家兎嗅粘膜の組織化学的研究

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家兎嗅粘膜の組織化学的研究

金沢大学医学部耳鼻咽喉科学教室（主任松田龍一教授）

今村昭治

（昭和35年12，月20日受付）

本論文の要旨は第131回日本耳鼻咽喉科学会北陸地方会例会，

第7回耳鼻咽喉科学会中部地方連合会で発表した．

第1編正常家兎嗅粘膜の組織化学

近年組織学の新しい一方面として各種の組織化学的方法が相次いで創案されるに従って，わが科領域においても，扁桃や下甲介粘膜，あるいは上顎洞粘膜匠応用され，とくに内耳においては核酸，脂質を中心に詳細な観察がなされており，また人，家兎，ラットの呼吸部鼻粘膜にはTaylor 1）の系統的研究があるが，嗅粘膜に関しては未だ報告をみない状態である．

家兎嗅上皮に関する研究では数多き先入の学識に接することができ，また固有層とくに測試については，

Heidenhain， Dogiel， L6wis以来検索され，本邦では沢田2）等によってその形態学的観察がなされておる．

しかし，単なるヘマトキシリン・エオジン染色を主とする純形態学的観察では従来以上の発展を望むことはむつかしく，細胞の物質代謝の面から多糖類，核酸，

および脂質の分布およびその消長を知ることは，最近この方面にも画期的に新しい分野を開きつつある電子顕微鏡の導入とあいまって，嗅粘膜機能の解明のうえからも興味あるものと考える．

研究材料並びに研究方法

使用した材料は，健康な雄の家兎で体重2kg前後の身体各部に病的変化を認めず，ことに耳鼻咽喉科領域においては何等異常所見を示さないものを求め，少なくとも1週間その生活状態を観察し，少しも変調を来さないものだけを実験に供した．

由来わが科領域において動物固定に関しては，洗源生体固定法が最も優秀な固定法とされておるが，鼻腔は聴器等の深く骨壁内に存在する器管と異なり，固定液の到達比較的容易であるので生体固定法を採らなかった．そして，鼻腔への固定液の浸入を容易にするためには河野3）が行なった方法にならった．すなわち，

心臓への空気栓塞により致死させたのち，鼻骨正中線

に垂直の方向で両側眼窩中心をよぎり鋭利な鋸でこれに前頭断を行ない，各染色法に応じた固定液のなかに投入する．以上の操作はほぼ10分以内に完了することができる．固定中は時々固定液を振回させ，その組織への浸透をはかる．鼻腔は鼻前庭，呼吸部，嗅部からなるが，家兎では嗅部は後甲介，鼻嚢の後半部，ならびにこれに対向する鼻中隔上半部に相当し，肉眼的にも淡褐色を呈し，帯紅色の呼吸部粘膜よりはるかに厚いので，容易に区別することができる．材料は，嗅部のうち比較的損傷することなく取出しうる鼻中隔嗅部のものを使用したが，それでも材料を破損し目的を達しないことが屡々あった．固定後鼻腔を開き，慎重に鼻中隔軟骨から剥離された嗅部粘膜の切片は，上皮表面に対する垂直断切片標本としたが，パラフィン包埋の間に粘膜が熱により巻紙のように容易に巻き込み，切片薄切にさいし常に考慮をはらった．切片はいずれも馳とし，ヘマトキシリン・エオジン染色を施し，参考としたほか次の染色を行なった．

1．多糖類およびグリコーゲン

非処置切片，唾液消化およびジアスターゼ消化後の

切片にMcManus氏染色法すなわちPAS反応を行

なった．

2．核酸

a．Feulgen反応および1N塩酸による加水分解を行なわない対照切片

b．非処理切片，1N塩酸（57。Cに加温）に10分間処理後の切片および三塩化酢酸による消化試験後の切片をUnna−PapPenheiln氏ピロニン・メチール緑染色液で染色した．

c．非処理切片および1N塩酸（57。Cに加温）で 30分蘭処置した切片を0．5％チオニン水溶液で染色し

た．

Histochemical Studies on the Olfactory Mucosa of Rabbit． Sy6ji Imamura， Department of OtQ−laryngology（Director：Prof． R． Matsuda）， School of Medicine， University of Kanazawa．

(2)

3．脂質

Feldman氏ズダン黒B染色法によった．

嗅粘膜の組織学的所見

嗅粘膜の組織化学的観察に先立ち，まずその正常構造を理解しておく必要がある．この目的のために正常家兎嗅粘膜を採取し，これにヘマトキシリン・エオジ

ン染色を施したが従来報告されておる文献から得た一般的知見とほぼ一致するので，記載は主要所見にとどめたい．

すでに沢田4）等によって記載されておるように，嗅粘膜は，嗅上皮と固有層との二部からなりその表層はクチクラ小謡，嗅境界層，または透明層等と呼ばれる厚さおよそ馳の無構造物質からなるが，これは嗅腺の分泌物にほかならないので，副島5）は分泌物層と命名しておる．上皮は平均12加の厚さを有し，三種の細胞すなわち支柱細胞，嗅細胞および基底細胞から構成されておる．支柱細胞の核は主として楕円形で濃染し，上皮の表面に近く並び，嗅細胞の核は円形，高さは種々でおよそ10層内外重積し，上記楕円球帯の下方に広い円核帯をなしておる．基底細胞は：その形円錐形で，核は円形または楕円形で，上皮と結合織との境界線に沿うて一列に配列しておる．

固有層には，Bowman氏嗅腺，血管網，嗅神経束が含まれ，この間に結合織が存する．多数の嗅腺，および血管とくに静脈は固有層の比較的表層部を占め，

動脈小幹，神経線維は比較的その深部に存在するのが認められる．Bowman冷評細胞は単管状腺または分岐管状腺であるが一層であり，その形状は大体短円柱状かまたは般子形である．一般に腺底部において細胞底面ひろく円錐形に近い外形を示し細胞は互いに密着し，その他の部分では細胞個々の形状種々で細胞の排列も多少乱調を呈しておるが，粘膜上皮に近づくに従い漸次単調となり，遂に上皮に入り排泄管に移行する．排泄管は上皮層を縦につらぬいて表面に開比して

おる．

嗅粘膜の多糖類（1）実験方法

1946年 cManus）7）によって用いられ，韮948年 Hotchikiss 8）により立派な業績があげられたPeriodic Acid schiff法（以下PAs法と略）により嗅粘膜に

出現する多糖類の組織化学的検索を行ない，さらに唾液，ジアスターゼ消化による多糖類の状態を追求し

た．

過ヨード酸による染色理論は次のように考えられて

おる．過ヨード酸（HIO4十2H20）が糖のOH基に作用してアルデヒド基を遊離させ，これがSchiff氏試薬のフクシンと結合七て赤色ないし赤紫色を呈すると考えられる．すなわち一CHOH−CHOH一＋H5106→

