其12 「フォルマリン」固定液ノ綜毬禮：

958

腎臓縣毬膿ノ「プラニメト 」 Pt、二面スル研究

其12 「フォルマリン」固定液ノ綜毬禮：

    大サニ及ボス影響二就テ

金澤讐科大學病理學i教室（杉山敏授指導）

助 手 藤  田 秀  一

  （昭和11年11月21日受附 特別掲載）

目 零  言

第1章 溢蚊材料；及實験方法 第2章 實験成績

 第1節 凍結切片二二ケル場合  第2節DopPelmesser ヲ用ヒテ

緒

次

言

    作りタル場合 第3章 総括及考按 結  論

文  献

 種：々ナル固定液：ト染色方法ト雪嵐リ組織ノ質的方面ハ釜底盤明二解決サル・＝從ヒ，新鮮 ニシテ固定セザル歌態ヲ知悉セントシ滲透墜等ノ關係ヨリ組織ノ萎縮，膨化ヲ防グ薪固定液 が諸學者ニヨリ考案セラレタリ是等ハ特殊ノ染色ヲ施ス前鹿置トシテ必須ナルベキモ，Blum

：E（2）ガ1893年二Formaldebydガ組織ノ硬化及ビ殺菌二便値：アリト提唱セシ以來，多数ノ實 験結果ヨリ今日二二テハ最モ汎ク利用セラル・二三レリ．

 而シテ余ハ嚢昌種々ナル標本＝於テ腎臓懸毬艦ノ萎縮スル程度ヲ槍索セシガ，其際用ヒシ 標本ハ既二「フォルマリン液二固定セラレタルモノニシテ，固定溶液ノ爲メニ其大サガ如何

二攣化シ行クカニ就テハ論ゼザリキ．

 既二Patten， B． and I）hi】pott， R．（9）， Stoeltzner， H．（11）， Werner， Cl． F．（12），Hertwig， G．（7）等ハ

胎見及ビ組織ノ「フォルマリン液田下リ受クル影響ヲ記載セシガ，今回余ハ新鮮腎臓綜毬罷 二就キテ「フォルマリン液ノ影響ヲ時間的二観察シ共6（14）二記載セシ凍結標本製作以前＝於 ケル欣態ヲ追究シ以テ薪鮮組織が種々ナル階梯ヲ維テ標本トナル迄ノ大サノ攣化ヲ系統的＝

追究セシヲ完成セント欲ス．

       第1章 實験材料二心二方法

實験材料ニハ新鮮ナル標本ヲ得ソが爲メ，成熟家兎ヲ使用セリ．

實験方法 室氣栓塞ニテ殺シタル家兎ノ腎臓ヲ別出シ其一部ヨリ10μ，20μ凍結標本及e  DopPelmesser ニテ厚サ約230μノ標本ヲ作りテ直二H−E染色ヲ行ヒ綜毬燈ノ大サヲ計測シ，ソレヨリ1％「フオルvリ ン液二浸漬シ時間的経過ヲ追ヒテ襯測セリ．観測方法トシテハ載物硝子上二標本ヲ置キ之二撒滴ノ水叉ハ        ［ 266 ］

腎臓孫毬膣ノ「プラニメトリーJ二關スル硫究 959

0・9％食言水ヲ加へ膣スルコトナク三物硝子ヲ重ネ周園ヲ「ワゼリソ」二封鎖シテ最初ノ大サヲ求メタル後 ハ100／o「フォルマリン液ヲ容レタπrシャーレ」中二標本ヲ三子二附ケタル儘投ジ，二二ニテ「ワゼリン』ヲ剥

