博 士 （ 医 学 ） 高 橋 昌 宏
学 位 論 文 題 名
肝多包虫症に対する温熱化学療法の効果
学位論文内容の要旨
I緒 言
肝 多 包虫 株 は 肝 臓 に多房 性の嚢 胞性病 変を 形成す る疾患 であり ，その 発育 は緩慢 である が，
悪 性 腫 瘍 のよ う な 病 態を 示す。 現在， 本症に 対する 確実 な有効 的治療 薬はな く， 外科的 に病巣 を 完 全 に 切除 す る 以 外 に治 療 法 は な い 。最 近 ， 薬 物 とし てBenzimidazole系 統 の 薬 剤 で ある Albendazole。Mebendazole等 が臨 床 的 に 有 効で あ っ た と いう 報 告 が散見 され るが， 有効血 中 濃 度，副 作用等 の問題 があ り，進 行多包 虫巣の 縮小 あるい は増殖 の停止 をきたす有効な治療法は い まだ確 立され ていな い。 一方， 本寄生 虫は低 温に は比較 的抵抗 性を示 すが，高温には抵抗性が 低 いとさ れてお り，局 所加 温が包 虫巣の 増殖を 抑制 するな らば， 切除不 能肝多包虫症剤に対する 臨 床効果 が期待 される 。そ こで今 回，著 者は実 験的 に多包 虫巣に 対する 温熱療法と薬剤の効果お よ び両者 の併用 効果に っい て検討 した。
H研究方 法 1．実験 材料
1）多包 虫株： 北海 道道立 衛生研究所で継代維持しているコットンラット（Sig'moid hispidus） 腹腔 内のア ラスカ 株を 用いた 。
2） 実 験 動 物 ：ス ナ ネ ズ ミ （Meriones Unguiculatas）8週 齢 体重60 g〜65gの雌を 用いた 。 2．方 法
実験 モデ ルとし て移植 部位に より肝内移植群（第1群）と臀部皮下移植群（第2群）を作成した。
1）1群 （ 肝 内移 植 群 ） ： 原頭 節 約800個 （O．2ml)を ス ナネ ズ ミ の肝 実質 に高木 の方法 で接 種 し た。2力 月 後 に形 成 さ れ た 多 包虫 巣 を モ デル とした （N =12)。 対照 として 非感染 の正常 肝 を 用 いた （N= 3)。 感 染 後2か 月 の ス ナ ネズ ミ を エ ー テル 麻 酔 下 で 再度 開腹し ，包虫 巣を露 出 し ， こ れ を 低 出 カ レ ー ザ ー(Nd―YAG，2〜3W)で 加 温 し た 。 加 温 に は セ ラ ミ ッ ク 製の 接 触 型広 拡散マ イク口 口ッ ドを用 い，そ の先端 部分 を刺入 した。 この刺 入点か ら3 mmの包虫巣部分に
サーモセンサーを同様に刺入し，この部位が45〜46℃となるようにon70ffコンピュ一夕一で抑 制しながら加温した。正常肝も同様に加温した。また，レーザ一光線を包虫巣表面に照射する外 照射加温も行った。測温は，中心より5 mm，8mm，12mm，15mmの点で加温開始後5分，10分，15 分後に行い，包虫巣および正常肝内の温度分布を調べた。レ―ザーによる20分間加温後の組織学 的 変 化 を ， 包 虫 巣で は， 直 接，1，3，7日目(N=各3)，正 常肝 では7日 目（N−3） にス ナネズミを犠牲死させて検討した。
2）2群（臀部皮下移植群）：スナネズミ臀部皮下に原頭節約4，000個を接種し，2力月後の皮 下包虫巣をモデルとした。温熱および薬物療法により以下の4群に分けた。Ia；温熱単独群：
1週6回 を4週 間 ， 計24回(N=5） 。Ib； 温 熱 単 独 群 ：1週3回4週 間 ， 計12回(N=5） 。 II；薬物療 法群：Albendazole 30mg7kg／日，1週5日を4週間，計20日間（N二二5）。皿；併 用 群 ： 温 熱 療 法(Ia） ， 薬 物 療 法 （II)の 併 用 （N二 二5） 。I； 対 照(Nご5)。 （1）加温方法：無麻酔下でスナネズミを金属メッシュで被覆固定し，臀部皮下包虫巣を43℃の 恒温槽の温水に20分間浸した。薬剤併用群では薬剤投与後ただちに温熱療法を施行し，包虫巣内 の温度を連続的に測温した。
