序 文
HIV には，現在世界で流行している HIV-1 と HIV-2 の 2 種類が知られている
1）2）．さらに HIV-1 はグループ M，N，O に分けられ，グループ M の中でさらにサブタイプに分類されている．また 2 つ以上のサブタイプによる組換えウイルスも報 告されている
3）4）．多様なウイルスが世界で蔓延し ており，日本国内での感染だけでなく流行地域か らの帰国者の感染が増加傾向にある
5）．HIV 抗体 検査では，これら多様なウイルスに感染した場合 においても，検出出来なければならない
6）7）．今回 我々は，counting immunoassay 法（以下 CIA 法）
を測定原理とした「PAMIA-50」を用い，同機に対 応する HIV-1 抗体および HIV-2 抗体検出用試薬
（以下本試薬） の臨床応用の可能性に関して検討を 行った．CIA 法の特徴を利用して新たに考案され た判定法
8）が， 従来の凝集法よりも高感度であるこ と，自動化により迅速測定であることが期待され る．
材料と方法
1．抗体測定試薬と測定法
CIA 法を測定原理とする「PAMIA-50」免疫凝集 測定装置（Sysmex 社）を用い，新しく開発された 本試薬を検討対象とした．本試薬に用いられる HIV 関連抗原は，リコンビナント抗原や合成ペプ チド抗原からなる HIV-1：p24（gag 領域） HIV-1：
gp41，HIV-2：gp36（env 領域）そして HIV-1：p 31（pol 領域）の抗原をラテックス粒子上に感作し ている．CIA 法は，検体中の HIV 抗体と試薬中の 感作ラテックス粒子を反応させ，シースフロー中 でレーザ光を照射することにより，検体中の抗体
Counting immunoassay 法による HIV-1 2 抗体検出キットに関する基礎検討
国立国際医療センター，エイズ治療・研究開発センター
蜂 谷 敦 子 岡 慎 一
＊（平成 12 年 9 月 4 日受付）
（平成 12 年 10 月 23 日受理）
Counting immunoassay（CIA）法を測定原理とする自動分析装置「PAMIA-50」を用い，新たに開発 された抗 HIV 抗体検出用試薬の評価を行った．HIV 抗体陽性 100 検体，陰性 100 検体を用いた検討では，
検出感度，特異性ともに 100％ であった．本法は，検討した HIV-1 グループ M のサブタイプ A〜F，E F，C E，B O，グループ O，HIV-2 すべてを検出できた．この検討で従来法の 1 つは subtype A の 1 検体を検出出来なかった．また種々のパネル血清を用いた検討でも従来法と同等の結果が得られた．本 法の測定時間は 15 分と短く，多量の検体を処理することが出来た．そのためすでに PAMIA-50 の設置さ れている病院や施設において，本法は有用で信頼のおける検出法であるといえる．
〔感染症誌 75：103〜109，2001〕
要 旨
別刷請求先：（〒162―8655）新宿区戸山 1―21―1 国立国際医療センター，エイズ治療研究
開発センター 岡 慎一
Key words： counting immunoassay, anti-HIV antibody
Table 1 Intra-assay variation of CIA
Case C Case B
Case A Positive
control Cut off
control Negative
control
C.O.I.
T2 T1 C.O.I.
T2 T1 C.O.I.
