関 与 謝 産物 酸代 け 肺 臓炎

マ ウ ^ス の ブ ^レオ ^マ イ ^{シ ン}

肺

酸代

産物

与

金沢 大 学 医 学 部 医学 科 内 科 学 第三講座 (主任^: 松田 保 教 授)

野 村 将 春

特 発 性 問 質 性 肺 炎, 特 発 性 肺 線 維 症ほ, 原 因不 明^の難 治 性 肺 疾 患^である^･ その研 究^におい ては, ブレオ^マ イ^{シ ン}

(ble o mycin･ B L M ) 投 与^によ る動 物^モデルが頻用 さ れて いる･ = れ まで_′ B L M 肺 線 維症^モデル において. ア ラキ ドン酸 代謝 産

物 (a r a chido nic a cid m etabolit_e･ A A M) ^に関 する研 究は ほ と ん ど なく, その関 与を検 討し た^. IC R 系 雄 性^マ ウス に B L M

1 50m g/^kg を静脈 内 投 与 す^ることで肺 線 維 症^モデルを作成し, B L M 投 与後2 8 日 目の肺湿 重 乱 肺/体 重 比お よ び病理組織 学 的 評価を指 標と し た^･ ト^{ロ ソ} ボ キサ ン A2(^{thr o mbo x a n e A}2, T X A2) 受 容 体 括 抗 剤であ^{る S}‑^{1 4 5 2, ペプチ ドロイコ ト}リ^ェ ン

(pep tidele ukotrie n e･ PL T) 受 容 体 抵 抗 剤である A ST^{3 5･ 70ロ ス タグラ げ} ィ ン El(pr o stagla ndin El,P G El) 誘 導 体^である P G E lαC D ･ お よ び プ^ロス タダラ げ ィ ソ Ⅰ2(P GI2) 誘導 体^である O P‑^{4 1 4 8 3aC D} を B L M 投 与 後1 4 日間腹 腔 内投 与^し, そ^の影 響を検 討^{し た■ S‑1 4 5 2} ほ B L M によ る肺湿 重 量^の増 加(対 軋 B L M･ B L M +S‑^{1 4 52 1m}g/^kg^, お よ び B L M + S‑^{145 2 3m}g/

kg の重 量は各^々･ 0･2 0 土0･0 4_g･0･3 2 ±0^･0 2g･0^･2 6 ±0^･01_g,0^･2 6 ± 0･Olg( 豆 ±S E)), お よ び^{ス コ} ア化し た肺 線 維 化を抑 制し た (対 軋 ^{B L M} ･ B L M +S‑^{1 4 5 2 1 m}g/k_g, お よ び B L M + S‑^{1 452 3m} g/^kg のス ^コア値^ほ各々_, 0 ± 0 息 3^･2 ±0^. 払 2^.9士0.4息 2^･5 ±0^･3点)^･ 検 討した その他^の薬 剤 も 同様に肺の線維 化を有 意^に抑制^した･ し か し な が ら各 薬剤^の抑 制 効果ほ部 分的なもの で

あった･ 以^上の成 績よ り一 T X A2 お よ び pL T ほ肺線 維 化 形 成過 樫^に関して促 進 的^に作用 し, P G El お よ び P G I2は抑 制 的^に作 用 して いること が 示唆さ れ た･ ま た, そ れぞれ^の作 用ほ部分 的^であった^こと か ら, 肺^の線 維 化にほ A A M が複雑^に関 与し てい る^こと が 示唆^{さ れ た.}

K ey w o^rds idiopathic inte r stitial _pneu m onia･idiopathic p^ulm o n a ry fibro sis,

1u ng inj^{u r}y, a r aChidonic acid m etabolite.

ble o m yc l n^‑indu c ed

特 発性 問質 性 肺 炎 (^idiop^ath icinte r stitialpn e u m o nia,ⅠI P ), 特 発 性 肺線 維 症(id iopathic p^ulm o n a ryfibr o sis,I P F ) ほ,今だ原 因 不 明で治療 法 も 確立 さ れて いな^い予 後^不良な疾患^である. し た がっ て, こ の疾 患^に関 する研 究は, 呼吸 器病学^にお け る重要な

も^{の の}1 つ と なって^いる･ ブレオ ^マイ シ ン (b le o m ycin, B L M )

は, 扁 平^上皮 癌や悪性リ^{ン パ}腫な どの悪 性腫 瘍^の治 療^に広く使 わ れて い る抗 癌 剤である^{1 )}が, その副 作用 と して ヒ トや動

