〈原著〉マウスヘルペス性角膜炎の再活性化抑制法の検討
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(2) 4. 渡遁敬三. 今回本研究において，マウスへルベス性角膜炎モ. 内服群，これらのコントロールとして生理食塩水(生. a s c o r b i c a c i d， デルを用いて，アスコルビン酸 (. 食)内服群， AMP筋肉内注射(筋注)群，このコン. AsA)，亜鉛 ( Z n )，アデノシンモノブォスフェート ( a d e n o s i n emonophosphate，AMP)，ゲル夕、ナマイ Geldanamycin，GM) の HSV-1再活性化抑 シン (. 群，このコントロールとしてジメチルスルホキシド. トロールとして生食筋注群， GM腹腔内注射(腹注). (DMSO) 腹注群，計 7群であった. 3 5 0匹のマウスを使用し，各群5 0匹ずつに分類し. 制効果を検討した. 7. 1 8に関しては，抗ウイル これまでに A s A I 5 . 1 6，Zn1. T ご. ス作用が報告されており ，ACV ，VACVと同様の再. 薬剤投与. 発抑制効果が期待できると考えた. AMPに関して. 各薬剤の作成および投与方法は以下の通りであ. と G Mはマウスモデルにおいて有意な再活性化抑. ，S tL o u i s，USA) 内服では 0 . 4 る. AsA(SIGMA mg，Zn(SIGMA，S tL o u i s，USA)内服では 0 . 0 0 6 5 mgをそれぞれ生食(大塚製薬，徳島 ) 0 . 5mlに溶解 し 1日 2回投与した. これらのコントロールの生食 内服では 0.5mlを 1日 2回投与した.AMP(ナカラ イテスク，京都)筋注では 0 . 0 4mgを生食0 . 1mlに . 1mlを 1日 1 溶解し 1日 1回筋注，生食筋注では 0 回筋注した.G M( In vivogen，SanDiego，CA，USA) 腹注では 0 . 2 5mgを DMSO(和光純薬，大阪)0 . 2 5 mlに溶解し 1日 1回腹注， DMSO腹注では 0.25ml. 制効果を認めた.. を 1日 l回腹腔内注射した.. y c l i c -AMP( cAMP)r e s p o n s eelementb i n d i n g は ， c p r o t e i n (CREB) が HSV-1の潜伏感染，再活性化 に関与すると報告されてきた 19-21 また， G Mは h e a tshockp r o t e i n9 0(Hsp9 0 )i n h i b i t o rであり 22 Hsp遺伝子がマウスへルペス性角膜炎の再活性化 時に有意に発現上昇することが報告されている 23 しかし，これら AsA ，Zn，AMP，G Mがマウスヘ ルベス性角膜炎の再活'性化抑制に有効かどうか検討 した報告はない.今回これらのことを検討し， AMP. 法. 方. 内服群は，注射器(テルモシリンジ⑧ 1ml，テルモ， 東京)に R e s e a r c hP i p e tT i p s( 0 . 1 1 0ぃ 1 )( B i o S -. c i e n c eI n c，S a l tLakeC i t y，Utah，USA)を{寸け，. ウイルス接種 すべての動物実験は，近畿大学医学部動物実験委. マウス口腔内に投与した.筋注群は，注射器(同上). 員会規定に基づいて行なった. BALB/cマウス(メ. に 27G針(テルモ，東京)を付け大腿筋腹に注射し. 5週齢，日本クレア株式会社)をケタミン(ケ. た.腹注群は，筋注群と同様に注射器に 27G針を付. ス. タラール⑮，三共株式会社，東京)麻酔下に，両眼角 膜上皮を 27G針で D oubleS c r a t c hに擦過し， HSV. 1McKrae株 (7x10 PFU/eye) を接種した. 3. 角膜上皮障害スコア ウイルス接種 3， 4日後に，マウス角膜をフルオ レセイン染色液にて染色，細隙灯顕微鏡下で観察し，. け腹腔内投与した. 各薬剤の投与は以下の再活性化施行の 3日前(ウ イルス接種2 5日目)より開始し，計 5日間行った. 急性感染期に約 60%のマウスが死亡し，薬剤投与開 始時には各群とも 2 0から 2 5匹であった. 再活性化 再活性化法は過去の報告 13 同様，潜伏感染が成立. 上皮型へルペス性角膜炎の程度を表 lに従いスコア リングした 24. したと考えられるウイルス接種2 8日日に，サイクロ. グループ分類. フォスフアミド (SIGMA ，S tL o u i s，USA)2 0 0mg/. ウイルス接種 4日後に，生存マウスを各群で上皮 型へルペス性角膜炎の程度が同程度になるように， 以下の 7群に分類した.すなわち， AsA内服群， Zn. Kgを腹注し，その 2 4時 間 後 に デ キ サ メ サ ゾ ン (SIGMA，S tL o u i s，USA)1 6mg/Kgを腹注した. 更に 4時間後， 4 3Cの温水中にマウスを 1 0分間浸け 0. た後，乾燥させた. 表 1 角膜上皮障害スコア. o:上皮障害を認めない. 1 点状表層角膜炎を認める. 2 樹枝状角膜炎あるいは地図状角膜炎が上皮全体 の1 / 4未満を占める. 3 :樹枝状角膜炎あるいは地図状角膜炎が上皮全体 の1 / 2未満を占める. 4 :樹枝状角膜炎あるいは地図状角膜炎が上皮全体 / 2以上を占める. の1 文献2 4より改変.. 組織中ウイルス P laqueAssay 再活性化 2 2時間後に，眼球と三叉神経を採取し，. 500rpm，1 0分間遠心分 各組織をホモジナイズ後， 3， 4穴培養皿に単層培養した Vero 離し，その上清を， 2 細胞に接種し， P laqueAssay法により組織中ウイル スの有無を検討した 25-28. DNA抽出 採取した眼球，三叉神経のホモジナイズ及び遠心. i s s u eK i t ⑧( Q i a g e n 分離後の沈殿物から， DNeasyT.