離シ，標本が充分「フオルアリソ」二浸漬二得ル如クシ，一定時間ノ後再ピ標本ヲ取出シ封鎖シテ計測セリ，

且ツ同一ノ綜毬鰹ヲ蓮績数回観測スル爲メニ豫メ100倍二廓大セル見：取圖ヲ作り之二縁り400倍二廓大シ Abbe氏襲置ニテ投影セシ面積ヲ測定セリ．

      第2章 實験 成 績

       第1節凍結切片二於ケル場合

異レル家兎ノ新鮮組織ヨリ作りシ20μ，10μ凍結標本ノ「實商計績剛性1，2表ノ如シ．何 レノ表二於テモ面積値ハ廓大セル儘ニシテ箪位ハ1／10cm2ナリ．

      第1表新鮮20μ凍結切片二於ケル10％フォルマリン液ノ影響

   綜二二

@    面積

次{

封照 固定1 條ﾔ後

〃5〃 〃7〃  〃

P0〃

 〃

Q4〃

 〃

R0〃

 〃

Q日後

〃3〃 〃4〃

5 100

P02 100

X9 100

X8

100 103 100 100 103 100 100

25 101 97 86 93 91 92 81

30 107

P16『

107 98 98 103 106 100 94

P06 ^{104 102}

4 114 94 107 94 106 102 96 91

26 122 110 117 120 111 118 112 112 114 114 20 123 108 108 102 100 113 112 114 107 1G5

9 130 130 110 112 121 115 113 110 110 112

12 130 125 123 113 124 123 127 123 120 122

8 135 134 137 133 132 134 133 122 135 129

7 141 128 124 132 127 128 127 124 125 116

28 141 141 134 132 123 135 135 135 135 130 27 153 124 134 142 144 126 122 125 122 125 6 155 147 150 151 151 145 142 140 136 146 2 156 122 118 113 124 124 127 122 125 117

13 161 153 150 153 159 150 150 153 156 155

1 166 115 127 131 116 125 126 116 126 138

21 190 188 172 172 182 180 186 172 172 179 16 197 155 156 150 155 150 153 166 161 161 14 203 193 183 189 180 178 182 184 174 171

17 210 175 161 162 160 171 156 139 169 165

緬副29381266812594｛26・3126・6126・3【2598i255・1257912559

百分…率 ・・α・・Igα8・18＆3・ 8＆9418＆7・

88．74 88．42 86．83 8Z78！8Z・・

 邸チ第1表二於テ新鮮ナル凍結標本ノ染色，面積測定二要セシ時闇ハ略々2時聞トナリ，

其後10％「フオルマリン液二浸シ1，5，7，10，24，30時間，2，3，4日二亘リテ測定シタル 20個ノ懸毬盤総面積ヨリ最初ノ値ヲ100トスル時，固定1時聞ニテ著シク萎縮シ約90％トナ

リ，ソレ以後ハ極メテ緩徐二萎縮シ略々88％ノ値ヲ以テ準衡歌態ヲ示シ庇値ハ5時間二於テ 既二現ハレタリ．

 第2表＝テハ同様ニシタル10μ切片二染色後0・9％食盛水中ニテ孫毬髄22個ノ大サヲ測定 シ其間1時間ヲ要シタルガ，「フオルマリン液固定1時間； 一テハ95．87％ヲ示シ，8時間以後 ニテハ略々88％ヲ表ハシソレ以後47時聞迄ハ殆ド干衡歌態ヲ保テリ．更二水洗シ種々ナル時     b

       ［ 267 ］

960 _藤 田

第8表…新鮮10〆・凍結切片二二ケル10％フォルマリン液，水洗酒精包埋ノ影響

   練毬｛鐙

@    面積

?{^番號

劉照 固定液

P時間 3〃 ^8〃 14〃 23〃 47〃

水洗 T・時間

70％酒80％酒

ｸ  精17時間2時間 090％酒

ｸ1時間無水酒 ｸ30分

ノく几

Tム附ｽ

29 138

1341132

32 149 136 122 122 125 128 127 95 120 111 110 123 152 9 153 147 135 135 134 133 140 135 119 122 119 101 126 18 186

1991191

14 193

1631177

13 200 181 182 172 163 175 ユ74 178 159 159 153 ユ56 167

ユ0 207 209 207 208 203 195 196 194 170 168 152 153 178

4 210 200 201 202 202 200 210 192 163 180 178 169 190

5 210 179 169 166 159 156 167 178 184 155 158 151 178

6 213 210 207 180 ユ82 195 180 185 179 170 164 155 165

，34 219 220 207 187 178 174 173 155 166 160 150 115 127

8 233 241 215 213 207 210 204 202 184 180 189 174 185

30 238 220 216 212 222 231 221 190 206 184 186 1ア5 183 2 239 230 214 205 200 212 200 201 189 180 167 171 176 20 242 247 221 214 219 222 217 223 20／ ユ99 182 186 214

31 248 254 251 236 234 233 232 220 196 207 173 195 212

36 256 231 212 214 203 215 207 216 187 201 180 183 200

1 281 237 247 244 246 249 226 225 257 256 210 185 202

35 283 294 246 247 248 257 254 234 222 217 156 165 173 27 294 788 275 267 274 280 269 250 249 250 229 230 240 33 370 354 359 336 337 336 334 311 295 295 306 306 310 28 380 350 310 311 309 320 298 291 313 300 305 294 313 面積綱5・421493・14697［457・i45・4｝45・7145・21435914・84i4・・2 ₃₈₇₈ P379414・27 百分率i・・α・・ig58719劃8＆87187・78187・8418ス55847718・3717977175427a78

