5.β-リポ蛋白の臨床*
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(2) (158) 生物物理化 学 が 測定 に 適 して い る結 果 が え ら れ た(図1)。. この点 で. 6,000r.p.m.30分. 遠 心 し て.β‑リ ポ 蛋 白 を 除 去 した 上 清. は従 来 の 比濁 計 測 と波 長 との 関係 に興 味 あ る問 題 を 提起. に 更 に0,025M+CaCl2溶. した もの と も言 え るが,こ の 点 につ いて の検 討 は 後 の機. を 生 ず る 。 こ れ を6,000r.p.m.30分. 会 に ゆ ず りた い と思 う。. DXR溶. b.2価. 村上 教 授がDXRを. 用 い り β‑リポ 蛋 白 測 定 法 を 発表. 加 え る と 再 び涸 濁 遠 心 し,沈. 液5.0mlに0.025M.CaCl20.05mlの. む 溶 液 で3回. 陽 イオ ン添加 に よ る影響 に つ い て. 液0.05mlを. 洗滌 し,次 い で2.60g/lEDTA溶. 解 し た も の に づ い てOuchterlony法. 抗 β‑リ ポ 蛋 白 血 清 と は 反 応 し な い が,抗. れ,そ の 中 で濁 度 増 強 の 目的 でCa,Mg或. と は 沈 降 帯 を 生 じ,Ca++に. ど. 2価 の 陽 イ オ ンを添 加 す る方 法が 行 な われ て い る。 しか. 液 で再 溶. で 抗 原 性 を み る と,. して 間 もな く,い くつ か の 類 似 の方 法 が あ き ら か に さ い はBaな. 渣 を. 割合で含. 全人 血 清 血 清. よ っ て β‑リ ポ 蛋 白 以 外 の 物. 質 と も 結 合 し 梱 濁 を 生 ず る こ と を 示 し て い る 。Ba++お. し これ らの2価 陽 イオ ンを 添 加 した ため に 増 加 した濁 濁. よ びMg++の. に は β‑リポ蛋 白 以 外 の もの を含 む 危 険 が あ る。 これ を. れ ら の 金 属 塩 を 添 加 す る こ と は 正 確iな β‑リ ポ 蛋 白 測 定. 確 か め る た め次 の如 き実験 を行 な った。. の た め に は 不 適 当 で あ る と言 え る 。. 血清0.2mlにDXR溶. 2). 液5.0mlを. 加 え混 和,15分. 後. 新 ら しい β‑リポ蛋 白 測 定 法. a.測 1.チ. 定用 試 薬 トラ ー ト加 生 理 的 食 塩 水. NaCl8.55g,ク 0.368gを. DXS粉. エ ン 酸 ソ ー ダ(C6H5Na3O7・2H2O). そ れ ぞれ 秤 量 分 取 し,蒸 溜 水 で1lに. 2価 陽 イ オ ン添 加 に よ る沈 殿 物 の 抗 原性. b.測. 定方法. 1.絶. 対 値 算 出 の 検 量 曲 線 の作 製. 図4は. 溶解す. 2.血. その 検 量 曲 線 で あ る。 清 β‑リポ蛋 白測 定. 被 検 血 清0,2mlに 蔵 用DXR溶. 液. 末500mgを100mlの. 定 用DXR試. 測定 用DXR試. 薬.0mlを. 蒸 溜 水 に溶 解 し冷 暗所. を 生 ず る と涸濁 が不 均 一 と な り,誤 差 が大 き くな るの で 注 意 を 要 す る。15分 後 厚 さ10mmのcuvetに. 移 し,図. 5,6の 如 きchartを 装 着 した 測 定 器 具 を 用 い,chartの. 薬. 用 に の ぞみ 貯 蔵 用DXR溶. 加 え,. 試 験 管 の 口を お さ え て7回 転 倒混 和 す る。 この 際,気 泡. に保 存 す る。 3.測. 図2. 検 量 曲線 の 作 製 は 図3の 如 き方 法 に よ って行 な った。. る. 2.貯. 場 合 も 全 く同 様 の 成 績 で あ り(図2),こ. 液8.0mlに. チ トラー ト加. 生 食 水 を加 え 全 量 を1lと す る。. 前 にcuvetを. 挿 入 し,涸 濁 を生 じた 液 相 を透 して は っ き. りと小 黒 円 の 配 列 を 判 定 し得 るchart記 ‑40‑. 号 を記 録 す る。.
(3) Vol.. 図5. 図3. 14. No.. 2. 1969. (159). 比 濁 用chart. 検 量 曲線 作 製 法. 図6. 例 え ば,Aか. β‑リポ蛋 白測 定 器. らDま で の 配 列 は 区 別 し得 るがEか. で は不 鮮 明 な場 合 は"D"と. 表 示 す る 。Chartに. らIま よ り表. 示 され た記 号 と,同 時 に 測 定 した 吸光 度 を 基 に 検量 曲線 か ら得 られ た絶 対 値 を 対 比 せ しめ た成 績 は 図7の 如 く両 者 の間 にか な りきれ い な 相 関 々係 が み と め ら れ,chart 図4. 検 量 曲線. 記号B〜Iま ‑41‑. で の間 で は概 ね 表Iの. 様 に β‑リポ 蛋 白 の.