T2 T1 T2 T1 T2 T1 T2 T1
31.82 70.40 15.17 27.07 60.17 5.52 16.29 37.00 2.37 49.38 3.52 4.00 1.69 1.86 1.51 1
31.80 70.35 15.31 27.27 60.61 5.63 16.93 38.39 2.41 49.06 3.51 4.63 1.66 1.86 1.53 2
31.89 70.54 15.41 26.55 59.07 5.64 16.09 36.57 2.52 49.81 3.61 3.81 1.62 2.03 1.69 3
32.12 71.03 15.75 26.59 59.14 5.79 17.01 38.55 2.49 48.67 3.61 3.92 1.60 2.13 1.62 4
31.77 70.28 15.40 26.83 59.66 5.50 16.60 37.68 2.42 48.47 3.46 4.14 1.61 1.91 1.59 5
31.87 70.51 15.36 26.36 58.66 5.32 16.87 38.26 2.54 48.32 3.42 4.14 1.70 1.90 1.69 6
31.94 70.65 15.85 27.34 60.77 5.78 15.67 35.68 2.51 47.88 3.38 4.13 1.64 2.02 1.59 7
32.33 71.49 15.67 27.36 60.80 5.63 16.35 37.14 2.42 48.17 3.50 4.10 1.65 2.03 1.56 8
32.36 71.55 16.11 26.73 59.45 5.82 16.62 37.71 2.45 50.70 3.71 4.32 1.62 2.06 1.63 9
32.11 71.02 15.94 26.74 59.47 5.56 16.31 37.04 2.56 47.42 3.23 4.13 1.71 2.08 1.58 10
32.00 70.78 15.60 26.88 59.78 5.62 16.48 37.40 2.47 48.79 3.50 4.13 1.65 1.99 1.60 mean
0.22 0.46 0.36
0.76 0.42
0.90 0.97
0.22 0.10
± SD
0.68 0.66 1.32
1.28 2.53
2.39 2.00
5.41 4.89
CV（%） ＊
＊：coefficient of variation CV ＝ SD/mean × 100
Table 2 Inter-assay variation of CIA
Case C Case B
Case A Positive
control Cut off
control Negative
control experiment
C.O.I.
T2 T1 C.O.I.
T2 T1 C.O.I.
T2 T1 T2 T1 T2 T1 T2 T1
32.97 71.2 16.05 27.29 59.28 5.52 16.66 36.95 2.24 48.32 3.31 4.07 1.48 1.97 1.44 day 1
34.39 71.22 15.68 27.88 58.14 5.24 17.45 37.18 2.21 47.51 3.26 4.11 1.52 2.10 1.49 day 2
33.73 71.49 15.79 27.52 58.70 5.56 17.16 37.36 2.20 48.94 3.39 4.07 1.52 2.01 1.48 day 3
34.14 72.31 15.73 27.79 59.23 5.56 17.16 37.33 2.21 48.68 3.29 4.04 1.47 1.98 1.49 day 4
33.81 71.56 15.81 27.62 58.84 5.47 17.11 37.21 2.22 48.36 3.31 4.07 1.5 2.02 1.48 mean
0.62 0.52 0.27
0.53 0.33
0.19 0.62
0.03 0.06
± SD
1.84 0.73 0.97
0.91 1.92
0.50 1.29
0.71 2.94
CV（%） ＊
＊：coefficient of variation CV ＝ SD/mean × 100
量に応じてラテックス粒子数（P：polymer）と未 凝集のラテックス粒子数（M：monomer）をカウ ントする．この P と M の和を T（total）とし，P T×100 を凝集度として算出する． この凝集度の算 出は，反応開始約 30 秒後と 15 分後の 2 回行い，
それぞれの P T を T1 値（％），T2 値（％）とす る． T1 値は抗体価を半定量する時に抗体過剰でプ ロゾーン現象が起こっていないかどうかを T2 値 と比較しながら用いる．T2 値はカットオフイン デックス （C.O.I.） の算出に用いる．C.O.I.の算出は，
検体の凝集度（T2 値）を S，陰性コントロールの 凝集度（T2 値）を N，カットオフコントロールの 凝集度（T2 値）を C とし，C.O.I.＝ （S-N） （C-N）を
用いた． 判定方法は C.O.I.が 1.0 以上を陽性 （＋） ， 1.0 未満を陰性（−）とした．なおカットオフコン トロールは既知の濃度の抗 HIV-1 2 モノクロー ナル抗体（ウサギ）であり，キットに添付されて いるものを使用した．
CIA 法の対照方法として，臨床検体を用いた一 致率では「アキシム HIV-1 2・ダイナパック」 （ダ イナボット） （以下 EIA 法） ， 「ジェネディア HIV- 1 2 ミックス PA」 （富士レビオ） （以下 PA 法）
9），
「ダ イ ナ ス ク リ ー ン・HIV-1 2」 （ダ イ ナ ボ ッ ト）
（以下イムノクロマトグラフィー法） ，市販の HIV
感染者パネル血清では PA 法を用いて抗 HIV 抗
体を測定した． 測定方法は， それぞれの添付マニュ
Table 3 Positivity of anti-HIV-1 antibody mixed low titer performance panel by CIA and PA
EIA（Abbott HIV1/2）＊ PA（GENEDIA
HIV1/2）
CIA sample no
judge C.O.I.
judge judge
C.O.I.