1 1

間二酒精ノ影響ヲ槍セシニ漸次萎縮シ無水酒精30分後ニテハ73．78％トナリシガ，「バルサム」

封鎖ニョリ80．26％トナリタリ．

 以上10％「フオルマリン液ノ影響ヲ曲線ニテ圖示スvバ第1圖＝見ル如シ．

第1圖凍結標本＝於ケル10％「フオルマリン    液ノ縣毬艦面積＝及ボス影響

（．O一，）

10G

S5

so

85

1

sX

、へ、、

噌    Sbs、

一一@20／i切ナ争 一一一一一@，10P切片

》で一一騨←一e・ r・ 檜胴罹一中一一一一胸一一P一一一一一一一一一軸   軸一一一一h繭．

1 3 5 78 10r 1415 20 2324

pt一

一一TT一一一

72 S6

   時間）

        第2節 Doppelmesserヲ用ヒテ作リタル標本ノ場合

Doppelmesserヲ用ヒ薪鮮ナル腎臓ヨV厚サ約230μノ薄片ヲ作リ前記ノ染色ヲ施シ水中＝

テ観測シ，ソレヨリ10％「フオルマリン液ノ影響ヲ30個ノ蒜毬wa ＝ツキ時間的二1週間二亘 リ観測シタル結果ヲ第3表トシテ揚載セリ．

      ［ 268 ］

腎臓綜銅盟ノ「プラニメトリー」二關スル研究 961

第3表新鮮約230μ薄片二於ケルIO％フォルマリン液ノ影響

   線毬艦

@    面積

次{ｨ番競 、

封照 固定時

ﾔ 1〃

〃3〃 〃6〃  〃

P0〃

 〃

Q0〃

 〃

Q4〃

〃2日 ^{〃3〃 〃4〃} 〃5〃 〃6〃 〃7〃 2回凍

泣Zル 27 110 123 124 110 106 113 106 118 124 107 120 110 124 25 112 129 124 108 123 127 130 123 116 110 125 100 120 130 33 112 111 136 130 110 119 132 118 114 110 123 118 107

4 118 111 115 121 114 112 111 113 110 116 117 110 124 36 120 124 118 122 123 117 120 137 123 111 112 127 121 123 39 121 118 122 110 115 125 124 124 118 110 125 124 123 118

6 146 148 139 145 141 130 113 136 140 139 131 138 126 52 148 150 140 135 165 131 149 144 139 148 158 153 140 48 161 181 168 150 148 141 123 145 150 156 156 147 158 176

53 163 171 146 160 186 151 135 144 168 143 157  180一      一

@170

167

2 172 170 151 162 162 163 160 154 155 153 158 166

43 173 157 160 141 153 133 147 176 170 151 156 162 159 194 47 173 174 176 177 170 161 173 185 175 143 159 180 201 55 175 177 178 186 195 167 184 155 170 164 157 188 172 51 181 149 171 176 167 186 162 168 154 165 176 166 180 20 181 201 189 189 176 175 187 176 ユ85 190 183 186 187 200

13 183 185 186 177 186 198 170 181 178 178 170 180 179 183

26 188 204 200 182 200 201 190 195 207 190 192 178 179 9 205 214 210 214 197 197 208 180 195   ^一P98 186 186 188 193 8 209 178 190 203 221 205 210 185 204 211 197 206 204 230 35 214 231 220 240 218 211 219 212 234 238 231 199 204

40 226 215 237  221一       ＿

@220

208 220

@249

214 219 199 212 200 212 ¹⁹⁸

49 227 223 221 250 197 212 218 233 230 215 207 239

45 231 232 240 230 223 235 248

228i212

1 233 227 240 213 218 211 220 231【211 ^{209 221 190 201}

46 238 196 218 216 219 214 213 197 207 209  203 201 200 182

50 238 237 229 215 215 243 225 234 214

2051223

37 246 240 255 235 251 220 260 231 259 235 215 227 250 235 14 255 262 251 250 253 235 240 236 242 227 227 241 241