(4) (160) 生物物理化学. 図7. β‑リポ蛋 白濃 度 とchart記 号 の 相 関 表1. Chart記 号 と β‑リポ蛋 白値. 定 量 表現 が可 能 で あ る。 4.β‑リ. ポ蛋 白 と他 の脂 質 分 画. 血 清 中 の 各脂 質 分 画 と β‑リポ蛋 白 と の 相 関 を 同 一 血 清 に つ い て 測定 した数 値 につ い て 比 較 検 討 した 成績 は, 図8の 様 に総 コ レス テ ロ ール,リ. ン脂 質 お よ び 中性 脂 肪. の 間 に い ず れ も推 計 学 的 に有 意 の相 関 が み とめ られ た 。 た だ,中 性 脂肪 で やや ば らつ き が み ら れ る の はDXR と結 合 能 力 を もた な いchylomicronやpreβ‑リ. ポ蛋白. な どに 由 来 す る ものが 含 まれ る ため で は な い か と思 わ れ る。. 図8. 各 脂 肪 質 分 画 と β‑リポ蛋 白値 の 関 係. われ か れ の確 か めた 症 例 中,preβ‑リ. ポ 蛋 白の 存 在 し. た 例 か ら分 離 した β‑リポ蛋 白 とpreβ‑リ ポ 蛋 白のDX Rと の親 和 性 を検 討 して い るが,preβ‑リ ポ蛋 白 はDX Rと. は結 合 しな い 成 績 が 得 られ て い る 。 ま たpreβ‑リ. ポ蛋 白の 抗 原 性 をOuchterlony法 ポ蛋 白血 清 と は反 応 せ ず,抗. で 検 索 したが,抗 α‑リ. β‑リポ 蛋 白 血 清 と も明 ら. か な沈 降 帯 を み と め る こ と はで きな か ったが(図9)こ れ に関 して は今 後 更 に検 討 を 重 ね た い と考 えて い る。 DXRで. 分 離 した β‑リポ蛋 白 中 の コ レス テ ロ ー ル の. 含 有 量 は,表2の 90.4%か ‑42‑. 様 に血 清 総 コ レス テ ロ ー ル 値 の 最 高. ら最 低30.9%に. 至 る巾 のあ る 含 有 量 を 示 して.
(5) Vol. 14. No. 2. 1969. 図9. 表2. (161). preβ‑リ ポ蛋 白の 抗 原 性. β‑リ ポ 蛋 白 中 の コ レ ス テ ロ ー ル. 単 位 は いず れ もmg% い るが,こ の変 動 も或 い は リポ蛋 白spectrumの1つ. の III.β‑リ. patternを 示 し得 るの で はな か ろ うか と考 え られ る。 4.各. 種 疾 患 と β‑リポ蛋 白. ポ蛋 白 の臨 床 的 意 義. リポ蛋 白 は電 気 泳 動 学 的 に α‑リ ポ 蛋 白,preβ‑リ. 健 康成 人 お よび 冠 疾 患,高 血 圧 症,脳 血 管障 害,糖 尿. ポ. 蛋 白,β‑リ ポ 蛋 白 お よ び γ‑リポ蛋 白 あ るい はOfraction. 病,腎 疾 患 な ど動 脈 矛 化 と関 係 の 深 い 疾 患 の 血 中 β‑リ. と言 わ れ る 分画 に分 か れ るが,こ の 中 で臨 床 上 問題 とさ. ポ蛋 白値 を 一 括 して 図10に. れ る の は β‑リポ 蛋 白,preβ‑リ. 示 した が,い. ず れ も健 康 人. に比 して これ らの 疾 患 で は 高 値 を 示 して い る。. 法 で はSf0〜20,Sf20〜400程 ‑43‑. ポ蛋 白 で あ り,超 遠 心 度 の い わ ゆ るvcry. low.