(3) 5. ヘルペス性角膜炎の再活性化抑制. I n c， Santa C 1 a r i t a， C a l i f o r n i a， USA) を用いて DNA抽出を行った. 各 サ ン プ ル の DNA量 を 分 光 光 度 計 に よ り 計 測 0 0ngになるよ し，それぞれのサンプル DNA量 が 1 う調整した.. 表 2 内服群再活性化後に HSV-1が検出されたサン AsA，Z n ) プJレ数と割合 ( 生食内服. AsA内服. Zn内服. 三叉神経節. 5 / 2 0 ( 2 0 % ). 2 / 1 5 ( 13 %). 8 / 2 5 ( 3 2 % ). 眼球. 6 / 2 0 ( 3 0 % ). 1 / 1 5 (7%). 3 / 2 6 ( 1 2 % ). R e a 1 t i m ePCR Taqman u n i v e r s a 1 PCR master mix，N0 AmpErase@(PEBiosystems ，New]ersey，USA). 陽性サンプル数/総サンプノレ数を示す.下段( )内は再. を試薬として用いた.プライマーは， f orward 5 ' -. 活性化率.. d 官ル一. 設計し，ゲノム DNAをターゲットとした.プロープ. 5 / 2 2 ( 2 3 % ). 眼球. においても同じ増幅領域に設計し， 5 '末 端 側 に レ ポ に ク エ ン チ ャ 一 色 素 と し て 6-carboxy-. t e t r a m e t h y1 -rodamineを標識した. PCR反 応 液 は PCRmastermix， 各 プ ラ イ マ ー を 2 0 0nM， プ ロ ー. 0. 4 / 2 0 ( 2 0 % ) 4 / 2 2 ( 1 8 % ). 表 4 腹注群再活性化後に HSV-1が検出されたサン プル数と割合 ( GM). GM腹注. DMSO腹注. 0 0 0SequenceD e t e c t o r (PE 機 器 は ABIPRISM7. 0. AMP筋注. 陽性サンプル数/総サンプル数を示す.下段( )内は再 活性化率.. プを 1 0 0nM，サンプルを 51 1 >1 混和し， 2 5凶 と し た .. o s t e rC i t y， C a l i f o r n i a， A p p 1 i e d Biosystems， F USA) を 使 用 し た . 増 幅 条 件 は 9 5C 10 分間， 9 7C20 秒間， 5 8C1分 間 を 5サイクル， 96T20秒間， 5 8C 5サイク lレで施行した 25-27 既 知 量 プ ラ ス 1分 間 を 4. //Jdaτ. Runru. 三叉神経節. h s v 13 3 2 4 3DNApo1ymerase(UL30) gene領 域 に. ータ一色素として 6 -carboxyf l u o r e c e i n， 3 '末 端 側. 、竜一. と HSV-2に共通である h erpes v i r u s 1 i s o 1 a t e. 注一) 筋一幻%. 表 3 筋注群再活性化後に HSV-1が検出されたサン プノレ数と割合 (AMP) 生一(. ACATCATCAACTTCGACTGG-3'，r e v e r s e5 ' CTCAGGTCCTTCTTCTTGTCC-3'を，プロープ は 5'-ATGGTGAACATCGACATGTACGG-3'を 用 い た 29-31 ま た プ ラ イ マ ー は 増 幅 領 域 を HSV-1. 3 / 2 2. 三叉神経節. 1 1 / 2 4 ( 4 6 % ). ( 14 %). 眼球. 5 / 2 4 ( 2 1 % ). 4 / 2 4 ( 1 7 % ). ※. 0. 0. h r e s h o 1 d ミド DNAの 希 釈 配 列 を 用 い て 得 ら れ た t c y c l e ( C t )からスタンダードカーブを決定し， LOX. 06 コ ピ ー ま で の リ ニ ア レ ン ジ を 得 1 01から LOX1 equenceD e t e c t o r た.データ解析は，ABIPRISMS o s t e rC i t y ， v e r s i o nLO(PEA p p 1 i e dBiosystems，F C a 1 i f o r n i a， USA) を用い， HSVDNA量 を 定 量 し た . こ れ ら の プ ラ イ マ ー は 目 的 と す る HSVDNA 以 外 の ゲ ノ ム DNAは増幅しなかった.. 統計処理 各薬剤投与群における P 1apueAssay陽 性 サ ン プ. i s h e r ' sexactp r o b a b i 1 i t yt e s tに ル数に関しては， F て検定し， R e a 1 t i m ePCRによる HSV-DNA量 に. 