ガンの診 断に利 用するフッ素含有ペプチドの合成研 究
服 部 能 英',山 本 仁 鱒,山 口 仁 宏8鱒,若 宮 建 昭'韓
Synthetic Study of Fluorine Containing Peptides to Use for Diagnosis of Cancer
, Yoshihiro YAMAGUCHI***
*
**, Hitoshi YAMAMOTO Yoshihide HATTORI
and Tateaki WAKAMIYA***
Dipeptides containing /3-(4-fluorophenyl)alanine [Phe(F)] seem to be selectively transferred into some kinds of tumor cells through the oligopeptide transporter. This fact suggests that the magnetic resonance imaging (MRI) based on 19F NMR measurement of the Phe(F)-containing peptides internalized into the tumor cells may be accessible as a promising means for diagnosis of cancer.
In order to develop a novel method for diagnosis of cancer using the MRI, a series of dipeptides containing 3-(pentafluorophenyl)alanine [Phe(F5)] were synthesized. These peptides are detectable by 19F NMR up to ,uM order concentration.
f-(Pentafluoro-
Fluorine-19 NMR, Magnetic resonance imaging, : Diagnosis of cancer,
Key words phenyl)alanine
の 濃 度 ま で 検 出 可 能 で あ るか を 調 べ るこ とに した(Fig.1).
1.序 論
2,合 成
本 研 究 で 用 い るPhe(F5)は 非 常 に高 価 で あるた め,こ れ を 効 率 的 に合 成 す ることにした.そ の た め に,ア ミノ酸 合 成 で は 一 般 的 な方 法 として知 られ るアセ トア ミドマロン酸 エ ステル 法 を 用 いることに した 。
2,1,DL‑Phe(F5)の 合 成
まず,ペ ン タフ ル オ ロ 安 息 香 酸(9)を ク ロロギ 酸 イソブ チ ル(IBCF)と 茄 メチ ル モ ル ホ リン(NMM)を 用 い て 混 合 酸 無 水 物10と した 後,こ れ を 単 離 す ることな く水 素 化 ホ ウ素 ナ トリウム で 還 元 して(ペ ン タフル オ ロフ ェニ ル)メチ ル ア ル コー ル(11)と し た.次 に,三 臭 化 リン とDMFか ら調 製 し た Vilsmeyer試 薬3)を 用 い て 化 合 物11の 水 酸 基 を 臭 素 化 し, ベ ン ジ ル ブ ロ ミド誘 導 体12と した.続 い て,12と ア セ トア ミド マ ロ ソ酌 ジ ェ 千 ル エ ステ ルm、 濠 縮 合L赫 捌r酌 加7k
近 年,生 体 内 の 特 定 の 病 巣 にフッ素 含 有 化 合 物 を集 積 さ
せ,そ のフッ素原 子(19F)をNMRと 同 様 の原 理 で磁 気 共 鳴 イメー ジン グ(MRI)を 用 い て検 出 す ることにより,様 々 な病 気 の診 断 を行 う研 究 が 注 目を集 め てい るL2),ガ ンの診 断 は,現 在 に至 っ ても重 要 な研 究 課 題 の一 つ で あるが,MRIに よる 生 体 の断 層 写 真 を撮 る方 法 は,最 も普 及 して いる診 断 法 の 一 っ となっている,
これ まで に 当研 究 室 にお いて,β 一(4一 フル オ ロフェニル)ア ラ ニ ン[Phe(4F)](1)含 有 ペ プ チ ドが,い ず れ もガ ン細 胞 に特 異 的 なオ リゴペ プ チ ドトランスポ ー ター を介 して腫 瘍 細 胞 に集 積 す る可能 性 が示 唆 され てい る.この 事 実 に 基 づ き,フ ッ素含 有 ペ プ チ ドを腫 瘍 細 胞 に集 積 させ,こ れ をMRIに よって検 出 で きれ ば,新 たな ガンの 診 断 法 の 開 発 につ な がるの で はな い か と考 えられ る.
