 腸 癌6例,胃. 癌2例,原. そ の 後1976年,. し,得. 発性 肝. は 全 例 陰 性 で あ った と し注 目 され た. Hegelundら14)は. 胎 生12〜20週. 胎 児 膵 と膵 癌 の 各homogenateを. 家 兎 に免 疫. ら れ た 抗 血 清 を さ ら に 正 常 ヒ ト血 清,赤. 血 球lysate,正. POAの. 常 ヒ ト膵 で 吸 収 し,こ の 吸 収 血. 呼. Schmiegelら7), か し な が ら,. 本 態 につ いて は今 な お不 明 の部 分 も多. く,特 性 に 関 し て も統 一 的 な 見 解 は 得 ら れ て い な い.ま. た腫 瘍 マ ーカーとは 「 癌 細 胞 が 産 生 し,. 非 癌 細 胞 と の 間 に 質 的 ま た は 量 的 差 異 の あ る物 質 」 と して 定 義 さ れ る17)も の で,腫. 瘍マーカー. た る に は 腫 瘍 に お け る局 在 を 免 疫 組 織 学 的 に 証 明 し な け れ ば な ら な い が, POAの. 免 疫組 織学. 的 研 究 は,こ. 酵 素抗体 法. れ ま でHobbsら6)が. に て 検 討 し た の み で ほ と ん ど な さ れ て い な い. さ ら に 最 近,. 存 在 は, 1974年Banwo. ヒ ト胎 児 膵homogenateを. antigen(POA)と. 西 田 ら10)の 報 告 が 相 次 い だ.し. 膵 癌 に関 連 し た 腫 瘍 マ ー カ ー の 一 つ に 胎 児 性. Bio. この 新 し い 腫 瘍 マ ー カ ー. oncofetal. 称 す る こ と に な り, Hobbsら6),. 癌 の腫 瘍 マ ー カ ー につ い て. のInter. for Oncodevelopmental. Medicineで. をPancreatic 考. 507. POA以. 外 の 膵 癌 関 連 抗 原 と し て,. 1977年Chuら18)は,膵 たCEAと. 癌 患 者 腹 水 よ り抽 出 し. は 異 な る 分 子 量185,000のglycopro. tetnを. 報 告 し,ま た1979年SchultzとYunis19). は,膵. 癌 細 胞 お よ び ヒ ト膵 癌 培 養 細 胞 よ り抽 出. し た 抗 原 を 報 告 し, KuntzとArcher20)は,膵 癌 組 織 よ り抽 出 した 抗 原 をpancreatic‑tumor‑ associated. antigen(TAA)と. して 報 告 し た.. さ ら に, 1981年 に はShimanoら21)が,膵. 癌患. 者 腹 水 よ り前 述 のChuら. の抗 原 とは異 な る抗. 原 を 分 離 し,. cancer. pancreatic. antigen(PCCA)と. associated. し 報 告, Klavins22)は,ヒ. ト膵 癌 組 織 よ り抗 原 を抽 出 し,家 られ た 抗 血 清 を 用 い,酵. 兎 に 免 疫 し得. 素抗 体 法 にて種 々の 腫. 瘍 を 免 疫 組 織 学 的 に 検 討 して い る.こ. の よ う に,. 清 を用 い膵 癌 抽 出 液 と交 叉 免 疫 電 気 泳 動 を行 っ. POA以. た が 反 応 は 認 め られ な か っ た と し,こ. る が,そ. の各 々 が同一 の抗 原 成分 をも って い る. の か,ま. たPOAと. 存 在 を否 定 し た.し Arndtら15),. か し1978年,. Mihasら16),小. 図9. 胎 児膵 組 織. 図10. 正常膵組織. 図11. 慢性膵炎. 図12. 膵 癌 症 例1.. の抗 原 の. Gelderら5),. 口 ら9)に よ り こ の. 外 に も 多 くの 膵 癌 関 連 抗 原 の 報 告 は あ. の異 同 が あ るの か な どに つ. い て は 各 研 究 者 の 間 で 十 分 検 討 さ れ て い な い.. 胎 児膵 細 胞 の 細 胞 質 が強 く陽 性 に染 色 され て い る. POA陽 59歳,男. 性 所 見 は 認 め られ な い. 性, POA陽. 64歳,女. 性 所 見 は認 め られ な い.. 性,腺 管 を形 成 した癌 細 胞 の細 胞 質 が陽 性 に染 色 され て い る.間 質,腺 腔 内 は染. 色 され て い な い. 図13. 膵 癌 症 例2.. 56歳,男. 性,腺 管 を形 成 した癌 細 胞 の 細 胞 質 が陽 性 に染 色 され て い る.. 図14. 膵 癌 症 例3.. 48歳,女. 性,腺 管 を形 成 した癌 細 胞 の 細 胞 質 が陽 性 に染 色 され て い る.. 図15.膵 癌 症 例6.. 61歳,男. 性,腫 瘍 細 胞 は わ ず か に陽性 に染 色 され て い る.. 図16. 膵 癌 症 例1の 壊 死部 分,壊 死 腫 瘍 細 胞 は 陽性 に染 色 さ れ な い..