陽性サンプル数/総サンプル数を示す.下段( )内は再 活性化率. ※ :GM腹注群とコントロール群との比較にて有意差を 認めた ( F i s h e r ' se x a c tp r o b a b i l i t yt e s t . P<0 . 0 5 ) . 表 5 内服群再活性化後の三叉神経節及び眼における HSVDNACopy数 (AsA ，Zn) 生食内服. AsA内服. Zn内服. 三叉神経節. 2η: t3 . 9 9 X 1 03 3 . 5 8: t54 7 X 1 03 1 .4 5: t2 . 5 5 x 1 03 ( n=20) ( n = 1 5 ) ( n = 2 5 ). 眼球. 5 . 5 0: t14.6XW 1 . 21 土2 . 0 2 X 1 0 '4 . 5 8: t1 0. lxW ( n = 2 0 ) ( n = 1 5 ) ( n = 2 6 ). 目. 目. 数値は平均値±標準偏差を示す.. Whi t n e yU t e s t及 び We 1 cht e s t 関しては， Mannにて検定した.. ル群と比較し，プラック陽性率に有意の差を認めた.. 結果. 1aqueAssayによる検討で， G M腹 注 は すなわち， P. 1aqueAssayの 結 果 を 示 表 2， 3， 4に組織の P す.三叉神経節および眼球における検討で， AsA内 服群， Zn内服群， AMP筋 注 群 に お い て は ， コ ン ト. マウスヘルペス性角膜炎の再活性化抑制効果を認め. た. 表 5から 7，図 1から 3に ， R e a 1 t i m ePCRの 結. ロール群と比較しプラック陽性率に有意の差を認め. 果を示した.. なかった. G M腹 注 群 で は 眼 球 に お い て は 有 意 の 差. ま ず ， 表 5及 び 図 1に AsA内服群， Zn内服群の R e a 1 t i m ePCRの 結 果 を 示 す . 両 群 と も 三 文 神 経 節. を認めなかったが，三叉神経節においてコントロー.
(4) 6. 渡. 敬. 漫. A. B. 100000. •••••.••••. j1000. 乱 100. .- -. 図 1 内服群再活性化後の三文神経節及 び眼球における HSVDNACopy 数 (AsA ，Zn). 各点は，各三叉神経節ωおよび眼 B )における HSVDNAC opy 球( 数を，パーは各群の平均 DNA Copy数を示す.. Zn. Zn. ASA. 生食. ・1M. 1 0. : 性. 10. ・ ・ -. ~O. -7. V E -. 2. -S24. ・ ・ 一 -・ ・. lUO{)O. A. B 50. .，.，. m w. ー耐. ST・ -. ハυ A V. 32. 滋. ，. 山山川町. taSEES. ••••. a a M W忍電車。。 晶. ol ot o. 証). JO. 一時. . -. •. -sz'. 10. AMP. AMP. 生食. A. • . . •. 図 2 筋注群再活性化時の三叉神経節及 び眼球における HSVDNACopy 数 (AMP) 各点は，各三叉神経節( A )および眼 球( B )における HSVDNAC opy 数を，パーは各群の平均 DNA Copy数を示す. ※ :AMP筋注群とコントロール 群との比較にて有意差を認めた (Mann-Whitney U T e s t，Pく 0 . 0 5 ).. B. 100000. .~O. 10000. 40. --T. ・ ・. 2. ま自 3az. luOO. 図 3 腹注群再活性化時の三叉神経節及 び眼球における HSVDNACopy. 100. 数 (GA). 10. 10. GM. -す刷. --. DMSO. s. O. DMSO. 各点は，各三文神経節ωおよび眼 B )における HSVDNAC opy 球( 数を，パーは各群の平均 DNA Copy数を示す.. および眼球においてコントロール群と比較し有意差. ルペス性角膜炎の三叉神経節での再活性化に対する. を認めなかった.. 抑制効果を認めた.. 表 6及び図 2に AMP筋 注 群 の R e a l t i m ePCR. 表 7及び図 3に G M腹注群の R e a l t i m ePCRの. の結果を示す. AMP筋注群は生食筋注群と比較し. 結果を示す.三叉神経節および眼球の両者ともに有. て，眼球においては有意の差を認めなかったが，三. 意の差を認めなかったが，三文神経節においては，. 叉神経節におけるウイルス DNA検出コピー数に有. ウイルス DNA検 出 コ ピ ー 数 が 少 な い 傾 向 を 認 め. 意な減少を認めた.すなわち， AMP筋注はマウスへ. た..
