正常者および慢性関節リウマチにおける血清ケラタン硫酸値の検討
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(2) 正常者および慢性関節リウマチにおける 血清ケラタン硫酸値の検討. 近畿大学医乍部整形外科学教室. 本 7 4 7. 克. (指導:田中清介教授). Thel e v e l so fkeratans u l f a t ei nserao fnormalandrheumatoida r t h r i t i s. 日IROSHI MOTOYOSHI. Departmento fOrthopaedicSurgery， K i n k iU n i v e r s i t ySchoolo fMedicine Osaka，Japan ( D i r e c t o r:Prof.S e i s u k e Tanaka). ABSTRACT o d i f i e dt h e Usingt h emonoclonalantibodyt ot h ekeratans u l f a t e (KS)，wem assayf ord e t e c t i o no fserumKSl e v e l s . T h i smethodi sbasedont h eenzymel i n k e dimmunosorbenta s s a y . Thed o g f i s hKSwasmoste f f e c t i v eands e n s i t i v e i nt h i sassay. KSl e v el sweremeasuredi n4 5p a t i e n t sw i t hnocomplaintso f i s t o r yo fa r t h r i t i s andno remarkablechangechange i nt h e a r t h r a l g i a，no h laboratorydata，i n c l u d i n gerythrocytesedimentationr a t e s，rheumatoidf a c t o r， u r i ca c i dandC r e a c t i v ep r o t e i n .A g e r e l a t e dchangeswereapparenti nserum . SerumKSl e v e lwasa l s omeasuredi n7 2rheumatoida r t h r i t i s(RA) KSl e v el. p a t i e n t s who f u l f i l l e dt h eAmericanRheumatism Association c r i t e r i a . They.
(3) wered i v i d e di n t ofourgroups，accordingt ot h eSteinbrockerc r i t e r i a. StageJ V. 緒. hads i g n i f i c a n t l ydecreasedseruml e v e l so fKS.. 高齢化社会を迎えつつある近年，. Eコ. t r.形外科領域において変形性関釘j11'1~ ~ζ 代ぶ. される関節軟' 1 " [に 破 撲 を き た す 政 患 に 遭 越 す る 機 会 が 多 く な り つ つ あ る . こ れ. Keywords: keratans u l f a t e，s e rum，mono c lon a lant i b ody，r he umatoi d. り の 診 断 に は X級 学 的 冷 断 U 2が 故 も ' 般 的 で あ り. a r t h r i t i s. しかし， IJ} 能であり ，. 現イ，:も広くJlJし 1 ら れ て い る. 乙の診断法では早期における軟竹破壊の変化を捉えることはイミ. また X 線J-.変化を認める!l ~f 期には口覚症状はかなりi1t行している. だ け で な く ， 組 織 学 的 に も 明 か な 所 見 が み ら れ る . また X線 学 的 診 断 法 で は 被 曝という侵襲もある. そ乙で血清などを検体として. 重傷マーカーの あたかも 1. ように非侵襲的に関節軟骨の変化を診断する乙とのできるマーカーが望まれる と乙ろである .. chondrocyte ) と 軟 骨 基 質 Ccarti lagematri x ) から 関節軟骨は ，軟骨細胞 C なるが，. 乙の軟骨基質の違いによって附子様軟骨 C hyali ne cartilage)， 線. 維性軟骨 ( fibro cartilage)， 知 性 軟 骨 C el astic cartilage) K .分 け ら れ J心 と す る 0%----30%の TypeI I コラーゲンを 1 1 る. 硝 子 様 軟 骨 は 70%の 水 ，2. コラーゲン線維および. 5%の フ ロ テ オ グ リ カ ン か ら な る .. このフロテオグリカンの化学構造はヒアルロン駿 ( hy a luronat e acid)を 中 心 と し た フ ロ テ オ グ リ カ ン サ ブ ユ ニ ッ トが 結 合 し た も の で あ り ，. 乙のサブユニッ. keratan su lfate) と コ ン ド ロ イ チ ン 硫 トはコアフロテインにケラタン硫酸 C 酸 C chondroitin sulfate)が 結 合 し た も の か ら で き て い る 5-8. 変形性￨対日iJ. 1 ; ' :や 慢 性 関 節 リ ウ マ チ お よ び 加 齢 的 変 化 に よ り 関 節 軟 骨 . ， ζ 変 性 を き た す と 変 性 軟骨では，グリコスアミ/グリカンの減少 イチン杭酸の ÒI-~ 少. 低分. f化，但J I鎖 の 短 縮 ， コ ン ド ロ. ケラタン硫般の憎加が認められることは既に知￨られている. o-1 7. 我々はこのケラタン怖酸に i tr Jした . ケ ラ タ ン 硫 酸 は 人 体 に お い て 軟 竹 を 除 け ば、 角膜以外にはほとんど仔在せず. その比ユ存も軟 ' T l 'と 比 較 し て 100分 の 1以 卜. と 傾 少 凶 で あ る 18. 1983年 Caterson ら が ケ ラ タ ン 疏 般 に 対 す る モ ノ ク ロ ー. -2-. - 3-.