CHO−CHO−H103十3H20 固定および染色方法

固定はCarnoy氏第1，液（無水アルコール30＋氷

門一脚一一一一

酢酸10）で2時間行ない，パラフィン包埋を行ない，

型のごとく切片標本を作る．

i）

ii）

漬．

iii）

iv）

v）

脱パラ

0．5％過ヨード酸水溶液中に切片を5分間浸

蒸溜水で充分水洗．

Schiff氏試薬中に15分間浸：漬．

亜硫酸水を別々の蓋のある容器3個にとり，

各々2分間ずつ浸漬．

vi） 5分間蒸溜水で水洗．

・ii）ヘマトキシリン液で切片オ塵

viii）5分間蒸溜水で水洗．

ix）95％アルコール，純アルコール脱水．

X）キシロール透徹，バルサム封入．

結果・陽性部は赤色ないし赤紫色に血染．

Schiff氏試薬Merck製の塩基性フクシン19をよくすりつぶし200ccの熱湯中に徐4に溶かして振盤しながら混和する．これを50。Cに冷却した後に濾過し，20ccの1N塩酸を加える，さらに冷却して25。C にし，無水酸性亜硫酸ソーダ1gを加え，約24時間暗所で室温に放置する．このようにしてフクシン亜硫酸液が完成し，液は淡黄色に着色しているが，これを密栓し冷暗所に保存したものを使用した．試薬がバラ色を呈するようになり，作製後1カ月以上経過した場合は，フクシンが再生したり染色に際し不完全性を示すので放棄した．

…水 o二等硫酬水溶畿

（使用の都度作製）

またPAS法はおおむね非特異的で，さらにこれを鑑別するために唾液消化試験およびジアスターゼ消化試験を行なった．

唾液4ccにpH 7．0の燐酸緩衝液（KIH2PO4・Na2 HPO4）1ccを加えた液を切片上に37。C，1時間作用させたものである．

グリコーゲンが存在する場合は，唾液またはジアスターゼ溶液によって消化されて，その部の多糖類染色は陰性となる．グリコーゲン以外の多糖類があれば，

(3)

唾液またはジアスターゼ消化後も多糖類染色は陽性に出現する．

（2）検索成績 A 嗅上皮

a）透明層この部はPAS染色により強い赤紫色の染色性が認められる．すなわち粘膜表面に均質な帯状をなして濃染しているのをみる．

b）支柱細胞，嗅細胞，基底細胞これら細胞間の接合物質（Klittsubstanz）にも微細な陽性頼粒として認められる．

c）基礎膜かなり強いPAS陽性物質の存在を示

す．

B 固有層

a）Bowman二二腺細胞原形質は部位により短円柱状，般子形または円錐形を呈しておるが，一般的にいってその十三に面した部分に穎粒状の赤紫色を呈

するPAS陽性物質が密集しているのが認められる．

なおこれを詳細に観察すると，同一の腺腔を囲む腺細胞個々の間にも種々の異なる反応がみられる．頼粒は腺腔に面するほど密度が高く，頼粒の比較的多い細胞では，核上部の原形質，細胞境界部等にも陽性顎粒がみられるが，細胞基底部には全く染色性が認められない．これら細胞内赤染物質はBowman氏腺細胞分泌物の前段階物質であろうと思われる．腺腔は内容を充たし陽性を呈するものと，空虚で染色されないものとがある．

b）排泄管上皮細胞の内層に弱卜しているところがある．ことに頼粒密度は管腔に面した原形質に高くなっている．管腔には禰蔓性に陽性の内容物がつまっ

ておる．

c）血管壁動脈内層に幾層かの輪状になり帯状となり血管壁を囲んで中等度陽性，その他の部分に一様第1表正常家兎嗅粘膜における多糖類

13 14 21 22 23 29

嗅

上

皮

固

有

層

透 ^明二十

支柱細胞

嗅細胞

基底細胞

原形質核原形質核原形質核

基礎工十十

腺細胞

表層

基底原形質核原形質核

二 ^十十、

腺

腔1＋又一収一＋又■双一1収一［収■収一

細胞排泄管上皮

内層外層

原形質核原形質核

？十十十十十十

管

劃収刊収一収■収一1＋又■収■叔一

壁束織

経

管合

神

血嗅結

備

考

．±．±±

鰹騰騰

嗅四物微状脈状．±．±±

同左

．±︒±±

同左

．±．±±

同左

．±．±士

同左

．±．±±

同左

．±．±±

同左

(4)

に．軽度の反応を認める．

d）嗅神経束，結合織も弱陽性に反応する．

標本にあらかじめ唾液消化またはジアスターゼ消化試験を行なってもほとんど影響をうけないようであ

る．

（3）小括ならびに考按

多糖類に関しては従来はグリコーゲンが主な対象であったが，最近ではMcManus氏法をはじめとし多くの染色法が応用されておる．過ヨード酸による多糖類染色によって陽性に発現するものは，Glick（1949）

9）によれば，動物組織では主としてグリコーゲン，ムチン，粘液蛋白，ピアルロン酸，ムコイチン硫酸，キチン，セロブロシド，植物組織では澱粉，セルローズ，ヘミセルローズ，ペクチンであるという．また Pearseはグリコ〜ゲン及びリポイドを含む多糖類のほかに粘液多糖類，粘液蛋白あるいは糖蛋白が陽性であるといっておる．。嗅粘膜において主として多糖類陽性を示したのは，

Bowman氏腺細胞の腺腔に面した部分，その腺腔内内容物，排泄管のとくに内層，排泄管内内容物，透明層，基礎膜であった．このうち腺腔内→管腔内→透明層と陽性部をたどれるところがら，腺細胞内の陽性物質は分泌物の前段階物質であり，恐らく核上部の原形質において形成されたPAS反応陽性穎粒が，成熱しながら腺細胞内を移動，上昇して腺腔内へ排出される

ものと思われる．

唾液消化，ジアスターゼ消化試験後も非処置切片とほぼ同様に呈色し，抗ジアスターゼ性が証明されるので，嗅粘膜のいずれの部分に含まれる多糖類もグリコーゲンではなく，他の複雑な多糖類と考えられる．

固定液に関して．各種の粘液多糖類はいずれも水溶性で，その程度も著しいものがあるので，ホルマリン液は不適当とされ，Carnoy氏固定液のような脱水剤が適当であるとされているが，固定による影響をしるために，さきに予備実験としてこの両者による比較を試みた．その結果，Bowman二三細胞においてやや色調の差異を認めたが，固定による量的差異は認められない．しかしホルマリン固定のものは分泌物層，基礎膜，血管壁においては，Camoy氏固定液によるものに比べやや陽性度が劣るように見受けられ，従来からいわれておるように，嗅粘膜のPAS染色においてもCarnoy氏液による固定がすぐれておるように思われる．またCarnoy氏固定液は（無水アルコール60十クロロホルム30＋氷酢酸10）であるが，Lison lo）は Carnoyが提案した最初の固定液（無水アルコール30