(2)薬剤および投与方法：薬剤にはAlbendazoleの純末（スミス・クライン藤沢）を用いた。
この純末を 界面活性剤である0．05％，T ween 80で懸濁し，30mg/kg/日の量を経□ゾンデ針 で胃内ヘ注入した。
(3)検索項目：治療開始日より1週毎に包虫巣の長経と短経を測定し，包虫巣の重量を算出し た。治療最終日に全例犠牲死させ，包虫巣を摘出し，その重量を測定するとともに，光顕的に HE染色組織像を検討した。
m結 果
1，1群（肝内移植群）
開腹3分後の包虫巣，正常肝の温度は各々，23〜24℃，33〜35℃であり，血流の乏しい包虫巣 は室温に近い温度を示した。加温5分後，中心より5 mmの点では包虫巣，正常肝ともに41℃に達 し，以後加温中ほば同じ温度で経過した。8 mm，12mm，15mmの各点では，正常肝の方が温度はや や高く，包虫巣の熱伝導はやや不良であった。また，レーザ一光線を直接照射した群では加温中 病 巣 の 温 度 は 室 温 と ほ ぼ 同 じ23〜 24℃ で 経 過 し ， そ れ 以 上 に 加 温さ れな か った 。 加温による包虫巣の病理組織学的変化は，割面で口ッド挿入点を中心とした赤白調のほば円形 の変色部分を認め，周囲包虫巣と区別される明らかな境界線を画していた。強拡大でtま，中心側
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で 蛋白変 性，血 液凝固 など の高熱 による 変化は 認めら れな いが， 小嚢胞 内の原頭節構成細胞はほ ぼ 一様に 変性・ 壊死を 起こ してお り，そ の細胞 核は淡 く不 明瞭と なって いた。また，一層の胚層 細 胞は膨 化し， 核の消 失が 認めら れた。
一 方，境 界線外 側で は原頭 節の構 造は良 く保 たれ， 胚層細 胞の膨 化を認 めなかった。上記変色 部 分の中 心部（ 口ッド 刺入 部）か ら境界 線まで の距離(d)は直後5．7土O．9mm，1日目5．7土O．5 mm，3日 目6．3土0．5Imn，7日目6．7土1．2mmであった。包虫巣の熱拡散状態から考えてみると，こ の 変色領 域は少 なくと も中 心部よ り5 mm以 内，す なわち41℃以 上の加 温部分 に相当した。一方，
正 常肝組 織は， 中心よ り半 径3 mmのや や挟 い範囲 内が白 色調に 変化 し，強 拡大では肝細胞核の濃 縮 や胞体 の膨化 が認め られ た。こ の範囲 は，45〜46℃以 上の加 温部 分に相 当する部分であった。
ま た ， レ ーザ 一 光 線 の み照 射し た包虫 巣には 組織学 的に原 頭節 ，胚層 の変性 を認め なか った。
2．2群（ 臀部皮 下移植 群）
包虫 巣温度 は加 温開始 後5分で43℃ に達し ，以 後加温 中の温 度は一 定で あった 。加温 終了後 温 度 は速や かに低 下した 。各 治療群 の相対平均包虫巣重量は各損IJ定時において変化がなかったが，
対 照群と 比較す ると， いず れの治 療群も 各測定 時にお いて包虫巣の増殖は明らかに抑制された（p くO． 05，pO．01)。 し か し ， 治 療 群 各 間 に は 明 ら か な 差 を 認 め な か っ た 。 また ，治療 最終 日に犠 牲死さ せて得 られ た包虫 巣の重 量は温 熱群(24回 ）2.6土1．4g，温 熱群 (12回)2．3土O．8g，薬物療法群2．了土0．6g，併用群2．4土O．9g，対照群4．3土1．Ogであり，治 療 群は対 照群に 比べ， 明ら かに低 値であ った(pくO．05)。 これ を包虫 巣重量 ／体重比でみると，
