免疫クロマトグラフ法による新しい RSV 迅速診断キットの評価 1）

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平成22年 5 月20日

免疫クロマトグラフ法による新しい RSV 迅速診断キットの評価

1）慈恵会中村病院，^2）なかた小児科，^3）浅村こどもクリニック，^4）佐竹小児科，^5）原土井病院臨床研究部

武内 可尚

中田 修二

浅村 信二

佐竹 幸重

池松 秀之

（平成 21 年 6 月 15 日受付）

（平成 22 年 1 月 25 日受理）

Key words : RS virus, rapid diagnosis, immunochromatography

はじめに

RS ウイルス（RSV）は，冬季に流行するポピュラー な呼吸器系ウイルスである．特に低月齢の乳児にとっ ては重い細気管支炎をおこす病原ウイルスとして，小 児科領域では広く知られている．RSV の認知に大き く貢献したのが，特別な技術や設備を必要としない，

簡便な RSV 抗原検出キットの普及である．1980 年代 後半に酵素免疫抗体法（EIA）によるキットが出現し

， 3 歳未満の入院児に使用する場合，保険点数 200 点が 算定できるようになった．2000 年ごろから，より簡 便・迅速に抗原検出が出来るように工夫された免疫ク ロマトグラフ法が主流となっている

．この度，標識 抗体に金コロイドを用いた RSV 迅速診断キット・イ ムノエース RSV（タウンズ）が開発され，その臨床 的有用性を 2 シーズンにわたり検討することが出来た ので報告する．

方 法

検体の採取：札幌，東京，高知県四万十市の 4 小児 科外来で評価試験への参加の同意が得られた患者を対 象に，鼻腔拭い液（NS）をキット付属の粘液拭い棒 で採取，キットに添付されている説明書に従って，直 ちに現場で実施した．検体抽出液の残部は福岡市の原 土井病院臨床研究部に患者情報とともに冷蔵輸送し，

RT-PCR に供した．

調査期間と検体数：2006 年 11 月から 2007 年 3 月，

2007 年 12 月から 2008 年 2 月，の 2 シーズンにわた り合計 253 件の NS を解析した．

患者カードの内容：患者イニシャル，各小児科での ID ナンバー，出生体重，生年月日，発症日，NS 採取 日，来院時体温，兄弟内での位置，保育園児か否か，

間接喫煙の有無，などであった．

得られた患者の個人情報は全て非公開とした．

結 果

1）2006! 2007 シーズンは 120 検体について検討で きた．RT-PCR を基準としたばあい，感度 74.3％，特 異度 100％，一致率 85％ となった．2007 ! 2008 シーズ ンは，133 検体について検討できた．感度 87.6％，特 異度 100％，一致率 91.7％ であった（Table 1）．これ ら 2 シーズンの成績を Table 2にまとめた．すなわち，

2 シーズン 253 検体についての感度は，81.8％（130!

159），，特異度 100％（94 ! 94），一致率 88.5％（224 ! 253）となった．

2）検体採取病日と陽性率についてみたのが，Fig.

1である．最も多い受診日は，第 2 から第 6 病日で，こ の間の検出感度は 90％ であった．RT-PCR では 15 病 日でも検出された例も認められた．

考 察

RS ウイルス（RSV）は，乳幼児にとって極めて重 要な呼吸器ウイルスである．乳児は，RSV 感染で，無 呼吸や重い細気管支炎に陥る

．RSV は毎年 12 月，1 月に流行のピークを示し，1 歳までに 70％ の乳児が 初感染する（Fig. 2）

．その後も生涯何度でも感染 する極めてポピュラーな風邪ウイルスの一つである．

そのため未熟児，先天性心疾患児には，重症化防止の ためにパリビズマブという，ヒト化 RSV モノクロナー ル抗体を，シーズン中毎月筋注して予防することが保 険で認められている

．RSV 感染を迅速簡便に検出す る診断キットが 20 年以上前から発売され，入院児の 場合，保険適用されてきたので，入院施設のある小児 科では，院内感染防止対策上欠かすことのできない キットである