＋氷酢酸10）の方が組織の収縮が少なく固定は極めて

良好であると賞用しており，この両者も比較してみたが著明な差をみなかった．わたくしは，PAS法およびピロニンーメチール緑染色にさいしては好んでCar−

noy氏第1液を使用した．

嗅粘膜の核酸 A Feulgen反応

（1）実験方法

染色理論は，DNオキシリボ核酸（DNA）が酸による加水分解によってプリンが遊離し，チミン酸ポリヌクレオチドとなり，デスオキシリボースのアルデヒドが露出する．この2分子のアルデヒド基とSchiff氏試薬の無色亜硫酸フクシン1分子が結合して発色するものである．すなわちF反応はDNAに陽性であり，

リボ核酸（RNA）には陰性に作用する．

固定および染色方法

昇禾氷酢酸液（6％昇二水100cc＋氷酢酸2cc）で 24時聞固定を行なったのち切片作製．

i）脱パラ．

ii）1N塩基で洗う．5分間．

iii）60。Cの1N塩酸中に4分間．

iv）更に1N塩酸5分間，

v）水洗して加水分解を中断．

vi）Schiff氏試薬中に1〜1．5時間．

vii）亜硫酸水で3回切片を洗浄．

viii）水洗．

ix）脱水．

X）キシロールで透徹，バルサム封入．

結果・陽性部は赤紫色に着染．

Schiff氏試薬は多糖類染色に用いたと同様のものを使用したが，亜硫酸水は200ccの蒸溜水に10％無水酸性亜硫酸ソーダ液10ccおよび1N塩酸10ccを加えて混合したものを使用に際して新調して用いた．

（2）検索成績

嗅粘膜においては，嗅細胞の核膜に接するクロマチンおよび核内のクロマチン頼粒が染色され，F反応陽性である．支柱細胞，基底細胞の核膜に接するクロマチンおよび核内のクロマチン穎粒もほぼ同様に染まり，染色上この三者の間に差異を認め難い．固有層では神経束のSchwam氏核が強く染色される． Bow・

man氏腺細胞においても核膜に接するクロマチンおよび核内のクロマチンは嗅上皮細胞の核に比べてはるかに淡く染まる．また固有層結合組，血管壁の核も弱染する．すなわちDNAは嗅粘膜において常に核内にだけ認められ，細胞原形質中には見出されない．

なお本染色標本では，成書に記載されておるように

(5)

美麗な赤紫色に染まらず，やや褐色がかつていたが，

塩酸の加水分解を経ない対照標本ではほとんど全く染色されないので，すなわち陰性成績を示し，以上所見の着旧物質はDNAにほかならないと考えておる．

（3）小雨および考按

F反応では，1N塩酸60。Cで処理すると， RNA が失われ，あとにはDNAが残る． DNAは普通は核に，RNAは仁および細胞質に分布しておる．浜崎11）

によれば，F反応で陽性になるDNAは，蛋白と結合したD：NAおよび高度に重合されたDNAであって，

遊離したDNA，解合されたDNAおよびNucleotide，

Nucleoside等は組織内では・F反応陰性であるといっておる．Lisonよれば， DNAの証明にはF反応が特異性であり，定性的にも定量的にも正確であるという．わたくしが上に述べたように，嗅粘膜のF反応はその上皮細胞には強く，固有層に含まれる細胞には弱くあらわれた．従ってF反応からみれば，嗅上皮細胞にはDNAが多量に含有されていることを思わし

める．

B ピロニン・メチール緑染色（1）実験方法

固定はCarnoy氏第1液（純アルコール30十氷酢酸 10）で3時間．

染色はBrachet氏法12）による．

i）パラフィン切片作製．

ii）脱パラ iii）水洗．

iv）ピロニン・メチール緑液（Stem氏処方によ

る）

ピロニン

︸

メチール緑 30％アルコールグリセリン 0．5％カルボール v） 3級ブタノール分別．

vi）

結果：RNAは赤く，

0．259 0．159 25cc 20cc 77．5cc

キシロール透徹，バルサム封入，

DNAは緑に染まる．重合度の落ちたDNAも赤色に染まる．

この染色液調製にはChroma製の色素を用い，

S†emの処方13）によって作製した．また分別にあたりビニロンはエタノールに対する溶解度が大きく，染色によって生じた反応が逆行して切片から失われやすいので，ブタノールが賞用されておる．わたくしもブタノールを使用して分別を行なった．

（2）検索成績 A 嗅上皮

a）透明層粘膜表面にやや青味を帯びた赤色に染まっておる．

b）支柱細胞その原形質はかなりの程度に墨染し，嗅細胞，基底細胞の原形質はそれより弱く中等度に上皮深層はいくらか濃染しておる．10号では，基底細胞核上部にピロニン陽性穎粒を認める．

B 固有層

a）Bowman氏腺の腺細胞原形質は最も強く赤直しておる．しかも腺腔に面していくらか濃渡が高いようにみえる．腺の個々に，また同一の腺腔を囲む細胞

個々の間にもわずかながら染色上差異があるようである．10号においては，腺細胞の原形質内顧に核をとり囲むがごとくピロニン好性の赤色の顯粒の存在を認める．腺腔内の分泌物もピロニン中等度好性である．

b）排泄管上皮細胞原形質も赤濃しておるが，腺細胞よりやや弱く腺細胞のようにはとくに濃染しておる亀部位はなく，瀬蔓性に血染しておる．排泄管にもピロ

ニン中等陽性の分泌物がみられるところがある．

c）嗅神経束，血管壁および結合織線維ピロニンにより淡く染まる．

C 核

成書に記載のように正確に緑色に染まらず，やや青味を帯びて染色されるが，嗅細胞の核膜に接するクロマチン及び核内のクロマチン穎粒は濃く染色され，

Bowman氏細胞のそれは幾分淡く，染色の濃度からいえばFeulgen反応における所見と一致しておる．

染色がRNAに特異的であるかどうかを確かめるために，リボヌクレアーゼを用いたいと思ったが，その純粋なものは入手できなかったので，1N塩酸を用いて，57。C，10分間の加水分解を行ない，ほとんど完全に消失したと認められるので，上記の染色方法で赤色を呈するものはRNAであると考えておる．また柴谷14）の実験から1N塩酸加水分解後，メチール緑好性が消失し，高重合DNAが低重合DNAに変性し，

ピロニン好性になることにより高重合D：NAを考察した．またRNA， DNAのす！くてを三塩化酢酸によって溶解させるSchneider氏の定量分析法を応用した Pollister氏の方法を用い，ピロニン・メチール緑染色を行ない，ピロニン・メチール山郭好性の消失から全核酸の存在を決定した．