(8) 508 2.抗. 高. 倉. 用 し た が,使. の 胎 児 膵 を抗 原 と し て 使. 用 す る 胎 児 膵 は 各 報 告 者 に よ り異. な り, Gelderら5)は18〜20週, 8〜16週,西. 田 ら10)は 約22週,本. 月 で も0.2〜1.0g(平. 小 さ く23),や は り,膵. す る 際,著. 者 は 他 の 報 告 者 と同 様protease. hibitorを. 用 い た が, Kuntzら20)はprotease. bitor使. inhibitorを. は り膵 組 織 をhomogenizeす. はprotease. inhibitorを. な が らPOA以 CEAな. 中 のAFP,. chro. 除 い て こ れ をcrudeなPOAと. 3.抗POA血. した.. 清 の 作 製 と特 異 性 に つ い て. 著 者 はcrudeなPOA. に 家 兎 の 背 部3カ. 1ml(1〜2mg Freund's. protein). adjuvantと. とも. 所 に 免 疫 して 抗 血 清 を得 た.. 外 は 家 兎 が 用 い ら れ て い る が,そ は 各 報 告 者 に よ り差 が あ る.家. の免 疫 方 法 に 兎 で の抗体 価 の. 使 用 し. 一 定 に さ せ る こ と は 困 難 で ,要. inhi. る際 に. は 当然 の こ と. ど も存 在 し,胎 児 膵homogenates を 測 定 し た と こ ろ, AFP. 表2. affinity. 児 膵homogenate中. 性 を失. 外 の 癌 胎 児 性 蛋 白 とい わ れ る. CEA値. 行 い,胎. 上 昇 に 個 体 差 も あ り,至 適 抗 原 量,免. 使 用 す べ き と 考 え る.. さ ら に この 胎 児 膵homogenateに. 用 い てnegative. Se. 免 疫 動 物 と し て 小 口9)が モ ル モ ッ トを 使 っ た 以. 用 に よ る抗 原 活 性 の 失 活 は認 め られ て. お ら ず,や. AFP,. in. 実験 中 の頻 回 の洗 浄 操. か し他 の 報 告 で はptotease. せ たCNBr‑activated. を等 量 のcomplete. 使 用 す る こ と に よ り抗 原 活 性 が 失. っ て もprotease活. 4Bを. のAFPを. 均0.58g)と. た胎 児 膵 をhomogenize. っ て い る と し て, protease. 原 か ら 除 く方. matographyを. が 適 当 と思 わ れ る.ま. て い な い.し. れ ら を除 く方 法 と し て,抗. 法 と 抗 血 清 か ら除 く方 法 が あ るが,著 者 はAnti. pharose. 月 頃 ま で の 膵 を 用 い るの. 作 で 除 か れ る か,あ. 含 まれ て い. 間 ら8)は12〜. が 形 態 を な して く る4カ. わ れ る と し, proteaseは. 1.1ng/mlが. の 平均 重 量 は. 月 頃 よ り完 成 す る6カ. inhibitorを. た.こ. CEA. AFPをcouplingさ. Mihasら16)は. 24週 の 胎 児 膵 を使 用 して い る.膵 胎 生5〜6カ. 尚. 35,000ng/ml,. 原 の 抽 出 につ いて. 著 者 は 胎 生16〜22週. 範. を 用 い,抗. 疫間隔 を. は 十 分 な抗 原 量. 体 価 の上 昇 を確認 しつ つ免 疫 す るこ. と と思 わ れ る.著 者 は 家 兎 よ り得 られ た抗POA 血 清 の 吸 収 を, glutaraldehydeで 正 常 ヒ トプ ー ル血 清,胎 た.正. 児 肝,正. 常 膵 に よ る吸 収 操 作 は,膵. teaseの. 不 溶 化 した 常膵 に て行 っ 組 織 中 のpro. た め 困 難 な こ と が あ り, Banwoら4)は. acrylamid. gelで 不 溶 化 して お り,ま. ら5), Hobbsら6),西. 膵癌関連抗原 とその性状. たGelder. 田 ら16)は 著 者 と 同 じ く.