11 290 251 258 269 245 269 245 262 255 262 257 272 246 206

総訓554gl548gi55・2

百分率lm・・lg蹴

95卵7卵5細963・ig477ig5421g6・5｝9595

其結果バー般二「フオルVリン液S因ル萎縮ハ凍結標本ノ場合＝於ケル如ク著シカラズ．

帥チ最初ノ敷時間ニテハ2−3％ノ萎縮ヲ認メタルモ固定20時闇前後二於テハ約96％1・ナリ，

ソレ以後ニアリテハ殆ド雫衡歌態ニアリ．之ヲ圖示スレバ第2圖ノ如シ．

      第2圖DoPPelmesserニヨル切片＝及ボス

       ノ10％「フオルマリン液ノ影響

    （i％｝

     10a      Sg      S8      S7      S6      95      S4

       10 2024 48 72 9S 12a 144 168

      （時間）

  而シテ1週間固定セシ標本ヲ2回凍結セシ後更二共面積ヲ測定シタル＝最後ノ値100二封 シ102．12トナリ僅二膨化ヲ示シタリ．      ・

      ［ 269 ）

9．62 藤 ^田

      総括及考按

 ：Blum，：F．（2）ガ1893年始メテ：Formaldehydハ組織ノ腐敗ヲ防ギ，酒精ヨリモ早ク組織ヲ硬 化シ且ツ萎縮セシムルコト殆ドナシト提唱シ，：Blum，工（1893）（4）同ジク本剤ハ中性或ハ極メ

テ弱キ酸性ヲ示シ，10倍稀繹液：ニチハ組織ヲ萎縮セシムルコトナシト述べ，Hermann（1894）

（6）ハ：Formalinハ組織ヲ不透明ナラシメズ且ツ自然色ヲ正常＝保チ，酒精ノ如ク脱水ノ影 響ナク，昇莱，酸溶液，「オスミウム酸混合液ノ如ク蛋白艦ノ沈澱及ビ凝固ヲ惹起スルコト無

キ良剤トテ推奨シタリ．

 其後St61tzner， H．（1096）（tl）ハ10倍二面繹シタル：Forrnalin水溶液ハ鼠ノ腎臓ヲ8．0−15．0

％，廿・日鼠ノソレヲ22・5−24・0％ダケ膨化セシメタリト言ヒ，Berg， W．（1907）（1）ハ10％：FQr−

malin液ニヨリ肝臓，脾臓ハ艦積的＝夫々一5．24％，十12．27％，重量的＝バー5．91％，十4．39％

ノ割合二萎縮，膨化ヲ示スト記載セリ．

 1）athen，：B・and：Philpott， R．（1921）（9）ハ人及ビ豚胎兇ノCrown−rump Iengthヲ羊水中＝テ 測りタル後，10％Formalin液二24時聞固定シタルニ手均5．0％ノ割二膨化スルヲ認メタリト

育ヘリ，

 叉Hertwig， G．（1931）（7）ハ海面ノー種Arbacia pustulosa， Sphaerechinus granularisノ卵及 ビSalamandra maculosaノ肩押軟骨板ノ細胞核ヲ實験材料1・シテ種々ナル固定液ノ影響ヲ 系統的二追窮セシガ，10％：Formatin液二關シテハ豫メ「リンゲル氏液二浸シタル値ヲ標準

トシ記載セリ．氏二擦レバ10％：Formalin水溶液及酒精，キシPt ・一ルJニチハ       固定   70％酒精  90％酒精  100％酒精 キシロール

   Arbacia pustulosa 147 105 85 76 70

   Sphaerechinus granularis 132 78 55 55   44

10％Formalin海水ニチハ，

      固定   70％酒糟  90％酒精

   Arbacia pustulosa 105 70 60

   Sphaerechinus granularis l OO 55 46

トナリ，Salamandra maculosaノ軟骨細胞核＝就キテハ，

      24時間固定  100％酒精  キシロール    10％：Formalin液（中性） 76    56      49    10％  〃  （酸性）66   53     49

   20％ Formalin 70 67 57

時分成績ヲ報告セリ．

100％酒精  キシロール

 50 48  44 40

キシロール或ハパ ラフイソ包埋後

  46   43   48

 上述セル如クFormalinノ萎縮，膨化二關シテハ多数ノ判者が論ヲ異ニシ，叉固定ザレタ ル組織ノ種類二依リテモ異ル成績ヲ揚ゲ，・一般＝ハ該固定液ハ組織ノ大サニ攣化ヲ及ボスモ

ノトシテ極メテ多数ノ混合固定液が考按セラレタリ．      ，        ［ 270 ］

腎臓綜毬盟ノ「プラ亀山トリー」二關スル研究 963

 先ヅParker， G．：H． and：Floyd， R．（1896）（8）ハ95％酒精ト2％：Formolヲ6：4ノ容量比二混 和スル時，一羊ノ臓ハ艦積的二三化ヲ示サズトナシ，Zdger， K（1930）（13）ハFormalin固定ハ 組織ノ陰荷電ヲ昇ラシメ蛋白コロイドハFormaldehydノ影響＝ヨリ純粋ノ酒精ノ固定二於，