(5) 7. ヘルペス性角膜炎の再活性化抑制. 表 6 筋注群再活性化時の三叉神経節及び眼球におけ る HSVDNAC opy数. (AMP) AMP筋注. 生食筋注 三叉神経節. 2 . 3 0士 3 . 1 6 X 1 03 (n=21 ). 眼球. . 4 5 X 1 01 2 . 5 5土 4 ( n=22). ※. 8 . 3 9: t2 7‘2X1 02 ( n = 2 0 ). 4 . 5: t1 7 . 4 X 1 0 -1 ( n = 2 2 ). 数値は平均値±標準偏差を示す. ※ :AMP筋注群とコントロール群との比較にて有意差 を認めた ( Mann-WhitneyUt e s しP <0.05). 表 7 腹注群再活性化時の三叉神経節及び眼球におけ る HSVDNAC opy数. 三叉神経節. (GM). DMSO腹注. GM腹注. 1 .3 4: t3 . 1 7 X 1 03. 4 . 8 9: t1 0 . 3 X I 02 ( n = 2 2 ). ( n2 4 ) 二. 眼球. t2 4 . 8 Xl O -1 9 . 1 7: ( n = 2 4 ). 1 .0 8: t3 . 3 4 X I 01. ( n = 2 4 ). 数値は平均値±標準偏差を示す.. 今回の研究では， GM腹 注 は 三 叉 神 経 節 で の P l a q u eAssayによる検討で有意にウイルス量を減 少させ(表 4 )， R e a l . t i m ePCRの結果においても， 有意ではないものの HSV-1の再活性化抑制傾向を 認めた(表 7，図 3) .P l a q u eAssayと R e a ltime PCRの結果に，やや差が認められた理由として，以 下のことが考えられる.. P l a q u eAssayでは l i v ev i r u sを検出するが， R e a l i v e t i m ePCRではウイルス DNAを証明するため， l v i r u sの み な ら ず 潜 伏 感 染 状 態 に あ る ウ イ ル ス DNAも検出する.急性期における検討では，ウイル ス力価とウイルス DNAコピー数は，同様の傾向を 示すと考えられるが，潜伏感染および再活性化実験 においては，両者の結果が必ずしも一致しないこと が予想される.そのため再活性化での評価を下す場 合 ， P l a q u eAssay，R e a ltimePCRの順に結果を 重要視するべきと考えられる.一方， G M腹注のコ. 46%) ( 表 4) は ， ントロール群である DMSO腹 注 ( 生食内服群 ( 20%) ( 表 2)あるいは生食筋注群 ( 2 4 %) ( 表 3)と比較すると再活性化率が高く，腹注操. 考. 察. 作自体が再活性化を促している可能性が考えられ た.このような操作が再活性化を促すことは，角膜. ，Zn ，AMP ，G Mの HSV-1再活性化 今回， AsA. を 場 と し て も 証 明 さ れ て い る 34 す な わ ち. 抑制効果を，マウスヘルペス'性角膜炎モデルを用い. AMP筋注(表 6，図 2)が，有意な HSV-1再活性. Shimomura34 らは，HSV-1潜伏感染白色家兎にお いて， 6 -hydroxydopamineイオントフォレーシス およびエピネプリン点眼により， 100%の再活性化率 を認め，一方，角膜擦過のみでも， 12%に再活性化. 化抑制効果を示した.これらの薬物のラット，家兎. を示したと報告している.. l a q u eAssayによる検討では GM腹 て検討した. P 注(表 4)が，また R e a l t i m ePCRによる検討では. での有効性，ヒトへの安全性，投与期間など更なる. cAMPの細胞内濃度の上昇は， cAMP依存性プロ. 検討をしたうえで， ヒトヘノレペス性角膜炎再発抑制. テインキナーゼ、 (PKA)を活性化し，さらに PKAは. に有用で、あるか調べていきたい.. CREBをリン酸化する 20 この経路は，細胞の増殖や. G Mは Hsp9 0の ATP/ADP結合ポケット ( b i n d . i n gp o c k e t )に結合することで Hsp90活性を抑制す 0は細胞質にもっとも多く存在するタン る32 Hsp9. 分化，また T リンパ球の分化増殖などに重要な役割. パク質の一つであり， ATP依存性に発現し，アポト. はマウス皮膚における AMPの HSV再活性化抑制. ーシス，細胞周期，シグナル伝達をするステロイド. 効果を検討しており，コントロール群と比較し，有. ホルモン受容体などに大きく関わっていることが知. 意に再活性化を抑制したとしている.また S k l a r. られており，現在抗癌剤として臨床治験が実施され. 害による抗ウイルス作用ではなく，サイクリン依存. ら36 は，再発性口唇へルペスの患者3 6名に対し， AMP筋注を行っている.治療開始前の平均年間再 発回数が6 . 3回であったのに対し， 1ヶ月から 2年の 経過観察中で3 2名 ( 8 8 . 9 % ) の患者で再発ゼロであ l u eら35及び S k l a r ったと報告している.しかし， B. 性プロテインキナーゼなど細胞周期調節因子を標的. ら36 の論文は，所見，症状の改善の有無に関してのみ. とするものであり，多くのウイルスに対しでも応用. の報告であり，定量性に乏しいと考える.今回の研. 可能であると述べている.HSV-1DNAの複製抑制. 究では， AMPの抑制効果を潜伏感染マウスを用い. により，ヘルペス性角膜炎急性期において GMが ，. て定量的に示すことができた(図. iら32 は ， Vero細胞中での HSV-1DNA ている 33. L 複製を G Mが阻害したと報告し，さらにこの阻害機 序は， ACVのようなウイルス DNAポリメラーゼ匝. 症状，所見の悪化を抑制する可能性があり，今後の 検討に値すると考える.. i. を果たすといわれている 21 また HSVにおいても，. l u eら35 その活性化や増殖に関与するとされる 21 B. 2 ) .. AsAは，その不足によりコラーゲン生成不全や免 疫能の低下などを引き起こすことが知られており，.