（3）小括ならびに考按

核酸は1869年Miescherによって発見され，これにはRNAとDNAとの二種類があり，組織化学の対象となっておる．一般に細胞内では，DNAは染色質にふくまれ，RNAは細胞全体に分布し，とくに仁と細胞質に多いが染色質にもDNAとともにふくまれてい

(6)

第2表正常家兎嗅粘膜における核酸

嘉一く容蟹11・

¹¹

¹²¹²¹

²² ²³

嗅

上

皮

固

有

層

透 ^明

層i一一珊

P・十 P十十

支柱細胞

嗅細胞

基底細胞

P十十 M十十 M十十P十

M十十P十

P十十 P十

M十十P十

P十÷

M十十 M十十P十

M十十P十

P十

基二二 P十 P十

腺細胞

表層

基底

P十十

M十 M十P十

P十十

M十

P十十

M十

P十←

M：十十

＋什︑

PM

M十十P十

P十 P十 P十 P十

P十十

M十 M十P十

P十÷

M十 M十P十

M十P什

P十卜

M十 M十P十 M十^P十

二

腔1P双一lp＋又一IP＋又一［P＋又一IP＋又一［P双一

内閣外層

M十P十 M十P十

M十P十 M十P十管

腔lp＋又一ip叔一P収■p＋又一IP＋又一IP双一

丁束織経管合二

丁二幅

備考

十十±

PPP

腺細胞核

NA寸寸

周辺にR 認む

ピロニン・メチール緑染色により赤色を呈し，1N 塩酸処理により好ピロニン性を失なう支柱細胞，嗅細胞および基底細胞の原形質，Bowman昌昌細胞および排泄管上皮細胞原形質，嗅神経束，血管壁，結合織線維はRNAを含有することが推定される．ピロニン

染色の度合は組織内のRNA含有量に平行するので，

腺細胞とくにその腺腔に面して非常に多量のRNAが含有され，排泄管上皮細胞にはこれに比べ含有量が少ないということができる．

また高重合D：NAは，核クロマチンだけに認められるが，嗅上皮において固有層におけるよりも濃度が高い．排泄管のDNAは腺細胞のそれと大差をみない．

要するにピロニン・メチール緑染色でメチール緑好性の部分は，大体においてFeulgen反応陽性の部位と一致する所見を示しておる．

固定液に関して．すべて固定にあたっては，最も急速な：固定が望ましく，固定液にかなりの時間入れておくことは，固定完了までに組織の化学物質の変化，移動が起るであろうと考えられる．ピロニン・メチール緑染色において，メチール緑が固有の染色液の色調である緑色よりやや青味を帯びておるが，このことについて市川16）は網膜の核酸の推移についてCafnoy氏固定，フォルマリン固定，アセトン・アルコール固定，

凍結乾燥法の4者を比較し，Camoy氏固定，フオル

＼

(7)

マリン固定では青色に，アセトン・アルコールでは青味を帯びた緑色に染まり，凍結乾燥法では純粋のメチール緑の緑色をもつて染まり，色調も明るく，核の構造もまた鮮明であるということを認めておる，しかし色調による差異は認めても，固定による量的差異は認められなかったとも述べておる．わたくしの標本においてもメチール緑をとっている部分は帯青緑色に染まっておるが，まえに述べたように1N塩酸加水分解および三塩化酢酸により鑑別を行なっておるので，この部分はメチール緑好性とみて間違いな：いと思う。

C 柴谷氏メタクロマジー反応（1）実験方法

チオニンおよびトルイジン青森の塩基性色素は核酸と反応して一般に沈澱性の塩をつくるが，柴谷17）18）はこの反応を核酸の沈澱反応と関係づけて説明した．核酸のメタクロマジーによりDNAは青色に， RNAは赤紫に染められるといい，青色色素による染色像は鏡検に好都合であるため，上述のFeulgen反応，ピロニン・メチール緑染色による所見を補足する意味で本染色を追加した．

i︶

ii）

iii）

iv）

脱パラ．

0．5％チオニン水溶液で5分間染める．

80％アルコールで分別．

純アルコールに入れ，アルコール・キシロールを経てキシロールに入れる．

v）バルサム封入．

結果：DNAは青．メタクロマジーを起している部分は赤紫となる．特にRNAがよく反応する．

（2）検索成績

嗅上皮では，嗅細胞，支柱細胞および基底細胞の核は紫色に，核膜およびクロマチンは濃藍色に染まっておる．透明層はごく淡い水色にみえる．基礎膜に対する染色性はほとんどない．Bowman氏腺細胞の核も紫色に，クロマチンは明瞭に濃藍色に染色されてお

る．腺細胞原形質は一般に淡い藍色であるが，腺腔に面した部分にはメタクロマジーを起し赤紫色にみえるところが多い．排泄管上皮細胞は腺細胞と同色調でやや淡出し，無定形の腺腔および管腔内内容物も汗染しておる．クロマチン頼粒は各個とも明瞭に識別することができる．嗅神経束，血管壁筋層，結合織は淡水色に染まっておる．

（3）実題ならびに考按

チオニンで濃藍色に染まる部分は，Feulgen反応あるいは，ピ妬心ン・メチール緑染色で好メチール緑性を示す部分と一致し，DNAの存在が推定できるが，

RNAに関しては明確な結果をみなかった．すなわち，

チオニンで紫赤色に染まる部分はピロニン・メチール緑で染めると好ピロニン性の最も強い部分と一致し RNAの存在が推定できるが，その他の部分は淡藍色ないし水色に染まる．しかし1N塩酸加水分解後の切片をチオニン染色したものでは，Feulgen反応陽性の部分だけに染色性が保持されるから，原形質の藍色ないし水色に染まった部分にもRNAの存在をほぼ推定することができる．

嗅粘膜の脂質

1935年Lison and Dagneliが月旨血染剤として紹介したズダン黒Bは従来の脂質染剤と異なり，細胞の主なる化学的構成要素の一つである非顕性脂質（masked lipid）を容易に染色し，従来のズダン皿等に比べ染色性の良好なことが示されておる．ズダン黒B（com・

Plex polyazodye C？gH2206）を用い，1950年Feldman 19）が発表した染色法により染色を行なった．

固定空気栓塞により致死させたものを断頭し，10

％フォルマリン中に24時間浸漬固定する．その後鼻腔を開き，鼻中隔の嗅粘膜部を軟骨膜から剥離すること，Carnoy氏固定の場合のようにし，材料とする，

このままでは，氷結切片作製が困難であるので，ゼラチン包埋を行なう．それには，水洗12時間後，薄いゼラチン液（ゼラチン10gを1％石炭酸水30 ccに溶かし，さらに等量の1％石炭酸水を加えたもの）に12 時間，そのうえで濃いゼラチン液（1％石炭酸水30cc に対して・ゼラチン109の割合に溶かしたもの）に24 時間（いずれも370Cの思懸劇中）入れる．そののち，ゼラチン液をシャーレに流しこみ，その中に組織片を適当に配置し氷室の中におく．約3日後，組織片の周囲の余分のゼラチンを切り除き，これを10％フォルマリン中にさらに2日間浸漬，充分に固まらせる．