T2 T1
（＋）
7.5
（＋）
（＋）
14.59 46.35 3.88 PRB106-01
（＋）
1.8
（＋）
（＋）
1.94 8.38 0.74 PRB106-02
（＋）
2.0
（＋）
（＋）
18.38 57.72 5.84 PRB106-03
（＋）
8.9
（＋）
（＋）
13.52 43.13 3.48 PRB106-04
（＋）
17.6
（＋）
（＋）
16.38 51.72 3.22 PRB106-05
（−）
0.1
（−）
（−）
0.00 2.58 0.56 PRB106-06
（＋）
7.9
（＋）
（＋）
9.39 30.73 1.34 PRB106-07
（＋）
15.7
（＋）
（＋）
19.86 62.16 5.70 PRB106-08
（＋）
16.6
（＋）
（＋）
21.40 66.78 7.95 PRB106-09
（＋）
12.7
（＋）
（＋）
17.34 54.58 3.45 PRB106-10
（＋）
6.8
（＋）
（＋）
19.48 61.01 4.05 PRB106-11
（＋）
2.4
（＋）
（＋）
9.54 31.20 1.33 PRB106-12
（＋）
10.5
（＋）
（＋）
18.63 58.45 7.43 PRB106-13
（＋）
6.0
（＋）
（＋）
18.61 58.40 7.45 PRB106-14
（＋）
5.5
（＋）
（＋）
15.96 50.44 4.05 PRB106-15
＊：Data from panel data sheet
Table 4 Positivity of anti-HIV-1 and 2 antibodies mixed performance panel by CIA and PA
EIA（Abbott HIV1/2） ＊ PA（GENEDIA
HIV1/2）
CIA HIV-1 or 2
sample no
judge C.O.I.
judge judge
C.O.I.
T2 T1
（＋）
＞ 17.4
（＋）
（＋）
16.79 52.95 4.33 2
PRZ203-01
（＋）
＞ 17.4
（＋）
（＋）
20.49 64.04 8.57 1
PRZ203-02
（＋）
＞ 17.4
（＋）
（＋）
17.09 53.85 4.03 1
PRZ203-03
（＋）
＞ 17.4
（＋）
（＋）
20.86 65.14 5.43 2
PRZ203-04
（＋）
＞ 17.4
（＋）
（＋）
17.16 54.05 3.85 2
PRZ203-05
（＋）
＞ 17.4
（＋）
（＋）
23.19 72.14 12.58 1
PRZ203-06
（＋）
14.7
（＋）
（＋）
15.98 50.52 3.29 2
PRZ203-07
（−）
0.1
（−）
（−）
0.03 2.66 0.46 negative PRZ203-08
（＋）
14.9
（＋）
（＋）
21.34 66.58 4.98 2
PRZ203-09
（＋）
＞ 17.4
（＋）
（＋）
16.84 53.08 4.61 2
PRZ203-10
（＋）
7.6
（＋）
（＋）
18.34 57.60 6.81 1
PRZ203-11
（＋）
＞ 17.4
（＋）
（＋）
23.05 71.72 9.15 2
PRZ203-12
（＋）
＞ 17.4
（＋）
（＋）
22.37 69.67 8.17 1
PRZ203-13
（＋）
6.9
（＋）
（＋）
18.43 57.87 6.54 1
PRZ203-14
（＋）
17.2
（＋）
（＋）
15.70 49.67 3.48 1
PRZ203-15
＊：Data from panel data sheet
アルに従って行った．
2．被検血清
陽性検体として国立国際医療センターを受診 し，文書同意の得られた HIV 感染者 100 人の凍結 保存血清を抗体測定に供した． すべての検体とも，
ウエスタンブロット法により HIV 抗体が陽性で
あることが確認されている．また抗 HIV 抗体陰性 血清として健常人血清 100 検体を使用した．この 検体は同意取得後，本試験のために採取し，すべ てコード化し無記名で試験を行った．
このほか，市販の HIV 感染者パネル血清とし
て，Anti-HIV1 2 Combo Performance Panel （PRZ
Table 5A Detection of antibody in worldwide performance panel by CIA and PA
EIA（Abbott A × SYM HIV1/2） ＊ PA（GENEDIA
HIV1/2）
CIA subtype
sample no
judge C.O.I.
judge judge
C.O.I.