(4) プル抗体 を作製し 1 9. 1985年 Thonar ら が 乙 の モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 を 用 い て. nked immunosorbent assay 酵 素 標 識 抗 体 測 定 法 (enzyme-1i による測定法を確立した 2 0. EL1SA). 血 清 中 の ケ ラ タ ン 硫 酸 が 関 節 軟 骨ζ i存 在 す る フ ロ. テオグリカンの変動を反映するのであれば. 簡 単 に 入 手 で き る 血 清を 用い て関. 節 軟 廿' の 破 壊 や 摩 耗 の 状 態 を 知 る 乙 と が で き る . 乙 れ は 従 来 の X線 学 的 診 断 法. 牛 鼻 中 隔 フ ロ テ オ グ リ カ ン モ ノ マ 一 (BN-D l PG， 5μg)を コ ン ド ロ イ チ. .0 1unit)にて 37ぐ ナ ー ゼ ABC (O 緩衝液 ( pH9.2)にて希釈し，. 時 間 消 化 した 後 2 0mM 炭 酸 ・重 炭 酸 塩. ELISAプ レ ー トに 3 7C， 2時 聞 に て 抗 原 と し 0. て 吸 着 さ せ た. 改くに精製ケラタン硫酸および血清を PBS ' 0.05~ぢ Twee n 20 ・ 1 % BSA. 0.05M. に比較して， はるかに簡便でかつ非侵襲的である . そこでケラタン硫酸の測定に用いる精製ケラタン硫酸に. Thonar ら は 豚 肋 軟. U精 製 し た も の を 使 用 し て い る が ， 豚 肋 軟 骨 は 竹より抽 I. 1 1 1販 さ れ て い な い た め ，. 我々はまず入手可能な牛角膜，鯨肋軟骨. 2 . EL1SA法ーに よ る 測 定 系. 鮫肋軟骨より精製されたケラタン硫. 般を用いて， ケラタン硫酸の測定法の確立をはかった.結果として，鮫肋軟骨 より精製されたケラタン硫酸を用 い る乙とになった.. B~ - Dl P G was digested with chondroit inase ABC at 37l : 1 hour ↓. This digeste d solution was dilut ed into carbonate-bicarbonate buffer， p laced on the ELISA plate at 3 7C 2 hours 0. ↓. 3w ashes with PBS，0.05% T ween 20 ↓. つ い で ， 今 回 確 立 し た 測 定 法 を 用 い て 明 か な 関 節 疾 患 の 存 在 しない正常イ号の血. lnhibition 日ixture brough int o the well at 37C 1 hour 0. Inhibition mi xtu re. 清 ケ ラタ ン 硫 酸 値 を測 定 して ，年齢と の 相 関 性 を 検 索 し た . さ ら に ， 代 表 的 な 関 節 疾 患 で あ る 慢 性 関 節 リウマチに 注 目 し. 000 f old dilution of monoclona l anti-KS 1.The 50，. 乙の患者の血 清に ついて の検討を行っ た. 2.Diluded shark-KS and serum 1+2 incubated at 37l : lhour. 材料および方法 .05% T ween 20 3 washes w ith PBS，O. 1 . 研究に用いた試薬および器機. ↓. 本実験で用いた試薬は次のとおりである. o. EL1SA フ レ ー ト ( コ ー ス タ ー 社 )，. プ レ ー ト ウ オ ッ シ ヤ ー ， プ レ ー ト リー夕、一 (SLT社) 抗 ケ ラ タ ン 硫 酸 モ ノ ク ローナル抗体. (5/D/4)，. Second antibody (anti mouse IgG) at room temperature 1 hou r ↓. 5 washes with PBS，0.05% T ween 20. コンドロイチナーゼ A BC ( 生 化 学 J~ 業) ，牛 鼻 中. 隔 フ ロ テ オ グ リカ ン モ ノ マ ー ( 1CN社 ). 