Feldman氏染色法

i）50％アルコール5分間．

ii）染色嚢中30分間（37。c）

染色液はつぎのように作製した．おおよそ1gのズダン黒B（Merck製）を70％アルコール100 ccを入れたすり合せのよい野口の細口瓶に入れて蓋をしてパ

ラフィン艀卵器中に（58〜60。C）10時間程度入れて，

時4振盈して充分溶かしてから室温で徐々に完全に冷やして飽和液をつくる．この溶液は氷室に保存し，使用に際して濾過して用いた．

iii）

iv）

v）

vi）

50％アルコール数秒間．

水洗1時間．

後染色ヘマトキシリン20秒前．

1％塩酸で適当に脱色．鼻

(8)

vii）水洗1時間．

viii）グリセリン封入．

結果3リポイドを含む脂質は黒く染まる．本染色はゼラチン包埋あるいは染色途上説明しえないような条件により左右され，良好な結果をうることはむつかしく，たび重なる予備実験を行なったが，上記の条件で最も鮮明な標本をうることが多かった．ゼラチンも染色液の色をとるが，上記の条件による標本では観察の妨げになるほどではなかった．

（2）検索成績

A 嗅上皮

a）透明層最：も著明な染色状態を示し，均等な帯状をなしている．

b）支柱細胞高度に旧染され，原形質は穎粒状に染まってくる．

c）嗅細胞，基底細胞わずかに染まっておるが，

支柱細胞に比べると遙かに淡く，上皮基底部に近くやや濃いようである．

B 固有層

a）Bowman晶晶細胞細胞内に穎粒状に存在し，

分布状態は主として核より外側，すなわち腺底部に多く，内側に少なく，核は染色されないので，後染色を行なわないものにあっては，淡明な小空泡状となってみえる．腺腔内はごく淡く染色される．

b）排泄管上皮細胞にごくわずかの染色性を認め

る．

c）嗅神経束腺細胞原形質にみられる穎粒の数倍の大きさをもつ大回粒として点在する．

d）血管壁，結合織にはほとんど染色性を認めな

い．

呼吸部粘膜と嗅粘膜との組織化学的比較呼吸部は形態学的にみて中隔の前部と後部とはかな

りはっきりした違いをあらわしているとTaylor 1）は述べておる．すなわち上皮は前部では線毛円柱上皮であるが，そのなかに粘液で膨んでおる杯細胞が介在しておる．中隔後部の線毛上皮は，前部に比し高く，核は種々の高さにあるために一見して多層にみえる．つ第3表正常家兎嗅粘膜における脂質

論〜遂鎧」

⁴ ⁵ ⁶ ⁷ ⁸

嗅

上

皮

固

有

層

透 ^明層

支柱細胞

嗅細胞

基底細胞

±

士

±

士

圭

基礎膜

腺細胞

表層

基底

十十 ^十〜十÷

什

十十

腺腔十又一十又一十又一十又一十又一

二言僻見引上皮

内層外層

±

士

土

±

管腔十十十十十

壁束織経管合神

血嗅結

備考

±什± 雨粒経穎神大在嗅は点士冷肉

同左

±甘±

同左

±H±

同左

±甘±

同左

(9)

ぎに，固有層の腺は前部では胞状腺であり，入では混合腺であるが，家兎ではその漿液線の型に近く，細胞は基底の方に近く大きな丸い核をもつておる．これに反し後部では，単管状線で，中心性の核を有しておる．嗅粘膜の形態学的構造はさきに述べたので略し，

両者の組織化学的比較にうつる．

多糖類ではTaylorはHotchikissの方法により行なっておるが，上皮細胞は中隔前部においてだけ，少数のものがPAS陽性でムチカルミンでも密に染まり，腺は少数がPAS陽性で大多数は陰性，陽性のものもムチカルミンで染まらないのに反し，後部では腺はすべてPAS陽性であり，ムチカルミンで染色されるという相異をあげておる，嗅粘膜では固有層の腺はすなわちBowman氏腺であるが，多少の強弱の差はあるが，すべての細胞はPAS陽性頼粒をかなり多量に有しておる．嗅粘膜上皮には勿論分泌細胞は含まれておらないので著明な染色性はないが，細胞間接合物質として微細頬粒状として認められる，呼吸部，嗅部ともにPAS陽性物質にはジアスターゼを作用させても変化は起らない．

核酸染色では，TaylorはFenlgen反応およびピロニン・メチール緑染色を行な：い，呼吸部粘膜ののいずれの組織の細胞核においてもDNAの分布に差異は認められないといっておる．嗅粘膜では，Feulgen反応，ピ考定ン・メチール緑染色，チオニン染色のいずれにおいても，嗅上皮を構成する三細胞の核は，固有層に含まれる細胞に比べ，DNAの反応は強くあらわれる．したがって嗅上皮のDNA含量は他の組織に比べかなり高いとこが知られる．RNAは呼吸部の腺の原形質の辺縁の部分と上皮とに主としてあらわれ，

大きい導管は微弱な反応を示すという，Bowman氏腺では，RNAにたいしかなり高い陽性度を示すが，

腺腔に面していくらか濃染し，排泄：管上皮細胞原形質も赤画するが，程度は腺細胞より弱い，

嗅粘膜では，嗅腺と支柱細胞がズダン黒に好染しておるが，呼吸部粘膜ではいずれの部分もズダン黒にせいする反応はなく，脂質は存在しないと記載されておるから，Bowman氏腺および前上皮細胞ことに支柱細胞は，嗅機能と密接な関係があると思われる．

総括および考按

支柱細胞の原形質はピロニン・メチール緑染色により強度のピロニン陽性所見を呈することから，この細胞が非常に強い核酸代謝を営むことが知られる．またズダン黒B染色においても豊富な陽性書記を見ることから，この細胞が単なる支持的の役割にとどまらず，

嗅上皮の機能上なんらかの重要な作用を分担するのではないかと想像される．このことは山田，安武20）が，

モルモット，家兎の嗅粘膜上皮の電子顕微鏡的観察で，「支持細胞では，endoPlasmic reticulumカミ極めてよく発達しており，モルモットでは，支持細胞の先端が粘膜上皮表面よりかなり突出し，この突出部内には極めて密なsmooth surfaceのendoplasmic reti・

culumが同心円形に配列する傾向を示す．これらは細胞の長軸に平行に核に向い核下部に続くが，核上部において屡・々網状の密集団を形成する．またこれらの reticulumが表面細胞膜において連絡しているめを認める．支持細胞のmitochondriaは嗅細胞のそれに比して大きく，cristaeが少なく，極めて密度の高い豊富なmatrixを有する．」との理由で支柱細胞の特異な機能に注目しておるが，これを裏書きする所見と考えられる．