上 述 の ような発 想 に基 づ き,本 研 究 で はMRIに よる腫 瘍 細 胞 中の19F原 子 の 検 出 をより容 易 にす るた め に,フ ェニル アラ ニ ンの 芳 香 環 を完 全 にフッ素 化 した β一(ペ ンタフル オ ロフェニ ル)アラニ ン[Phe(F5)](2)を 含 む ジペ プ チド6種(3〜8)を 新 た に合 成 し,この ようなペ プチ ドが19FNMRに よって どの 程 度
H-Phe-Phe(F5)-OH (6) H-Ser-Phe(F5)-OH (7) H-Arg-Phe(F5)-OH (8) H-Phe(F5)-Phe-OH (3)
H-Phe(F5)-Ser-OH (4) H-Phe(F5)-Arg-OH (5)
The compounds containing fluorine.
Fig. 1
平成17年6月11日 受 理
索総 合理 工 学 研 究 科 理 学 専 攻 艸 大 阪 大 学 大 学 院 理 学 研 究 科
*勅 理 学 科
第1回 アジ アー太 平 洋 国 際 ペ プ チ ドシンポジ ウム(2004年ll
月,福 岡)に て 一部 発 表
ベ ン ジ ル エ ス テ ル 誘 導 体 を,1一エ チ ル ー3‑(3一ジ メチ ル ア ミノプ ロ ピル)一カル ボ ジ イ ミド塩 酸 塩(EDC・HC1)お よ び1一 ヒドロキ シ ベ ンゾ トリア ゾ ー ル(HOBt)に よ り縮 合 させ て 調 製 したC[hble
l).
一 方,C末 端 をDL‑Phe(F5)と す るジ ペ プ チ ド誘 導 体 は, カル ボ キ シ ル 基 をBz1基 で 保 護 した 誘 導 体18と,Phe,Ser, お よびArgの 各Bocア ミノ酸 誘 導 体 を縮 合 させ て 調 製 した (Table2).
得 られ た ジ ペ プ チ ド19〜24のBzl基 を10%Pd(OH)2/C を 用 い た 接 触 還 元 で 除 去 し,さ らに ギ 酸 でBoc基 を 除 去 し た 。粗 生 成 物 をRPHPLCで 精 製 後,0.IMHCIを 作 用 させ, ジ ペ プ チ ド25〜30を 合 成 した(Table3).
分 解 を 行 い,目 的 とす るDL‑Phe(F5)を 塩 酸 塩15と して 合 成 す ることが で きた(Fig2).本 研 究 に お い て は,NMRに よ る 検 出 限 界 を 調 べ るこ とが 目 的 で あ るた め,DL体 を 用 い て 以 後 の 実 験 を 進 め ることに した 。
3.HCI・H‑DL‑Phe(F5》‑Ser‑OHの 検 出 限 界 濃 度
上 記 の ように して 合 成 した ペ プ チ ド群 の うちSerをC末 端 に 有 す るジ ペ プ チ ド26を 用 い て,19FNMRに よ る検 出 限 界 濃 度 の 測 定 を 行 っ た.検 出 限 界 濃 度 は,HC1・DレH‑Phe(F5)‑Ser‑OH (9.1mg,0.024㎜01)をD20(1証)に 溶 力・し,こ れ を10倍 ず っ10〜100,000倍 まで 希 釈 した 各 溶 液 を用 い て19FNMR 2.2.DレPhe(F5)保 護 誘 導 体 の 合 成
DL‑Phe(F5)を 含 む ペ プ チ ドを 合 成 す るた め に,そ の ア ミノ基 を ∫一ブ トキ シ カ ル ボ ニ ル(Boc)基 で,カ ル ボ キ シ ル 基 を ベ ン ジ ル(Bz1)基 で 保 護 した 誘 導 体 を そ れ ぞ れ 調 製 した.
ま ず,DレPhe(F5)(15)を 常 法 どお りBoc化 した16は,1>
末 端 にDL‑Phe(F5)を 有 す るペ プ チ ド3〜5の 合 成 に 用 い る.