牛血 清アルブミン ( bovi ne serum. a1 bumi n :BSA )， ホ リ オ キ シ エ チ レ ン ソ ル ビ タ ン モ ノ ラ ウ レ ー ト (Tween 20)， 0-フ ェ ニ レ ン ジ ア ミ ン ( シ グ マ 社 )， リ ン 酸 緩 衝 液 ( phosphate buffer sa1i ne PBS) ( ギ ブ コ 社 )， ヘ ル オ キ シ 夕 、 ー ゼ 標 識 抗 マ ウ ス IgG ( カ ヘ ル 社 )， 牛 角 膜 ケ ラ タ ン 硫 酸 ， テ キ ス 卜 ラ ン 侃 酸 ( シ グ マ 社 )， 鮫 精 製 ケ ラ タ ン 硫 酸 ， 鯨 精 製 ケ ラ タ ン 硫 駿 ( 生 化 学 工 業 ).. -4-. ↓. …. The substrate (O-phenylenedia皿i n ) and H202 brough in to the well. 1 at rooo t. ture 1 5 minutes. The production of chromophore stopped with 2N sul fic acid ↓. Read at a wavelength 492 nm. F ig.1 Methodofas saysys tem TheELISAt ec hni quewasbasedoncompet i t i v eas say.. -5-.
(5) EDTA依 液ζ iて 希 釈 し 3 7ヤ ，. 5]j伏 希 釈 し た 抗 ケ ラ タ ン 硫 駿 モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 と. 1時 間 } xJ;むさせた. 11 1 与問反応させた. 乙 の 時 ， 標 準 曲 線 と し て の 精 製. 7 共存物質の;形符 各荷物質の影響をみるために，. I r.常人の. l ( nN it ζ名 将 物 質 と し て ビ リ ル ヒン(. m}より 2倍 連 続 希 釈 し ， 血 清 希 釈 は 1/8より 1/6 4ま で ケ ラ タ ン 硫 駿 は 200ng/. 30m ε/ m}) ， イ ン 卜 ラ フ ァ ッ 卜 (19 ' ow/v )， ア ス コ ル ビ ン 酸 C20mg/ m1)およ. 2伏 連 続 希 釈 と し た .. ，000 Unit /ml)を 添 加 し び へ ハ リ ン C1. 1 -記 反 応 終. f後. 3l t t ]洗 浄 し た 後. 抗 原 を 吸 着 さ せ た フ レ ー ト を PBS .0 . 0 5% Tween 20 t . cて 以応液を入れ3 7( ' . ]時間にて抗原抗体. } x応 に て 結 代 し な か. l結 合 さ せ た . っ た 余 剰 の 抗 体 を フ レ ー ト Lの 抗 原ζ PBS' 0.05% Tween2 0に て 3回 洗 浄 し た 後. 8 . 測定対象とした血清 正常人としたのは ータ(血沈. PBS' 0.05~ぢ Tween 2 0t . cて. 2 )検 斉 デ. CRPな ど )t ζ 異常喝を認めないもの. 尿酸値. 3)X線 で 関 節 症 を 思 わ せ る 所 見 の な い も の で. 測 定 の 対 象 と な ったのは 4 5人 (. X線 上 異 常 を 認 め な い 腰 痛 患 有 1 3人，胸李S I1 1 Jl H i .候 群 5人 ， 神. 骨粗緊症1 5人 ，. l時 間 反 応 さ せ た .. ， 巨候群 4人 経絞侃1. o- フ ェ ニ ル ジ ア ミ ン に て 発 色. 1 )関節痛および過去に関節炎の既往がないもの. リウマチ因子. 1000イ告に希釈した第 二抗 体 ( ヘ ル オ キ シ 夕、 ー ゼ 標 識 抗 マ ウ ス 1gG) を 室 温 で. PBS'0.05%Tween2 0 t . cて 5同 洗 浄 し た 後. その I n ]収 不 を i W J定 し た .. そ の 他 8人 ) で あ っ た .. 慢 性 関 節 リ ウ マ チ ( RA ) 患 者 は ア メ リ カ リ ウ マ チ 学 会 C A R A ) の 診 断 基. ，. させた .. 準1 2ζ基づき RAと 診 断 さ れ た 7 2人(ソJ:1 4人. 1 5分 後 ， 硫 般 (2N)t ζて 発 色 を 停 止 さ せ ， 波 長 492nmt ζて 吸 光 度 を 測 定 し た. 0 .4年 ) と し た . ま た 乙 の 7 2人 に つ い て 手 指 X線 を 阪 彩 し 平均催病期間 1. CFig・ 1).. Steinbrockerに よ る Stage分 類 22(St age I: 正 常 か 軽 度 の 萎 縮 を 認 め るが. 3 . 標準曲線の作製. 