嗅細胞および基底細胞原形質は中等度のRNA含量を示し，DNAは， Feulgen反応，ピロニン・メチール緑染色，チオニン染色のいずれの方法によっても，

嗅細胞，基底細胞および支柱細胞の核膜に接するクロマチンおよび核内のクロマチン穎粒は明瞭に染め出され，固有層の各成分のそれに比しはるかにD：NA濃度は高いようである．

多糖類は嗅上皮においては，粘膜表面にみられるほか，微細な穎粒として細胞間接合物質に認められ，また基礎膜は明らかに染め出される．Lillie（1949）21）は人の上気達の基礎膜はPAS陽性であることを発見しておる．鼻腔粘膜では北川等（1953）22）は鼻茸の基底膜はPAS法では弱陽性を示すことが多く，今井等

（1955）23）は副鼻腔粘膜の基礎膜はPAS陽性であるといい，坂倉等（1957）24）も慢性肥厚性鼻炎の下甲介粘膜において強い染色性を認めておる．Taylorは入の呼吸部粘膜の基礎膜はPAS陰性であり， Lillieの発見を確認することができず，また家兎，ラットでは基礎膜は見出し得なかったと述べておる．以前の研究者のうち，嗅領域における基礎膜の欠如をとなえる入もいるが，山田，安武は前述の電子顕微鏡的観察でこれを認めており，わたくしのPAS染色標本において

も，かなり強く明瞭に認められる．

Bowman氏腺細胞は，粘膜組織中水に最：も各種染色法にたいし陽性反応を現わす．まずその腺腔に面した部分に穎粒状のPAS陽性物質の分布をみる．細胞基底部には全く染色性が認められず，核上部の原形質から腺表層に多いことから，核上部の原形質において形成されたPAS反応陽性頼粒が成熟しながら腺細胞内を移動，上昇して腺腔内へ排出されるものと思われ

(10)

る．

Bowman氏腺は，その名が示すように1856年Bow−

manによって発見されて以来，その分布ならびに性状がきわめられ，脊椎動物で陸上に住むもののほとんどに存在が確かめられ，固有鼻腔の嗅粘膜領域に存在するものであることが確認されておる．性状に関しては，議論のあったところであるが，Cowdry（1932），

Schultz（1862）は粘液腺であるといい， Heidenhain

（1870）は犬，豚，羊，家兎等を用い，嗅粘膜に存在する腺はすべて漿液腺であると推断した．さらに Dogiel（1884）は犬，猫，家兎について嗅腺の組織学的構造を研究し，分泌物は漿液性であるといい，Hei−

denhain説を支持した．しかるに間もなくPaulsen は少なくとも馬，豚，山羊では晶晶は純然とした漿液腺ではなく，これに粘液細胞の混合を主張し，混合説を立てた．しかるに沢田（1936）25）は，分泌物排出の様式および顯粒形成の機序を追求し，Heidenhain，

Dogie1の説を支持し現在漿液腺説は学会において確認されておる．いまPAS染色を行ない，腺細胞に強度の反応をみたことは興味がある．

古くから，Heヨdenhain，：L6wis， Dogie1等が重クロム酸カリ固定ヘマトキシリン染色で特異の染色を現わす物質の存在を認めておるが，沢田は家兎嗅腺について，そのHeidellhain二二ヘマトキシリン染色にて染色するとき，強く染色される物質をhyperchroma−

tische Substanzeと名づけ，これを有する暗細胞とこれを有しない明細胞とを分け，明細胞は機能営為期にあるもの，暗細胞は休止またはほとんどこれに近い時期にあるものとの説をとっておる．ピロニン・メチール緑染色では嗅腺原形質はかなり高度のピロニン好性を示し，かなりの蛋白合成作用を営んでおることを知るが，さらに仔細に観察すると腺の個々に，また細胞個々の間にもわずかながら染色上差異を有し，腺細胞分泌機能と関連があるように思われる．

ズダン黒にたいしては，乙鳥は支柱細胞とともに最も好染する部分である．

腺腔には分泌物を認めるものと認めないもめとがあり，分泌物を認めるものにあってはPAS強陽性，ピロニンでわずかに無二するが，ズダン黒ではごく淡く染色される．

排泄管上皮細胞はこれにPAS染色を行なうと管腔に面する原形質の一部に陽性穎粒をみるから，分泌作用があるものと思われる．しかし，ズダン黒染色による陽性度はわずかで濃染する一定の部分もないので，

その分泌作用もBowman氏腺におけるものとは異な

るものと思われる．ピロニン・メチール緑染色ではピロニンにより赤染するが，その程度は腺細胞に比し弱く蛋白合成作用は腺細胞より少ないということができ

る．

管腔内の分泌物はPAS陽性であり，ピロニン中等度陽性であるが，脂質は腺細胞に存在するような明瞭な払出としては認められず，均等に染まる．

血管は，静脈壁，動脈壁ともにPAS弱陽性であり，動脈弾力膜は輪状に血管壁を囲んで中等度陽性である．ピロニンには淡く染まる．ズダン黒にたいする染色性はほとんど認められない．

嗅神経束はPAS染色で弱陽性であり，またピロニンにより淡染する．ズダン黒染色では黒色大面粒が点在するを認める．

結合織線維はPAS弱陽性であり，窪たピロニンにより淡染する．ズダン黒にたいする染色性はほとんど認められない，

結論

正常家兎嗅粘膜を材料として組織化学的検索を行ない，次の結論を得た．

1，PAS反応陽性物質は透明層，基礎膜， Bowma皿氏腺のとくに腺腔に面した部分，腺腔内内容物，排泄管上皮細胞の内層，排泄管管腔内内容物，動脈弾力膜に強く認められる．グリコーゲンはいずれの部分にも認められない．

2，Bowman高冷では， PAS陽性物質は基底部には全く染色性は認められず，核上部に近接した原形質から表層へかけて多い．

3．RNAは，支柱細胞，嗅細胞および基底細胞原形質，Bowman氏腺細胞および排泄管上皮細胞原形質，面諭および管腔内内容物に多く認められる．腺細胞では腺腔に面してやや濃度が高く，排泄管上皮細胞では濃染される一定の部分はなく，瀕蔓性に童謡するが一般に腺細胞に比し弱く，蛋白合成作用は腺細胞よ