物^{2 ト 4)に}肺 線 維 症^を起^こす^こと が知ら れて いる^. そ れ ゆ え簡 便

に肺^の線 維 化が作 成さ れ, そ^の病 変が ⅠI P,I P F と類 似し ている こと か ら, こ の疾 患^の研 究目的^{にB L M} を投 与^{し た}動 物モデル

が頻用 され て^いる^{5 )･}II P^,I P F, お よ び B L M 肺 線維 症^モデルは

いわ ば慢性^の炎 症 性 肺 疾 患^であ^り, 従 来よ り炎 症の視 点か ら各 種^サイ トカインや活 性 酸 素な どの検 討が おこな わ れ て^いる^{6) 7 )}.

ト ^ロ ン ボ キ サ ン (^thro m bo x a n e, T X ), ロ イ ^コ ト リ ^ェ ン

(1e ukotrie n e,L T), プ^ロ スタ グラ ンディ ン (pr o stagla ndin, P G ) な どの ア ラキ ド^ン酸 代 謝 産 物 (^{a r a ch ido nic} a cid m etabolite,

A A M) も炎 症 ^一般^に関わ る重要^なメディ ^ェー^ター^であり,呼 吸 器系 疾 患^{で ほ}気 管 支 喘息や急 性 呼 吸 窮迫 症 候 群な ど で詳細に倹

平 成7 年^{1 1}月2 4 日受付, 平 成7 年^{1 2}月28 日受 理 A b br e viatio n s :

●

A A M , a_{r a C}hido nic acid m etaboli^te

討さ れて いる^{8 ト t 3 )･} し か し,ⅠI P.IP F , お よ び B L M 肺線 椎 症モ

デルに関^{し て は}, 末 梢血 お よ び気 管 支 肺 胞 洗 浄 液 中の ^一 部^の A A M の検 出^{1 4'}以外^には ほ と ん ど研 究さ れて いみ^{い. そこ で,}

これ ら^のメディ ^ェー^クー^の_{肺 線維 化 過 程}^へ の関 与を 明 ら かにす ること を 目的と して_, B L M 肺 線維 症^モデルに対 す^{る T X,L T} ,

お よ び P G の特 異 的括 抗 剤 あ^るいほ類 似物 質 投 与の影 響^につ い て研 究し た.

対照お よび 方 法 工. 実験 動 物

I C R 系 雄性^マウス (1 0 ^〜1 2矧 軌 体 重^{3 5〜}4 0_g, 日本^{ク レ ア},

東 京) を金 沢 大学 動 物 実験 施 設 内^の空 調 飼 育室(室 温2 3 ± 2 ℃,

湿 度5 5^･5%) にて 1 週 間 以上飼 育し, 肉 眼 的観 察^によ り健 常^な 動物を実 験に用いた.

Ⅱ･ B L M 単 回 静脈 内投 与に よ る^マウスの肺臓 炎モ デ ル の作 製

安 井^の方 法^{1 5 )に}基^づいて^マウ^ス の肺 臓 炎^モデ^ルを作 製し た.

すな わ ち B L M (日本 化 薬 東 京)を生理的食 塩 水^0.2ml に溶解

B L M , bleo my^cin;II P ,idiop^athic inte rstitial p^{n e}u m o nia; I P F･ idiop^athic p^ulm onary fibr o sis; L T･ 1e ukotriene; P G, p^{r O S}tagla ndin; pL T , P^ep tide leukotrie n e; T X,

thr o mbo x a n e^.

3 0 野

し, 1 匹当り B L M 1 5 0m g/^kg にな る よう^{に マウス の}尾 静 脈^か ら投 与^{し た.}

Ⅲ^. 肺 湿重 丑, 体 重 測 定 並 びに病 理 組 織 学 的評 価 1) 肺 湿 重 量, 体 重^の測 定

B L M 投 与後2 8 日 目に ^マウスを^ベ ン ト バ ル ビタ^ー ル ナ トリ ウ ム(ダ イナポッ ト, 大 阪)5mg を腹 腔 内^に注 射^{し て}麻 酔^し, 体 重 を測 定 後 腹 部^{を 正}中 切 開し腹 部 大 動 脈を露 出さ せ切 開し て脱血 死させた^. 次^いで胸 腔を切 開し心肺^{を 一}塊^にして摘 出 後, 肺だ けを分離^した. 肺^の湿 重 量を測 定し, 1 0% ^{ホ ルマ リンに}て 24時 間 以上固定^{し た.}