ケルヨリモヨリ酸性ナリト言ヒシガ，H：amburgerハ酸ニヨリテ動物細胞ハ増大スト言ヘリ．

 Schroeder， Kurt（1933）（10）ハ固定ノ際：Formalin液ニテ膨化ヲ示シ，謄ハ其形態ヲ攣化ス ルモ，：Forinaldehyd solutum＝o．9％食盤水ヲ加ヘテ稀繹スレバ等張ノ固定液が得ラレ，紳 維組織ノ膨化ヲ常二防ギ得ルト言ヘリ．

 ：Burke， F． V．（1933）（・s）ハ固定申ノ因子トシテ：Forn）alin／Ph．ヲ考へ：Formalin液中ノ水素 イオン濃度ヲ安定セシムル爲メニ種々ナル混合液ヲ作りシガ，：Formalinハ固定液トシテハ10

％液が最良ナリト述べタリ．

 余ノ凍結標本二野ケル成績ヲ見ル＝何レモ10部門フォルマリン液＝因り最初ヨリ急激二縮 少シ，20μ標本ニチハ5時闇，10μ標本皇テハ8時間経過セシ後ハ夫々88．30％，88．87％ヲ 示シ，其後ハ歩々一定ノ値ヲ上下二僅二動揺スルニ過ギズ．

 而シテ上記雫均値ハ紫野二於テ殆ド同一ニシテ10μ標本ニチハ20、μノソレ＝於ケルヨリ モ切片が菲薄ナルニ拘ラズ，液ノ影響スル速度ハ却テ綾慢トナレリ．コハ或ハSchroeder，

Kurtノ言ヒシ如ク0・9％食平水ノ爲メニ始メノ短時間ニハ比較的其萎縮率ヲ小ナラシメタル モノナラン．

 叉DoPPelmesser標本＝テモ同様ニシテ大願二於テ漸…欠縮小シ，20時間ニテ95．64％ヲ示 シ，ソレ以後ノ移動ハ比較的少シ．

 是等實験誤差ノ根擦ハ主トシテ標本ノ厚薄ニアルベク，標本ノ薄キモノ程測定誤差ノ少キ ハ理想シ得ル所ナリ．又凍結標本ニチハ固定一定時間後ノ値が略々88％ナルモDoPpelmesser 標本ニチハ熱々96％ヲ示シ， 且ツ1週間後二於テ凍結シタルニ約2％ノ面積的増加ヲ平骨ル が故二固定セザル新鮮組織ヲ直二凍結スル時ハ正常ヨリ著シク大ナル組織膨化ヲ表ハスベ ク，斯クシテ作ラレシ標本ガ「フォルマリン液ニヨリDoppelmesserニテ作りシ標本二比シ テ著シク多ク脆水シテ萎縮スル度ノ大ナルハ判然ナリ．

       結   論

 余ハ成熟家兎腎臓ノ10μ，20μ凍結切片及e  Doppelmesser ＝ヨル厚サ約230μノ薄片二「ヘ マトキシリン，エオジン」染色ヲ：施シタノレ後，懸毬艦面積＝及ボス10％「フォルマリン國定液：

ノ影響ヲ時間的二観察シ次ノ結論二到達シタリ．

 1．10μ凍結標本ニチハ樹照ヲ100トスル時，固定8時間ニテ88．87％二下リ，其後ハ殆ド ー定ニシテ47時間迄攣化ナシ．

 2．20μ凍結標本ニチハ三二ニシテ固定5時聞二二88・30％ヲ示シ，其後バー定＝シテ4日 迄殆ド攣化ナシ．

 3．Doppelmesserニヨル標本二於テハ最初ノ樹照値ヲ100トスレバ固定＝ヨリ徐々＝縮小       ［ 271 ］

964 _藤 田

シ20時闇ニシテ95．64％トナリ，其後7日迄ハ大サノ攣化ハ殆ド認メラレズ．

  4．上記ノ如ク凍結切片ニチハ最初ノ大サバ大ニシテ，固定時間ニョル縮小ハ急激ナリ，

特二20ft ti於デ甚シ． DopPelmesserノ場合＝テハ最初ノ大ナハ小サク，固定ニヨル縮小ハ 徐々ナリ．之バー二見豫想二反スル如キモ凍結標本ハ凍結ナル操作ニヨリ眞ノ大サヨリ大トナ

リシモノト考ヘテル．故二固定ニヨリ急激二縮小スルモノナラン．

・T．之レヲ要スルー般二組織ハ固定液ノ滲透ニヨリテ急激二縮小スルモー定ノ固定ヲ蒙り タル後ハ該組織ノー定ノ大サヲ保ツモノト思考セラル． ，

       文   獄       t

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