血中向精神薬分析における固相担体カラムを用いた液─液抽出法による前処理の全自動化

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(1)法科学技術，26(1)，91―102(2021). 91. ―技術報告― 血中向精神薬分析における固相担体カラムを用いた液―液抽出法による前処理の全自動化河村真帆1，相澤. 満1，中本晃弘1，奈女良昭2. 1広島県警察本部刑事部科学捜査研究所. 〒730 0825 広島県広島市中区光南 2 26 3 2広島大学大学院医系科学研究科法医学〒734 8553 広島県広島市南区霞 1 2 3. Full automation of sample pretreatment operations by supported liquid extraction for the determination of psychotropic drugs in blood Maho Kawamura1, Mitsuru Aizawa1, Akihiro Nakamoto1 and Akira Namera2 1Forensic. Science Laboratory, Hiroshima Prefectural Police H.Q. 26 3, Kohnan, Naka-ku, Hiroshima, 730 0825 Japan 2 2Department of Forensic Medicine, Graduate School of Biomedical and Health Science, Hiroshima University 1 2 3, Kasumi, Minami-ku, Hiroshima, 734 8553 Japan. (Received 25 March 2020; accepted 2 August 2020; Published online 25 September 2020 in JSTAGE DOI: 10.3408/jafst.784). Supported liquid extraction (SLE) is commonly used to avoid emulsion formation; however, it takes a long time to concentrate the eluate and it is di‹cult to use in multiple samples. To solve these problems, automation of SLE has been previously reported, but no paper has reported the automation of the entire pretreatment operation in one apparatus. Therefore, we applied ATLASLEXT, an automated pretreatment apparatus developed to fully automate liquid-liquid extraction (LLE), to SLE and investigated the full automation of the pretreatment operation in a blood drug analysis. Blood samples containing 18 benzodiazepines and 16 other psychotropic drugs were pretreated with ATLASLEXT and analyzed using liquid chromatography/mass spectrometry (LC/MS). For all benzodiazepines tested, the calibration curves showed good linearity within the range of 10500 ng/mL, and the recovery rate was 79. For the other psychotropic drugs, the calibration curve showed good linearity within the range of 10500 ng/mL, although the recovery rate was low for some analytes. In conclusion, the present study suggests that ATLAS LEXT is useful for the pretreatment of blood samples for drug analysis using SLE, which has been impossible to fully be automated until now..

(2) 河村真帆ほか. 92. Key words : Automated sample pretreatment apparatus, Supported liquid extraction (SLE), Psychotropic drug, Blood いが，摂取薬物に加えて血中薬物濃度が判明するた. 緒. 言. 昨今の社会構造の変化やストレス社会を反映し. め，事件当時の薬物の影響の有無を知るうえで重要な手がかりとなることが期待される．. て，国民の63.1が鎮痛薬，6.3が睡眠薬，5.7. 生体試料中の薬物検査を実施するうえで試料の前. が精神安定薬を使用しているとの報告があり1)，多. 処理が重要な役割を担い，液液抽出（LLE）や固. くの向精神薬が社会生活に浸透している．なかでも. 相抽出（ SPE ）など多様な方法が用いられてい. ベンゾジアゼピン系薬物は抗不安作用や催眠作用を. る713)．LLE は簡便で安価な手法であるが，特に血. 有し，諸外国に比べて日本での消費量が多いと言わ. 液試料を処理する際のエマルジョン生成がその後の. れている2)．また，ベンゾジアゼピン系薬物の使用. 抽出操作の妨害となる．このエマルジョン生成を回. で交通事故発生率の高いことも報告されており3)，. 避する目的で，カートリッジに珪藻土などが充填さ. 薬物影響下での運転（Driving Under the In‰uence. れている固相担体カラムを用いた液液抽出（SLE）. of. Drugs）が裁判において争点となるなど4)，世界. 的な問題ともなっている．2019年中の交通事故統計. が用いられる1417)が，溶出液の濃縮に時間を要し，多検体処理が困難であった．. によると，薬物使用の違反が記録された事故件数は. 近年，感染リスク軽減や人的エラーの回避を目的. 24件あり，危険運転致死傷罪が適用された事件のお. に薬物抽出の自動化が注目されている．