移 骨髄 植 後 免疫 学 的 検 討 りり

3 6 金沢 大 学 十 全 医学 会 雑 誌 第9 3巻 第¹ 号 3 6 ⁻4 5 く1 9 8 41

骨 髄

移

後

学

検

りり

T リ ン ^パ球 サ ブ^セッ ト と そ^の 免疫学的 反応 性に^{つ い} て

金沢大 学 医 学 部 第三内科 単 数 重 く主任^二服 部 純 ^一教授ン

上 田 幹 夫

く昭和^{5 9}年¹ 月1 9日受 付ン

同種 骨 髄 移 植お よび自 家 骨 髄 移 植後 長 期 生 存^{し ている}患 者を対 象と し て，末 梢血T⁻C ell サ ブセ ット およ び そ の免疫 学 的 反応 性^{に つ い}て 比較検 討を行った^． 同種 移 植 く4例フ^およ び自 家 移 植 く4例う^の両群 は， 移 植前の基 礎 疾 患， 移 植 前 処 置と し て の治 療， 移植 後^の支 持 療 法， 移 植か ら免 疫 学 的検 討を加え る ま での期 間， な ど の点で ほ と ん ど差 異を認めず， 群 間比較が検 討 可 能な対象^と思わ れ た． これ ら両 群の間の

比 較で は， モ ノク^ロナ ^ー ル抗 体の O K T 3， O K T 4， O K T 8 ^およ び O K T ^al 陽 性細 胞 数^に有 意な差を認め た． さ らに移 植 患 者と 正常 人との間^にも同 様な T−^{C ell サ ブセ}ッ ト の明ら か な差 異を認め た． 特徴 的なこと は， 移 植 後 長期^にわ たって 回復 遅 延 傾 向を 示 す O K T 4 陽性 細胞^と， 著 明な増 加傾 向を 示 す O K T 8陽 性 細 胞が常^に観 察さ れ る点^で， こ のた め O K T 410 K T 8 比 は両 移 植群と も著 明な低値が持 続し， こ の O K T 41 0 K T 8比は自 家 移 植 群^に比^べ同 種 移 植 群^で有 意^に低 下し ていた． mitog^{e n} に対す る幼 君 化 反 応 く以 下

mitoge n 反 応 性と す る．う も T ⁻C e11 サ ブセ ット と同様^に， 同種 移 植 群^が自家 移 植 群^{に比 し}著 明な低 反応 性 を 示 し^， ま た移 植 患者の反 応 性は 正常 人に比^べ明ら^かな低 下を 示 し た^{． 一} 方， リ^{ン パ}球 混 合 培 養 くmix ed

l_ym pho cy t^e c ultu r e， 以 下M L C と略I を 用^いた同 種 抗 原^に対す る反 応性 くM L C 反 応 性l ^に関す る検 討で

は，移 植 患 者お よ び 正常 人の間^に差 異は認め ら れず，ま た同種 移植 群と自 家 移 植群の比較で も M L C 反応性

に有 意差は み ら れ な かっ た^{． つ}ぎに， mi toge n 反応 性と T−^{C ell サ ブセ ット との関 係を検 討す る と， phy to−}

he m ag glutinin くP H Al 反応 性の み が O K T 410 K T 8 比 お よ び O K T⁴ 陽 性 細胞 数と有 意 く^いずれ もp く 0．0 11 の相 関を 示 し た^． 以 上の成 績よ り， 骨 髄 移 植 後 長 期生 存し て^いる例で も， T⁻C ell の再構 築は不 完 全 で かつ異常が認め ら れ，そ の異 常は T ⁻C ell サ ブセ_ッ ト^のイ^{ン バ}ラン スを特 徴と し， 同種 移 植お よ び自 家 移 植の両群^に認め ら れ る が， 前 者にそ の程 度が よ り深い こと が 示唆さ れ た^．

Key ^{w or}ds B o n e m a r r o w tr a n splantatio n， T⁻C ell r e c o n stitution，

Pr olife r ativ e r e sp^{o n s e}

白 血 病や再 生 不 良 性 貧 血な どに対す る治 療 法と し て， 同種 骨髄 移 植 くalloge n eic bo n e m a r r o w tr a n S⁻ pla ntatio n， 以 下al lo⁻B M T と晰 は目 覚^{ま しい}進歩 を遂 げて^いる． し^かし な が ら， allo−^{B M T 患 者は し ば}

