人 白 血 病 の ウ イ ル ス 学 的 研 究
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(2) 514. 宇. イル スに対 してimmunological. toleranceを. 野. 潤. 一. もた な. い ラツ トで 免 疫 し,そ の 抗 血 清 を用 い てGrossウ. イ. ル ス に少 な くと も5種 類 の抗 原 の あ るこ とを発 見 し た8).その うち,他 の マ ウス 白血 病 ウ イ ル ス に も共 通 した抗 原 がspecies‑specific. antigen. (gs‑1抗 原). 郎. 20系 中2系20)21)22)にRLVを cell. lineの. 持 続 感 染 さ せ23)24)25)その. ウ イ ル ス 抗 原 分 析 を 行 う に あ た り次 の よ. う な 材 料 を 用 い た. 1. 細. (1). 胞. Subacute. myeloopticoneuropathy. (SMON). とい われ て お り,さ らに この5種 抗 原 の1つ に,マ. の 患 者 末 梢 血 白 血 球 よ り樹 立 し た リ ン パ 芽 球 様 株 細. ウ スの 他,ラ. 胞OUMS‑11a20)22).. ッ ト,ハ ムス ター,ネ. コな どの 白血 病. (2). ウ イ ル ス に も共 通 す る抗 原 が あ り,こ れ がinterspe cies‑specific. antigen. (gs‑3抗. 原)と い わ れ て い. る10)11).そ の 後,ニ ワ ト リ,マ ウス そ の他 の 動物 の 腫. OUMS‑11aの. にRauscher白. 培 養 開 始 後14ヶ 血 病 発 症BALB/cマ. ウ ス の10%脾. 抽 出 液 に よ り, in vitroでRLVを. 感 染 さ せ た 後,. 瘍 ウ イル スにつ い て のgs抗 原 に関 す る研 究 が 極 め て. 継 代 培 養 を 行 っ たOUMS‑11a‑R23)24)の. 活発 に行 わ れ12)‑19),現 在 ではかな り純 度 の 高 い,か つ. 54日,. 比 較 的 高 力 価 の抗gs‑1血. 清 お よ び抗gs‑3血. 清の. 172日,. 日(73代),. 342日(64代),. 非 感 染 細 胞OUMS‑11aも. イル ス抗 原 の分 析 が可 能 と な って き た.. て 採 取 し た.. 悪 性 リンパ 腫 そ の他 の 患者 の 末 梢 血,リ. ンパ 節 か ら. 多 数 の 人 由 来 リンパ芽 球様 株 細 胞 を樹 立 し,そ の 中 の2系. に マ ウス 白血 病 ウ イル スであ るRLVの. 感染 を. 試 み て それ に成 功 して い る.し か も,こ のRLV感. 染. (3). Hodgkin病. もの を 用 い た.. RLV. そ れ ぞ れ 同 時 に対 照 と し. 株 細 胞OUMS‑6C121)25) (4). OUMS‑6C1を. sion. ミ リポ ア 膜 で 作 成 し たdiffu. chamberに. LB/cマ. 入 れ てRauscher白. ウ ス の 腹 腔 内 に 入 れ,. 染 させ,. 期 に わ た って,現 在 もな お ウイ ル ス を産 生 し続 け て. vitroの. い る.か か る 白血 病 ウ イル ス は,感 染 に用 い たRLV. R1,. と同 じ抗 原 性 を もつRLVそ. 感 染 後395日(32代),. 2週. 血 病 発 症BA. in vivoでRLVを. 間 後 に 取 り 出 し,そ. 感. の 細 胞 を 再 びin. 培 養 系 に 移 し継 代 培養 を行 っ たOUMS‑6C1‑ OUMS‑6C1‑R225).. OUMS‑6C1‑R1は 400日(33代)の. い は人 由来 リン パ芽 球 様 株 細 胞 に 感 染 す る こ とに よ. OUMS‑6C1‑R2は243日(16代),. って抗 原 性 の変 化 を きた して い るの か,あ るい は ま た,. の も の を 用 い た.. も と も と人 の細 胞 にgenomeの. 同 時 に 採 取 し て 対 照 に 用 い た.こ. 形 で潜 在 して い る と. 416. 患 者 リ ンパ 節 由 来 の リ ン パ 芽 球 様. 人 由 来 リンパ 芽 球 様 株 細胞 は,感 染 後1年 以 上 の長. の もの で あ るの か,あ る. 感 染 後13日,. 393日(68代),. 470日(81代)の. 作 成 が可 能 とな り,か か る抗 血 清 を用 い て の 腫 瘍 ウ. 私達 の 教 室 に お い て,三 好 らは,正 常 人,白 血 病,. 月,継 代59代 目. もの を 用 い, 313日(26代). RLV非. 感 染 細 胞OUMS‑6C1も れ らの細 胞 は浮 遊. 想定 され る ウイ ル スの 活 性 化 した もの で あ るか な ど. 状 態 で 培 養 き れ て お り, 0.01mol. が考 え られ,こ の 解 明 は極 め て重 要 な もの で あ る.. 回 洗 い,. 