これまでに. よそ. 5 にあたるため5) ，交通事故捜査において薬. も，血液試料の前処理法として SLE を自動化する. 物の影響の有無を調査することが重要となってい. ために 96-well プレートやカラムカートリッジを用. る．. いた自動抽出装置が報告されている1820)が，溶出液. さらに，ベンゾジアゼピン系薬物は前向性健忘作. を濃縮・乾固する際には手動で濃縮装置へ移動させ. 用を持つことが特徴として挙げられる．前向性健忘. るか，2 台の装置を組み合わせる必要があり，全て. とは服用してから一定期間の記憶が障害される状態. の工程を 1 台の装置内で自動化することは困難で. を示し，医療現場では患者の不安や苦痛を緩和する. あった．. 目的で投与されるが，高用量の場合やアルコールと. そこで本研究では自動前処理装置 ATLASLEXT. の併用などの不適正な使用において高頻度に生じる. による SLE を用いた血液試料の全自動前処理法の. ことが知られている．この作用を悪用し， Date. 構築を試みた． ATLAS シリーズは LLE の自動化. Rape Drug として被害者に摂取させて心神喪失や. を目的として開発された装置21) であり，分注，撹. 抗拒不能な状態にさせ，性犯罪に及ぶ事案が存在す. 拌，遠心，窒素気流による蒸発乾固の一連の操作を. る6)．そのため，性犯罪捜査においても薬物検査は. 全自動で行うことができる装置である．現在までに. 重要な資料となり得る．. 本シリーズを用いた LLE または除タンパク法によ. 交通事故や性犯罪事案などの薬物鑑定に用いられ. る生体試料中薬物抽出が報告されている2224) が，. る生体試料の代表的なものとして尿や血液が挙げら. SLE による報告は見受けられない．本研究では新. れる．尿試料は非侵襲的に採取できるうえ，薬物を. たな試みとして，ATLASLEXT で使用する試験管. 摂取してから数日間は高濃度で薬物を検出できるこ. サイズに適合した SLE カラムを装着し，Table 1 に. とから検査に付されることが多いが，数日前からの. 示されるベンゾジアゼピン系薬物18種類を対象薬物. 薬物摂取の状況が結果に反映されるため，尿中薬物. として， SLE による血中薬物の前処理の全自動化. 分析の結果からは事件発生時に薬物の影響を受けて. を検討した．さらに，確立した方法が Table 2 に示. いたか否かの判断は困難である．一方，血液試料は. されるその他の向精神薬16種類に適用可能かどうか. 尿試料に比べて薬物の検出期間が短く薬物濃度も低. もあわせて検討した．.

(3) 血中向精神薬分析における SLE による前処理の全自動化. 93. Table 1 Molecular formulae, monitoring ions, and retention times of 18 tested benzodiazepines and an internal standard. Compound. Molecular formula. Monitoring ion (m/z). Retention time (min). 4-Hydroxyestazolam. C16H11ClN4O. 311.07. 16.73. Bromazepam. C14H10BrN3O. 316.01. 16.80. Clonazepam. C15H10ClN3O3. 316.05. 17.28. Nitrazepam. C15H11N3O3. 282.09. 17.32. Flunitrazepam. C16H12FN3O3. 314.09. 17.40. a -Hydroxyalprazolam. C17H13ClN4O. 325.09. 17.58. Estazolam. C16H11ClN4. 295.07. 17.62. Nimetazepam. C16H13N3O3. 296.10. 17.63. Triazolam. C17H12Cl2N4. 343.05. 17.85. Lorazepam. C15H10Cl2N2O2. 321.02. 17.95. Alprazolam. C17H13ClN4. 309.09. 17.99. Oxazepam. C15H11ClN2O2. 287.06. 18.03. Etizolam. C17H15ClN4S. 343.08. 18.12. Lormetazepam. C16H12Cl2N2O2. 335.03. 18.41. Chlordiazepoxide. C16H14ClN3O. 300.09. 18.76. Diazepam. C16H13ClN2O. 285.08. 19.19. Clotiazepam. C16H15ClN2OS. 319.07. 19.59. Prazepam. C19H17ClN2O. 325.11. 20.33. Triazolam-d4. C17H8Cl2N4D4. 347.08. 17.81. Table 2. Molecular formulae, monitoring ions, and retention times of 16 tested psychotropic drugs.. Compound. Molecular formula. Monitoring ion (m/z). Retention time (min). Lamotrigine. C9H7Cl2N5. 256.02. 14.22. Carbamazepine. C15H12N2O. 237.10. 17.09. Diphenhydramine. C17H21NO. 256.17. 17.67. Duloxetine. C18H19NOS. 298.13. 17.98. Nortriptyline. C19H21N. 264.17. 18.24. Risperidone. C23H27FN4O2. 411.22. 18.24. Haloperidol. C21H23ClFNO2. 376.15. 18.47. Mirtazapine. C17H19N3. 266.17. 19.28. Trazodone. C19H22ClN5O. 372.16. 19.71. Quetiapine. C21H25N3O2S. 384.17. 19.73. Trihexyphenidyl. C20H31NO. 302.25. 20.07. Amitriptyline. C20H23N. 278.19. 20.22. Levomepromazine. C19H24N2OS. 329.17. 20.73. Promethazine. C17H20N2S. 285.14. 20.69. Chlorpromazine. C17H19ClN2S. 319.10. 21.21. Perphenazine. C21H26ClN3OS. 404.16. 21.27.