しばa c ute gr aft−V e r S u S⁻ho stdis e a s e く以下^aG V H D と略1， Chr o nic gr aft⁻V e r S u S−^{ho st d is e a s e く以 下}

cG V H D と田削 お よ び長 期^にわ た り持 続す る免 疫 不 全

によ る も の と考え ら れ る 日和 見 感 染な ど の危 険^にさ ら さ れ， これ が死 因^の大 部 分を占め て^いる^り． これ ら Stud ie s o n Im m u n ologi ^{cal Re c o n stitutio n}

G V H D や免 疫 不 全 状 態^{に み}ら れ る免疫 学 的 問 題は，主 に T ⁻C ell の再構 築^およ び そ^の機能を検 討す る^ことに

重点が置^かれ て き た^2潮． ま た， 骨 髄 移 植 後^の免疫 学 的 回復^に関す る検 討は， allo−B M T 患者^につ いて は多数

の報 告^4ト8Iがみら れ る が， 自 家 骨 髄 移 植 く^{a utolo}g^{o u s} bo n e m a r r o w tr a n spla ntio n， 以 下a utor^{B M T と略l} 患者^{に つ い て}の検 討⁹恨 き わ め て少な^い． 当 教 室塩 原 ら^{1 0}恨， 骨 髄 移植 後 早 期^の免 疫学 的再 構 築^{に つ い て，}

a uto ⁻B M T 群の方が allor^{B M T 群に比べ再 構 築が早}

afte r B o n e M a r r o w T r a n spla ntatio n． E^Iコ^こ

Re c o v e ry ^of T ^{−C e}11 Subs ets a nd Im m u n e Re a ctivi tie s． M ik io U eda_， Dep^{a r}t^{m e n}t of Inte r n al M edicin e III く^{D ir e cto r こPr of． K ． H atto ri}J， Scho oI of M edicin e

， K a n a z a w a Univ ersit y，

Ka n a z a w a，9 20．

く し^かも完 全^であ ること を報 告し て^いる^． ま た 原 田 ら^川も， 移 植 後 末梢血 リ^{ン パ}球の回復初 期^にお^いて，

allo−^{B M T で は}見ら れ ないT−C ellの急峻なス パイ ク を^{a uto}−B M T の大 多 数例で認め る報 告を し ており，

allo⁻B M T， a utO⁻B M T で は リ^{ン パ}組 織 系の再構 築に

相 違が あ る 可能 性を 示唆し ている． そこ で， 本 研 究で は骨 髄 移植 後¹年 以 上長 期 生存し ている症 例を対 象と し て， a1lo ⁻B M T とa uto−^{B M T に}お^いて移 植後^の免 疫 学 的回復^に差が あ る か ど うか を明らか にす る た め に， 末 梢血サ ブセ_ッ ト お よ び種々 の抗 原 刺 激^に対す る リ^{ン パ}球増 殖反応につき検 討を加え た^．

対 象お よ び 方 法 I ． 骨 髄 移 植^の方 法

当教 室^{に お}け るa1lo⁻B M T お よ びa uto⁻B M T の方 法に つ い て， 既^に詳細^に報 告^{1 21 川}さ れ て^いるのでこ こ では そ^の既 略を述^べる． Fig^．1 に示 さ れ る よ うに a1lo

−^{およ びa uto}−B M T 患 者は， 移 植 前 処 置と し て大 量 く12 0m gノkgl _{の サ イ ク}ロ ホス フ_ァ マイ ド くcy^clo⁻ pho sphami del と 1 0 Gy のtotal body ir r ad iatio n

くT B 工ユ を受け る た め，移 植後ほ ほ完全 な骨髄無形成が招 来さ れ， こ の造 血 不 全 状 態を 回復させ る目 的^でa1lo

−^{あ るいはa uto}−^{B M T が}施 行さ れ ている^． allo−B M T は F ig^．1くal ^に示 さ れ る よ う^に， H L A の ^一 致し ている 同 胞か ら採取 し た骨 髄 細 胞を， a utO ⁻B M T は Fig^．