2) 病理風 紋 学 的 評 価

ホル マ リン固 定した肺を 2 4時 間以上水 道水^で洗 浄 後^{パ ラ フ}ィ ンブ^ロッ クを作 製した^. 厚^{さ 4}担n の パ ラ フ_ィ ン切 片を切り出 しス ライ ド グ^{ラ ス}上^に固 定し, パ ラ フ ィ ン切 片 標 本を作 製し た^. 作 製^{し たパ ラ フィ ン}切片 標 本に H E 染 色, お よ び^マ ッ ソン

ヤリク^ロ ム染色を施した^. そ れ ら を光 学 顕 微 鏡^{に て}観 察^し病理 組 織 学 的^に評価^{し た.} 肺 線 維 化^の程 度は表1 のように俗 本らの

方法^{1 6) に}従^{いス コア}化^{し た.} さ らに^マ ウ^ス毎に2点 以上 を 示 し た肺葉 数を総 肺 葉数で険し, 肺 葉 あた りの発 生 頻 度^の百分 率を 算 出^{し て}線 椎 化^の発 生頻 度^{と し た.}

Ⅳ^. T X A2 受 容 体 括杭 剤の影 響

肺 線純 化^{に お}ける内 因 性T X A2の関 与を検 討 する た め, 特 異 的 T X A2受 容 体 括 抗 剤^であ^{る S‑1 4 5 2}( 塩野 義 製 薬, 大 阪) ^{を 用}

い _ト以 下^の5群^につ いて B L M 投 与2 8 日彼^{の肺湿 重 量▲ 肺}/^{体 重} 比, お よ び病^理組 織 学 的 評価^を比 較し た.

1) S‑^{1 4 5 2} 単 独 投 与 群(^{n =}1 0), 2) ^{B L M} 単 独 投 与 群 (^{n= =1 0}), 3) B L M + S^‑1 4 5 2 0^.3m g/^kg 投 与 群 (n ⁼1 0), 4)

B L M + S^‑1 4 5 2 1 mg/^kg 投 与 群 (^{n =1 0}), 5) ^{B L M + S}‑^{1 4 5 2}

3m g/^kg 投与 群 (n ⁼1 0)^. S‑^{1 4 5 2 は生理食塩 水0･5ml に溶 解し}

B L M 投 与 後^{1 4 日}間連 続^で腹 腔 内投 与した^.

V ^{. ペ}プチドロイ^コ ト リ^エン (pep ti dele ukotrie n e,PL T ) 受 容 体 括 坑剤の影 響

肺 線 維 化^におけ^る pL T の関 与^を検 討 す^{る た め}, 特 異 的

pL T 受 容 体結 抗 剤^である A S^‑3 5( 東 京田辺 製 薬, 東 京) を用

い, 以 下^の4 群^{につい てB L M} 投 与 後2 8 日後^の肺 湿 重 量, 肺/体 重 比, お よ び病理組 織 学 的 評価^を比 較^{し た.}

1) A S‑^{3 5} 単 独 投 与 群 (n ⁼1 0), 2) B L M 単 独 投 与 群 (^{n = 10}), 3) ^{B L M + A S}‑^{35 1m g}/^kg 投 与 群 (^{n =1 0}), 4) B L M + A S^‑35 3mg/^kg 投 与群 (n ⁼1 0)^, A S‑^{3 5 は ジメチ ル ホ ル}

ム ア ミドに溶 解^し,B L M 投 与後^{1 4 日}間 連続で腹 腔 内 投 与し た^.

Ⅵ^. P G El製 剤 投 与の影 響

P G Elを特 異 的^に括 抗 する物 質が な^いた め, P G El顆 似 物 質^で ある P G ElaC D ( 小 野 薬 品^工業, 東 京) ^を用^い, 以下^の4群^につ

いて B L M 投 与後2 8 日後^の肺 湿重 量^, 肺/体 重 比, お よ び病理組 織 学 的 評 価^を比較^{し た.}

1) P G ElαC D 単 独 投 与 群 (^{n =1 0}), 2) ^{B L M} 単 独 投 与 群 (^{n =1 0}), 3) B L M + P G ElαC D O^.5m g/^kg 投 与群 (n ⁼1 0), 4)

B L M + P G E.αC D l.5r ng/^kg 投 与 群(^{n =1 0})^{.P G ElαC D は}生 理 食 塩 水0^.5ml に溶 解し, B L M 投 与後1 4 日連 続^で腹 腔 内投 与し た.