(4) 河村真帆ほか. 94. 高速液体クロマトグラフ装置 UltiMate3000と Bruk-. 材料および方法 . er Daltonics 製飛行時間型質量分析装置 micrOTOF. 試薬類. を用いた．分析条件は以下のとおりである．カラ. 血液はコスモバイオ製ウマ溶血血液を用いた．対象薬物である Alprazolam,. a-Hydroxyalprazolam,. ム化学物質評価研究機構製 L-column2 ODS（1.5 ，カラムオーブン温度 mm i.d.×150 mm, 5 mm）. Haloperidol,. 40 ° C ，移動相  10 mM 酢酸アンモニウム . Lorazepam, Oxazepam, Perphenazine, Prazepam,. Methanol[5－直線グラジエント（15 min)－95. Triazolam は Sigma-Aldrich, Carbamazepine は. (10 min）］，流速0.1 mL/min，イオン化法エレ. Tocris Bioscience, Chlorpromazine, Clonazepam,. クトロスプレーイオン化法（positive）．測定範囲. Duloxetine, Flunitrazepam, Lamotrigine, Prometha-. m/z 50 500 (scan mode), Hexapole RF70 Vpp.. Bromazepam,. zine,. Chlordiazepoxide,. Trazodone は和光純薬工業（富士フィルム和. . 試料前処理. 光純薬），Mirtazapine, Quetiapine, Risperidone, Tri-. 各対象薬物を 500 ng / mL となるよう調製した血. hexyphenidyl は東京化成工業， Nortriptyline は. 液試料 500 mL に， 0.1 mol / L グリシンおよび 0.1. Toronto Research Chemicals からそれぞれ購入し. mol/L 塩化ナトリウム水溶液の混合溶液と0.1 mol/. た．Amitriptyline は日本メルク萬有（MSD 製薬），. L 水酸化ナトリウム水溶液を 3  2 となるよう調製. Clotiazepam, Etizolam は吉富製薬（田辺三菱製. したグリシン・水酸化ナトリウム緩衝液（pH 10.0）. 薬）， Diazepam, Estazolam, 4-Hydroxyestazolam は. 500 mL と内部標準物質（ IS ）である Triazolam-d4. 武田薬品工業， Diphenhydramine は田辺製薬（田. 10 mg / mL メタノール溶液 25 mL を加えて撹拌し，. 辺三菱製薬）， Levomepromazine は塩野義製薬，. 2,000 × g ， 30 秒遠心後，得られた上清 200 mL をカ. Lormetazepam は日本ワイス（ファイザー），. ラムに分注し，150×g，5 秒間の遠心操作でカラム. Nimetazepam は住友化学， Nitrazepam は三共（第. に保持させた．5 分静置後酢酸エチル600 mL をカラ. 一三共）からそれぞれ入手した．内部標準物質とし. ムに分注し，25×g，10分間の遠心操作により溶出. て使用する Triazolam-d4 は Sigma-Aldrich 製のもの. した．溶出完了後，使用したカラムはアダプターご. を用いた．いずれもメタノール溶液として購入した. と廃棄した．得られた溶出液全量を窒素気流下で 7. ものはそのまま，粉末として入手したものについて. 分乾固後，乾固物をメタノール 100 mL で再溶解. はそれぞれ 1 mg/mL のメタノール溶液として調製. し，攪拌して， 2,000 × g ， 1 分間遠心後，上清 50. し，分析に供するまで－ 20 ° C で冷凍保管した．分. mL を分析バイアルに分注して検査試料とした．な. 析には，各薬物のメタノール溶液を適宜蒸留水ある. お，本研究では，装置分注部のトラブル回避および. いは血液で希釈して使用した．その他の試薬，溶媒. 分注精度を考慮し，血液試料を 500 mL と設定し. などは市販の特級品を使用した．. た．上記の操作は Fig. 1 に示すとおり自動前処理. . 装置. 装置 ATLAS LEXT 内にて全自動で行われ，前処.  . 自動前処理装置と抽出用カラム. 理操作に要する時間は 2 検体で約50分であった．. 自動前処理装置は島津エンジニアリング製 AT-. . 分析法バリデーションの検討. LAS LEXT を用いた． ATLAS LEXT で使用でき. 検量線は，各対象薬物を10, 20, 50, 100, 200, 500. る直径15 mm，高さ75 mm，容量12 mL の試験管に. ng / mL となるよう調製した血液試料 500 mL を「 3. 適合する大きさの固相担体カラムである Phenome-. 試料前処理」のとおり前処理を行って LC/MS を行. nex 製 Novum Simpliˆed Liquid Extraction (SLE) 1. い， Table 1 および Table 2 に示す各薬物の抽出イ. cc tube を，アダプターを用いてカラムを試験管に. オンクロマトグラムにおけるピーク面積を IS の. 装着した状態で抽出に使用した．. ピーク面積で除して得られた面積比を用いて内部標.  . 液体クロマトグラフ質量分析装置（LC/MS）. 準法により検量線を作成した（n＝3）．自動抽出操. LC/MS は Dionex (Thermo Fisher Scientiˆc）製. 作における Novum SLE の回収率は， 100 ng / mL.