T2 T1
（＋）
29.8
（＋）
（＋）
22.52 70.14 10.48 O
WWRB301-01
（＋）
26.7
（＋）
（＋）
21.14 65.99 8.86 B
WWRB301-02
（＋）
52.3
（＋）
（＋）
23.75 73.82 11.87 A
WWRB301-03
（＋）
49.1
（＋）
（＋）
23.20 72.18 13.06 B
WWRB301-04
（＋）
24.3
（＋）
（＋）
19.93 62.36 6.00 C
WWRB301-05
（＋）
55.6
（＋）
（＋）
22.90 71.28 11.27 E
WWRB301-06
（＋）
32.1
（＋）
（＋）
19.70 61.67 5.28 E, F
WWRB301-07
（＋）
51.1
（＋）
（＋）
23.05 71.71 12.35 F
WWRB301-08
（＋）
3.7
（＋）
（＋）
1.49 7.03 0.60
― WWRB301-09
（＋）
3.8
（＋）
（＋）
1.52 7.13 0.65
― WWRB301-10
（−）
0.4
（−）
（−）
0.22 3.24 0.55 negative
WWRB301-11
（＋）
48.8
（＋）
（＋）
24.46 75.94 12.26 E
WWRB301-12
（＋）
52.9
（＋）
（＋）
23.44 72.88 11.29 E, C
WWRB301-13
（＋）
28.9
（＋）
（＋）
21.37 66.68 8.36
― WWRB301-14
（＋）
20.3
（＋）
（＋）
18.58 58.31 5.82
― WWRB301-15
（＋）
38.8
（＋）
（＋）
22.53 70.17 9.52 A
WWRB301-16
（＋）
24.9
（＋）
（＋）
21.55 67.22 9.84 B
WWRB301-17
（＋）
26.4
（＋）
（＋）
21.38 66.72 10.31 C
WWRB301-18
（＋）
28.5
（＋）
（＋）
20.70 64.67 4.44 A
WWRB301-19
（＋）
16.7
（＋）
（＋）
20.68 64.61 9.22 B
WWRB301-20
（＋）
60.9
（＋）
（＋）
22.82 71.02 10.23 C
WWRB301-21
（＋）
20.8
（＋）
（＋）
23.71 73.70 13.91 D
WWRB301-22
（＋）
33.0
（＋）
（＋）
24.87 77.19 15.24 D
WWRB301-23
（＋）
60.3
（＋）
（＋）
23.15 72.02 14.32 D
WWRB301-24
（＋）
20.5
（＋）
（＋）
21.86 68.16 12.25 D
WWRB301-25
（＋）
42.9
（＋）
（＋）
23.13 71.97 11.92 D
WWRB301-26
（＋）
5.8
（＋）
（＋）
4.33 15.55 0.73
― WWRB301-27
（＋）
44.9
（＋）
（＋）
22.50 70.07 11.25 A
WWRB301-28
（＋）
50.7
（＋）
（＋）
23.06 71.74 13.47 A
WWRB301-29
（＋）
27.0
（＋）
（＋）
23.73 73.75 10.80 B
WWRB301-30
（＋）
58.5
（＋）
（＋）
22.25 69.32 11.37 C
WWRB301-31
（＋）
32.1
（＋）
（＋）
22.83 71.05 9.86 B
WWRB301-32
（＋）
29.8
（＋）
（＋）
19.46 60.95 4.76 E, F
WWRB301-33
（＋）
40.2
（＋）
（＋）
22.33 69.55 12.40 E
WWRB301-34
（＋）
40.8
（＋）
（＋）
21.21 66.19 7.32 F
WWRB301-35
（＋）
4.7
（＋）
（＋）
6.71 22.71 0.96
― WWRB301-36
（＋）
19.2
（＋）
（＋）
5.96 20.46 0.77
― WWRB301-37
（＋）
30.0
（＋）
（＋）
21.59 67.35 11.65 C/E
WWRB301-38
（＋）
50.1
（＋）
（＋）
13.77 43.89 11.10 E/F
WWRB301-39
（＋）
30.2
（＋）
（＋）
22.27 69.37 11.44 E
WWRB301-40
（−）
0.4
（−）
（−）
0.00 2.56 0.49 negative
WWRB301-41
（＋）
19.0
（−）
（＋）
14.53 46.16 4.98 A
WWRB301-42
（＋）
54.8
（＋）
（＋）
23.66 73.55 13.21 C
WWRB301-43
（＋）
28.4
（＋）
（＋）
16.35 51.63 4.97 C
WWRB301-44
（＋）
22.6
（＋）
（＋）
9.58 31.30 1.54 B
WWRB301-45
（＋）
54.5
（＋）
（＋）
24.52 76.12 15.67 B
WWRB301-46
（＋）
23.0
（＋）
（＋）
15.42 48.84 3.86 B
WWRB301-47
（＋）
33.9
（＋）
（＋）
22.79 70.94 11.80 F
WWRB301-48
（＋）
40.8
（＋）
（＋）
23.23 72.27 13.99 B
WWRB301-49
（−）
0.5
（−）
（−）
0.78 4.92 0.61 negative
WWRB301-50
＊：Data from panel data sheet
Table 5B Detection of antibody in worldwide performance panel by CIA and PA
EIA（Abbott HIV1/2） ＊ PA（GENEDIA
HIV1/2）
CIA subtype
sample no
judge C.O.I.