次 に,16の カ ル ボ キ シ ル 基 を臭 化 ベ ンジ ル(Bz1Br)と 炭 酸 カ リウム を 用 い てBz1基 で 保 護 し,4MHCI/AcOEtを 用 い て B㏄ 基 を 除 去 し て18を 調 製 した.こ の ベ ン ジ ル エ ス テ ル 体 18は,C末 端 にPhe(F5)を 持 つ ペ プ チ ド6〜9の 合 成 に 利 用 す る(Fig3),
2.3,DL‑Phe(F5)含 有 ペ プ チ ドの 合 成
1>末 端 をDL‑Phe(F5)と す るジ ペ プ チ ド誘 導 体 は,B㏄ 誘 導 体16と,疎 水 性 ア ミノ酸 の フ ェニ ル ア ラニ ン(Phe),親 水 性 ア ミ ノ酸 の セ リン(Ser),塩 基 性 ア ミノ酸 の アル ギ ニ ン(Arg)の 各
Table 1 Yields of Boc-DL-Phe(F5)-AA-OBzl EDC • HC1
16 + H-AA-OBzlHOBt / CHC1Boc-DL-Phe(F5)-AA-OBzl z219 — 21
Yield (%) Product
Substrate
71.2 78.8 78.0
Boc-DL-Phe(F5)-Phe-OBzl Boc-DL-Phe(F5)-Ser(Bzl)-OBzI Boc-DL-Phe(F5)-Arg(NO2)-OBzl
19 20 21
Yields of Boc-AA-DL-Phe(F5)-OBzl EDC•HCI
+ 18Boc-AA-DL-Phe(F5)-OBzi HOBt / CH2C12 22 ^-24 Table 2
Boc-AA-OH
Yield (%)
Product Substrate
90.3 90.0 88.0 Boc-Phe-DL-Phe(F5)-OBzl
Boc-Ser(Bzl)-DL-Phe(F5)-OBzl Boc-Arg(NO2)-DL-Phe(F5)-OBzl
22 23 24
Synthesis of DL-Phe(F5).
Fig. 2
Table 3 Yields of dipeptides containing DL-Phe(F5)
• H-DL-Phe(F5)-AA-OH (25 ^- 27)
or
• H-AA-DL-Phe(F5)-OH (28 ^- 30) 1) Pd(OH)2 / H2
HCI 2) HCOOH 19 ^- 24 3) 0
.1M HCIHCl
Yield Product
Substrate
32.5 % 40.4 % 17.4 % 73.1 % 64.0 % 61.4 %
HC1 • H-DL-Phe(F5)-Phe-OH (25) HC1 • H-DL-Phe(F5)-Ser-OH (26) 2HC1 • H-DL-Phe(F5)-Arg-OH (27) HC1 • H-Phe-DL-Phe(F5)-OH (28) HCI • H-Ser-DL-Phe(F5)-OH (29) 2HC1 • H-Arg-DL-Phe(F5)-OH (30)
19 20 21 22 23 24 Preparation of DL-Phe(F5) derivatives.
Fig. 3
測 定 を行 うことに よって決 定 した,
Fig.4に 示 した測 定結 果 より,ジペ プ チ ド26は2.4×1♂mM の濃 度 まで 検 出 が可 能 で あ ることが わ かった ,この結 果 は,オ リゴペ プ チ ドトランスポ ー ター を介 してジ ペ プ チ ドを腫 瘍 細 胞 に集 積 した 場 合,細 胞 内濃 度 で5mM,血 中濃 度 にしても5x lO●2mMほ どの 濃 度 が 期 待 で きること,また一 般 の 薬 剤 の 血 中 濃 度 が μMオ ー ダー であることを考 慮 す ると,Phe(F5)含 有 ペ プ チ ドを集 積 した腫 瘍 細 胞 のMRIに よる検 出 が可 能 で あるこ とを示 唆 す る重 要 な知 見 で ある.
4.実 験 の 部
Detection limit of HC1 • DL-H-Phe(F5)-Ser- OH by means of 19F NMR (D20, 470 MHz).