(5) 血中向精神薬分析における SLE による前処理の全自動化. Fig. 1. Schematic procedure for supported liquid extraction using ATLAS LEXT.. 95.

(6) 河村真帆ほか. 96. 試料前処理」の. えることはなかった．そこで，前処理に要する時間. とおり前処理を行って得られた結果と，ブランク試. を短縮するため遠心操作による溶出を行うこととし. 料を抽出して得られた残渣に各対象薬物の 2 mg /. た．. mL メタノール溶液を 5 mL（薬物添加試料を処理し.  . に調製した添加試料を用いて「 3. キャリーオーバーの検証. た場合の薬物量に相当）添加してメタノールで100. 各対象薬物を2,000 ng/mL となるよう添加した血. mL とした検査試料で得られた結果を用いて算出し. 液試料 5 検体を ATLAS LEXT で連続前処理した. た（n＝5）．. 後，ブランク試料について前処理を行い LC/MS を実施した結果，薬物は検出されず，キャリーオー. 結果および考察 . 前処理操作の検討.  . 溶出溶媒量の検討. バーは確認されなかった． . ベンゾジアゼピン系薬物の分析 Table 1 に示すベンゾジアゼピン系薬物 18種類を. Table 1 に示すベンゾジアゼピン系薬物 18種類を. 用いて10500 ng/mL の範囲で検量線を作成したと. 500 ng / mL となるよう添加した血液をカラムに保. ころ， Table 4 に示すとおり Etizolam の決定係数. 持させて，溶出させる酢酸エチルの量を 150 mL ご. （ R 2 ）は0.990, Clotiazepam が 0.993 ，その他のベン. とに分取して対象薬物の抽出効率を確認した．. ゾジアゼピン系薬物は 0.997 以上であり，全ての薬. Phenomenex 社が推奨する Novum SLE の溶出溶媒. 物において R2 が 0.99 以上の良好な直線性が得られ. 量は 1.2 mL となっている25) が，溶出溶媒量 1.2 mL. た．また，自動抽出操作における Novum SLE の回. に対する各溶媒量での薬物の抽出量の比を算出して. 収率は，Lorazepam および Prazepam が79，その. 抽出効率を確認したところ，Fig. 2 に示すとおり，. 他のベンゾジアゼピン系薬物は80以上であり，相. 溶出溶媒量が 600 mL の時点で Clotiazepam は 98. 対標準偏差も全ての薬物が 10 以下と概ね良好で. ，Alprazolam, Diazepam, Prazepam は99，そ. あった．. の他のベンゾジアゼピン系薬物は100抽出が完了. . していることが推察されたため，溶出溶媒量は600 mL とした．. その他の向精神薬の分析 Table 2 に示すその他の向精神薬 16種類について. も，本法が適用可能か検討を行ったところ，Table. なお，溶出溶媒である酢酸エチルは， Novum. 5に示すとおり，いずれの薬物も R 2 が0.99以上とな. SLE を用いた薬物抽出の溶出溶媒として概ね適し. り，良好な直線性が得られた．一方，自動抽出操作. ていると Phenomenex 社より報告されている25) ．. における Novum SLE の回収率は Table 5 に示すと. 平成26年にジクロロメタンなどのハロゲン系溶媒が. おり概ね良好であったが，クロルプロマジンやレボ. 特定化学物質に指定され，取り扱いの規制がより厳. メプロマジンなどのフェノチアジン系薬物について. しくなった26)ことを考慮すると，酢酸エチルでの溶. は回収率の低下が確認された．本法では自動化に伴. 出が適当と考えられた．. い溶出溶媒量と溶出操作を変更したが，これらが回.  . 収率の低下を招いている可能性があったため，ベン. 自然落下と遠心操作による抽出の比較 Novum SLE による抽出操作は通常自然落下で行. ゾジアゼピン系薬物と同様の方法で確認した．その. うとされている25)が，カラムの内径が細いため自然. 結果，フェノチアジン系薬物の溶出溶媒量の変更に. 落下での溶出に30分以上を要した．そこで，遠心操. よる影響は確認されなかった．フェノチアジン系薬. 作により溶出させたところ，10分で溶出させること. 物は油水分配係数が小さい（疎水性が高い）ものが. ができた．Table 1 に示すベンゾジアゼピン系薬物. 多く，カラムから完全に溶出されていない可能性が. 18 種類を 500 ng / mL となるよう添加した血液を用. あることから，カラムからの溶出効率を上げるため. いて自然落下による回収率と遠心操作による回収率. には，酢酸エチルより溶出力の高い溶媒を検討する. を比較したところ， Table 3 に示すとおり，溶出方. ことが選択肢のひとつとなり得ると考えられた．次. 法を遠心操作に変更しても回収率に大きく影響を与. に，溶出操作の変更による影響を確認したところ，.