judge judge
C.O.I.
T2 T1
（＋）
1.8
（＋）
（＋）
1.12 5.92 0.79 O
WWRB302-01
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
22.28 69.42 12.07 A
WWRB302-02
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
24.72 76.73 14.46 G
WWRB302-03
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
23.23 72.26 13.70 G
WWRB302-04
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
24.74 76.79 13.47 A
WWRB302-05
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
22.61 70.41 9.73 G
WWRB302-06
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
15.79 49.94 3.49 HIV-2
WWRB302-07
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
23.15 72.02 12.89 G
WWRB302-08
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
24.49 76.03 14.71 A
WWRB302-09
（−）
0.2
（−）
（−）
0.26 3.36 0.84 negative
WWRB302-10
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
19.70 61.66 6.00 HIV-2
WWRB302-11
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
24.18 75.12 14.76 C
WWRB302-12
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
21.93 68.37 11.08 A
WWRB302-13
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
19.93 62.35 7.10 D
WWRB302-14
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
22.71 70.71 11.08 D
WWRB302-15
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
24.40 75.76 13.25 D
WWRB302-16
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
23.69 73.64 13.06 D
WWRB302-17
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
24.05 74.72 11.45 C
WWRB302-18
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
21.85 68.12 8.88 C
WWRB302-19
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
24.32 75.54 11.32 C
WWRB302-20
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
24.41 75.80 13.19 B
WWRB302-21
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
23.74 73.78 11.17 E
WWRB302-22
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
22.26 69.34 10.51 E
WWRB302-23
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
22.01 68.61 10.46 E
WWRB302-24
（＋）
15.4
（＋）
（＋）
22.01 68.60 5.03 HIV-2
WWRB302-25
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
23.33 72.57 13.86 B
WWRB302-26
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
22.09 68.83 10.58 B/D
WWRB302-27
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
21.56 67.26 11.26 F
WWRB302-28
（＋）
＞ 16.1
（＋）
（＋）
22.17 69.09 13.49 B
WWRB302-29
（−）
0.2
（−）
（−）
0.53 4.17 0.73 negative
WWRB302-30
＊：Data from panel data sheet
203 ）， Anti-HIV1 Low titer Performance Panel
（PRB106） ，Worldwide HIV-1 Performance Panel
（WWRB301） （WWRB302） ，HIV-1 Seroconversion Panel（PRB929） （PRB931） （PRB932） （PRB935）
（PRB943） （PRB949） （PRB952） （PRB953） を使用し た．本研究は，平成 11 年 10 月の国立国際医療セ ン タ ー Institutioal Review Board（IRB）の 承 認
（H-11，J-97）を得た．
成 績
1．従来法との一致率
EIA 法陽性，ウエスタンブロット法陽性と確認 した 100 検体について，CIA 法で測定したとこ ろ，すべて陽性であり一致率は 100％ であった．
またイムノクロマトグラフィー法と PA 法で陰性
が確認できた 100 検体について，CIA 法で測定し たところ，すべて陰性であり一致率は 100％ で あった．
2．同時再現性
CIA 法の同時再現性を抗 HIV 抗体陰性コント ロール，カットオフコントロール，抗 HIV 抗体陽 性コントロールおよび抗体価が低，中，高値を示 す臨床検体（HIV 感染者血清 3 種）を用いて 10 回測定し検討した （Table 1） ．その結果，臨床検体 におけるカットオフインデックスの CV 値は 0.68
〜2.53％ であり，精度は良好な成績であった．
3．日差再現性
CIA 法の日差再現性をみるために，同時再現性
で使用したコントロールおよび臨床検体（HIV
Table 6 Detection of antibody and p24 antigen in HIV-1 seroconversion panel sera
Roche RNA PCR＊ Abbott
HIV Ag＊ PA（GENEDIA
HIV1/2）
CIA days
sample no
judge judge
judge judge
C.O.I.