り少ない．

D：NAは，嗅上皮を構成する細胞核に多く存在し，

固有層に含まれる核には少ない．

4．脂質は，透明層，支柱細胞，Bowman氏腺細胞特に基底部に多く存在し，嗅細胞，基底細胞，排泄管上皮細胞，管腔内，腺腔内にもわずかに認められる．

5．支柱細胞は単に，支持的の役割だけでなく，嗅上皮の機能上なんらかの重要な作用を分担するのではないかと考える．

(11)

第2篇過度嗅刺戟を与えた場合の嗅粘膜の組織化学

実験方法

材料および粘膜採取方法は，さきに正常のものについて行なったようにした．

嗅素の作用方法

家兎は固定箱に入れ，50cm×36cm×38cmのガラス箱におさめた．このガラス箱の天蓋には小孔を穿ち，幾分かの換気が行なわれるようにした．

嗅素としては，純正嗅素のうちピリジンを使用した．約1009入りの瓶にピリジン約509を入れ，家兎の鼻孔から約5〜6cm離しておいた．家兎は食餌を与えるため1日午後2時間外界へ出し，あわせてそのとき固定箱の清掃を行なった．

このようにしてピロニン吸入2時間，4時間，2日間2匹，6日間2匹を得たので，これに多糖類はMc Manus氏法により，核酸はピロニン・メチール緑法に従い染色を行ない，さきに述べた対照標本と比較した，嗅粘膜はいずれも鼻中隔から採ったが，これを前方から後方へ〔P1〕〔P2〕〔P3〕とし，その各々について比較を行なった，

検索成績

1．McManlls氏法による多糖類染色

正常家兎嗅粘膜における観察でPAS陽性を示していたのは，透明層，基礎膜，Bowman氏腺細胞原形質の腺腔に面した部分，排泄管内腔，Bowman氏腺腺腔内容物，排泄管管腔内容物，血管壁，嗅神経束，

結合織である．嗅刺戟を与えたものでは，それによる変化は最：も著明にBowman氏腺に現われてくる．それで，いまBowman氏腺の染色性の変化を中心に観察してみたい．すなわち，2時間刺戟の31号において，腺細胞原形質の二二に面した部分の染色性は，大部分のものにあっては対照標本と著しい相異を認めないが，一部の腺細胞においてはすでに染色性の増強をみ，反面では染色性の減退をしめすものもみられる．

すな：わち染色の多様性を示しておる．部位的には〔P1〕

において増加をみるもの多く，一部減少を示しているに反し，〔P3〕では増加をみるものなく，減少を示すものがわずかに見られ，〔P2〕ではこの両者ともわずかに認められる．4時間刺戟の32号においても〔P1〕

〔P2〕ともに腺細胞の核の周囲から腺腔に面した原形質へ，染色性の増強と分布の増加を示すものが多くなっているが，また一方では減少している部分もまれに認められる．2日刺戟のうち26号について観察：する

と，Bowman藁紙のほとんどは染色性減退を示し，

その中にあって正常にとどまっているものも少数存在するが，一面全く染色性の認められないものも少数にある，〔P2〕の部分には比較的正常にとどまっているものが多いが，これに反し，〔P3〕では染色性の明らかな減退をみるものが多い．つぎに28号においても，

腺細胞の染色性の軽度減退から欠如までの種々の変化を示しておる．しかしそのなかにあって非常に稀ではあるが増加をしめしているものもある．本標本では一般に粘膜の表層部の変化は軽度であるが，基底部では全く染色性が認められない．部位別にみると〔P1〕は

〔P2〕〔P3〕に比し減退の程度が強くあらわれておる．

6日刺戟の24号，25号においては，両者とも〔P1〕では固有層表層のBowman二品は軽度減退のものが最も多く，深層ではほとんどが全く染色性を示さず，わ一ずかのものが種々の程度の減退を示しておる．しかし両立ともごく稀には正常のものを混じておる．rp2〕

では大多数が陰性で，少数が軽度減退，〔P3〕では陰性軽度減退相半ばし，ごく一部は正常にとどまってお

る．

2．ピロニン・メチール緑法によるリボ核酸およびデスオキシリボ核酸染色

2時間刺戟の31号では，嗅上皮細胞の胞体，核ともに全く変化が認められない．Bowman氏腺腔に面する部は，正常のものについてみられるようにピロニン濃染しているが，この部分も含め，原形質全体も幾分強風の傾向があるかと思われる．4時間刺戟の32号でも，支柱細胞，嗅細胞，基底細胞層の排列形態はいずれも変化を認めない．Bowman氏腺の形態にはほとんど変化はないが，〔Pl〕の部には固有層表層の腺細胞には核が小さく不正形のものがあり，また深部に．は胞体の膨大を呈しているものがある．腺は一般に腺腔に面してとくに強い赤色を呈しているように見えるが，その他の胞体も反応がわずかに増強しているように見える．2日刺戟のもののうち，26号では支柱細胞，嗅細胞および基底細胞核の配列はほとんど乱れておらないが，28号では〔P2〕〔P3〕の部分で，楕円核帯と円帯核との混在がわずかに見られる．Bowman氏腺では両例とも全般に軽度の膨大を示すものが多い．

同じ腺腔を囲む細胞にもピロニン陽性の比較的強度のものとそうでないものとがある，6日刺戟の24号と25 号とについて，透明層は24号では〔PI〕〔P2〕において認められないところが多く，〔P3〕では存在するが，

25号では〔P2〕〔P3〕は認めるが〔P1〕では認められ

(12)

第4表過度嗅刺戟を与えた家兎嗅粘膜の多糖類

家兎番号 ^対照

^{31 号（2時間）}

P・ip・lp・

32号（4時間）

P・lP・lp・

26号

P1

嗅上皮

固

有

層

難細工十三1＝＝＝＝＝＝1 嗅旧劇飛質1＝＝＝＝＝＝基底細副原酬＝＝＝＝＝＝

基礎劇甘1＋1什1司＋1ギ1】朴

腺細胞

表層

基底

原形質核原形質

二

十〜昔〜柵

〈〉

一〜十﹀

十〜什〜冊

〈〉

一〜十﹀

十〜十十

く十〜甘〜柵

＜＜

一〜十﹀

十〜什〜柵

＜＜

一〜十﹀

一r》十〜十十

〈〉

腺

〜三田又■一三■骨又一叡一遍■骨又■ 田又一

内三原三士土 ± ± エ土夕立十三＝＝＝＝＝＝

管

腔陪又一国又一二又一隊ヨ叔一二又■ 田又一

壁束織

経

管合

神

血嗅結

．±．±± ．±．±士．±．±± ．±．±士．±．六十．±．±± ．±．±±

（2日）

P−P・

28

号（2日）

P・lp・1P・ ^{24号（6日）} ^{P・｝P・1P・} ^{25号（6日）} P・P・IP・

什1朴i什1玉什1・1・1什1・1刑

刑什1什1什1骨【刑刑朴1什陪1

一〜十〜十十

＜＜

^一〜十^﹀

一〜十〜十十

〈〉

十〜十十内く ^十〜十十く ^{一〜十〜十十}

〉〉

^一〜十^〉

一〜十〜十十

＝〉

一〜十〜十十

〉〉

一〜十〜十十

〉〉

三又■什又一田又■什又一1甘刻三又■三又一1叡一隔又一田又■

＝＝＝＝＝＝一1＝＝＝＝

一三■一対叡一隔又■叡一1骨又■叡H叡一二又■什又■

．±．±± ．士．±± ．±．±± ．±．±士．±．±± ．±．±土．±．±± ．±．土± ．士．±士．士．±±

(13)