Fig. 4 4.1.試 薬 お よ び 装 置
シ リカ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ トグ ラ フ ィー は,シ リカ ゲ ル60 (A質7734,70‑230mesh,Merck,Gemlany)を 用 い て 行 っ た.
1HNMRお よび19FNMRはVadanMercury300[1HNMR
(300MHz),19FNMR(282MHz),VarianCo.,Ltd.,USA】 を 用 い て 測 定 した.1HNMRの 化 学 シ フ ト値 は,内 部 標 準 とし て 用 い た テ トラメチ ル シ ラン(TMS)を も とに 決 定 した.19F NMRの 化 学 シ フ ト値 は,内 部 標 準 として 用 い た トリフ ル オ ロ 酢 酸(TFA)を 基 準 に して 決 定 した.HCI・H‑DレPhe(F5)‑
Ser‑OHの 検 出 限 界 濃 度 の 測 定 は,Varian【NOVA600 (VadanCo.,Ltd,,USA)を 用 い て 行 っ た.マ トリックス 支 援 レ ー ザ ー イオ ン 脱 離 イオ ン 化 飛 行 時 間 測 定 型 マ ス スペ クトロメ トリー(MALDI‑TOFMS)の 測 定 はKRATOSKOMPACT
MALDIIV(島 津 製 作 所,京 都)を 用 い て 行 った,
で 乾 燥 した.MgSO4を ろ 去 後,ろ 液 を 減 圧 濃 縮 し,無 色 の 油 状 物 として12の 粗 生 成 物 を 得 た(1.32g,100%).こ の 粗 生 成 物 を 精 製 せ ず に そ の ま ま次 の 反 応 に 用 い た.
2‑Acetylamin(ト2{(penta何uα て)phenyりmethyllmalonic aciddiethylester(i4)
ア セ トア ミドマ ロン 酸 ジ エ チ ル(13)(428mg,1.97㎜01)を 窒 素 雰 囲 気 下 でEtOH(10mL)に 溶 か し,NaOEt(1.OMの EtOH溶 液,1.97凪,1.97㎜01)を 加 え て30分 加 熱 還 流 し た.反 応 溶 液 に 化 合 物12(658mg,2.52㎜ol)のEtOH
(10mL)溶 液 を 加 え,さ らに1時 間 加 熱 還 流 を 行 っ た.反 応 溶 液 を 減 圧 濃 縮 後,残 分 をAcOEt(40mL)に 溶 か し,10%
クエ ン 酸 水 溶 液(20mLx3),炭 酸 水 素 ナ トリウ ム 水 溶 液 (20mLx3),飽 和 食 塩 水(20mLx3)で 順 次 洗 浄 した.有 機 層 を 無 水MgSO4で 乾 燥 後,溶 液 を 減 圧 濃 縮 した.生 じた 粗 結 晶 をAcOEtと ヘ キ サ ン か ら再 結 晶 し,13を 無 色 結 晶 と して 得 た.収 量1。62g(82.0%);融 点125‑126℃.1H
NMR(CDC13)δ1.30(6H,t,」=6.OHz),2.02(3H,s),3.79 (2H,s),4.22‑4.34(4H,m),6.52(1H,br),
4.2.実 験 操 作
(Penta鯛uorophenyl)methylalcohol(11)
ペ ン タ フル 加 安 息 香 酸(9)(5 。00g,25.0㎜oi)を 鰍 THF(60凪)に 溶 か し,NMM(2,86g,28.3㎜ol)を 加 え た 後,塩 氷 浴 下 でIBCF(3.87g,28.3㎜01)を 加 え,2時 間 撹 搾 した.反 応 溶 液 に 氷 水(50mL)を 加 え た 後,NaBH4 (2.14g,56.6㎜01)を ゆ っ くりと加 え,氷 浴 下 で10時 間 撹 搾 した,反 応 溶 液 に10%ク エ ン 酸 水 溶 液 を 加 え,沈 殿 物 を 溶 か し た 後 に,THFを 減 圧 濃 縮 に よって 除 去 した.残 っ た 水 溶 液 をAcOEt(50mLx3)で 抽 出 し,抽 出 溶 液 を10%ク エ ン 酸 水 溶 液(40mLx3),飽 和 炭 酸 水 素 ナ トリウム 水 溶 液 (40mLx3),飽 和 食 塩 水(40mLx3)で 順 次 洗 浄 した.有 機 層 を 無 水MgSO4で 乾 燥 後,溶 液 を減 圧 濃 縮 し,残 分 を シ リカ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ トグ ラ フ ィー(シ リカ ゲ ル:150g, CHC蓋3:MeOHニ9:1)で 精 製 す ることに より,11を 無 色 結 晶 として 得 た.収 量4.15g(88.8%);融 点38‑39℃.IH
NMR(CDC13)δ2.15(1H,t,ノ ニ6.6Hz),4.80(2H ,d,」=6.6 Hz).