破壊像はみとめないもの，. 標準曲線として使用する精製ケラタン硫酸を. d j販 の 牛 角 膜 ケ ラ タ ン 硫 酸 ， 生. 化学工業より寄 l j ーされた鮫および鯨の肋軟骨より精製されたケラタン硫酸，お. が関節変形を認めないもの，. 失 :5 8入. 手均年齢 5 3 .3成，. Stage 1 脱 l 天による骨影像の稀薄化が明かとなる Stage I I 明かな軟骨および骨破壊像と関節変形. l iな と ) を 認 め る も の ， Stage I V (亜脱円 ，尺背側{同位，あるいは過仲 J. 似. 立 が 認 め ら れ る も の ) を 行 い 検 ，t Jした . 維性または骨性強l. よびデキストラン硫般について検討した.. 4 再現性の検J 、 I. l E常 者 5人 の 血 清 5検 体 を 用 い variable. 1検 体 に つ き 6凶 測 定 し 変 動 係 数 Cconstant. CV)を 検 討 し た .. 標準I l j J線に月]し 1 る精製ケラタン{流般. 5 . 添加I n ]収試験の検， l ' J. l E常 有 3人 の 血 清 を 用 い. 結果. /下角膜. そ の 血 清ζ i稀 釈 液 ζ i て 稀 釈 し た 濃 度 25，5 0 . 100，. 150 ng/ml のケラタン硫酸を添加して，その[ロ]収率を検 ばした . f. mJ~ ，鮫 ~}J 軟汁より精製され たケラタン航酸を検，;，j した結果，鮫!l)J i 欽. 竹より精製されたケラタン偏向交が，. 200ng/ mI以 ド の 濃 度 で 最 も 鋭 敏 で l 政光度. の変化も人-きく ，標準山総!に 適 し て い る こ と が 確 認 さ れ た CFig.2).. 6 . 稀釈試験の検討 正 常 右 2人 の 血 清 を 用 い て 希 釈 液 に よ り 2府 連 続 稀 釈 し そ の 内 線 性 を 検 ， dし. た.. - 6-. 一. 7-.
(6) 句. ‘¥. 、 ‘ ¥ 、 、、. 3. 添加回収試験. 100= = 5労 以内と 良 好 であっ た (Tab1e 2). 、 ‘. 。. 。 -7.5. (CV ) 3.9~ぢから 7 . 2% と良好な結 果 が得られた ( T a bl e l ) .. 、. 。 -7 -6.5. -6. Table2 Recoveryt e s t -5. -4. -3. Log(g ks)/ml Fig.2 Enzymel i n k e dimmunosorbentassay( ELISA). Added. Expected. Measure. (ng/ml). (ng/ml). (ng/ml ). Recovery rate. ( X ). A monoclonalantibodyrecognizingKSwasi nc ubated withKSfroms e v e r a lsourc e s . Concentration( ng/ mD r e f e r st odryweight . Purifiedproteoglycansfrom. 。. 440.0. dogfish( 園)，bovinec ornea( 0 )，whal e (* )anddextran s u l f a t e( -)weret e s t e d .. Table1 Inter-assayp r e c l slOn. ト 1ean(ng/Ql). S 0 (ng/ml). cv ( % ). 変動係数. 回 収 試 験ζ l 用 い た 正 常 お の 血 清 ケ ラ タ ン 硫 酸 値 は 440ng/ m1で ， 回 収 率 は. 。. -8.5 -8.25 -8. ¥、. 、 、¥、 ， 、、 ‘ 、. 、. qL. Nmゴ︿. 。. 血清 ケ ラ タ ン 硫 酸値は 1 41 . 4ng/ ml から 516.8ng/ ml の範何で，. 一、、. 一央、. 一、 一、. ・、 -、. 。. 一 、 、. 、 一. 3. 2 . 再 現性. 25. 465.0. 463.8. 95.2. 50. 490.0. 494.2. 96.4. 100. 540.0. 541 .2. 1 01 .2. 150. 590.0. 595.5. 103.7. (n=3). 141.4 250.9 450.6 460.5 516.8 10.2. 18.0. 17.7. 19.2. 23.7. 7.2. 7.2. 3.9. 4.2. 4.6. (n=6). 。 口. -9-.