(9) 膵 癌胎 児抗 原(POA)の glutaraldchydeで. 不 溶 化 さ せ 成 功 して い る.. この他 本 間 ら24)は, CNBr‑activated 4B. 特 性 とその 免疫 組織 学 的研 究. affinity chromatographyを. Sepharose 行 い,正. に よ る吸 収 を行 っ て い る. 得 られ た 特 異 的 抗POA血 抽 出 液,入 抗 原,正 血 清,膵 double. 児 肝 抽 出 液,正. 常 ヒ ト. 癌 患 者 血 清 とOuchterlony法. 特 異 的 抗POA血. 清 は,胎. な わ ちPOAの. 児 膵 抽 出液 と膵癌 特 児 膵 と膵 癌 に共 通 な抗. testでBanwoら4)は,. 中20例(76.9%),. は45例 中44例(97.8%),本. 特 異 的 沈 降 線 を認 め て い る が,. sayに. よ り抗POA血. を み て い る が,反. immunodiffusion. の 電気 易動 度. の 違 い の 原 因 は 明 ら か で な い. POAの 70℃,. 耐 熱 性 に つ い て も差 が あ り,著 5分 間 の 耐 熱 処 理 でPOAの. 認 め た が,小. 口9)は70℃,. 者 は. 非耐 熱 性 を. 20分 間 の 加 熱 を 行 っ. testを. as. た 小 口9). POAは. 行 い,特. る と述 べ て い る. 著 者 はSephacryl. S‑300 Columnを. 用 いPOA. と推 定 し た が, POAの. 分子. 量 も各 報 告 者 に よ り さ ま ざ ま で あ る.大. き くは. Gelderら5),本. 間 ら24)の80〜90万. 量 の もの と, Hobbsら6),. と す る大 分 子. Arndtら15),西. の 約40,000前. の抗 血 清 で は 特 異 的 沈 降 線 を認 め な か っ た と し,. 著 者 の20万 に近 い 報 告 と し て は,膵. 田 ら10). 後 の 小 分 子 量 の もの に 分 け られ る. 癌関連抗原. そ の 理 由 と して, ① 抗 血 清 の 抗 体 価 が 低 す ぎ る. と し て 報 告 さ れ た もの の な か で, Chuら18)の. こ と, ② 吸 収 を行 う正 常 膵 組 織 中 の 酵 素 活 性 に. 癌 患 者 腹 水 中 のglycoproteinが185,000,. よ って 蛋 白 の 消 化,消. 失 が お こ る こ と, ③ 正 常. 部 分 交 差 反 応 を 示 す もの が. あ る こ と, ④ 正 常 膵 組 織 中 にPOAと. 異. 非耐 熱性 であ. も 正 常 ヒ ト血 清 と正 常 膵 抽 出 物 で 吸 収 し た の ち. 膵 組 織 中 にPOAと. か. 間 ら8)は 著 者 と 同 様 に α2〜β. の 分 子 量 を約20万. 清 と膵 癌 患 者 血 清 の 反 応. 応 を認 め て お らず,ま. しGelderら5),本. 領 域 に泳 動 さ れ た と して お り,こ. 田 ら10), Mihasら16)は,. Hobbsら6). 間 ら24)は67例 中45. double. α2, Mihasら16). 沈 降 線 を 認 め た と し て い る が, Gelderら5),西. 著 者 は こ れ を認 め な か っ た. Schmiegelら7)も Enzyme‑linked. 告者. は α1〜α2,西 田 ら10)は β 領 域 と して い る.し. 