Ⅶ^. P G I2製 剤 投 与の影 響

P G I2を特 異 的に括 抗 する物 質がき^{ないた め,P GI2の類 似物 質で} あ^{る O P‑41 4 8 3αC D} ( 小 野 薬 品^工業) ^を用い , 以 下^の4 群^{につ い} て B L M 投 与 後2 8 日^■後^の肺 湿重 量, 肺/体 重 比仁お よ び病理組 織

Tab lel. T Tl e Cri teri_af br m o rp h^olog i^cai evalu atio n of_pul^‑ m o n a ry 丘b^{r o s}isindu c ed b y B L M i^{n m}ic e

Crit e ria

‑ (0) ^{A b}s e n c e of名br o sis

± (^l)^{Ar e a s w}i th q^{u e st}io Tl able蔦br o sisin alv e ola r s ep t^a + (²)^{A fbw} fbciof 丘br o sis,0鮎nin s ubp^{le u r ala r e a}

≠ (⁴)Sc atte r edfbciof bibr o sis

≠ (^{6) D i 飢 配 色br o sis}

Gr ade(S C O 托 S)^;

bcide n c e (% ) ¹

Tot al s c o r e s ofspeC l m e n S h o n e m o u s e

Nu mbe r ofspe ^{Cl m e n Sint he s a m e m o u s e}

Nu mbe r ofsp^{c c l m e n S Wi th} 鎖br o sisin o n e 皿 O u S e Nu mbe r ofs匹^{C l m e n Sin 血e s a m e m o u s e}

学 的 評 価^を比 較^{し た.}

1) O P‑^{4 1 4 8 3αC D} 単 独 投 与 群 (^{n =1 0}), 2) ^{B L M} 単 独 投 与 群 (^{n =1 0}). 3) B L M + O PT^{4 1 4 8 3αC D O.5m g}/^kg 投 与 群 (n ⁼1 0), 4) B L M + O P^‑4 1 服3αC D l･5mg/^kg 投 与 群 (^{n =1 0})^･

O P‑^{4 1 4 8 3αC D は生 理 食塩 水0.5ml に溶 解し,B L M} 投 与後^{1 4 日} 連 続^で腹 腔 内投 与^{し た.}

Ⅷ^. 統 計 処 理

得^{ら れ た}計 測 値は, す^べて平 均値±標 準 誤 差^で示 し た^. 得ら

れた計測 値^の比 較^にほ, W ilc o x o nの順 位 和 検定^を使^{用 し}, 両側

検 定^で危険 率5 % 以下 をも^って有 意差 あり と判 定し た^.

成 績

Ⅰ. T X A2受 容 体 括 抗剤^の影 響 1 ^. 肺 湿 重 量お よ び肺/体 重 比

図1 で 示 さ れ た よ う^に , B L M 単 独 投 与 群^に比 較 ^{し て} B L M + S‑^{1 4 52 1m g}/^kg,3mg/^kg 投 与 群^では, 肺湿 重 量, 肺/^体

重 比^の増 加が有 意^に抑 制された^. 2 . 病理麗.織 学 的 評 価

図2 ^で示 さ れ た よ う^に , B L M 単 独 投 与 群^に 比 較^して ,

B L M + S‑^{1 4 5 2 3m g}/^kg 投 与 群で は肺 線維 化^の程 度, 発 生 頻 度 とも 有意^に低 下^{して いた.}

Ⅰ^. pL T 受容 体 括 坑 剤の影 響 1 . 肺湿 重 量^{お よ び}肺/体 重 比

図3 で 示 さ れ た よう^{に B L M} 単 独 投 与 群^に 比 較^{し て},

B L M + A S‑^{3 5 3m g}/^{kg 投 与 群では B L M によ る肺 湿 重量, 肺}/ 体 重 比^の増 加^が有 意^に抑 制^{さ れ た.}

2 ^. 病理学 的 評 価

図 4 で 示 さ れ た ように B L M 単 独 投 与 群^に 比 較して ,

B L M + A S^‑3 5 3m g/^kg 投 与 群^では肺 線 椎 化^の発 生 程 度, 頻 度と も 有 意^に低 下し^{て い}た^.

Ⅲ^. P G El類 似 物 質^{P G E}.αC D の影 響 1 ^. 肺 湿 重 量お よ び肺/体重 比

図5 で 示 さ れ た ように､, B L M + P G ElαC D l^.5m g/^kg 投 与 群

では B L M に よ る肺 湿 重 量, 肺/^{体 重 比の増 加が有 意に抑 制さ}

れ た.