第5表過度嗅刺戟を与えた家兎嗅粘膜の核酸

家兎番号対照

P2

嗅透明

劇p＋

31号（2時間）

P・lp・

_P3

P＋IP＋lp＋

32 号（4時間）

P1 P2 P3

26 P1

上皮

固有層

P＋「P＋［P＋1P＋

支柱細胞1子壷韻団七甜障＃ほ則甜ほ測韻

嗅細胞1原蚕質隠茸 i鈷障剤鈷1鈷1鈷1鈷障古

基底細劇原註自証剤鈷ほ劃丑剤鈷障剤鈷1鈷基礎劇P刊p刊P＋lP＋1P＋lp＋IP＋［P＋

P十〜十十 P十F

P十F P十十

原形質

P十十

P十F P十十

P十十

腺表層＞ M十核

M十

M十 M十

M十 M：十

M十 M十

一 P十 P十〜十十原形質

P十〜什 P十〜十十 P十〜十十

P十

P十〜十÷

P十〜十十

胞基底＜＜＜＜＜＜

核

M十 M十 M十

M十 M十 M十 M十 M十

一

腔lp＋又一IP収一

_P＋又一奄吹{又一【P＋又一IP双一IP＋又一P＋又一

鵜内月面旨旨‡ほ‡ほ‡障‡1詳障‡障‡障‡

篁胞タ花原覆馴丑到丑‡障劃丑‡障‡障‡隔‡ほ‡

管腔IP＋又一

十束織経管合神

血一結

備考

十十±

PPP

^P十又一十十±

PPP

^P三又一十十±

PPP

ip＋又一lp叔一lp収一lp＋又一lp収一

P・lP・

28 号（2 日）

P1

P・ip・

24 号（6 日）

P1 P2 P3

25 号（6 日）

P1 P2 P3

P＋ip＋lp＋1P＋lp＋i・・1P＋1■p＋IP＋

上訴＃i甜1韻1錯ほ＃1諸1甜障＃1韻i海溝1鈷ほ劃歳霜鈷1丑劃鈷i鈷1鈷1犬引鈷

丑剤丑剤鈷1丑剤丑剤二瀬鈷1丑諸士劃丑剤鈷

P＋「P＋lp＋

十十士

PPP

楕円核帯排列不整

子十±

PPP

細紐著しい膨大

うな部分がある．核の形態萎縮し，クロマチン濃縮を起しているものがある．血管，嗅神経束，結合織は嗅刺戟の影響をうけなかった．

総括および考按

過度の嗅刺戟を与え嗅粘膜の変化をみた研究は，主として1916年から1927年の間に行なわれておるが，まず中村26）27）が金線蛙を使用しての実験があげられる．

ベルガモット油を18日間間断なく作用させた例では，

軽度の場合では嗅表皮深層においてオスミウムにより黒秘する多数の粉末頼粒を認め，高度の場合では嗅細胞および支柱細胞の変性，萎縮，崩壊等を認めておる．また樟脳を18日間嗅がせた蛙においても嗅表皮深層における嗅細胞原形質に小さい不正形黒色頼粒をみておる．そして以上の変化は嗅表皮だけに限り，呼吸表皮は侵されないところがら明らかに過度の刺戟による退行性変化であるとしておる．服部28）29）も金線蛙を使用し，嗅素としてはベルガモット，入工鵬香，クレオソートを用い，オスミウム酸固定のもので，嗅細胞原形質は黒色穎粒状物質に変性して雨間に散在し，核は萎縮変形し，その染色は不染ないし濃染無構造となり，核内のクロマチン質を認めておらない．また嗅上皮の変化を示したものでは，Bowman氏腺に膨大あるいは萎縮，排列の不整および染色不良，核の変性および変位をみておる．ゆえに嗅刺戟により腺細胞は機能充進の状態を示し，とくにその刺戟強大な場合にはその退行変性を起すものであろうとしておる．りいで服部は，ボルネオール，ゲラニオール，ワレリアン酸，ヘリオトロビン，ピリジン，カプロン酸，スカトールについても同様実験を行ない，ほぼ同様の所見を得ておる．

わたくしの実験例では，ピリジンの嗅刺戟を2時闘，4時間加えた例では，McManus氏法ではBow・

卑an氏腺の分泌機能の軽度増大の傾向と染色の多様性とを示すようである．比較的長期間刺戟にさらされた26号，28号，24号，25号では著しい染色性の減退な

いし欠如を示し，なかには分泌能力の皆無に等しいことを示唆すると考えられるものを含んでいるものも認められる．

ビニロン・メチール緑法によるリボ核酸およびデスオキシリボ核酸染色では，2時間刺戟，4時間刺戟ともに腺細胞のピロニン好性やや増加しているかと思われるが必ずしも著明ではない．6日刺戟の24号および 25号では，形態学的に腺細胞は著しい膨大をしめしておるが，本法によってもまたピロニン好性の弱くなっておるのを認める．

すなわち，McManus弘法，ピロニン・メチール緑法ともに2時間刺戟，4時間刺戟のものにおいて，機能の増大は必ずしも著明には証明されなかったが，2 日刺戟，6日刺戟のものでは明らかに組織化学的に機能の低下がみられる．試みた2つの方法は，いずれも細胞の物質代謝を表現するものではあるが，いまこの 2つの染色を比較すると，PAS法の方が敏感にあらわれたように思う

以上の所見は，Bowman臨画細胞に関する限り，

服部の「嗅刺戟により腺細胞は機能油漉の状態を示し，とくにその刺戟強大な場合にはその退行性変化を起す」という説に符合する組織化学的所見ということができるのではないかと考える．

結論

ピリジンの嗅刺戟を与えた家兎嗅粘膜にMcManus 詠出およびピロニン・メチール緑染色を行ない，Bow・

man氏腺においては2時間刺戟，4時間刺戟のものでは機能充進の傾向を，2日刺戟，6日刺戟のものでは著明な機能低下の所見を得た．

終に臨み御懇篤なる御指導と御校閲の労をとられた恩師松田龍一教授に心から感謝の意を表します・なお実験に際し有益なる助言をいただいた病理学教室高柳勇：立，泉彪之子飼博士に感謝いたします．

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家兎嗅粘膜の組織化学的研究