β一(Penta¶uorophenyl)alaninehydrochlolide(15) 化 合 物14(200mg,0.503mmo1)に6MHCI(10mL)を
加 え8時 間 加 熱 還 流 した.反 応 溶 液 を減 圧 濃 縮 した 後,生 じた 粗 結 晶 を 水 か ら再 結 晶 して,15を 無 色 結 晶 とし て得 た, 収 量143mg(97.5%);融 点240‑251℃.IHNMR(D20)
δ3.08‑3.27(2H,m),4.07‑4,13(lH,m).19FNMR(282 (Penta伽orophenyl)methylbromide(12)
PBr3(5.00g)をEt20(10mL)に 溶 か した 溶 液 に,無 水 DMF(20mL)を 滴 下 し,10分 間 撹 絆 した,こ の 懸 濁 液 に, 化 合 物11(1.00g,5.94㎜01)の 鰍DMF(20mL)溶 液 を加 え,50℃ で1時 間 撹 搾 した.反 応 溶 液 に 冷 水(40mL) を加 え た 後,こ の 溶 液 をEt20(30mLx3)で 抽 出 した.抽 出 液 を 合 わ せ,水(20mLx3)で 洗 浄 した 後,無 水MgSO4
収 量237mg(71.2%);融 点137‑139℃.1HNMR (CDα3)δ1.35(9H,s),2.89‑3.01(4H,m),4.33‑4.36(IH, m),4.85‑4.92(1H,m),5.16(2H,s),6.47(1H,br),6.97‑
7。40(10H,m).
pv免 かButoxycarbonyl‑oLツ θ一(pentafluorophenyl)alanyl1‑
03‑benzylserinebenzylester(20)
化 舗16(200mg,0.563㎜ol)とH‑Sa(Bzl)‑OBzl(270
mg,0.676㎜01)か ら,20を 無 色 結 晶 とし て 得 た,収 量276 mg(78.8%);融 点111‑113℃.1HNMR(CDCI3)δ1.35
(9H,s),2.92‑3.31(2H,m),3.63‑3.95(2H,m),4.40‑4.47 (lH,m),4.74‑4.77(lH,m),5.18(2H,s),6.86(1H,br), 7.20‑7,35(10H,m).
【〈10L卜Butoxyca市onyl‑DL「 β一(penta刊uorophenyl)alanyl}
〜9‑nito顧oargininebenzylester(21)
化 合 物16(200mg,0563㎜01)とH・Arg(NO2)‑OBz1
(314mg,0.676㎜ol)か ら,21を 無 色 結 晶 と し て 得 た.殿 283mg(78.0%);融 点85‑90℃.1HNMR(CDC13)δ
1.36(9H,s),1.57‑1.93(4H,m),2.96‑3.30(4H,m),3.36‑
3.95(2H,m),4.40‑4.42(lH,m),4.64‑4.68(lH,m),5.19 (2H,s),7.04(lH,br),7.35‑7.41(5H,1n).