(7) 血中向精神薬分析における SLE による前処理の全自動化. Fig. 2. Elution proˆles of the target drugs by the diŠerent elution volume.. 97.

(8) 河村真帆ほか. 98. Table 3 Comparison between ratios of recovery rates of 18 benzodiazepines from blood using Novum SLE eluted by centrifugation and those by gravity elution. Analyte. Ratioa) (). Ratioa) (). Analyte. Alprazolam. 99. Etizolam. a -Hydroxyalprazolam. 99. Flunitrazepam. 94. Lorazepam. 99. Bromazepam. 100. 102. Chlordiazepoxide. 93. Lormetazepam. 97. Clonazepam. 97. Nimetazepam. 98. Clotiazepam. 98. Nitrazepam. 96. Diazepam. 101. Oxazepam. 95. Estazolam. 95. Prazepam. 92. 4-Hydroxyestazolam. 94. Triazolam. 95. a):. Each value represents the ratio of recovery rate eluted by centrifugation against that by gravity elution.. Table 4 Linearities, coe‹cients of determination, recovery rates, and relative standard deviations of 18 benzodiazepines. Linearitya,b). Coe‹cient of determination. Recovery rate (). Relative standard deviation (). Alprazolam. y＝0.0024x＋0.0277. 0.998. 88. 8.8. a -Hydroxyalprazolam. y＝0.0014x－0.0086. 0.999. 86. 7.8. Bromazepam. y＝0.0009x－0.0066. 0.999. 84. 10. Chlordiazepoxide. y＝0.0029x－0.0175. 0.999. 95. 7.5. Clonazepam. y＝0.0011x－0.0122. 0.998. 82. 8.6. Clotiazepam. y＝0.0057x＋0.0957. 0.993. 93. 10. Diazepam. y＝0.0040x＋0.0370. 0.997. 82. 2.9. Estazolam. y＝0.0023x＋0.0006. 1.000. 89. 6.2. 4-Hydroxyestazolam. y＝0.0012x－0.0136. 0.998. 93. 6.5. Etizolam. y＝0.0046x＋0.1049. 0.990. 88. 5.6. Flunitrazepam. y＝0.0021x＋0.0092. 1.000. 83. 10. Lorazepam. y＝0.0010x－0.0090. 0.997. 79. 8.4. Lormetazepam. y＝0.0017x＋0.0008. 1.000. 90. 7.0. Nimetazepam. y＝0.0021x＋0.0035. 1.000. 84. 8.2. Nitrazepam. y＝0.0014x－0.0107. 0.999. 83. 10. Oxazepam. y＝0.0018x－0.0162. 0.998. 81. 9.6. Prazepam. y＝0.0055x－0.0128. 1.000. 79. 6.6. Triazolam. y＝0.0016x＋0.0022. 0.999. 94. 8.8. Analyte. a): b):. Linear range; 10 500 ng/mL. x and y mean the concentration of the analytes and the analyte/IS peak area ratio, respectively..