T2 T1
（−）
（−）
（−）
（−）
0.00 2.48 0.59 0
PRB929-01
（−）
（−）
（−）
（−）
0.00 2.41 0.66 4
PRB929-02
（＋）
（−）
（−）
（−）
0.03 2.66 0.50 14
PRB929-03
（＋）
（＋）
（−）
（−）
0.06 2.75 0.68 18
PRB929-04
（＋）
（＋）
（−）
（＋）
2.69 10.63 0.71 21
PRB929-05
（＋）
（＋）
（＋）
（＋）
18.11 56.90 2.03 25
PRB929-06
（＋）
（＋）
（＋）
（＋）
21.57 67.29 4.47 28
PRB929-07
（−）
（−）
（−）
（−）
0.04 2.68 0.65 0
PRB949-01
（＋）
（−）
（−）
（−）
0.06 2.76 0.68 6
PRB949-02
（＋）
（−）
（−）
（−）
0.09 2.85 0.61 9
PRB949-03
（＋）
（＋）
（±）
（＋）
3.64 13.50 0.77 18
PRB949-04
（＋）
（＋）
（＋）
（＋）
9.21 30.21 1.36 20
PRB949-05
（−）
（−）
（−）
（−）
0.12 2.93 0.88 0
PRB952-01
（＋）
（−）
（−）
（−）
0.03 2.67 0.68 7
PRB952-02
（＋）
（＋）
（−）
（−）
0.17 3.09 0.64 10
PRB952-03
（＋）
（＋）
（±）
（＋）
4.64 16.50 1.09 14
PRB952-04
（＋）
（−）
（＋）
（＋）
18.55 58.23 3.39 17
PRB952-05
（＋）
（−）
（＋）
（＋）
21.20 66.16 7.89 21
PRB952-06
＊：Data from panel data sheet
感染者血清・低，中，高濃度） を用いて，4 日間に わたり測定し検討を行った．その結果，臨床検体 におけるカットオフインデックスの CV 値は 0.97
〜1.92％ であり，精度は良好な成績であった（Ta- ble 2） ．
4．市販のパネル血清を用いた CIA 法と PA 法 の比較
4． 1 抗 HIV 低抗体価パネル血清
抗 HIV 低抗体価パネル血清（BBI 社，Lot. PRB 106）について CIA 法と PA 法で抗 HIV-1 2 抗体 を測定して比較した（Table 3） ．陽性検体である 14 検体は CIA 法，PA 法ともに陽性であり，陰性 検体である PRB106-06 は両者とも陰性であった．
これらの結果は血清添付データ（Abbott HIV1 2）
と全て一致した．
4． 2 抗 HIV 1 型・2 型混合パネル血清 抗 HIV 1 型・2 型混合パネル血清（PRZ203）を 用いて CIA 法と PA 法で測定した（Table 4）．陽 性検体である 14 検体は，CIA 法，PA 法ともに陽 性，陰性検体である PRB203-08 はともに陰性であ り，血清添付データ（Abbott HIV1 2）とすべて一 致した．
4． 3 抗 HIV サブタイプ別パネル血清
グループ O，グループ M のサブタイプ A〜G さらに 2 種の混合組換え ウ イ ル ス E F，C E，
B D が含まれている抗 HIV サブタイプ別パネル 血 清（WWRB301，302）に つ い て CIA 法 と PA 法で測定し，それぞれの結果を Table 5A，Table 5B に示した．サブタイプ不明検体も含め，陽性検 体である 75 検体のうち CIA 法ではすべて陽性で あったが，PA 法では，サブタイプ A の 1 例偽陰 性となった （WWRB301-42） ．この結果は 3 回再検 を行ったが，すべて偽陰性であった．この検体に 対する CIA 法でのカットオフインデックス（C.O.