1V免 卜Butoxycarわonylphenyialanyl{DL一 β一(penta鯛uoro‑
phenyl)aIanine】benzylester(22)
化 合 物18(194mg,0.563㎜ol)とB㏄ 一Phe‑OH(217mg, 0.676㎜oDか ら,22を 無 色 結 晶 と し て 得 た 。収 量301㎎
(90.3%);融 点146‑148℃.1HNMR(CDC13)δL37(9H, s),2.95‑3.26(4H,m),4.30‑4,37(1H,m),4.80‑4.88(lH, m),5.11(2H,s),6.61(lH,br),7.15‑7.39(10H,m).
〜 α」f」Butoxyca市onyト03‑benzylseryl{DL一 β 一(penta何uoro。
phenyl)alaninelbenzylester(23)
化 合 物18(194mg,0.563㎜ol)とB㏄ 一Ser(Bzl)‑OH(232 mg,0.676㎜ol)か ら,23を 無 色 結 晶 とし て 得 た.収 量269 mg(90.0%);融 点ll5‑117℃.IHNMR(CDCI3)δ1.39
(9H,s),3.02‑3.39(2H,m),3.52‑3.85(2H,m),4.40‑4.57 (1H,m),4.84‑4.96(lH,m),5.17(2H,s),7.27‑7.38(10H, m).
〜 免卜Butoxyca市onyl‑〜9‑nitoroargininyl{DL‑19‑(penta一 例uorophenyりalanine】benzylester(24)
化 合 物18(194mg,0.563㎜01)とB㏄ 一Arg(NO2)‑OH (270mg,0.676㎜ol)か ら,24を 無 色 結 晶 と して 得 た.収 量320mg(88.0%);融 点83‑86℃.IHNMR(CDCI3)
δ1.42(9H,s),1.47‑1.70(2H,m),1.83‑2.05(2H,m),3.lI
‑3 .36(4H,m),4.09‑4.15(lH,m),4.81‑4.88(1H,m), 5。15(2H,s),7。20(1H,br),7.25‑7.39(5H,m).
[DL一β一(Pentafluorophenyl)alanyllpheny量alaninehydro‑
chlo醐e(25)(ジ ペ プ チ ド塩 酸 塩25〜30の 一 般 合 成 法) 化 合 物19(50.Omg,0.0844㎜01)を 酢 酸(1凪)と エ タ ノー ル(lmL)に 溶 か し,10%Pd(OH)2(20.Omg)を 加 え て 水 素 を 吹 き 込 み な が ら2時 間 撹 搾 した.反 応 溶 液 を 減 圧 MHz,D20)δ 一161(m),‑153(m),‑141(m).
〜免かButoxycarbonyl‑DL一 β一(penta押uoroρhenyりalanine (16)
化 合 物15(1.00g,3.24㎜01)を 水(20証)に 溶 か した 溶 液 に,B㏄20(848mg,3。89㎜ol)の ア セ トン 溶 液(20 mL)を ゆ っ くり滴 下 した,8時 間 撹 搾 した 後,減 圧 濃 縮 に よ
りア セ トン を 除 去 し,残 った 水 溶 液 に 無 水 クエ ン 酸 を 加 えpH 4に 調 整 した.水 溶 液 をAcOEt(20mLx3)で 抽 出 し,合 わ せ た 抽 出 液 を10%ク エ ン 酸(30mLx3)と 飽 和 食 塩 水 (30mLx3)で 順 次 洗 浄 した.有 機 層 を 無 水MgSO4で 乾 燥 後,溶 液 を 減 圧 濃 縮 した,生 じた 粗 結 晶 をAcOEtと ヘ キ サ ン か ら再 結 晶 し,16を 無 色 結 晶 と して 得 た.収 量1.15g (99.6%);融 点155‑158℃.1HNMR(CDC13)δ1.34(9H,
s),2,92‑3.Ol(2H,m),4.21‑4.27(lH,m).