(6) (162) 生物物理化学 density lipoprotein, low density lipoproteinの 増 加 す る 場 合 で あ る。Very micronは. low density lipoprotein中 のchylo‑. 炉 紙 泳 動 で は原 点 に と どま る が,こ. の分画に. つ い て は 食 餌性 の影 響 が 大 きい こ とを示 唆 した 成 績 が 多 数 発 表 さ れ て い る 。 β‑リ ポ 蛋 白 は そ の 殆 ん ど がlow density lipoproteinに 分 布 し,泳 動 的 には β‑globに 一 致 し,免疫 電 気泳 動 法 やOuchterlony法. に よ って も単一. な 抗 原性 を もつ 蛋 白部 分 の存 在 が 知 られ て い る。Preβ‑ リポ蛋 白 は,大 部 分 がSf20〜105の. リポ蛋 白 に分布 し,. 内 因性 に 由来 す る脂 質 で あ る とさ れ て い るが,こ の 分 画 の 検 出 に は緩 衝 液 へ のalbの 添 加 な ど細 か い処 理 が 必要 とされ,ま. た十 分 な 免 疫 学 的 証 明 が な され て い な い 。. い ま まで 本 態 性 高 脂 血 症 と して 一括 さ れ て い る 疾 患 は,血 清 脂 質 の 泳 動 に よ るchylomicron,α‑,preβ‑,β 各 リポ蛋 白 の変 動 と耐 糖 能 との 関 係か ら現 在 で は5つ の 型 に分 類 され て い る。 成 人 病 に み られ る 中等 度 の 血 中脂 質 の増 加 もな ん らか の 点 で この いず れ か の型 に類 似 した 点 を もって い るが,日 本 人 の特 殊 性 につ い て は 今後 の検 討 に また ね ば な らな い 。 ま た 冠 疾 患 でpreβ‑リ. ポ蛋 白. が 高 頻 度 にみ られ る こ とな ど興 味 深 い もの と して と りあ げ られ,そ の 他 β‑リポ 蛋 白,α2‑リ ポ蛋 白の増 加 す る疾 患 と して ネ フ ロー ゼ 症候 群 やlipoatrophic diabetesな ど が と りあ げ られroutineの. 検 査 と して,β‑リ ポ蛋 白 の定. 量 の 必 要 に 迫 られ る 疾 患 も決 して 少 な くな い 。. IV.む 以上,わ. す び れ われ はDXRを. 用 い る極 めて 簡 易 な β‑リ. ポ 蛋 白測 定 法 を開 発 し,実 用 の 段 階 に至 って い る。 この こ とは設 備 の整 っ た研 究 室 で の 測 定手 技 を 開業 医 あ るい は 診療 所 な どの実 地 医家 の層 にま で侵 透 させ たい とい う 念願 の ひ とつ を達 し得 た もの と考 え て い る。 〔 追加〕. 日大 ・医 ・臨 床 病 理. 河. β‑リポ 蛋 白 に 関 して われ われ はalb加. 合. 忠. 緩 衝 液 を用 い. る炉 紙 電 気 泳 動 法 に よ って 分 析 して い るが,演 者 の 報告 と 同 じよ う に,pre‑β 分 画 は硫 酸 デ キ ス トラ ンに よ って 十 分 に沈 殿 しえ な い 事 を 観 察 して い る。 今 後 は 種 々 の polyanionsを. 応用 す る こと に よ っ て β‑リポ蛋 白 お よ び. pre‑β リポ蛋 白 を分 画 沈 殿 す る方 法 を 開発 す る必 要 が あ ろ う。 〔 追加に対する質問〕 血 清albを. 千 葉 大 ・医 ・1内. 加 え た 源 紙 電 気 泳動 でpre‑β の 出 現 す る. 頻 度 が 多 い とい うが,血 清albを 図10. 各 種 疾 患 と β‑リポ蛋 白. 加 え た 時 の粘 度 の変 化. が 分 離 に関 係 す るの で は な いか 。 ‑44‑. 小 藤 田和 郎.
(7) Vol.. 14. No.. 2. 1969. (163). 方 法 にお い て,特 に,そ の係 数 が正 常,病 的 血 清 を とわ 〔答 〕. 日大 ・医 ・臨 床 病理. 河. 合. 忠. ず 一 定 とみ な して よ いか どうか につ い て の演 者 の見 解 如. 粘度 の増 加 の た め,同 一 の展 開 距離 を得 るた め に は,. 何。. albを 加 え な い 場 合 に 比べ て長 時 間 の通 電 を 要 す る。 こ の こ とが,pre‑β の分 離 に,直 接 ど の よ う に関 与 して い るか は不 明で あ る。. 〔 答〕. 金 沢 大 ・医 ・2内. 関. 本. 博. 我 々 の方 法 にお い て も,β‑リ ポ蛋 白 値 と 最 もき れ い な相 関 を 示 す の は コ レス テ ロ ール で あ る か らポ リア ニオ. 〔質 問〕. 京 大 ・医 ・中 検. 富. 田. 仁. ドイ ツ のハ ウ リー の,β‑リ ポ蛋 白 を 沈 殿 さ せ,沈. ンと リポ蛋 白の 結 合 に よ り生 じた沈 殿 物 中 の コ レス テ ロ 殿. 物 中 の コ レス テ ロー ル を測 定 して,そ れ に 係数 を掛 け る. ‑45‑. ール を 測 定 す る とい う考 え は悪 い こ とで は な い と思 う。.
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