(9) 血中向精神薬分析における SLE による前処理の全自動化. 99. Table 5 Linearities, coe‹cients of determination, recovery rates, and relative standard deviations of 16 psychotropic drugs. Linearitya,b). Coe‹cient of determination. Recovery rate (). Relative standard deviation (). Amitriptyline. y＝0.0113x－0.0233. 0.998. 74. 3.6. Carbamazepine. y＝0.0056x＋0.0564. 0.998. 81. 10. Chlorpromazine. y＝0.0094x－0.0184. 1.000. 36. 6.0. Diphenhydramine. y＝0.0084x＋0.0981. 0.996. 80. 9.1. Duloxetine. y＝0.0017x－0.0058. 1.000. 57. 4.1. Haloperidol. y＝0.0025x＋0.0306. 0.997. 87. 6.5. Lamotrigine. y＝0.0018x＋0.0114. 0.999. 84. 7.4. Levomepromazine. y＝0.0139x＋0.0439. 0.999. 50. 5.1. Mirtazapine. y＝0.0076x＋0.1642. 0.990. 82. 8.3. Nortriptyline. y＝0.0036x－0.0101. 0.999. 62. 9.4. Perphenazine. y＝0.0062x－0.0293. 1.000. 46. 4.0. Promethazine. y＝0.0101x＋0.0645. 0.999. 49. 8.6. Quetiapine. y＝0.0064x＋0.0416. 0.998. 75. 7.5. Risperidone. y＝0.0051x＋0.0852. 0.993. 81. 8.0. Trazodone. y＝0.0041x－0.0072. 1.000. 73. 7.4. Trihexyphenidyl. y＝0.0134x＋0.1819. 0.995. 76. 5.4. Analyte. a): b):. Linear range; 10 500 ng/mL. x and y mean the concentration of the analytes and the analyte/IS peak area ratio, respectively.. Table 6 Comparison between ratios of recovery rates of 16 psychotropic drugs from blood using Novum SLE eluted by centrifugation and those by gravity elution. Analyte. a):. Ratioa) (). Analyte. Ratioa) (). Amitriptyline. 92. Mirtazapine. 99. Carbamazepine. 97. Nortriptyline. 101. Chlorpromazine. 75. Perphenazine. 84. Diphenhydramine. 99. Promethazine. 89. Duloxetine. 98. Quetiapine. 102. Haloperidol. 98. Risperidone. 102. Lamotrigine. 92. Trazodone. 101. Levomepromazine. 90. Trihexyphenidyl. 94. Each value represents the ratio of recovery rate eluted by centrifugation against that by gravity elution.. Table 6 に示すとおりフェノチアジン系薬物は自然. きく影響する可能性が示唆された．また， Saito ら. 落下時より遠心操作時の回収率が低くなった．この. の報告では，フェノチアジン系薬物はカラムでの抽. ことから，フェノチアジン系薬物はベンゾジアゼピ. 出過程において酸化されると考えられている17)．今. ン系薬物に比べてカラムに吸着されやすいため，ベ. 回の検討においても， Fig. 3 に示すとおり酸化体. ンゾジアゼピン系薬物よりも溶出速度が回収率に大. （M＋16）のピークを確認することができた．市販.

(10) 100. 河村真帆ほか. Fig. 3 Extracted ion chromatograms for extracts from spiked blood containing 500 ng/mL Chlorpromazine (a 1 and a 2), blank blood (b 1 and b 2), and authentic standard of Chlorpromazine (c 1 and c 2).. の酢酸エチル中には過酸化物などの不純物が存在. 改善が期待できる．. し，エフェドリンの酸化によるメトカチノンの生成. . 自動化がもたらす利点. に寄与していることが石川らにより報告されてい. 本法における血液 2 検体あたりの所要時間は50分. る27)．今回使用した溶媒も市販の酢酸エチルであっ. と比較的時間を要する．しかし，前処理操作の全自. たため，溶媒中の不純物がフェノチアジン系薬物の. 動化により得られる大きなメリットとして次の 3 点. 酸化体の生成に影響を及ぼしていると考えられた．. が挙げられる．. よって，フェノチアジン系薬物の回収率低下は，カ. 1 点目は，試料の取り間違いやサンプリングのミ. ラムへの吸着，溶出速度の影響および抽出過程にお. スなど人的エラーを回避できることである．2 点目. ける酸化が原因と推察された．本法は Table 1 に示. は，検査業務者の煩雑な前処理操作にかかる負担を. すベンゾジアゼピン系薬物18種類を対象として前処. 削減できることである．特に，自動分析に伴う効率. 理操作を検討したため酢酸エチルを抽出溶媒とした. 化は多検体になるほど発揮され，装置稼働時間内に. が，フェノチアジン系薬物を対象として前処理操作. 並行して他の検査の実施が可能であるなど，時間の. を行う場合は，抽出溶媒を変更することで回収率の. 有効活用が期待できる．3 点目は，感染性試料や揮.