2^. 病理学 的 評 価

因6 で示さ れ た ように , B L M 単 独 投 与 群^に比 較^して,

B L M + P G ElαC D l.5m g/^kg 投 与 群^{で は B L M に よ る}肺 線維 化

の発 生程 度, 頻 度とも 有 意^に低 下し ていた^.

Ⅳ. P G Iz 類 似 物 賓^{0 ヤー41 4 8 3αC D の}影 響 1 ^. 肺湿 重 量お よ び肺/^{体 重 比}

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F ig^･1･ E ffe ct of S‑^{1 4 5 2tr e atm e nt o n the w etlu n}g w eight

(^A) ^{a nd t}h^e lu ng w eight^qto^‑body w ei_ght r atio (B ) in mi c e tr e ated with B L M ^. M ic e w e r e tr e ated with v a rio u s do s e s

(^0･3, 1 a nd 3 mg/^kg,intr a^‑pe rito n e aly (intr ape rito n e ally,

ip)^･) ^{of S‑1 45 2 fo r} 1 4 days afte rthe administr atio n of B L M (1 5 0 mg/^kg body w eigh ^t)^. T he a nim als w e r e s a c rific ed at 2 8 days afte r the B L M tr e atm e nt･ Ea ch ba r r epr e s e nts

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F ig^･2･ E ffe ct of S^‑1 4 5 2 tr e atm e nt o n the gr ade of fibr o sis

(^A) ^{a nd the}in cide n c e of fi br o sis (B)in mi c e t_{r e a}ted with B L M ･ M ic e w e r e tr e ated with v a rio u s do s e s(0^.3,1 a nd 3

mg/^kg,ip) ^{of S‑}1 45 2 fo r 1 4 days afte r the administr atio n Of B L M (^{1 50 m}g/^kg bod_{y w e}ight)^. T he a nim als w e r e S a C rific ed at2 8 days afte r the B L M ^tr e atm e nt. Ea ch ba r r epr e s e nts 真 土S E M .

3 2

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(^A) ^{a nd the lu n}g w eighトto^‑body w eight r atio(^B)in mic e tr e ated with B L M . M ic e w e r et_{r e a}ted with v a rio u s do s e s

(^{l a nd 3 m} g/ ^kg!ip) of A S^‑35 fo r 1 4 days afte r the administ_{r a}tio n of B L M (1 5 0 mg/^{kg body w eight). T he}

a nimals w e r e s a c rific ed a.^{t 2 8 days afte r the B L M}

tr e atm e nt. Ea ch ba rr epr e s e nts 真 土 S E M ^.

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F ig^.4^. E ffe ct of A S^‑3 5 tr e atm e nt o n the gr ade of fibr o sis

(A) a nd the in cide n c e of fibr o sis(B) in mic e tr e ated with B L M ^. M ic e w e r e tr e ated with v a rio u sdo s e s(1 a nd 3 mg/

kg,ip) of A S^‑3 5 fo r 1 4 days afte r the administr atio n of B L M (1 5 0 m g/^kg^.body w eight)^. T he a nim als w e r e s a c rific ed at 2 8 days afte r the B L M ^tr e atm e nt. Ea ch ba r r epr e s e nts 支 ±S E M ^.

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F ig^･5^･ E ffe ct of P G ElαC D o n the w etlu ng w ei_ght(^{A ) a nd}

thelu ng w eight^‑tO‑^body w eight r atio ( B) in mic e tr e ated

With B L M ^･ M ic e w e r etr e ated with v a rio u s do s e s(0^.5 a nd l･5 _mg/^kg,ip) ^{of P G E}lαC D fo r 1 4 days afte r the ad mi nis^‑ trq^tio n of B L M (^{1 50 m}g/^{kg bod}y ^{w e}ight)^. T he a nim als W e r ed s a c rific ed at 2 8 days afte r the B L M tr e atm e nt.

Ea ch ba r r epr e s e nts 支 士S E M .

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F ig^･6･ E ffe ct of P G ElaC D o n the gT ade of fibr o sis(^A) ^{a nd}

the in cide n c e of fibr o sis (B)i占 mic e tr e ated with B L M ^. M ic e w e r etr e ated wi ^th v a rio u s do s e s(0^.5 a nd l^.5 m g/^kg,

ip) ^{of P G E}laC D fo r 1 4 d_{ays a}fte r thq administr atio n of B L M (^{1 5 0 m}g/^{kg bod}y ^w eight)^. ･ ^{T he a nim als w e r e}

S a C rific ed at 2 8 days afte rthe B L M t_{r e a}tm e nt^. Ea ch ba r r epr e s e nts 支j:S E M .