Posted at the Institutional Resources for Unique Collection and Academic Archives at Tokyo Dental College, Available from http://ir.tdc.ac.jp/
Title
№２：喉頭軟骨構成要素の発生学的研究∼三次元的形態
計測と免疫組織化学的観察∼
Author(s)
渡辺, 多恵; 北村, 啓; 小高, 研人; 石川, 昂; 山本,
仁
Journal
歯科学報, 119(3): 233-233
URL
http://hdl.handle.net/10130/4919
Right
Description
目的：咽頭と食道の境界部は食道入口部と称し，そ の上部粘膜下には輪状軟骨から起始する輪状咽頭筋 が走行し，下部の食道筋束と隣接している。この食 道入口部は括約筋として，胃からの逆流物を気道へ 誤嚥させないための役割を担うが，近年誤嚥性肺炎 に食道入口部の機能の加齢による衰えが関係してい るとの指摘がある。これまで食道入口部を構成する 筋束の構成については報告が少なく不明な点があ る。そこで本研究では食道入口部高齢者献体標本を 用い，食道入口部の筋束の構成に関する組織学的お よび免疫組織化学的染色による検索を行い，同じ括 約筋としての機能を有する肛門との組織構造の違い について考察を試みた。 方法：東京歯科大学解剖学講座所蔵の解剖実習用献 体２２体（女性１０体，男性１２体，平均年齢８５歳）から 摘出した食道入口部付近の組織を観察材料とした。 資料摘出後，通法に従い固定および包埋処理後，連 続薄切切片を作製した。形態観察のために H-E 染 色，弾性線維観察のためにエラスチカ・ワンギーソ ン染色，平滑筋組織の観察のために anti-αSMA 抗 体を用い免疫組織化学的染色を施した。 結果および考察：形態学的観察の結果，食道の内側 輪状筋と外側縦走筋の最上部が輪状咽頭筋と連続性 を有し，その前外側では両筋束が結合していた。さ らに内側輪状筋の一部筋束が，内喉頭筋である後輪 状披裂筋の筋膜と連続性を持つなど，咽頭・喉頭・ 食道の構造的な関係の一端が明らかとなった。また αSMA 陽性細胞，すなわち平滑筋が食道入口部の 下部に多く観察されたものの，輪状咽頭筋と接する 像がみられなかった。これまでの報告から，直腸は 肛門挙筋によって挟まれており，肛門挙筋の横紋筋 線維は直腸の縦平滑筋と連続していることが報告さ れている。しかしながら，咽頭と食道においては横 紋筋と平滑筋の連続性は観察されなかった。よって 括約筋としての構造は肛門と比較し弱く，何らかの 原因で機能低下に陥った組織が容易に胃からの逆流 物を上方へ通過させてしまう可能性が考えられた。 目的：喉頭腔は上部を咽頭，下部を気管に挟まれて 存在し，声門と呼ばれる狭窄部を含んでいる。この 喉頭腔を支持するのは喉頭軟骨（LC）であり，甲 状軟骨（TC），輪状 軟 骨（CC），一 対 の 披 裂 軟 骨 （AC）から構成される。発生初期に声門は内胚葉 性の上皮に裏層されるが，その肥厚により喉頭腔は 一時的に閉鎖する。この閉塞時に LC が形成を開始 すると報告されているが，声門の再開通と軟骨形成 の関連性は不明である。そこで本研究は声門の再開 通前後における，胎生期喉頭軟骨の成長過程の解明 を目的とした。
方 法：胎 生１３．５∼１７．５日（E１３．５∼E１７．５）の ICR マウスを用いた。通法に従いパラフィンに包埋した のち連続切片を作製し，Alcian Blue 染色後，喉頭 全体の顕微鏡写真を撮影した。取得した画像を二値 化処理し，画像処理ソフトウェアにより TC，CC， AC および喉頭腔を抽出し，構造解析ソフトウェア で立体構築を行った。この立体構築像を用いて各軟 骨 の 体 積，TC と CC の 高 径，幅 径，前 後 径，AC の前後径（筋突起から AC 上端と AC 下端の距離） を計測した。また軟骨細胞の分化過程の観察のため に抗 SOX９抗体，抗 Collagen typeⅡ（ColⅡ）抗 体
を用いた免疫組織化学染色を行った。
結果および考察：E１３．５では抗 SOX９抗体と抗 Col
Ⅱ抗体に対する陽性反応は LC の概形に沿って発現 し，将来 LC を構成する各軟骨間にも連続的に陽 性反応を認めた。E１４．５では LC を構成する TC， CC，AC はそれぞれ独立して観察された。この時 期喉頭腔は声門の上皮により分断され，上皮内には 泡沫状の構造を認めた。抗 SOX９抗体陽性軟骨細 胞は抗 ColⅡ抗体陽性を示す範囲外にも多数認めら れた。E１５．５では LC は拡大し，声門上皮内の泡沫 状 構 造 は 連 続 し て 管 状 を 呈 し た。E１６．５で LC は 急速に拡大するとともに，声門は再開通した。抗 SOX９抗 体 陽 性 軟 骨 細 胞 は 減 少 し，肥 大 し て い た。立体画像の計測では各軟骨の体積は経時的に増 加した。特に TC 幅径，CC 高径，AC 前後径は E １５．５から E１６．５での増加が著しかった。以上の結果 から，LC は発生初期に一塊で存在するが，方向性 をもった拡大により TC，CC，AC が独立して形成 されていく過程が明らかとなった。また声門が再開 通される時期に軟骨細胞の成熟と細胞増殖が同時に おこり，各軟骨が急速に成長すると考えられた。
