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第
3
節 じ よ う の う 膜 に お け る 酵 素 活 性 の 変 化越 年 着 果 に 伴 う じ よ う の う 膜 の 変 化 と 関 連 し て 細 胞 壁 多 糖 類 の 分 解 酵 素 に 着 目 し 、 じ よ う の う 膜 中 の セ ル ロ ー ス 分 解 酵 素 で あ る セ ル ラ ー ゼ (CE) と植物組織 中 の ベ ク チ ン 質 を 加 水 分 解 す る 酵 素 で あ る ポ リ ガ ラ ク チ ュ ロ ナ ー ゼ (PG)及び 脱 メ チ ル 化 作 用 を 持 つ ベ ク チ ン メ チ ル エ ス テ ラ ー ゼ (PE) に つ い て 、 そ れ ぞ れ、越年着果期間中の活性の変化を調査した。
材 料 及 び 方 法
前 節 の 実 験 で 供 試 し た 果 実 の う ち 、 本 実 験 以 降 は
S
階 級 果 実( 5 5 . . . . . . . . 6 0 m m )
をS
区、2 L
階 級 果 実 (7 3 " ‑ ' 7 9 m m )
をL区 の 代 表 と し た 果 実 の じ よ う の う 膜 か ら 、 以 下 の 方 法 に 従 い セ ル ラ ー ゼ( C e l l u 1 a s e . C E)
.ポリガラクチュロナーゼ( P o 1 y ‑ g a 1 a c t u r o n a s e . P G)
及 び ベ ク チ ン メ チ ル エ ス テ ラ ー ゼ( P e c t i n m e t h y 1 e s t e r a s e .
P E)
を抽出しそれらの活性を制定した。CE
とPG
は、生体重で3 0 g
のじよ う の う 膜 ( じ よ う の う 膜 の 両 側 面 ) を 採 取 供 試 し てY a m a k i( 1 9 7 7 )
の方法に従い、生試料を微細にホモゲナイズし、
0 . 0 5 M
のリン酸緩衝液( p H7 . 3 )
中で酵素を抽出し、蒸留水中で
1 2
時間透析した。以上の操作をすべて氷温下で行った。次いで、カ ル ポ キ シ メ チ ル セ ル ロ ー ズ
N a
塩 並 び に ベ ク チ ン 酸N a
塩 の 基 質 に3 0
"Cで3
時 間作用させた液の遺元力を、S o m o g y i ‑ N e 1 s o n
法 で 測 定 し て プ ラ ン ク と の 差 を 酵 素 の 活 性 と し た 。 そ れ ぞ れ 放 出 さ れ た ブ ド ウ 糖 及 び ガ ラ ク チ ュ ロ ン 酸 の1μmo
l/h
を1u n i t
とした。PE
はA w a d
とYoung( 1 9 7 9 )
の方法に従い、生果実より1 0 g
のじようのう膜を採 り 徴 細 に ホ モ ゲ ナ イ ズ し た 生 試 料 に0 . 4 M ‑ N a C 1
を1 0 m 1
加 え て 酵 素 を 抽 出 し た 。 抽 出の全ての操作は氷温下で行った。次に、酵素抽出液をベクチン基質と混合し、N a O H
でp H7 . 5 8
に調整した後、2 4
"cで1 0
分 間 保 持 し 、 基 質 上 に 生 じ た ーC O O H
基をO . 1 N ‑ N a O H
で 中 和 滴 定( p H7 . 5 8 )
する方法で測定した。1
分間当たり1m e q
のエ ス テ ル を 加 水 分 解 し た 場 合 を1u n i t
とした。6 5
実験結果
じようのう臨の細胞壁多精類の分解酵素活性のうち、セルラーゼ (CE)活性 の 経 時 的 な 変 化 は 第
16図に示した通りである。.宮川早生'では 1 1
月以降上昇 してS区では 1
月を最高に2
月には急激に低下し、L区では 2月まで急激に上昇
した。 林温州'のS
区及びL区は 2月まで上昇したがその程度は
宮川早生.より緩やかでかつ小さかった。
ポ リ ガ ラ ク チ ュ ロ ナ ー ゼ (PG)及 びベクチンメチル エステ ラ ーゼ (PE)活 性 の 経 時 的 な 変 化 は 第 17図に示した通りである。 P G活 性 は . 宮 川 早 生 ' で 高 く.林温州'で低かった。.宮川早生'のS区では 1月に、 L区では 2月にそれ ぞれ最高を示し、両区の間に時期的なずれがあった。 ・林温州'では
S
、L両区
とも援やかな上昇傾向を示した。PE
活性は.宮川早生'及び 林温州'ともに成熟の進行にともなって、わずかながら低下する傾向が見られ、 .宮川早生.の
S
区と 宮川早生'のL
区、 林温州'のS
区及びL
区との聞に僅かな差は認め られたが調査期間中の変化は小さかった。第
4
節 じようのう膜構成成分含有量の変化前 節 に お い て 述 べ た 成 熟 に 伴 う じ よ う の う 膜 中 の 細 胞 壁 多 楯 類 分 解 酵 素 活 性 の 変化と関連し、吉岡(1
9 9 2 )
は果実の軟化や細胞壁の脆弱化は構成する多糖類の可 溶 化 に よ っ て 生 ず る と し て い る 。 そ こ で 、 じ よ う の う 膜 の 細 胞 壁 構 成 成 分 の 含 有 量の変化について調査し、膜の脆弱化との関係について検討した。材 料 及 び 方 法
前 節 と 同 じ 試 料 を ア ル コ ー ル 不 溶 性 固 形 物 (AIS)試料とし、細胞壁の構成成分 であるセルロース.へミセルロース及びリグニン含量の測定を、
V a n S o e s t
のdetergent fiber
法(19 6 3a ， 1 9 6 3 b ， 1 9 6 7 )
に従い、ND F ( N e u t r a l Detergent
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セルラ~，ゼ (units / 'gFWX 10‑')
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