(7) 4 稀釈試験. 5 . j七イメ物質の彩特. 2名 の I E常 お の み ; 検 討 に 用 い た 血 清 ケ ラ タ ン 硫 酸 値 は 232，386ng/mlであっ た . 乙 の 血 清 を 2れ 連 続 稀 釈 し. そ の 直 線 性 を 検 討 し た . その結果， 32倍 ま で. か~i 点を通る tr\ 線をぶした (Fig ・ 3. ) .. ビリルビン，. イントラファッ卜，アスコルビン駿および抗凝I l i J斉I J { iイ上ドにお. い て も 良 好 な 結 決 が 何 ら れ た (Table 3).. Table3 E f f e c to fi n t e r f e r i n gsubstanc e s ng/ml. 件 。. 386ngIml. Added substances and its concentorations. Measured (ng/ml ). 300. No add 232ngIml. 434.0. Bilirubin. 30mg/ml. 410.6. 200. Intrafat l%w/v. 454.2. Ascorbic acid. 100. 20mg/ml. 411.2. Heparin 000Unit/ml 1， 11 8. F i g .3 D i l u t i o nt e s t Thirtytwof o l dd i l u t i o n of sera showed s t r a i g h tl i n e . toward0point. 421 .2. ハU.
(8) 日 .. 正常人の血清ケ ラタン硫酸伯. 800. • •• •• •• • • • •• ••• ••、 • ••. 上記の ELISA法に て 測 定 し た 正 常 人 血 清 ケ ラ タ ン 硫 酸 値 は 年 齢 と 相 関 係 数 1.の相関関係 を 認め， 0 . 6 2の J. = t37. そ の 平 均 値 は 439.8= t22. 1ng/ml (男. 415 8 600. y : : : 454 .9= t27.2)で男T:.i ! i :は 認 め な か っ た C Table 4， Fig.4) . E¥mc). (一. ~・. 400. /.. 凶﹀-. Table4 Serumkeratans u l f a t eCKS)l evel sC ng/mD. 200 Age. Serum KS(n). =. R 0.62 p <0.05. ハU. ハU. e. -2 9. 3 2 3 . 7i : . 2 1 .2 (6). 30・ 39. 3 3 9 . 2i : . 36.9 ( 9 ). 40・49. 3 3 4 . 0i : . 24.2. 50・ 59. .8i : . 47.7( 531 10 ). 60・69. 5 8 2 . 1i : .1 84.1( 10 ). 70・79. 483.7土. Total. 4 3 9 . 8i : . 22.1(45). 10 20 30 40 50 60 70 80. Age e v e l si nthenormalgroup Fig.4 SerumKSl Ager e l a t e dincreasewereevident .. (7). 18.9 ( 3 ). 7 慢性関節リウマチ患者の血清ケラタン硫駿値 慢 性 関 節 リ ウ マ チ に お け る Steinbrockerの Stage分 知 で 了二 指 X線 像 で の半J I. 2名 ， 0名 ， Stagem2 定 で は Stage 1 6名 ， Stage r2. Stage が高まるにつれて血清ケ ラ タン抗酸は 1 ~8 値をと っ たが，. で は 他 の Stageの 患 高. ~c.比し ，. Data are represented as the mean i : .SE. Stage IV の患~'. 血清ケ ラタ ン 硫 酸 は 著 明 i ζ低 似 を 示 し た (. g.5 ). Table 5， Fi また 1 ， 記ζ i示 し た 年 齢 別 正 常 値 と の 比 較 検 討 で は ，. ( )-number of normal subjects. StageI V2 4名であ った.. ， 低{直を / J ミした症例は ， Stage 1.rで は 0人. その L E常 値 よ り 2 S D以. Stage. mで は 4人，. 1 ' ，. Stage I V. では 1 8人と StageI Vに お い て は 患 者 の 75%が 明 か な 低 置 を 示 す こ と が 確 認 さ れ. f こ.. 円 ベ u. ttaA. 円/ ω.