(6) 8. 渡漫敬三. 近年では AsAの抗癌作用が注目され37 現在臨床治 験中である.また抗ウイルス作用についても報告が あり， Hoviら15 は再発性口唇へルペス患者に対し AsA溶解液の塗布にてプラセボ群と比較し有意に，. その治癒期間，有症状期間の短縮を認めたとしてい る.また Furuyaら16 は invitroでの AsAの抗ウイ ルス作用の検討を行っており，容量依存性に抗ウイ ルス作用を示したと報告している.今回の研究では， AsA内服に HSV再活性化に対する抑制効果は認. められなかった(表 2，図1)が，過去の報告 15.16 は 病変に直接塗布あるいは M E M (minimum essent i a lmedium)中に溶解されていた事を考えると，へ. ルペス性角膜炎急性感染期の AsA点眼の効果につ いてさらに検討する余地があると思われる. Znは ，. 1 0 0 種を超える酵素活性において重要な役. 割を担っており， RNAポリメラーゼ、や DNAポリ 18 メラーゼ、の産生や細胞性免疫に関与している 17， Arensら17 は i nv i t r oにおいて有意に HSVを不活. 化したと報告しており，また Femianoら18 は，再発. 0 名に対し，その抑制効果を検 性口唇へルペス患者2 討し，コントロール群と比較し，再発回数及び治癒 までに要した期聞が減少したと報告している.我々 の検討においては， Zn内服に HSV再活性化に対す る抑制効果は認められなかった(表 2，図 1).Zn内 服および AsA内服では，血中濃度が一定に保たれ ない可能性が問題点としてあげられ，今後は内服濃. D e a iT， FukudaM， HigakiS， Hooper 3 . ShimomuraY， 2 0 0 7 )C o r n e a lb u t t o n so b t a i n e dfrom LC，HayashiK ( p a t i e n t sw i t hHSKharborh i g hcopynumberso ft h e HSVgenome. Cornea2 6 :1 9 0 1 9 3 4 . Bla t tAN， LaycockKA， BradyRH， TraynorP， Krog e p o s eJS( 1 9 9 3 )P r o p h y l a c t i ca c y c l o v i re f f e c s t a dDJ，P t i v e l yr e d u c e sh e r p e ss i m p l e xv i r u st y p e1r e a c t i v a t i o n 巴re x p o s u r eo fl a t e n t l yi n f e c t e dmicet ou l t r a v i o l e tB a f t I n v e s tOphthalmolV i sS c i3 4 :3 4 5 9 3 4 6 5 1 9 9 2 ) Rapid i nv i v o 5 .S a w t e l l N M，Thompson RL ( r e a c t i v a t i o no fh e r p e ss i m p l e xv i r u si nl a t e n t l yi n f e c t e d murineg a n g l i o n i cn e u r o n sa f t e rt r a n s i e n th y p e r t h e r m i a JV i r o l6 6 :2 1 5 0 2 1 5 6 R H a l f o r d WP. P a t h o g e n e s i sa n d 6 .H i l l JM，Wen， 19 9 8 ) m o l e c u l a rb i o l o g yo fo c u l a rHSVi nt h er a b b i t( I n : Herpess i m p l e xv i r u sp r o t o c o l s . BrownMS，Mad s . Methodsi nM o l e c u l a rMedicineTotowa， c l e a nAR，e NJ: HumanP r e s s :2 9 1 3 1 5 i l lJM，ThompsonH W 7 .V a r n e l lED，KaufmanHE，H ( 1 9 9 5 ) Colds t r e s s i n d u c e dr e c u r r e n c e so fh e r p e t i ck e r a t i t i si nt h es q u i r r e lmonkey. I n v e s tOphthalmolV i sS c i 3 6 :1 1 8 1 1 1 8 3 RootmanDS， X i eLX， K i r i t o s h iA， Hi 1 lJM 8 . HarutaY， ( 1 9 8 9 )R e c u r r e n tHSV1c o r n e a ll e s i o n si nr a b b i t si n