癌 患 者 血 清 とOuchterlony. immunodiffusion. 37例 中36例(97.3%),. Gelderら5)は26例. 者 の 成績 で は免 疫. た 胎 児 膵 抽 出 液 よ り作 製 し た 抗 血 清 を 用 い て 膵. 存 在 が 示 され た.抗POA. 血 清 と膵 癌 患 者 血 清 のdouble. 例(67.2%)に. にて. testを 行 った と こ ろ,. 異 抗 原 と の み 反 応 し,胎 原,す. 児膵. 江 の 方 法12)に よ り抽 出 した 膵 癌 特 異. immunodiffusion. 電 気 易 動 度 は,著. 電 気 泳 動 で α2〜β領 域 に泳 動 さ れ た が,報 に よ り差 が あ り, Banwoら4)は. 清 を 用 い,胎. 常 膵 抽 出 液,胎. と し て い る. POAの. 常膵. 509. 同一 成 分. 膵. Kuntz. ら20)のpancreatic‑tumor‑associated‑antigen の380,000が. あ る.報. 告者 に よ る分子 量 の違 い. に つ い て 明 確 な 説 明 は な い が, Hobbsら6)は,. が存 在 す る こ とな ど を 挙 げ, ① ② の 可 能 性 が 強. 彼 ら の 抗POA血. い と述 べ て い る.著. 抗POA血. 清 と は 同 一 の 抗 原 成 分 で あ っ た と し,. Gelderら. の も の はpolymerか. Ouchterlony法. 者 は 上 記 の 理 由 に 加 え,. に て 検 出 され る程 のPOAが. 膵. 清 とGelderら,. Arndtら. 他 の複 合 物 を も. 癌 患 者 血 清 中 に存 在 しな か っ た 可 能 性 も 考 慮 し. って い るの で あ ろ う と推 測 して い る.ま. た い.. ら15)は,彼. 4.. POAの. 性 状 につ い て. 特 異 的 抗POA血 異 抗 原 と のdouble 互 い に 血seす POAは. immunodiffusion. 癌特. testで. る単 一 の 沈 降 線 を得 た こ と よ り,. 両 者 に共 通 な抗 原 で あ る こ と が 判 明 し,. さ ら に 既 知 のCEA, 反 応 せ ず, POAは. AFP,. Ferritinな. そ れ ら とは 明 らか に 異 な る 新. しい 癌 胎 児 抗 原 で あ る. Hobbsら6)は め ら れ る既 知 の 物 質48種 異 を検 討 し, POAは. ど とは. 血 中 に認. に つ い てPOAと. の差. す べ て の も の と異 な っ た. が,膵. たArndt. らが 胎 児 膵 お よ び 膵 癌 患 者 膵 液 か ら. 分 離 し たPOAの. 清 と胎 児 膵 抽 出 液,膵. の. 分 子 量 は40,000前. 後 で あ った. 癌 患 者 血 中 に は 分 子 量40,000の. に120,000,. 300,000の. 互 い にidenticalで. もの以 外. も の が 存 在 し,こ. れ らは. あ っ た と述 べ て お り,分. 量 の 差 異 に つ い て はHobbsら. 子. の推 察 が正 しい. も の と 考 え ら れ る. さ ら にPOAの Arndtら15)の. 特 性 に つ い て, Gelderら5), 報 告 が あ るが, Gelderら. は 脂 肪 を含 まな い糖 蛋 白 で,抗 原 活 性 はD R Naseで. は 影 響 を 受 け ず, trypsin,. はPOA Nase, papain,.