〜 αLかButoxycarb◎nyトDL層 β一(pentafluorophenyりalanine benzylester(17)
化 合 物16(1,00g,281㎜01)とK2CO3(777mg,5.62
mmo1)をDMF(25mL)に 溶 か し た 溶 液 に,Bz1Br(958mg, 5.62㎜ol)を 加 え,5時 間 撹 絆 し た,反 応 溶 液 に10%ク エ
ン 酸 水 溶 液(40mL)を 加 え,AcOEt(20mLx3)で 抽 出 し
た.抽 出 液 を 合 わ せ,水(40mLx3),飽 和 炭 酸 水 素 ナ トリ
ウ ム 水 溶 液(40mLx3),飽 和 食 塩 水(40mLx3)で 順 次
洗 浄 し た.有 機 層 を 無 水MgSO4で 乾 燥 後,溶 液 を 減 圧 濃 縮 した.生 じ た 粗 結 晶 をAcOEtと ヘ キ サ ン か ら 再 結 晶 し,18 を 無 色 結 晶 とし て 得 た.収 量1.14g(91.6%);融 点123‑
125℃.1HNMR(CDC13)δ1.40(9H,s),3.05‑3.38(2H, m),4.59‑4.69(1H,m),5.28(2H,s),7.29‑7.40(5H,m).
DLrβ一(Pentafluorophenyl)alaninebenzylester(18) 化 合 物17(600mg,1.35㎜ol)を4MHCI/AcOEt(5
mL)に 溶 か し,2時 間 撹 搾 した.反 応 溶 液 に 飽 和 炭 酸 水 素 ナ トリウ ム 水 溶 液 を 塩 基 性 に な る ま で 加 え た 後,AcOEt(20 mLx3)で 抽 出 した.抽 出 液 を 合 わ せ,飽 和 炭 酸 水 素 ナ トリ ウム 水 溶 液(40mLx3)と 飽 和 食 塩 水(40mLx3)で 順 次 洗 浄 した.有 機 層 を無 水MgSO4で 乾 燥 後,溶 液 を 減 圧 濃 縮 した.生 じた 無 色 の 固 体 を これ 以 上 精 製 せ ず に そ の ま ま 次 の 反 応 に 用 い た,粗 収 量435mg(91.6%);1HNMR
(CDC13)δ1.40(9H,s),3.05‑3.38(2H,m),4.59‑4.69(1H, In),5.28(2H,s),7.29‑7.40(5H,m).
【〜免f」Butoxycarbonyl‑Dレ β一(pentafluor℃phenyl)alanyl】‑
phenylalaninebenzylester(19)(ジ ペ プ チ ド保 護 誘 導 体 ig〜24の 一 般 合 成 法)
化 合 物16(200mg,0.563㎜ol)とH‑Phe‑OBz1(173mg, 0,676㎜01)のCH2C12溶 液 に,HOBt(91.4mg,
0.676㎜ol)とEDC・HCI(130mg,0.676㎜01)を 氷 浴 で 冷 却 下 に 加 え た.反 応 溶 液 を 室 温 に 戻 し,5時 間 撹 搾 した 後, 減 圧 濃 縮 した.残 分 をAcOEt(20mL)に 溶 か し,10%ク エ ン 酸(10mLX3),飽 和 炭 酸 水 素 ナ トリウム 水 溶 液(10mL x3),飽 和 食 塩 水(10mLx3)で 順 次 洗 浄 した,有 機 層 を 無 水MgSO4で 乾 燥 後,溶 液 を 減 圧 濃 縮 した.生 じた 粗 結 晶 をAcOEtと ヘ キ サ ン か ら再 結 晶 し,19を 無 色 結 晶 として 得 た.
2.72‑3.ll(4H,m),3.97‑4.02(lH,m),4.05‑4.45(lH,m),
6.92‑7.14(5H,m).19FNMR(D20)δ 一166(m),‑159(m),
‑146(m) .MALDI‑TOFMS:fbundm/z403.4[M+Hr
(calcdfbrC18H15F5N203+H:403.1).
Seryl{DL一 β 一(pentafluorophenyりalaninelhydrochloride (29)
化 合 物23(50.Omg,0.0803㎜01)か ら化 合 物29を 無 色
粉 末 とし て 得 た.収 量19.5mg(64.0%);1HNMR(D20)δ 2.96‑3.22(2H,m),354‑3.81(2H,m),3.89‑3.95(1H,m),
4.54‑4.63(IH,m).19FNMR(D20)δ 一165(m),‑158(m),
‑146(m) .MALDI‑TOFMS:fbundm/z343.3[M+H]+
(calcdfbrC12HllF5N204+H:343.1).