ducedbyc y c l o p h o s p h a m i d eanddexamethasone.I n v e s t OphthalmolV i sS c i3 0 :3 7 1 3 7 6 e l k e S，Warren T，Aoki FY，Sacks S， 9 . Wald A，S Diaz-MitomaF，CoreyL ( 2 0 0 6 )Comparativee f f i c a c yo f f a m c i c l o v i randv a l a c y c l o v i rf o rs u p p r e s s i o no fr e c u r r e n tg e n i t a lh e r p e sandv i r a ls h e d d i n g . SexTransmD i s 3 3 3 3 :5 2 95 H o l l i e rLM， 1 日cIn t i r eD， SanchezPJ .J a c k 1 0 .S c o t tLL， 2 0 0 2 )A c y c l o v i rs u p p r e s s i o nt o s o nGL，Wendel GD ( p r e v e n tr e c u r r e n tg e n i t a lh e r p e sa td e l i v e r y .I n f e c tD i s O b s t e tG y n e c o l1 0 :7 1 7 7 C o r e yL，Cunningham， A MalkinJE， S t a n 1 1 .G i l b e r tS， h i t l e y， R SpruanceS ( 2 0 07 ) Anu p d a t eon b e r r yL，W s h o r t c o u r s ei n t e r m i t t e n tandp r e v e n t i o nt h e r a p i e sf o r ) ・ 13A18A h e r p e sl a b i a l i s . Herpes1 4( S u p pI 1 2 . TheH e r p e t i cEyeD i s e a s eS t u d yGroup ( 1 9 9 8 )A c y c l o v i rf o rt h eP r e v e n t i o no fR e c u r r e n tHerpesS i m p l e x is e a s e . N EnglJMed3 3 9 :3 0 0 3 0 6 V i r u sEyeD i g a k iS，ShimomuraY ( 2 0 0 8 )E f f e c t so f 1 3 .I t a h a s h iM，H a n t ih e r p e t i cd r u g s on mice w i t hh e r p e t i ce p i t h e l i a l k e r a t i t i sa f t e rr e a c t i v a t i o no fh e r p e ss i m p l e xv i r u st y p e 1 . SeminO phthalmol2 3 :2 4 1 2 4 7 I ta h a s h iM， D e a iT， FukudaM， Shimomura 1 4 . HigakiS， Y ( 2 0 0 6 )E f f e c to fo r a lv a l a c i c l o v i ron h e r p e t i ck e r ):S 6 4 S 6 7 a t i t i s . Cornea2 5(SuppI 1 5 . HoviT， H i r v i m i e sA， S t e n v i kM， VuolaE， P i p p u r iR ( 19 9 5 )T o p i c a lt r e a t m e n to fr e ←. 度，そして投与法を変更するなど，再検討する必要 があると考えられた. 本研究ではマウスへルペス性角膜炎において， A M Pおよび G Mが HSV-1再活性化抑制効果を示. した.今後，さらに検討が必要と考えられるが，有 効なへルペス性角膜炎再発抑制方法が判明すれば， 再発を繰り返す症例，および角膜擁痕により永続的 な視力障害を引き起こす症例が，有意に減少すると 考える. 謝 辞 稿を終えるにあたり，御指導，御校閲を賜りました下村嘉一 教授に深甚なる謝意を表します.また終始御助言，御指導いた だきました，桧垣史郎講師ならびに福田昌彦講師に感謝の意 を表します.. 文. 献. 1 . NesburnAB， D i c k i s o nR，R a d t o r iM ( 19 7 6 )Thee f f e c t o ft r i g e m i n a ln e r v eandg a n g l i o nm a n i p u l a t i o nonr e c u r r e n c eo fo c u l a rh e r p e ss i m p l e xi nr a b b i t s .I n v e s tO p h t h a l m o l1 5 :7 2 6 7 3 1 MoriY， InoueY， K i r i t o o s h iA， O h a s h i 2 . ShimomuraY， 1 9 9 3 ) Herpess i m p l e xv i r u sl a t 巴n cyi n Y，ManabeR ( humanc o r n e a .J p nJOphthalmol3 7 :3 1 8 3 2 4. →.