(10) 510. 高. 倉. 範. 尚. に して も, POA,他. の 腫瘍 関連 抗 原 の免 疫 組 織. pronase, pepsinで 完 全 に消失 す る と述 べ て い るの に対 し, Arndtら はPOAはCon A‑Se. 学 的 検 討 は,い. pharoseに. に詳 細 な 研 究 が 必 要 で あ る.. 結 合 せず糖 部 分 が認 め られ ない と報. ま だ 十 分 な さ れ て お ら ず,さ. 告 して い る.こ の よ うに電 気 易動 度,耐 熱性 の 有無,分 子量 な どPOAの. 論. 特 性 につ い て各 報 告. 者 の間 で差 もあ り,今 後 さ らに検 討 され なけ れ. 膵 癌 の 腫 瘍 マ ー カ ー と し て のPOAに. ついて. 検 討 し た.. ば な らない. 5. POAの. 結. ら. 胎 生16〜22週. 免 疫組織 学 的検 討. 螢 光 抗 体 間接 法 にて膵 癌 組織,胎. 児膵 組織,. の 中 絶 ヒ ト胎 児 膵 を 抗 原(POA). と し て,抗POA血. 慢 性 膵 炎 膵 組織,正 常膵 組 織 を染色 した と ころ, 胎 児膵 組織,膵 癌 組織 が陽 性 に染色 され た.し. 各 膵 組 織 内 に お け るPOAの. か し,同 じ膵 癌組 織 で も陽 性 に染色 され るの は. し,以 下 の 結 果 を得 た.. 管腔 を形 成 した膵 癌 細胞 の細 胞 質 で あ り,管 腔 を形成 しな い膵癌 細胞 は わ ず か に染 色 され るの. POAの. 清 を 作 製 し,抗 血 清 の 特 異. 性,. 1). double. し,胎. の 分化 度 に よ り差 が あ った.ま た腫 瘍 近傍 の 間. さ れ た. 2). POAは. 他 の胎 児 性 蛋 白 で あ るCEA,. やFerritinと. Hobbsら6)が. で 異 な る も の で あ っ た.. 酵 素抗 体 法 にて検 討 している にす. 3). はdouble. 管 腔 内,癌 細胞 近 傍 の 間 質 が陽 性 に染 色 され, POAが. Columnに. よ るgel. み え る と述 べ て い る が,膵 癌 の 組織 型 に よ る染. 万 と 推 定 され,ま. 色性 の差 異 に関 して は言 及 してい ない. Gelder. 性 を 失 活 し た.. ら5)はRocket. immunoelectrophoresisに. 膵 癌 患 者 血 清 中 のPOAの. よる. 定 量 で, 25POA単. immunodiffusion. POAはimmunoelectrophoresisで. 〜β 領 域 に 位 置 し. 癌 細 胞 か ら分 泌 さ れて い るかの よ う に. testで 抗POA. 癌 特 異 抗 原 との み反応. 児 膵 と膵 癌 に特 異 な 共 通 抗 原 の 存 在 が 示. の 免疫 組 織 学 的検 索 は ほ とん ど なされてお らず, ぎない.彼 らは胎 児 膵 組織,膵 癌 細 胞 の細 胞 質,. 局 在 につ い て検討. immunodiffusion. 血 清 は 胎 児 膵 抽 出 液,膵. み で,壊 死 の 多 い膵 癌細 胞 は染 色 されず,細 胞. 質,管 腔 内 は 染色 されなかった.こ れまでPOA. 性 状 お よ び螢 光 抗 体 間接 法 に よ る. 4)螢. ,さ. た70℃,. test. α2. ら にSephacryl. filtrationで. AFP. S‑300. 分 子 量 は 約20. 5分 間 の 加 熱 で 抗 原. 光抗 体 間接 法 に よっ てPOAは. 胎 児膵. と膵 癌 膵 に存在 し,そ の 局在 部 位 は細 胞 質 で あ. 位 以上 の高 値例 に は中 〜高 分化 型 腺 癌 が 多 く,. っ た.ま た 同 じ膵 癌 で も分化 度 の高 い管 腔 を形. 10POA単. 位 以 下 の低 値 例 には低 分 化型 腺 癌 が. 成 す る腫 瘍 細胞 に比 べ,低 分化 な腫 瘍 細 胞 は わ. 多 かっ た と述 べ て お り,例 数 は少 な いが著 者 の. ず か に染 色 され るの みで,壊 死 の 多 い腫 瘍細 胞. 得 た結 果 と あ わせ 考 え る と,高 分 化 の もの ほ ど. は染 色 さ れず,そ の産 生 には 腫瘍 細 胞 の分 化度. POA産. が 関与 して い る こ とが示 唆 さ れた.. 生 能 が高 く,低 分 化 の もの はPOA産. 生 能 が低 い こ とが うか が われ た.そ の他 の腫 瘍 関連 抗原 の免 疫組織 学的検 索 で は, Schultzら19). 稿 を終 えるにあた り,御 指導 および御校閲 を賜 っ. が膵癌 培 養 細胞 に対 す る抗 血 清 を用 い螢 光抗 体. た折田薫三教授 に謹 んで感謝の意 を表 します.ま た. 間 接法 で検 討 して い る が,腫 瘍 細 胞 の核 膜 が 陽. 終 始,御 助言 と御指 導 をいただいた三村. 性 に染 色 さ れて お り,著 者 の結 果 とは異 な り同 一抗 原 では ない と考 え られ る.ま た, Shimano. 岡 山大 学医学部 第一 内科.辻. ら21)の膵癌 患者 腹 水 より精 製 した膵 癌 関 連抗 原. ニ ック,黒 瀬康平博 士に深 謝 いた します.. (PCAA)は,こ. の抗 血 清 を用 い た酵 素 抗体 法 に. よ る検 索 で は,膵 癌 細 胞 の 中 で も胞 体 の 明 るい 分化 した癌 細胞 に限局 して 検 出 され て お り,著 者 の結 果 と比較 的合 致 す る が,膵 癌 以 外 の 胃 癌, 大腸 癌 な どで も存 在 を認 め られ て い る.い ず れ. 医学部 内科学3.泉. 久助教授,. 孝夫教授,東 海大学. 正 樹講師,黒 瀬 ア イビー クリ. なお本論 文の要旨 は第68回 日本消化器病 学会総会 において発 表 した..