．現在の迅速診断キットの主流はイム ノクロマト法で，感度を高めるあまり偽陽性が多くな る傾向がある

．今回開発されたイムノエース RSV キットは，06! 07，07! 08 の 2 シーズンにわたる乳幼

別刷請求先：（〒787―0029）四万十市中村小姓町 75 番地

中村病院小児科 武内 可尚

武内 可尚 他 310

感染症学雑誌 第84巻 第 3 号 Fig. 1 RSV-Positive Resultson Sampling Day ofIllness

Table 1 Testresultcorrelation between kitand RT-PCR RT-PCR 2006/2007 season

Nasalswab Positive Negative Total 52 0

52 Positive

Rapid DiagnosisKit

“ImunoAceRSV” Negative 18 50 68 120 50

70 Total

（52/70）

74.3%

Sensitivity

（50/50）

100.0%

Specificity

（102/120）

85.0%

Accuracy

RT-PCR 2007/2008 season

Nasalswab Positive Negative Total 78 0

78 Positive

Rapid DiagnosisKit

“ImunoAceRSV” Negative 11 44 55 133 44

89 Total

（78/89）

87.6%

Sensitivity

（44/44）

100.0%

Specificity

（122/133）

91.7%

Accuracy

Table 2 Testresultcorrelation between kitand RT-PCR RT-PCR 2 seasonsNasalswab

Total Negative

Positive

130 0

130 Positive

Rapid DiagnosisKit

“ImunoAceRSV” Negative 29 94 123 253 94

159 Total

（130/159）

81.8%

Sensitivity

（94/94）

100.0%

Specificity

（224/253）

88.5%

Accuracy

児の鼻腔拭い液 235 検体を RT-PCR による成績と突 き合わせた結果，感度も実際上 90％ と申し分なく，特 異度も 100％ となった．2 シーズンにわたって検証し た結果，イムノエース RSV の信頼度は，極めて高い ことが示された．

タウンズ社が開発したイムノエース RSV は，金コ ロイド粒子を用いた免疫クロマトグラフ法で，その判 定ラインは明瞭である（Fig. 3）．すでに分離されて

いる RSV を用いて，信頼度を調べたのと異なり，様々 な夾雑物が含まれている NS から RSV の成分を抽出 し，精度の高い結果をスピーデイに提供してくれるイ ムノエース RSV の臨床的有用性は極めて高いといえ る．ウイルス量の多い検体では，およそ 3 分で判定可 能である．また，従来市販されているキットでは，抽 出液の分注が必要なものや複数の抽出操作が必要なも のが多かったが，本キットの抽出液は 1 テストずつ小 分け分注されており，抽出操作も簡便である．キット に添付の拭い棒は，先端部にポリアミド繊維を使った 植毛タイプで，検体採取効率の向上と，患者に対する 負担の軽減が図られている．

かつては，3 歳未満児の入院例に限って保険の適応

が認められていたが，平成 20 年の診療報酬改定で，入

院例の年齢制限は撤廃され，保険点数は 150 点となっ

ている．しかし，RSV 感染症の成人領域での認知度

が，わが国では極めて低く，大きな問題である．Hall

や，Falsey らの調査では，成人の RSV 感染症でも医

学的・社会経済的インパクトは，インフルエンザにほ

ぼ匹敵することが示されている

．

新しい RSV 迅速診断キット 311

平成22年 5 月20日

Fig. 2 EpidemiologicalRSV pattern in subjectsunder3 yearsold -KawasakiMunicipalHospitalDepartmentofPediatrics-

Fig. 3 ImunoAce RSV testplate

RSV 感染症は，感染症発生動向調査（サーベイラ ンス）の対象疾患である．しかし外来での RSV 診断 キットに保険適応がない現実はサーベイランスを不完 全なものにしている．乳児の保護者が風邪をひき，診 療所に受診しても，RSV 感染とのウイルス学的病原 診断をされないまま，それを家庭に持ち込んで乳児が 重篤な細気管支炎に陥る，というのだけは避けたい．