I.） は，14.5 と比較的高値であった．血清添付デー タの EIA 法，p24 抗原，RNA PCR の 3 者において も陽性が確認されており，PA 法の偽陰性が考え られた．また陰性検体である 5 検体については，
CIA 法，PA 法ともに陰性であった．
4． 4 感染経時パネル血 清 を 用 い た CIA 法 と PA 法の比較
HIV 感染後，経時的に採血された 8 例の感染者 経 時 パ ネ ル 血 清（BBI 社，Lot. PRB929，931，
932，935，943，949，952，953）に つ い て CIA
法と PA 法で抗 HIV-1 2 抗体を測定した．8 例中 5 例は，CIA 法と PA 法において抗 HIV 抗体は同 時に検出された．しかし残り 3 例については，両 者において乖離が見られ（Table 6） ，ともに PA 法に比べ CIA 法の方が先に検出された．CIA 法の み検出された検体では，血清添付データから p24 抗原，HIV RNA が PCR にて，同時もしくは先に 検出されていたことが確認された．
考 察
本研究にて，CIA 法を応用した抗 HIV-1 2 抗体 測定キットにつき，既に認可になっている従来の 抗体測定キットとの比較を行い，臨床応用の可能 性において検討した．臨床検体を用いて CIA 法と PA 法を比較したところ，一致率は陰性検体，陽性 検体ともに 100％ であり，同時再現性，日差再現 性の CV の値から精度の点ですぐれていることが 示唆された．低抗体価パネル血清では，PA 法と CIA 法は同等に抗体を検出し得た．現在，世界中 で多様化している HIV-1，HIV-2， およびサ ブ タ イプ間の異なる HIV-1 について，CIA 法はすべて 検出が可能であった．また感染経時パネル血清を 用いた検討では，p24 抗原が最初に検出される日 数は 8 例中 3 例については従来法にくらべ，早く 検出された．CIA 法は，1）IgM の検出が可能であ るため， 早期検出と凝集度の感度を引き上げる事，
2）フローサイトメトリー法を用いることにより 凝集塊を目視判定ではなく，ラテックス粒子の大
きさと数を反映した粒度分布を作成する事によ り，弱陽性の検体についても確実に検出できた，
本試薬および測定装置は，感度に優れ，簡便，安 全でかつ迅速に大量処理が可能なシステムであ る．従って，すでに PAMIA-50 が使用されている 施設において本キットは，日常検査および緊急検 査に役立つものと思われた．
文 献
1）Clavel F, Guetard D, Brun-Vezinet Fet al.：Isola- tion of a new retrovirus from West African pa- tient with AIDS. Science 1986；233：343―346.
2）Clavel F, Guyader M, Guetard Det al.：Molecular cloning and polymorphrism of the human immu- nodeficiency virus type 2. Nature 1986 ； 324 ： 691―695.
3）McCutchan FE, Salminen MO, Carr JKet al.：
HIV-1 genetic diversity. AIDS 1996；10：13―20.
4）松 田 俊 二，武 部 豊：分 子 疫 学 か ら み た HIV AIDS 流行．臨床と微生物 1988；25：289―293.
5）今井光信，近藤真規子，須藤弘二，他：PCR によ る HIV-1 サブタイプ（B と E）の鑑別．感染症学 雑誌 1997；71：918―923.
6） Busch MP , Lee LL , Sateen GA et al. ： Time course of detection of viral and serologic markers preceding human immunodeficiency virus type-1 serocoversion：implication for screening of blood and tissue donors. Transfusion 1995；35：91―97.
7）Schreiber GB, Bush MP, Kleinman SHet al.：The risk of transfusion transfusion transmitted viral infections. N Eng J Med 1996；334：1685―1690.
8）新改悦郎，本射滋己：PAMIA の測定原理．Sys- mex Journal 1997；20：77―86.
9）速水正憲：HIV-1 2 PA コンビネーションタイプ による HIV-1 抗体および HIV-2 抗体の検出．医学 と薬学 1994；31：943―951.
Evaluation of an Anti-HIV-1 2 Antibodies Detection Kit Based on Counting Immunoassay
Atsuko HACHIYA & Shinichi OKA
AIDS Clinical Center, International Medical Center of Japan
