Posted at the Institutional Resources for Unique Collection and Academic Archives at Tokyo Dental College, Available from http://ir.tdc.ac.jp/
Title
Formation of Gap Junctions And Expression of
Connexin 43 in Cultured Malassez’s Epithelial Rest
Cells
Author(s)
洪, 榮杰
Journal
歯科学報, 113(1): 98-99
URL
http://hdl.handle.net/10130/3014
Right
論 文 内 容 の 要 旨 １．研 究 目 的 歯根膜内に存在するマラッセの残存上皮は，生涯を通じて歯根膜内に存在し，歯根膜の恒常性の維持を始 め，歯根吸収抑制やセメント質形成の機能を持つとされている。また，歯肉結合組織や歯根膜に炎症性刺激が 加わると，マラッセの残存上皮は増殖を開始し，歯周ポケット上皮や嚢胞の裏装上皮になることが知られてい る。また，マラッセの残存上皮細胞間にはデスモゾームやギャップ結合が存在していることも報告されてい る。しかし，マラッセの残存上皮の増殖とギャップ結合の関連を研究したものは少ない。本研究の目的は，培 養条件下において，マラッセの残存上皮由来細胞の増殖と，gap junction を介した情報伝達機構を Connexin
４３（CX４３）蛋白を用いて，２Ｄ培養および３Ｄ培養を用いて，免疫組織化学ならびに分子生物学的に解明する ことである。 ２．研 究 方 法 すべての実験は，東京歯科大学動物実験施設指針に則り行われた。ブタ歯根膜より得たマラッセの残存上皮 由来細胞は，北海道医療大学安彦教授に提供頂いた。実験は，２Ｄ培養として３５mm 培養皿に細胞を５，０００個 播き，３７℃，５％炭酸ガス，９５％の空気の状況下で培養した。培養液は２日毎に交換した。初期に細胞同士の 接触のない状態を第１群，経日的に，数個の細胞が接するような時期を第２群，その後多くの細胞が接するよ うに増殖した時期を第３群とした。各々の群の細胞は，gap Junctino の構成タンパクである CX４３を抗体とし て染色し，共焦点レーザー顕微鏡観察，免疫電子顕微鏡的観察，および RT-PCR 法により検討した。３Ｄ培 養として１３．５mm の２４穴培養皿に１５，０００個の細胞とⅠ型コラーゲンゲルを混和したものを播き，通常より濃縮 された培養液にて培養した。細胞は CX４３を抗体として染色し，共焦点レーザー顕微鏡観察をおこなった。ま た，細胞は定量的 RT-PCR 法により分析した。 ３．成績および結論 第１群において Connexin ４３の発現は見られず，第２群では接触する細胞膜同士の間に点状の陽性像が散見 されるようになり，第３群で接触する細胞同士の細胞間に多くの点状の陽性像が観察された。また，免疫電顕 的観察では，二つの細胞が接する細胞膜上に金粒子の存在が認められ Connexin ４３の存在が明らかとなった。 さらに RT-PCR では Connexin ４３の発現が第１群より第２群で，第２群より第３群で強く観察された。３Ｄ培 氏 名（本 籍） こう えい けつ
洪
榮
杰
（中国（台湾）） 学 位 の 種 類 博 士（歯 学） 学 位 記 番 号 第 １９１０ 号（甲第１１６２号） 学 位 授 与 の 日 付 平成２３年３月３１日 学 位 授 与 の 要 件 学位規則第４条第１項該当学 位 論 文 題 目 Formation of Gap Junctions And Expression of Connexin 43 in Cultured Malassez s Epithelial Rest Cells
掲 載 雑 誌 名 CLINICAL DENTISTRY AND RESEARCH 第３６巻 ２号
３−９頁 ２０１２年６月 論 文 審 査 委 員 （主査） 井上 孝教授 （副査） 山田 了教授 中川 寛一教授 下野 正基教授 歯科学報 Vol．１１３，No．１（２０１３） ９８ ― ９８ ―
養群では，細胞は様々な方向に突起を伸ばし，突起同士で結合する像が観察されたが，CX４３の陽性像は見ら れなかった。また定量 RT-PCR では２Ｄ培養群に比べ有意に低い値を示した。 gap Junction は，細胞間結合構造物でイオンやセカンドメッセンジャーを通過させ，細胞分化などに関与して いることが知られている。今回の実験から，マラッセの残存上皮由来の細胞は，細胞膜で接触する細胞が多く なるほど gap junction の数も増え，活発に情報伝達を行うことが示唆された。 論 文 審 査 の 要 旨 本審査委員会は，平成２３年２月２４日に行われた。まず Hung Jung-Chieh 大学院生から英語により論文の内 容の説明があり，次いで，論文内容に関する質疑ならびに口頭試問が行われた。審査委員会では，１： Malasse s epithelial rest cell の培養方法と特徴について，２：Gap junction と細胞増殖・分化の関係，３：２ Ｄと３Ｄ培養における細胞の特徴，４：間葉系細胞と上皮細胞の３Ｄにおける違い，などについて質疑が行わ れた。培養方法と特徴については University of British Columbia の DM Brunette 教授が開発した培養法を用 い，培養細胞は歯原性上皮のマーカーである CK１９に陽性を示すと説明した。細胞分化と増殖との関係に関し ては，細胞増殖が起こり，gap junction が形成され，その後分化が起こる。つまり，本細胞は，生体内では一 生涯を通じて歯根膜内に存在し，増殖することはないので，培養という操作により増殖を開始し，角化性の扁 平上皮に分化するので，それに伴い gap junction が増えてくることが考えられると説明した。さらに，２ Ｄ，３Ｄと間葉系細胞と上皮系細胞に関しては，上皮細胞は，被覆上皮では基底細胞が結合組織と接着してい るのみで，基底細胞は，上層に向かって分化し最終的には角質物となり捨てられる。しかし３Ｄ培養では，細 胞全体がⅠ型コラーゲンに接してしまい，通常の上皮の構造とは異なる。つまり，上皮の性格を見るには２次 元，間葉系細胞の性格を見るには３Ｄが適していると説明した。また，目的の明確化，参考論文の追加等の指 摘があり，修正がなされた。 本研究で得られた結果は，今後の歯学の進歩，発展に寄与するところ大であり，学授与に値するものと判定 した。 歯科学報 Vol．１１３，No．１（２０１３） ９９ ― ９９ ―