(7) ヘルペス性角膜炎の再活性化抑制. 5 4 5 r a v i sS ( 2 0 0 0 )Z i n cS a l t sI n a c t i v a t eC l i n iー 1 7 . ArensM，T c a lI s o l a t e so fH巴r p e sSimplexV i r u sI nV i t r o . JC l i n M i c r o b i o l3 8 :1 7 5 8 1 7 6 2 c u l l yC ( 2 0 0 5 )R e c u r r e n t 1 8 . Femiano F，Gombos F，S h e r p e sl a b i a l i s :a p i l o ts t u d yo ft h ee f f i c a c yo fz i n c t h e r a p y . JO r a lP a t h o lMed3 4 :4 2 3 4 2 5 ， JL e i b DD ( 19 9 5 ) 1 9 . Ackland-Berglund CE，Davido D Ther o l e so ft h ecAMP-responsee l e m e n tandTATA boxi ne x p r e s s i o no ft h eh e r p e ss i m p l e xv i r u st y p e1 l a t e n c y a s s o c i a t e dt r a n s c r i p t s .V i r o l o g y2 1 0 :1 4 1 1 5 1 ] ，K rebsFC，H a r t l eHT，G a r t n e rAE，Chatton 2 0 . KennyJ e i d e nJM，H o e f f l e rJP，WeberPC，WigdahlB ( 19 9 4 ) B，L I d e n t i f i c a t i o no fas e c o n dATF/CREB-likee l e m e n ti n 1 ) l a t e n c y t h eh e r p e ss i m p l e xv i r u st y p e 1 (HSVa s s o c i a t e dt r a n s c r i p t (LAT) p r o m o t e r .V i r o l o g y2 0 0 : 2 2 0 2 3 5 1 . Mi I lhouseS，KennyJ ， QuinnPG，LeeV，WigdahlB 2 ( 1 9 9 8 )ATF/CREBe l e m e n t si nt h eh e r p e ss i m p l e xv i r u s t y p e1l a t e n c y a s s o c i a t e dt r a n s c r i p tpromoteri n t e r a c t w i t hmemberso ft h eATF /CREBandAP-1t r a n s c r i p t i o nf a c t o rf a m i l i e s . JBiomedS c i5 :4 5 1 4 6 4 h eh e a ts h o c kp r o t e i n9 0 2 2 .N e c k l e r sLM ( 2 0 0 0 ) Cant i n h i b i t o r geldanamycin be d e s i g n e dt os p e c i f i c a l l y i n h i b i tHER-2t y r o s i n ek i n a s e ? DrugR e s i s tUpdat3: 2 0 3 2 0 5 I lJ 2 3 .H i g a k iS，GebhardtB，LukiwW ，ThompsonH，Hi ( 2 0 0 3 )Genee x p r e s s i o np r o f i l i n gi nt h eHSV1l a t e n t l y i n f e c t e dmouset r i g e m i n a lg a n g l i af o l l o w i n gh y p e r t h e r 3 1 2 3 8 mics t r e s s . CurrEyeRes2 6・ 2 2 0 0 5 )パラシクロピル内服によるマウス上皮型 2 4 . 板橋幹城 ( 0:1 1 3 1 2 2 角膜へルペスに対する効果.近畿大医誌 3 巴1ED ，KaufmanHE( 2 0 0 5 )I n h i 2 5 . GebhardtB M，Varn b i t i o no fc y c l o o x y g e n a s e2s y n t h e s i ss u p p r e s s e sHerpes s i m p l e xv i r u st y p e1r e a c t i v a t i o n . JO c u lPharmacol Ther2 1 :1 1 4 1 2 0 a r n e l l ED， Kaufman HE ( 2 0 0 4 ) 2 6 . Gebhardt B M，V A c e t y l s a l i c y l i ca c i dr e d u c e sv i r a ls h e d d i n gi n d u c e dby t h e r m a ls t r e s s .C u r rEyeRes2 9 :1 1 9 1 2 5 i l lJM( 2 0 0 4 )E f f e c to f 2 7 . GebhardtB M，KaufmanHE，H a c y c l o v i r on t h e r m a l s t r e s s i n d u c e d h e r p e s v i r u s r e a c t i v a t i o n .C u r rEyeRes2 9 :1 3 7 1 4 4 o c h e rF，S p a d a r iS， 2 8 . GebhardtB M，WrightGE，XuH，F Kaufman HE ( 1 9 9 6 )9 -( 4 -Hydroxybuty J )-N 2-phenyl 目. 