(9) u l f a t ei np a t i e n t swithRA Table5 Serumkeratans Stage. Case. 1983年 Catersonら が ケ ラ タ ン 抗 酸 に 対 す る モ ノ ク 口 一 ナ ノ レ 抗 体 を 作 製 し. : t2SD#. Serum K S. Age. 察. 考. lower. 1 9. 1985年 Thonar ら が こ の モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 を 川 い て EL1SA i Lに よ る. 1~とはーを確\'rした ケ ラ タ ン 疏 酸 の 出]. E 国. W. Williams ら は フ ロ テ オ グ リ カ ン 分 解 醇. 6. 47.5: t10.7. 289.7: t 74.0. 2 0. 48.1: t10.4. 385.1: t133.8. 。. 素であるキモハパインを家兎の膝関節内に注入し，. 2 2. 57.3: t 6.5. 463.3: t138.1. 4. 乙 の こ と か ら Wi1 1iamsら は 血 清 ケ ラ タ ン 硫 酸 は 関 節 軟 骨 破 壊 の 程 度 を 知 る マ. 2 4. 55.6: t10.9. 225.8: t 88.3・. O. 1 8. 血清ケラタン硫酸値が花人後2 4時 間 で 著 明 l ζ I 高値をぷす乙とを報告した.. させ. 一力ーとして有用であると報告していた. Thonar ら の 測 定 法 は 標 準 曲 線 と し て 用 い る 精 製 ケ ラ タ ン 硫 酸 が ，. と乙ろが. (mean: tS D ) 4. *p<:0.05，Duncan's multicomparison test #:We determined the age matched control values i n. 般l ζ I H販 さ れ て い な い 豚 肋 軟 骨 よ り 抽 出 精 製 さ れ た ケ ラ タ ン 疏 酸 を 用 い て い. たため. • •. 100. ー. stage. 田. O H. nJU. •. ー. s W. Fig.5 L e v e l so fserumKSl e v e l si nRAp a t i e n t s Seventy-twop a t i e n t s were a l l o c a t e dt o four groups accordingt ot h eSteinbrockerc r i t e r i a . Barsrepresentt h e meanv a l u e sf oreach s t a g e . Theserum KS l e v e li nt h e stageI Vp a t i e n t swass i g n i f i c a n t l ylowerthant h a to ft h e p a t i e n t si nt h eothergroups.. ，Aqe. ーし. 的￥. 200. . ，T. E¥mc). (一. • ••• •• • •. 300. た. • -. •. 400. m 皮肋. 軟骨より抽出されたケラタン硫酸が標準曲線として最も適していることを発見. 600 500. 本邦で入手口I 能な午，. 鯨 な ど の 精 製 ケ ラ タ ン 硫 酸 を 同 い 検 討 を 行 う 乙 と に し た . その結!以.，. 鮫 ，. 700. 乙 の 測 定 法 が 発 表 さ れ た 後 も 迫 試 を 行 な う 乙 と は で き な か っ た . そこ. で我々も血清司!のケラタン硫酸の測定法の確吹をめざし，. the normal population 1n this study(see table 5 ) . 800. 関節軟付の代謝陣:与をおこ. 去 に つ い て 精 度 放 び Iド.確性を検討する I jn1で J E常 お の 血 清 を 肘 い て さら ζ l， 本 j 再現性，. 添加同収試験および稀釈試験を行った. 再現性においては血清濃度. 1 4 1 4ng/mlから 516 8ng/mlま で の 範 闘 に お い て は 変 動 係 数 が ほ ぼ 5 %前 後 で あ り 良 好 で あ っ た . た だ 低 濃 度 領 域 で は 7 %と や や 高 値 を 示 し た が ，. それで. 09 c づ 以 内 と 良 好 な 結 果 が 得 ら れ た . また も1. I F.常(直ζ l近 い 濃 度 を 則 い て の 添 加. 住1 J収 試 験 に お い て も 5 %以 内 と 良 好 で あ り ，. 稀釈試験においても原点をi8iる l f L. ーにおいても体内よりはるかに尚濃度のビリ 線 性 を 示 し た . 共 存 物 質 の 検 、j ン ，. ア ス コ jレ ビ ン 酸 存 在 下 で も ケ ラ タ ン 硫 酸 値 は 安 定 し て お り ，. レビ. j. 血液検任時，. 血 液 凝 伺 防 止 に 使 用 す る がJ1 00倍 濃 度 の へ パ リ ン 存 在 下 で も 安 定 で あ っ た . ついで，. l J E常 訂 の 血 清 ケ ラ タ ン 侃 酸 を 測 定 し 検 I Hしたと乙ろ， 年 齢 と の 問 ζ. 相関係数 0 . 6 2の 正 の 相 関 関 係 が 認 め ら れ た. 乙の乙とは，. 血清ケラタン杭駿. ﹁. 41A υ h. A斗 ‘.
