囁騒
24 48 72 96 120 hr
Fig．5マウス唾液腺由来前駆細胞
【a】マウス唾液腺由来前駆細胞（mSGP）は平板培養上で上皮様の細胞形
態を示す。scale bar：100 ll m．
【bl mSGPの免疫蛍光染色像。未分化なmSGPはAFP（red）陽惚細胞内
laminin（green）陽性’CD49f（green）陽性である。 scale・bar：100μm。［cl RT－PCR．mSGP細胞では未分化マーカーのAFP陽性、分化マーカーの アルブミン、CK19は陰性である。1＝mSGP細胞2：liver
ld】マウス唾液腺前駆細胞の増殖曲線。596FBS下でのmSGP細胞の対数 増殖期は72－96時間である。O％FBS下では細胞増殖の速度が減少した。
O％一2．596FBS下ではmSGP細胞は増殖が抑制され、細胞形態変化をき
たした。46
4
2 ．02
4
o
★ 嚢
Gly
一 「 一 一
4321
一一一一．．s一’．．一一一 o
Met
Asn
Ala
1墨e
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Asp
1
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1
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Val
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4
Leu
噛一幽壕鼈鼈黶@薗需藁一一一一一
o
His
1
Trp
Pro
一」酢一一一一働一一一鱒一一＿一
t＝f’
国OmM□2．5mM圃5mM■10mM Ua 20mM
Fig．6アミノ酸添加によるmSGP細胞の増殖の変化
mSGP細胞を単一アミノ酸添加培地（O mM，2．5mM，5mM，10mM，20mM）およびコント回一ル培地 を用いて48時間培養した。細胞形態の変化と細胞増殖の変化と細胞数の変化を24時間ごとに評価した。
20mM以上のアミノ酸濃度では、すべてのアミノ酸で細胞増殖が抑制された。 tOmM以下のアミノ酸濃
度では細胞の増殖が可能であった。Gly， Thr， Asn， Phe， Tyr， Lys， Pro添加では細胞増殖が著しく抑制された。Ala， Ser， Met，， Gln， Glu，
Val， lle添加では細胞増殖に大きな影響を認めなかった。 Cys， Asp，Trp， Leu， Arg， His添加では細胞増 殖が促進された。“p＜0．OOI，嚢tp＜0．05
a ．
・Co巾。量
＋Ala
＋Gly
＋Ser
b
コ£
6．0
4．0
2．0
o
一
禽朋ドー”一’”
一 一 一 一一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 願 〇 一 一
一 一 一 一 一 一 ■
潤@一 一 一 一 一 ■
一 一
黶@鰯
一 一
黶@一
一 一 ■ 願 一 一 一
一一一一一■一一一旧一髄一一一一一一一
control ＋Gly ＋Ala ＋Ser
c d
ω＝oo①占旧ωoα⊃セロ
（o／o）
g 60 藩 e 40 s
e 20 o o
control ＋Gly ＋Ala ＋Ser
Figure 7マウス唾液腺由来前駆細胞の増殖に対する
短期間グリシン添加の影響
Fig．7マウス唾液腺由来前駆細胞の増殖に対する
短期間グリシン添加の影響
3種類の単一アミノ酸添加培地を用いてマウス唾液腺由来前駆細胞（mSGP）の増殖変化を調べた。
3種類の単一アミノ酸添加培地（寺Gly，＋Ala，＋Ser）を作成した。 mSGP細胞を単一アミノ酸添加培地
（＋Gly，＋Ala，＋Ser）を用いて48時間培養した。24時間ごとに細胞形態の変化、細胞数の変化を評価
した。
【a】培養24時間後の細胞形態。すべてのアミノ酸調整培地で細胞形態は変化しなかった。
scale bar t OO”m．
Ibl細胞増殖の変化。縦軸は、細胞数（24hr，48hr）1培養開始時の細胞数（0時間）を表す。
グリシン添加培地を用いて培養した場合、細胞数の増加が抑制された（24hr：コント ロール2．23倍，＋G量yIA9倍、48hr：コントP一ル5．67倍、＋Gly 2．27倍、’p＜0．001、
勲p＜0．05）。24時間（black bar）、48時間（white bar）。
［c，d］BrdUを用いた細胞増殖の評価。単一アミノ酸添加培地を用いて24時間培養した。
BrdUを10μM添加し、37。C、5％CO2下で2時間インキュベートした。その後、蛍光免
疫染色を用いてBrdU陽性細胞（red）の数を比較した。【c1免疫蛍光染色像。 scale bar 100μm。
［dl BrdU陽性細胞数の変化。縦軸はBrdU陽性細胞数を表す。 BrdU陽性細胞の割合は
Glycine添加培地を用いて培養した場合、コントロールに比較して減少した（control41 ． 1 9010， 十Gly 1 t ．9010， 十Ala 45．93010， 十Se28．35010． ”p〈O．05） ．
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一
b 4．o
コ