併 用群の みが対 照群に 比べ ，有意 に低値 であっ た（pく0． 05)。組織 学的に は各治療群における 小 嚢胞数 と嚢胞 内原頭 節教 は対照 群に比 べ減少 してお り， 特に温 熱群， 併用群に著明であった。
さ らに薬 物療法 群では 原頭 節，胚 層の変 性・壊 死を部 分的 に認め たが， 正常な原頭節，胚層も残 存 してい た。一 方，温 熱群 ，併用 群では 原頭節 ，胚層 とも に一様 に変性 ・崩壊しており，宿主側 の 反応と 考えら れるル ンパ 球の浸 潤が強 くみら れた。
IV総 括なら びに結 論
＠ 移植肝 多包虫 巣に レーザ 一温熱 療法を 施行し た結 果，41℃ ，15分 間の加温で原頭節・胚層は 変 性・崩 壊した 。◎正 常肝細 胞は45〜 46℃，15分間の加温で変性・壊死を起こした。◎移植臀部 皮 下多包 虫巣に 対し， 恒温槽 を用 いた43℃ ，15分 間の温 熱療法 を施行 した結果，計24回，12回の い ずれか の群に おいて も包虫 巣の 増殖は 有意抑 止され た。
以 上より 肝多包 虫症 に対す る温熱 療法の 可能性 が示 唆され た。
学位論文審査の要旨 主 査 教 授 内 野 純 一 副査 教授 小野江和則 副 査 教 授 安 田 慶 秀
肝 多包虫 症は完 全摘 除以外 治療は ないが ，発 見時病 巣が高 度に進 展して いるため，切除不能と な る症例 が少な くない 。切 除不能 症例に は薬物 療法が 試み られて いるが ，未だ確立された治療法 は ない。 そこで 申請者 は実 験的に 多包虫 巣に温 熱療法 を施 行し， 薬剤と の併用効果にっいて検討 し た。
実 験材料 である 多包 虫株は 北海道 道立衛 生研 究所で コット ンラッ トの腹 腔内に継代維持してい る アラス カ株を 用いた 。ま た，実 験動物 はスナ ネズミ の雌 を用い た。実 験モデルとして移植部位 に より肝 内移植 群（第1群 ）と臀 部皮 下移植 群（第2群 ）を作 成した 。
第1群 で は 原 頭 節約800個 （0． 2ml)を ス ナ ネズミ の肝実 質に接 種し ，2力 月後 に形成 された 多 包 虫 巣 をモ デ ル と し た。 こ の 包 虫 巣に 接 触 型 広 拡 散マ イ ク 口 口 ッド を刺入 し，on/offコン ピ ュ 一 夕 一 で 抑 制 し な が ら 低 出 カレ ー ザ ー （Nd―YAG，2〜3W） で 加 温 し た 。正 常 肝 も 同 様 に 加温し た。ま た，レ ーザ ー光線 を包虫 巣表面 に照射 する 外照射 加温も 行った。測温は，マイク 口 口 ッ ド 刺入 部 よ り ，5 mm，8mm，12mm，15mmの点 で加 温開始 後5分，10分 ，15分 後に行 い，包 虫 巣 お よ び正 常 肝 内 温 度分布 を調べ た。組 織学 的変化 にっい ては， 包虫 巣では ，直後 ，1，4， 7日目， 正常 肝でtま7日目に 犠牲 死させ て検討 した。
そ の結果 ，包虫 巣， 正常肝 の温度 は加温5分 ，5 imnの点 で両者 ともす でに41℃に達しており，
以 後加温 中ほぼ 同じ温 度で 経過し た。8 mm，12mn，15mmの各点 では ，正常 肝の方が温度はやや高 く ，包虫 巣の熱 伝導は やや 不良で あった 。また ，レ― ザー 光線を 直接照 射した群では加温中病巣 の 温度は 室温と ほぼ同 じ23〜24℃で経 過し ，それ 以上に 加温さ れな かった 。組織学的には，割面 で 口ット 挿入点 を中心 とし た赤白 調のほ ぼ円形 の変色 部分 を認め ，周囲 包虫巣と区別される明ら か な境界 線を画 してお り， 強拡大 では変 色部分 の原頭 節， 胚層は ほぼ一 様に変性，壊死を起こし て いた。 この変 色部分 の中 心部（口ッド刺入部）から境界線までの距離は少なくとも5 mmであり，