(11) 膵 癌胎 児抗 原(POA)の. 特 性 と その免 疫 組織 学的 研 究. 文. 511. 献. 1. Levin B, Remine WH, Hermann RE, Scheive PS and Cohn I Jr: Panel: Cancer of the pancreas. Am J Surg (1978) 135, 185-191. 2. Van Heerden JA, Remine WH, Weiland LH and Mcllrath DC: Total pancreatectomy for ductal adenocarcinoma of the pancreas. The Mayo clinic experience. Am J Surg (1981) 142, 308-311. 3. 鈴 木. 4.. 散:膵 癌 の 診 断 お よ び切 除 成 績 向 上 に む け て の私 ど もの 試 み.日 消 外 会 誌(1983). Banwo O,. Versey. J and Hobbs JR:. New oncofetal. antigen. for human. 16, 1001.. pancreas.. Lancet. (1974). 13, 643-645. 5.. Gelder FB, Reese CJ, Moossa. AR, Hall T and Hunter. and clinical evaluation of a pancreatic 6.. Hobbs JR, Knapp localization. 7.. ML, Braufoot. in humans.. oncofetal. AC:. Oncodev. antigen.. Pancreatic. Biol Med. R: Purification, Cancer. Oncofetal. (1980) 1,. Diagnostic. Oncofetal. Application. Antigen. in Pancreatic. of a Pancreatic. (POA);. Its frequency. and. 37-48.. Juices.. Cancer. characterization,. Res (1978) 38, 313-324.. Antigen. Schmiegel WH, Becker WN, Arndt R, Hamann A, Sochendra HG: Pancreatic. partial. N, Jessen K, Classen-M. Partial. Associated. and Thiele. Chemical Characterization. Antigen.. Scand. and. J Gastroenterol. (1981) 16, 1033-1040. 8.. 本 間 達 二,小. 9.. 小 口 寿 夫:ヒ. 10.. 西 田 康 一,松. 口 寿 夫:膵. 癌 の 血 清 学 的 診 断.. Medicina(1977). 村 直 幸,細. る 膵 癌 の 診 断.医. 11. Avrameas. 川 計 明,増. 田 正 典,堀. 学 の あ ゆ み(1979). S and Ternynck. for the preparation. 110,. T:. The crosslinking. of immunoadsorbents.. 入 江 礼 子:腫. 瘍 特 異 抗 原 の 精 製 法.免. 星 野. 瘍 免 疫 の 最 近 の 動 向 に つ い て.医. 14.. Hegelund. 15.. the. (1976). 24,. R, Nishida. Int. Mihas 60, 17.. 石井. Bock. 疫 実 験 操 作 法,日. fetal. 43‑53.. 藤 元 治:膵. of proteins. 液 中 の 膵 癌 胎 児抗 原 によ. with glutaraldehyde. 32,. and. and its use. 53-66.. 394‑399.. 15‑24.. B and. pancreas. (1969) 6,. 本 免 疫 学 会 編(1978). 療(1978). E, NƒÓrgaard-Pedersen of. 26,. RƒÓder. pancreas. OC:. Immunochemical. carcinoma.. Protides. studies Biol. Fluids. 525-528.. pancreas Soc. NH,. composition. Arndt fetal. 16.. H, Axelen antigenic. 川 敏 一,近. Immunochemistry. 13.. 孝:腫. 田 忠 弘,吉. 212‑214.. 州 医 誌(1978). 272‑273.. 12.. of. 14,. ト胎 児 膵 に よ る 膵 癌 の 血 清 学 的 診 断 の 研 究.信. antigen. Oncodev AA:. K,. Biol. Becker. WM. and. preliminary. Med. Immunologic. and. abstr. Thiele. Partial. experiences (1978). studies. HG:. on. molecular. concerning. its. characterization diagnostic. of onco. value.. 