Posted at the Institutional Resources for Unique Collection and Academic Archives at Tokyo Dental College,
Available from http://ir.tdc.ac.jp/
Title
№２７：口腔扁平上皮癌細胞における自家蛍光物質の発
現解析
Author(s)
丸茂, 知子; 田邉, 耕士; 三浦, 直; 野村, 武史; 笠原,
正貴; 柴原, 孝彦
Journal
歯科学報, 115(5): 484-484
URL
http://hdl.handle.net/10130/3834
Right
目的：口腔粘膜上皮の病変を観察する補助手段とし て，ヨード等による染色法が用いられる。しかし不 染域である過角化部には不適であり，アレルギーの 問題もある。そこで近年，細胞の自家蛍光をター ゲットにした蛍光観察装置を併用することで，肉眼 や染色では判別できない病変を検出する方法が導入 された。細胞内の自家蛍光物質は主に Collagen， Nicotinamide adenine dinucleotide（NADH），Fla-vin adenine dinucleotide（FAD）と さ れ る。こ の 装置は正常細胞とがん細胞の代謝の違いや Colla-gen 組織の破壊による自家蛍光物質量の差に着目し て開発された。しかし臨床報告のみで口腔組織での 基礎的エビデンスを示した報告はない。本研究では その機構を解明するために，細胞における自家蛍光 物質についての比較検討を行った。 方法：自家蛍光物質に想定される試料として Colla-gen，NADH，FAD を用い，それぞれ１μM の溶液を 作製した。また細胞試料として，ヒト表皮角化細胞 株（HaCaT），ヒ ト 口 底 扁 平 上 皮 癌 細 胞 株 （KON），ヒト舌扁平上皮癌細胞株（SAS），ヒト歯 肉扁平上皮癌細胞株（Ca９-２２）を用いた。各細胞 株を DMEM 培地（１０％FBS 添加）で培養し，剥離 回収後，PBS に懸濁し１×１０５ cells/mL の濃度で細 胞浮遊液を作製した。Collagen，NADH，FAD の 各溶液および各細胞浮遊液に分光蛍光光度計（RF-５３００PC，島津）を用い，励起波長（EX）３８０nm∼ ６８０nm の条件で 蛍 光 波 長（EM）を 測 定，比 較 を 行った。 結果および考察：正常細胞と癌細胞において蛍光強 度（W）を比較した結果，正常細胞に比較して有意 に癌細胞の蛍光強度は弱かった。また蛍光観察装置 の照射波長範囲（およそ EX４１０nm∼EX４５０nm）に おける蛍光強度の比較も合わせて行ったが，同様の 結果を得た。続いて，蛍光物質と正常細胞における 蛍光特性についての比較検討を行った。どの物質に おいても，正常細胞が示す蛍光スペクトルの特徴と 一部一致するピークを認め，これらの物質が細胞の 自家蛍光に関与している可能性が示唆された。今 後，細胞における各物質の含有量についての検討が 必要と考えられる。 目的：ミダゾラムとプロポフォールは歯科治療時の 静脈内鎮静法で頻用される薬物であり，鎮静・健忘 作用とともに呼吸抑制作用も有する。そのため，気 道と術野が一致する歯科治療時の静脈内鎮静法にお いては呼吸監視が特に重要であり，日本歯科麻酔学 会のガイドラインでも呼気二酸化炭素分圧のモニタ リングなどの呼吸監視が推奨されている。これま で，鎮静薬投与前と投与後の呼吸安定時の呼吸状態 を比較した報告は多くあるが，鎮静薬投与直後から 静脈内鎮静中にかけての呼吸状態の経時的変動につ いて観察した報告は少ない。そこで本研究では，鎮 静薬の違いによる呼吸抑制の差を検討するために， 鎮静薬投与後の呼吸状態の経時的変動を観察した。 方法：本研究は，東京歯科大学倫理委員会の承認を 得て実施した（承認番号：５８６）。対象は ASA 分類 Ⅰの健康成人ボランティア１１名で，ミダゾラム群 （M 群），プロポフォール群（P 群），ミダゾラム・ プロポフォール併用群（M+P 群）の３群を cross-over で観察した。各鎮静薬を投与し，Bispectral Index（BIS）で至適鎮静レベルが得られたことを 確認後，１５分間にわたって RR（呼吸回数），呼気 二 酸 化 炭 素 分 圧（ETCO２），動 脈 血 酸 素 飽 和 度 （SpO２）を観察した。統計処理には Kruskal Wallis
H-test と分散分析を用いた。 結果：BIS は，M 群と M+P 群では薬物投与後約２ 分で，P 群では約５分で至適鎮静レベルである７０− ８０に到達した。RR は３群すべてで増加した。M 群 では測定開始後１分までに最大約４０％，M+P 群と P 群では測定開始１−３分までに約２５％の増加を認 め，その後はその呼吸回数を維持した。ETCO２は ３群すべてでコントロール値より６−９％上昇し た。SpO２は３群すべてでコントロール値より２− ２．５％の低下を示し，その後は基準値より１．５％前後 の低下にまで回復した。ETCO２と SpO２は３群間に 有意差を認めなかった。 考察：３群すべてで RR はコントロール値より増加 しているにも関わらず，ETCO２は上昇し，SpO２は 低下した。このことから，呼吸抑制による一回換気 量の減少が RR の増加では代償できなかったことが 推測され，特にミダゾラムは一回換気量の減少率が プロポフォールよりも大きいことが示唆された。