包 虫巣の 熱拡散 状態か らす ると41℃以上の加温部分に相当すると考えられた。一方，正常肝では，
中 心より 半径3 mmのやや 狭い範 囲内が 白色 調に変 化し， 強拡大 で肝 細胞の 変性が認められた。こ の 範囲は ，45‑ 46℃ 以上の 加温 部分に 相当す る部分 であっ た。 また， レーザー光線のみ照射した
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包虫巣に は組織学的に原頭節 ，胚層の変性を認 めた。
第2群 は， スナ ネ ズミ 臀部 皮 下に 原頭 節 約4，000個 を接 種し ，2力 月 後の 皮下 包虫巣をモデ ル と し た 。 温 熱 お よ び 薬 物 療 法 に より 以下 の4群 に 分け た。Ia；温 熱単 独 群：1週6回 を4週 間，
計24回（N二ニニ5）。Ib；温 熱単独群：1週3回 を4週間， 計12回（N二二二ニ5）。皿；薬物療法群：
Albendazole 30mm/kg/日 ，1週5日 間 を4週 間 ， 計20日 間 （N=5） 。m； 併 用 群 ： 温 熱 療 法
（Ia） ， 薬 物 療 法 （1I） の 併 用 （N=5）。IV； 対 照（N=5） 。加 温 方法 は無 麻 酔下 でス ナ ネズ ミ を金 属メ ッ シュ で被 覆 固定 し， 臀部 皮下包虫巣を43℃の 恒温槽の温水に20分間浸した。併用 群 で は 薬 剤 投与 後 ただ ちに 温 熱療 法を 施 行し た。 薬 剤に はAlbendazoleの 純末 を 用い ，界 面 活性 剤 であ る0．05％ ，T ween 80で懸 濁 し，30imn/kg／ 日の 量 を経 □ゾ ン デ針 で胃 内へ注入した 。 治 療開 始日 よ り1週 毎に 包虫 巣 の長 経と 短 経を 測定 し ，包 虫巣の重量を算出 した。治療最終日 に 全 例 犠 牲 死 さ せ ， 包 虫 巣 を 摘 出 し， その 重 量を 測定 す ると とも に ，組 織学 的 にも 検討 し た。
包虫 巣温 度 は加 温開 始 後5分 で43℃に 達 し， 以後 加 温中 温度は一定であっ た。加温終了後温 度 は 速や かに 低 下し た。 各 治療 群の 相対 平均包虫巣重量は各 測定時において変 化しなかったが， 対 照 群と 比較 す ると ，い ず れの 治療 群 も各 測定 時 にお いて 包虫巣の 増殖は明らかに抑制 された（p くO．05，pくO． 01）。しか し，治療群各間に は明らかな差を認 めなかヮた。治療最 終日に犠牲死 さ せて 得ら れ た包虫巣の重量も 冶療群は対照群に 比ベ，明らかに低 値であった（pくO． 05）。 組 織 学的 には 各 治療 群に お ける 小嚢 胞数 と嚢胞内原頭節数は 対照群に比べ減少 しており，特に温 熱 群，併用 群に著明であった。 薬物療法群では正 常な原頭節，月丕層の残存も認められたが，温熱群、
併 用群 では 原 頭節 ，胚 層 とも に一 様に 変性・崩壊しており ，宿主側の反応と 考えられるルンパ 球 の浸潤が 強くみられた。
審 査 に 当 た っ て 小 野 江 教 授 よ り 宿 主 側 の 免 疫 反 応 にっ い て， 安田 教 授よ りLASERを 用 いた 理 由， 宮崎 教 授よ ルア ル ベン ダゾ ール の血中濃度にっいて など質疑があった が，申請者は慨ね 妥 当な解答 を行った。
多包 虫症 に 対す る温 熱 療法 単独 ある いは薬物療法との併 用の有効性にっい て検討した報告は な く ，本 研究 は 切除 不能 肝 多包 虫症 に対 する温熱療法の可能 性を示した点で意 義があり，学位授 与 に値する ものと考える。