(11) 血中向精神薬分析における SLE による前処理の全自動化. 発性溶媒を装置内で扱うため，作業環境の管理を適. 7). 101. 切に行うことができると見込まれることである．. Inoue H., Maeno Y., Iwasa M., Matoba R. and Nagao M., Screening and determination of benzodiazepines in whole blood using solid-phase ex-. 結. 語. traction and gas chromatography/mass spectro-. 本研究は ATLAS LEXT を用いることにより，これまで前処理操作の全自動化が不可能であった. metry. Forensic Sci. Int., 113, 367 373, 2000. 8). Laloup M., Ramirez Fernandez M. D. M., De. SLE による血中薬物の前処理の全自動化を行うこ. Boeck G., Wood M., Maes V. and Samyn N.,. とができ，対象薬物としたベンゾジアゼピン系薬物. Validation of a liquid chromatography-tandem. 18 種類の前処理として有用であることが示唆され. mass spectrometry method for the simultaneous. た．さらにその他の向精神薬については一部の薬物. determination of 26 benzodiazepines and metabo-. について低回収率となったが，概ね有用であった．. lites, zolpidem and zopiclone, in blood, urine, and. 本法ではウマ溶血血液を用いて検討したため実際例. hair. J. Anal. Toxicol., 29, 616 626, 2005.. に適用するには種差を考慮する必要があるが，実務への適用を検討する一助になると考えられた．. 9). S áanchez de la Torre C., Martáƒnez M. A. and. Almarza E., Determination of several psychiatric drugs in whole blood using capillary gas-liquid. 文 1). 献. 嶋根卓也，猪浦智史，邱冬梅，和田. chromatography with nitrogen phosphorus detec-. 清，. tion: comparison of two solid phase extraction. 薬物使用に関する全国住民調査（2019）．令和元. procedures. Forensic Sci. Int., 155, 193204,. 年度厚生労働行政推進調査事業費補助金医薬. 2005.. 品・医療機器等レギュラトリーサイエンス政策. 10). Usui K., Hayashizaki Y., Hashiyada M. and. 研究事業「薬物乱用・依存状況の実態把握と薬. Funayama M., Rapid drug extraction from hu-. 物依存症者の社会復帰に向けた支援に関する研. man whole blood using a modiˆed QuEChERS. 究（研究代表者嶋根卓也）」分担研究報告書．. extraction method. Legal Med. (Tokyo), 14, 286. pp. 19 120, 2020. 2). International Narcotics Control Board, Availa-. 296, 2012. 11). Sasaki C., Shinozuka T., Murakami C., Irie. bility of internationally controlled drugs: ensuring. W., Maeda K., Watanabe T., Nakamaru N.,. adequate access for medical and scientiˆc pur-. Furukawa M., Nakamura S. and Kurihara K.,. poses. pp. 32 41, 2010.. Simultaneous determination of 5 psychotropic. 3). Rapoport M. J., Lanct âot K. L., Streiner D. L.,. drugs of various types in an autopsy case of acute. B áedard M., Vingilis E., Murray B., SchaŠer A.,. multiple drug poisoning. Forensic Sci. Int., 227,. Shulman K. I. and Herrmann N., Benzodiazepine. 90 94, 2013.. use and driving: a meta-analysis. J. Clin. Psy-. 12 ). chiatry, 70, 663 673, 2009. 4). Uddin. M.. N.,. Samanidou. V.. F.. and. Papadoyannis I. N., Bio-sample preparation and. 江 o 治朗，多木崇，中尾賢一朗，薬物乱用. gas chromatographic determination of benzodia-. と交通事故，国際交通安全学会誌， 40, 35 44,. zepines―a review. J. Chromatogr. Sci., 51, 587. 2015.. 598, 2013.. 5). 警察庁交通企画課，交通死亡事故の発生状況. 13). Fisichella M., Odoardi S. and Strano-Rossi S.,. 及び道路交通法違反取締り状況等について，道. High-throughput dispersive liquid/liquid micro-. 路の交通に関する統計，42, 2019.. extraction (DLLME) method for the rapid deter-. 6). 清水惠子，Date Rape Drug と健忘，旭川医科. 大学研究フォーラム，7, 2 12, 2006.. mination of drugs of abuse, benzodiazepines and other psychotropic medications in blood samples.