6th. Meeting. 229.. a Pancreatic. Oncofetal. Protein.. J Natl. Cancer. Inst. (1978). 1439-1444. 勝:図. 説Tumor. marker‑最. 近 の 進 歩.日. 18. Chu TM, Holyoke ED and Douglass of pancreatic 19. Schultz. carcinoma.. 38,. 2‑4.. of a glycoprotein. antigen. from ascites fluid. (1977) 37, 1525-1529.. Tumor-associated. Oncology. SJ:. Extraction. antigen. in human. pancreatic. cancer.. J Natl. HO and Chu TM:. cancer-associated. and identification. of a human pacreatic-tumor-associated. (1979) 36, 134-138.. 21. Shimano T, Loor RM, Papsidero R, Douglass. 本 臨 床(1980). Isolation. (1979) 62, 777-785.. 20. Kuntz DJ and Archer antigen.. Cancer Res. DR and Yunis AA:. Cancer Inst. HO:. antigen.. LD, Kuriyama Isolation,. Cancer. M, Vincent. characterization. (1980) 47, 1602-1613.. RG, Nemoto T, Holyoke ED, Berjian and clinical evaluation. of a pancreas.
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(13) 膵 癌 胎 児抗 原(POA)の. Characterization. 特 性 と その 免疫 組 織 学 的研 究. 513. and immunohistlogical studies of. a Pancreatic Oncofetal Antigen (POA) Norihisa TAKAKURA The First Department. of Surgery, Okayama University. Medical School,. Okayama (Director: Prof. K. Orita) Pancreatic the of. detection POA. oncofetal of. have. cancer. been. characterizations POA grams,. and. did. react. not. also. fetal. anti-POA. cancerous. In and. the. ferentiation.. weight. tumor. conclusion, production. it. the. ferritin. was. Well. by. confirmed. be. about in. on. was. tumor. cells. specific. same. antigen,. to. POA.. immunoelectrophoreto by. gel. filtration. test.. From present. stained. for. immunohistological. Ouchtalony test.. marker. characterization. and. 200,000. POA. tumor. antibody. the. Ouchtalony that. differentiated. useful. biochemical. of ƒ¿2•`ƒÀ. antibodies. pancreas. the. pancreas. region. to. a. biochemical. anti-fetal. in. as. on. study,. estimated. or. cancerous. serum,. with. accepted reports. present. located. was. AFP,. pancreas.. the. performed was. anti-CEA,. generally. However,. In. were. of. is. pancreas.. pancreas. molecular. with. differentiated. the. POA. fetal. in extracts. with and. the the. detected. studies. of. (POA). contradictory. of. of. antigen. POA PO. A. was. immunohistological in. much. the. cytoplasm. more. than. of poorly. cells. cancerous of. POA. pancreas in. cancerous. shares pancreas. the. is. related. to. POA, the. degree. with. fetal of. tumor. pancreas, cell. dif.
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