A L し0 ⁻B M T

くaナ

1くbうに示 さ れ る よ う^に， 腫瘍 細 胞 浸潤を認め な^い時 期

に採 取凍 結保 存し た自 家骨髄 細 胞を解 凍し輸 注す る．

移植 前処 置^から移 植骨 髄が生者^{し そ の}機 能が 回復す る

ま での問は，1a min a r air 80 W を備え た無菌 室に隔

し， 非吸収 性抗 生 剤の内服吸 入によ り腸 管 内菌 草の完 全抑 制を行^い， 中 心静 脈 高カロ リ^ー 栄 養^を含む強 力な 支持 療法を施 行^{し た． allo −B M T} 患 者^には，G V H D ^の 予防^のた め T bo ma s らの標 準 的な方 法^{1 5}りこよ^ってメ ソト^レキセ ^ー トくm ethotr e x atel を移 植 後day lO 2 ま で投 与し た．

王工． 対 象 患者

Tab le l は本 研 究の対 象と し た症 例^の臨 床 的 特 徴 を示 し た も^{の で}あ る． allo⁻B M T を受 け た 4 例は， 2 例が a c ute lymphobla stic le uke u mi a くA LU ． 残り 2例がa c ut_e m yeloge n o u sle ukemi a くA M U の基 礎 疾患を有し ていた． 年齢は 13歳か ら 4 6歳ま で で， 平 均年 齢は 2 6歳であった．4例と も現在 無 治療で生存 中

であ る が， CG V 壬i D が消槌し後遺 症を残して いる1例 くN o．11 を除き， 残る 3 例はcG V H D を全く認め な か^った． a ut_o ⁻B M T を受け た 4 例は，3 例が adv a n c⁻ ed n o n−^Hodgkin

，

slym pho ma くN H u ， 1例が 比較

的早 期のn a s opha rynge alc a r cin o m aくN P Cン^の基礎 疾 患を有し ていた．患 者の年 齢は 2 8歳か ら 52 歳^に及び，

平均 年齢は 39 歳であった．移植 後6 カ月 目以 後^に発 症 し た感染 症^{に つ い}て は， ウ イ^{ル ス}感染 症と真 菌 感 染症

A U T O ^岬 B M T

C 三 三基ニュニプ

ト ＋

C 三 三 妄ニニ ニプ

j ^苫

C^三さ三 三ニニニプ

R ADI A T把削

くbナ

CR Y O P R 亡 S E R V A T I O N

F i_g^．1^． Sche m atic r epr e s e ntatio n s of a1loge n eic a nd a utologo u s bo n e m a r r o w tr a n spla ntatio nく^allo−^{B M T a nd a uto−B M T}I^．

3 8 上

を認め，a1lo⁻B M T 群で は 4 回， a utO−^{B M T} 群で は1 回 の発 症を認め た． 免^{疫学 的 検 査を実施した時に，No．}

3 と N o．4 の 2例^に漸 減 量で あ る少量のプレド^ロ ソ^ロ ンくpr ednis olo n eIが投 与さ れ て^いた他^には， 免 疫 抑制 剤は使用 さ れ て^いな かった． な お， 対 照^に用^いた 正常 人 は， 患者の年 齢^に相 応す る年齢 層^の健 康 人を選 択し た．

IIl^． 末梢血単 核 細 胞^の分離

末梢 血 単 核細 胞 くpe ri_phe r al b lo od ^m o n o n u cle a r c e11s， 以 下P B M C と略1 は， ヘ パリ^ン加 末棉 血か ら Fic o11⁻H _{y p}aqu e 比重 遠心法を 用 ^いて分 離 し た^． P B M C は R P M I 1 6 4 0 培 養液 くG I B C O，G^{r a n}d I^slan d，

N ．Y．1で3 回洗 浄し， 15％fetalc alfs e r u mく以下F C S と略， G 工B C Oほ口 R P M I 16 4 0 培 養 液^に再 浮 遊さ せ， 以 下の実験^に用^いた^． な^お， Tab lel に示 す よ う^に， 4 人 ず^{つ の} allo ⁻B M T ^およ び^{a uto}−^{B M T 患者から そ れ ぞ}

れ 8 回 と 7 回^の検 体 採 取を行っ た．

1 軋 ^{モ ノ}ク^ロナ ^{ー ル}抗 体を 用^い た T ⁻C ell サ ブ^セッ トの解 析

T ⁻C ell の分 化 抗 原^に対す る特 異 的なモ ノク^ロ ナ ^ー ル抗 体O K T 3， O K T 4， O K T 8 お よびO K IalくO^rtho