(12) 河村真帆ほか. 102. by liquid chromatography-tandem mass spectro-. Petukhov A. and Bogstrand S. T., Determination. MS/MS) and application to forensic metry (LC. of phosphatidylethanol 16:0/18:1 in whole blood. cases. Microchem. J., 123, 33 41, 2015.. by 96-well supported liquid extraction and. 14). Logan B. K. and StaŠord D. T., Liquid/solid. extraction on diatomaceous earth for drug analysis in postmortem blood. J. Forensic Sci., 34, 553. UHPLC MS/MS. J. Clin. Lab. Anal., 33, e22631, 2019. 21). 564, 1989.. Tsuchihashi H., Tatsuno M., Miki A., Katagi. 15). M., Ueda K. and Nogami Y., Development and. Venisse N., Marquet P., Duchoslav E., Dupuy. evaluation of a fully automated liquid-liquid ex-. J. L. and Lach âatre G., A general unknown screen-. traction system for stimulants in urine. Jpn. J.. ing procedure for drugs and toxic compounds in. Forensic Toxicol., 15, 203 210, 1997.. serum using liquid chromatography-electrospray-. 22 ). 三木昭宏，掛橋秀直，松田駿太朗，篁直. single quadrupole mass spectrometry. J. Anal.. 樹，渡邉. 勉，石丸麗子，地中. Toxicol., 27, 7 14, 2003.. 子，土橋. 均，財津. 啓，草野麻衣. 桂，片木宗弘，精密試料. Sauve E. N., Langødeg ¹ard M., Ekeberg D. and. 前処理装置 ATLASX の開発と生体試料中乱用. Øiestad A.M.L., ° Determination of benzodiaze-. 薬物の分析への適用，日本法中毒学会第37年会. pines in ante-mortem and post-mortem whole. 講演要旨集，60, 2018.. 16). blood by solid-supported liquid-liquid extraction. 23 ). 草野麻衣子，財津. and UPLC MS/MS. J. Chromatogr. B, 883 884,. 樹，渡邊. 177 188, 2012.. 弘，三木昭宏，土橋. 17). 勉，石丸麗子，地中均，石井. 直. 啓，片木宗晃，自動前処. Saito T., Namera A., Tsuji T. and Inokuchi S.,. 理装置「 ATLAS X 」と LC / Q TOFMS を用い. Assessment of concentrations of four phenothia-. た肝臓中薬物スクリーニング法の構築，日本法. zine antipsychotics in serum and whole blood us-. 中毒学会第37年会講演要旨集，67, 2018.. ing diŠerent diatomaceous earth-based solid-. 18). 桂，三浦仁美，篁. 24 ). 石丸麗子，村上貴哉，岩室嘉晃，篁. 直樹，. phase columns: a comparative analysis. Anal.. 渡邊. 勉，三木昭宏，片木宗弘，草野麻衣子，. 819, 2019. Sci., 35, 815. 土橋. 均，財津. 桂，地中. 啓，自動前処理装. KristoŠersen L., Langødeg ¹ard M., Gaare K. I.,. 置「ATLASX」を用いた QuEChERS 法による. Amundsen I., Terland M. N. and Strand D. H.,. 全血中薬物の抽出，日本法中毒学会第37年会講. Determination of 12 commonly found compounds. 演要旨集，68, 2018.. in DUID cases in whole blood using fully auto-. 25). Phenomenex Inc., Novum SLE Information,. mated supported liquid extraction and UHPLC. available from [https://www.phenomenex.com/. MS/MS. J Chromatogr. B, 1093 1094, 8 23,. Products/Detail/Novum],. 2018.. 2020.. 19). Jones R., Williams L., Lamboley C., Senior A., Edgington A., Lodder H., Davies G., Jordan S., Desbrow C., Roberts P., Marin S., Menasco D.,. 26). accessed. Mar. 18,. 昭和四十七年政令第三百十八号，労働安全衛. 生法施行令，2019. 27). 石川亜香里，鎌田. 徹，新田篤志，浅井龍太. Neifeld J. and Gairloch E., Drugs of abuse extrac-. 郎，和田美暁，掛橋秀直，中野史保子，松田駿. tion from whole blood using supported liquid ex-. 太朗，佐々木啓子，志摩典明，鎌田寛恵，西岡. traction (SLE) and extrahera automation prior to. 裕，三木昭宏，片木宗弘，エフェドリン分析時. UPLC MS/MS analysis. Toxicol. Anal. et Clin.,. におけるメトカチノンの生成，日本法科学技術. 30, S62, 2018.. 学会誌，25, 185191, 2020.. 20). Berg T., Eliassen E., Jørgenrud B., Kabashi S.,.

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