(10) がプロテオグリカンの代謝を反映しているものと思われる .. 謝. Thonar ら は 血 清 ケ ラ タ ン 硫 酸 値 を 測 定 し ， 年 齢 の 聞 に ， 有 意 な 相 関 を 得 な か. F1導，御検￨泊を u 易りました!忍日!日 r [ j1~J 清介教授に 深比 稿を終えるにあたり，御t. ったが，. これは Thonar ら の 測 定 し た 正 常 対 象 者 は 入 院 中 の 高 血 圧 ，. 腎疾患な. どの内科的疾患患ィ号であり，関節疾患の合併などを除外しなかったためと思わ れる .. 辞. なる謝意を搾げます. また本研究を遊行するにあたり御折導 し た 福 田 寛 ; 講 師ζ l心 か ら 感 謝 し ま す .. 3U ' l[ I 本 1 ) ウマチマ:会(平成ノ亡年 5J J ) 本論文の'a.行は第 3. 慢 性 関 節 リ ウ マ チ に お い て は ， 現 在 ま で ELISA法 に よ り 血 清 ケ ラ タ ン 硫 酸 伯を測定し検討した報告は我々の報告以外ない. 2 5. また，現在慢性関節リウマ. チ に お け る 関 節 破 壊 の 程 度 を 評 価 す る 手 段 と し て 用 い ら れ る Steinbrockerら. *示 ). 木 整 形 外 科 学 会 法 礎 学 術 集 会 ( 平 成 広 年 8J ]. ! . + U ; く) ) 第 4 1 i l l l l. め 3l n J軟 竹 代 謝 研 究 会 (. 手成 2年 ， 東 広 )) 第 5rull~ 際整形外科災古外科以礎学術集会( 1990年 ， モ ントリオール)において発ぶした.. V以 外 の Stage 分 類 と ， 各 Stageの 血 清 ケ ラ タ ン 硫 酸 値 と の 検 討 で は StageI は ， 我 々 が / 示 し た 正 常 値 と の 聞 に 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た . Stage I Vの患者 は ， 年 齢 別 正 常 値 と の 比 較 で 75%の 者 が 年 齢 別 の 平 均 値 の 2S D よ り 低 値 を 示 す 乙 と も 確 認 で き た . 我 々 が Stage分 類 ζ i 用 い た X線 は 手 指 お よ び 手 関 節 の み の X線 で あ り ， 全 身 の 関 節 に つ い て の X線 検 討 し た わ け で は な か っ た が. Stage I VI c該 当 す る 患 者 で 著 明 な 低 値 を 示 し た 乙 と は ) Stage I Vでは破壊さ れ る 関 節 軟 骨 の 量 が 少 な い 乙 と か ら 他 の Stageよ り 著 明 に 低 値 を 示 し た も の と 考えられる . 以上の事より血清ケラタン疏酸は関節軟骨の破壊や摩耗を知る指標として有 用である乙とが示唆された . ケラタン硫酸は体内ではその大部分が関節軟骨 K 存在するため血清を用いて関節軟骨の状態を把握できる乙とは，簡便で，非侵 襲的である . 今回の検討で正常値が確立された乙とにより，乙れが変形性関節 症や慢性関節リウマチにおけるスクリーニングや関節破壊の指標となりうる可 能性が示唆された.. 4E'A. 可 -. -16-. 御I l } Jr~.を賜りま.
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