D iag^{n o s}tic Syste m sI^{n c．}Ra rita n， U⁻ S^■A−1 を 用い て， 移 植 患者^{P B M C にお け る T −C ell サ ブセッ ト を}間 接 蛍 光 抗体 法^で検 討し た^． 2 0叫^1の培 養液^に浮遊さ せ

た1 X lO^6のP B M C に対し， 各^{モ ノ}クロ ナ ^ー ル抗体を 5メ1 ず^つ加え4⁰Cで3 0 分反応さ せ た． 反応 終了後，

c old pho sphate buffe r s alin e 似 下^{c o}ld P B S と略，

日水 製 薬う を 用^い， 2 回 洗 浄し た後， 10伸1の c old P B S ^に再 浮 遊さ せ， そこ^へ，40 倍^に希 釈し た蛍 光標 識 抗マウスIgG ヤ ギ 血清くC^ap p^el Lab^．Co chr a n ville，UI

S^． Aう^． を等 量 加え 4 ⁰C で 3 0 分 間反 応さ せ た． 反応終 了後， C Old P B S を用^い3 回洗 浄し た後pellet を再 浮 遊さ せ， 蛍光 頗 微 鏡 くF lu ophot， N i ko n，Tok_yol 下 で陽性 細 胞を算定し た^．算 定は40 0偶の細 胞を観 察し，

その陽性 細 胞^の比率を求め， これ と P B M C 数との積

によ り各T ⁻C ell サ ブセ ットの実 数を算 出し た^． V ^． mitoge n 反応性と リン パ球混合 培養

mitoge n 反 応 性お よ び リン パ球 混 合 培 養 くM ix ed lym pho cy t^{e c u}ltu r e， 以下 M L C と晰 は既に報告し た方法^{1 41に}拠^って行っ た^． す な わ ち， mitoge n 反 応は，

P B M C を 1 ^Xl O⁶ノ^ml 濃 度で15％F C S 加R P M I 16 4 0 培 養 液に浮 遊さ せ た ものを， 2 0 0_J^Llず^{つ m}ic r oplate

くN u n clo n揮1 6 33 2 0，Nu n c，De n ma rkl に分 注し， あ らかじ め 予備 実 験^で得ら れ た そ れ ぞ れの mitoge n の 至適 量を加え 7 2 時 間 培 養し た． mitog^{e n} と し て は，

c 。n C a n a V a rin A く以下 Co n A と略l， Bo ehring^{e r} M a n nheim G^mb H， W ^． Ge r m a nyl P h_{y t}ohe m ag⁻

g

l^utinin⁻P 似 下P H A と略l， D ifc o Lab，U^．S^．Al^．

Tab le l^． Patie ntcha r a cte ristic s

patie nt D iag^{n o s}is^a G V H D^b Infe ctio n^cin Outc

9T^{n e}ミ ミ_d竺禦鯉り苧

ateくm ol N o．Age Se x く毒蒜^{竜一もM T}I ^{Ac ute chr o nic lo ng te r m pe riod s u r viv al}く^{m o}l

A llog^{e n e}ic 1 27 M 2 1 8 M 3 4 6 M 4 ¹3 F Autolog^{o u s}

5 3 8 M

A L L く^{1st Re}り

A L L く¹st C RI

A M L く^1st C即

A M L く2nd C RI

N H L く工Ill 6 2 8 M

く^Tl

鴛も

7 5 2 M 8 3 8 F

N H L く1III

II in a ctiv e

ト 1 ト 1

ト1 トン

ロ ト1

N H L くI用

Trichophy to n

V Z V V Z V Trichophy to n

トラ

ト1 ト1 V Z V ト1

C R く^ン641 ⁴3．52 C Rく^ン2 91 ^{1 4}， 2 3 C Rく^ン1 81 12^， 15 C Rく^{ン 1}引 ¹2， 1 5

C R く^ン3 91 C Rく^ン3 91 C Rく^ン371 C Rく^ン2 91

24， 30 2 4

2 2， 2 7，3 1 23

a A L L，a C utel_ym phob la sticle uke miai A M L，a C ute m yeloge n o u sle uke miai N H L，n O n⁻Hod_gk in

，

s

l ym pho m ai N P C，n a S Opha rynge al c a r cin o m ai Rel，r elaps eミC R，C O m plete r e mis sio ni B M T，bo n e m a r r o w tr a n spla ntatio n

b G V H D，gr aft⁻V e r S us ⁻ho stdis e a s e． C V Z V ，V a ric ella z o ste r vir u s．

d m o， m O ntb．