9. g u a n i n e(HBPG)，at h y m i d i n ek i n a s ei n h i b i t o r，s u p p r e s s e sh e r p e sv i r u sr e a c t i v a t i o ni nm i c e .A n t i v i r a lRes3 0: 8 7 9 4 2 9 .I toY，KimuraH，YabutaY，AndoY，MurakamiT， ShiomiM，MorishimaT ( 2 0 0 0 )E x a c e r b a t i o no fh e r p e s it i sa f t e rs u c c e s s f u lt r e a t m e n tw i t h s i m p l e xe n c e p h a1 .C l i nI n f e c tD i s3 0 :1 8 5 1 8 7 a c y c l o v ir e a iT，HibinoT，H i g a k iS，Hayashi， K 3 0 . FukudaM，D Shimomura Y ( 2 0 0 3 )Q u a n t i t a t i v ea n a l y s i so fh e r p e s s i m p l e xv i r u sgenomei nt e a r sfromp a t i e n t sw i t hh e r ):S 5 5 S 6 0 p e t i ck e r a t i t i s . Cornea2 2 (SuppJ i g a k iS，HayashiK， 3 1 . DeaiT，FukudaM，HibinoT，H Shimomura Y ( 2 0 0 4 ) Herpes s i m p l e xv i r u s genome q u a n t i f i c a t i o ni ntwop a t i e n t swhod e v e l o p e dh e r p e t i c e p i t h e l i a lk e r a t i t i sd u r i n gt r e a t m e n tw i t ha n t i g l a u c o m a 2 5 1 2 8 m e d i c a t i o n s .C o r n e a2 3・1 i u YZ，J i a n g JD ( 2 0 0 4 )G e l 3 2 .L i YH，Tao PZ， L i g a n do fh e a ts h o c kp r o t e i n9 0，i n h i b i t s danamycin，al t h er e p l i c a t i o no fh e r p e ss i m p l e xv i r u st y p e1i nv i t r o . AntimicrobA g e n t sChemother4 8 :8 6 7 8 7 2 K AmesM M，Mandre 3 3 . NowakowskiGS，McCollumA， kar SJ，R巴i dJM，A d j e i AA，T o f t DO，S a f g r e n SL， ErlichmanC( 2 0 0 6 )A Phase1T r i a lo fTwice-Weekly1 7 Iy lamino-Demethoxy-Geldanamycini nP a t i e n t sw i t h Al .C l i nCanc 巴rR es1 2 :6 0 8 7 6 0 9 3 AdvancedCancer r，KataokaM，Hi I lJM 3 4 . ShimomuraY，GangarosaLPS ( 1 9 8 3 ) HSV1s h e d d i n gbyl o n t o p h o r e s i so f6 h y d r o x ydopamine f o l l o w e d by t o p i c a le p i n e p h r i n e . I n v e s t OphthalmolV i sS c i2 4 :1 5 8 8 1 5 9 4 1u e W T，Winland RD，S t o b b s DG，K i r k s e y DF， 3 5 .B SavageRE( 19 81 )E f f e c t so fA d e n o s i n eMonophsphate ont h eR e a c t i v a t i o no fL a t e n t HerpesSimplex V i r u s Type 1 I n f e c t i o n so f M i c e . Antimicrob A g e n t s Chemother2 0 :5 4 7 5 4 8 u i m o v i c i K l e i nE ( 19 7 9 )Adenosinei nt h e 3 6 .S k l a rSH，B t r e a t m e n to fr e c u r r e n th e r p e sl a b i a l i s .O r a lSurgO r a l MedO r a lP a t h o l4 8 :4 1 6 4 1 7 i t c h e l lJB，Corpe 3 7 . ChenQ，EspeyM G，KrishnaMC，M u e t t n e rGR，S h a c t e r E，L e v i n eM ( 2 0 0 5 )P h a r CP，B macologica s c o r b i ca c i dc o n c e n t r a t i o n ss e l e c t i v e l yk i l l c a n c e rc e l l s :A c t i o na sap r o d r u gt od e l i v e rhydrogen p e r o x i d et ot i s s u e s . Proc N a t l Acad S c i USA 1 0 2 : 1 3 6 0 4 1 3 6 0 9 司.
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