Arginy1{DL一 β 一(pentafluor◎phenyl)alanine】dihydro‑
chlo而de(30)
化 合 物24(50.Omg,0.0844㎜01)か ら 化 合 物30を 無 色 粉 末 とし て 得 た.収 量7.50mg(17.4%);IHNMR(D20)δ
1.00‑1.44(4H,m),2.86‑2.93(4H,m),3.83‑4.02(2H,m).
19FNMR(282MHz
,D20)δ 一165(m),‑158(m),‑146(m).
MALDI‑TOFMS:R)undm/z412,9[M+Hj+(calcdfbr C15HI8F5N503+H:412.1).
参考文献
1) T. Sassa, T. Suhara, H. Ikehira, T. Obata, F. Griard, S.
Tanada and Y. Okubo, Psychiatry Clin. Neurosci. 56 (2002) 637.
2) M. Higuchi, N. Iwata, Y. Matsuba, K. Sato, K. Sasamoto and C. T. Saida, Nature Neuroscience 8 (2005) 527.
3) W. R. Dolbier Jr., J. P. Dulcere, S.F. Sellers, H. Koroniak, B.T. Shatkin and T. L. Clark, J. Org. Chem. 47 (1982) 2298.
濃 縮 し,残 分 をHCOOH(2mL)に 溶 か し て5時 間 撹 搾 した.
反 応 溶 液 を 減 圧 濃 縮 し,残 分 を 水(2mL)に 溶 か し た,こ れ を 逆 相 高 速 液 体 ク ロ マ トグ ラ フ ィ ー に よ っ て 精 製 し,凍 結 乾 燥 に よ っ て 無 色 粉 末 を 得 た,こ の 粉 末 に0.1MHCI(1mL) を 加 え て 再 度 凍 結 乾 燥 を 行 い,25を 無 色 粉 末 と し て 得 た.
収 量16.9mg(45.6%);1HNMR(D20)δ2。49‑3.12(4H, m),3.68‑3.81(1H,m),4.05‑4.13(lH,m),6.79‑6.91(5H, m).19FNMR(D20)δ 一165(m),‑158(m),‑146(m).
MALDI‑TOFMS:fbmdm/z403.0[M+H】+(calcdfbr C18HIsF5N203+H:403,1).
【Dし。β 一(Pentafluorophenyりalanyl1Serlnehydrochloride (26)
化 合 物20(50.Omg,0.0803㎜01)か ら化 合 物26を 無 色
粉 末 と して 得 た.収 量15.6mg(51.3%);1HNMR(D20)δ 3.17‑3.20(2H,m),3.56‑3.72(2H,m),4.07‑4.15(1H,m),
4.24‑4.30(lH,m).隻9FNMR(MHz,D20)δ 一165(m),‑158 (m),‑146(m).MALDI‑TOFMSlfbundm/z343.3[M+
H]+(calcdfbrC12HllF5N204+H:343,1).
【DL一β 一(Penta刊uorophenyl)alaninyl】argininedihydro‑
chloride(27)
化 合 物21(50,0mg,0.0844㎜01)か ら 化 合 物27を 無 色 粉 末 と して 得 た.収 量26.5mg(61.4%);lHNMR(D20)δ
1.12‑1.77(4H,m),2.95‑3.23(4H,m),3.82‑3.89(lH,m),
4.47‑4.63(1H,m>19FNMR(D20)δ 一165(m),‑158(m),
‑146(m) .MALDI‑TOFMS=飴undm/z412.7[M+H]+
(calcdfbrCI5HI8F5N503+H:412.1).
Phenylalanyl{DL一 β 一(pentafluorophenyl)alanine】hydm。
chloride(28)
化 合 物22(50,0mg,0.08覗 ㎜01)か ら 化 合 物28を 無 色 粉 末 とし て 得 た.収 量27.1mg(73.1%);1HNMRD20)δ