わが国でも，先進的内科医の中では，成人領域での RSV 感染症が最近注目されるようになった

．インフ ルエンザシーズンと RSV の流行期が重なるだけに，外 来診療の場はもとより，施設内感染でも，ウイルス感 染を考えることが重要である．今回，新しく開発され た RS ウイルス感染症の迅速診断キットを評価する機 会を得たが，本キットの信頼度は高く，簡便な操作性 を有しており，今後の RS ウイルス感染症の迅速診断 に有用である．インフルエンザウイルスやアデノウイ ルスだけでなく，RS ウイルスの迅速診断キットが加 わることで，感染症の病原診断に寄与する範囲が広が

り，抗生剤の適正使用にも繋がるものである．

本稿の要旨は，第 74 回日本小児科学会高知地方会（9!21!

08）並びに第 78 回日本感染症学会西日本地方会（12!5!08）

で発表した．このトライアルのきっかけを与えてくださっ たサイ・リサーチの福田徹三氏に感謝します．

文 献

1）Wren CG, Bate BJ, Masters HB, Lauer BA：De- tection of Respiratory Syncytial Virus Antigen in Nasal Washings by Abbott TestPack En- zyme Immunoassay. J Clin Microbiol 1990；

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2）七種美和子，武内可尚，長 秀男，安倍 隆，宗 村徹也，川上千春：イムノクロマトグラフィー を用いた respiratory syncytial virus 診断キット の検討．感染症誌 2003；77：443―50.

3）由 井 郁 子，渡 辺 幸 恵，安 倍 隆，渡 辺 淳，武 内可尚：未然型乳児突然死症候群（near miss SIDS）を来した RS ウイルス感染症の 3 例．日 児誌 1988；92：1577―82.

4）Glezen WP, Taber LH, Frank AL, Kasel JA：

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543―6.

5）武 内 可 尚：RS ウ イ ル ス 肺 炎．小 児 科 臨 床 2002；55：674―81.

6）武内可尚，長 秀男，山下行雄，御宿百合子，中 尾 歩，麻生泰二，他：早産児および慢性肺疾 患児における palivisumab の安全性および薬物動 態の検討．日化療会誌 2002；50：215―22.

7）武内可尚，山口由美，渡辺 淳，服部春木，青 山辰夫，安倍 隆，他：RS ウイルス感染症の院 内感染．臨床とウイルス 1990；18：186―91.

8）新庄正宜：感染症迅速診断キットの進歩と課題 RS ウイルス．小児科臨床 2008；61：189―93.

9）Hall CB, Long CE, Schnabel KC：Respiratory syncytial virus infections in previously healthy

武内 可尚 他 312

感染症学雑誌 第84巻 第 3 号 working adult. Clin Infect Dis 2001；33：792―6.

10）Falsey AR, Hennessey PA, Formica MA, Cox C, Walsh EE：Respiratory syncytial virus infection in elderly and high-risk adults. N Eng J Med 2005；352：1749―59.

11）河合直樹，池松秀之，岩城紀男，川島 崇，前 田哲也，廣津伸夫，他：PCR による高齢者を含 めた RS ウイルス検出例の検討―新しい迅速診断 キットの試用経験を含めて―．感染症誌 2008；

82：1―5.

A New Rapid Diagnostic Kit for Respiratory Syncytial Virus Infections Evaluation Yoshinao TAKEUCHI

, Shuuji NAKATA

, Shinji ASAMURA

,

Yukishige SATAKE

& Hideyuki IKEMATSU

1)Jikeikai Nakamura Hospital,²⁾Nakata Pediatric Clinic,³⁾Asamura Childrens Clinic,⁴⁾Satake Pediatric Clinic,

5)Clinical Research Laboratory, Haradoi Hospital

〔J.J.A. Inf. D. 84：309〜312, 2010〕