私 は,人 白血 病 の ウ イル ス学 的 研 究 の1つ の ア プ ロ ー チ と して ,抗gs‑1血 清お よび抗gs‑3血 清 を用い. と 肝 の 凍 結 切 片 お よ び 腹 水 系 ラ ッ ト白 血 病DBLA‑6. て,か か るRLV感. の 腹 水 細 胞26).これ ら の 細 胞 は 抗 血 清 の 特 異 性 を み る. 染 人 由来 リンパ芽 球 様 株 細 胞 のgs. 抗 原 の分 析 を試 み,興 味 あ る知 見 を得 たので報告 す る.. (5). Ⅱ 実験材料及び実験方 法 Dr.. Rauscher. Leukemia. Virus感. 染 に用 いた. 人 由来 リン パ芽 球 様 株 細 胞. 血 病 マ ウ ス の 脾 の ス タ ン プ標 本. 米 国National. Rauscherよ. 7にFITCを 表1. 7.2 PBSで3. 2,. 3). 抗血清. (1). 私達 の教室 で樹立 した人由来 リンパ芽球様株細胞. Rauscher白. た め に 使 用 し た(表1, 2. PH. 10分 間 ア セ ト ン 固 定 し た.. (2). Cancer. Institute. り供 与 され た 抗RLV山. (NCI)の 羊 血 清IS‑. 標 識 し た も の27).. NCIのDr.. Huebnerよ. り供 与 され た抗RLV山. 羊 血 清IS‑7.. oUMS‑6C1:. Hodgkin氏. OUMS‑11a:. SMON患. 表2. Rauscher. OUMS‑6.Cl‑Rl,R2:. 病 患 者 の リンパ 節 由 来 者 の末 梢 血 白血 球 由来. Leukemia. Virusを. OUMS‑lla‑R:. vivoで. Ether処. 理 し たMSVを. ラ ッ トで 免 疫 し て 作. 感 染 させ た 人 由 来 リ ン パ 芽 球 様 株 細 胞. OUMS‑6C1をdiffusion in. (3). chamberで,. Rauscher. leukemic. mouse腹. 腔 内 で. 感 染 さ せ た も の. OUMS‑11aにRauscher. leukemia. virusをin. vitroで. 感 染. させ た もの.
(3) 人 白血 病 の ウ イル ス学 的 研 究. 表3. 検索 した培養細胞の継代数. OUMS‑6C1‑R1:. (5). 32代(感. 染395日. 後). 33代(感. 染400日. 後). 16代(感. 染243日. 後). 26代(感. 染313日. 後). OUMS‑6Cl‑R2:. 0UMS‑11a‑R:. 感 染13日. 515. Hyland製FITC標. 羊 血 清Lot. 識 抗 ラ ッ ト γ‑globulin山. No.2228. T003. (6). Hyland製FITC標. 血 清Lot. No.2155. 表6. A1. 識 抗 山 羊 γ‑globulin家. T001. A1(表6). 材料及び方 法. 後. 54日 後. 抗血清. 抗RLV山. 172日 後 64代(感. 染342日. 後). 68代(感. 染393日. 後). 73代(感. 染416日. 後). 81代(感. 染470日. 後). FITC標. 羊血清. 抗gs‑1(MSV)ラ. ッ ト血 清. 抗gs‑3(FeLV)山. 羊血 清. 識 抗 血 清(Hyland製) 抗 山 羊 γ‑G家. 兎血清. 抗 ラ ッ トγ‑G山 PBSで3回. 洗 い,カ. 温 で10分. (4). Ether処. れ た 抗FeLV山. パ ー グ ラ ス に 塗 抹 風 乾 し,室. 間 ア セ トン 固 定. られ た 抗MSVラ. 羊 血 清(抗gs‑3血. らの 抗 血 清 はImmunodiffusionお ent. fixation. testで,そ. され て い る.(表4,. 細. 胞. 清)2x. 1008.. GUMS‑6C1‑R2. 山 羊 で 免 疫 して 作 ら 清)IS‑8.こ. ラ ッ ト 白 血 病DBLA‑6の. れ. 正 常BALB/cマ. の 特 異 性 と抗 体 価 はcheck. 吸. 収. 1). 5).. 抗gs‑1 (MSV)ラ 反 応 に よ る抗 体 価. 腹 水細 胞. ウ ス 及 びRauscher. 白 血 病 マ ゥ ス の 肝,脾. よ びComplem. 方. 表4. 羊血清. OUMS‑11a.OUMS‑6Cl OUMS‑11a‑R.OUMS‑6C1‑Rl. ッ ト血 清(抗gs‑1血 理 し たFeLVを. 法. の細 胞. Human. liver. RLV非. 感 染 人 由 来 リン パ 芽 球 様 株 細 胞. acetone. powder. 蛍 光 抗 体 法 直 接 法 及 び間 接 法. ツ ト血 清 の 補 体 結 合 3. 抗 血 清 の吸 収 操 作. 上 記 の 抗 血 清 は 使 用 に 先 立 っ て,ま ver. acetone. 潤 に し,. powder. 30mgを. 4℃ 9000rpm,. ずhuman. 温 に 放 置 し た の ち,再. 抗gs‑3 (FeLV)山 羊血 清 の免 疫 沈降 反 応 と補 体 結 合 反 応 に よ る特 異 性 と抗 体 価. び4℃. 洗 い,. 4℃. 加 え, 1時. 9000rpm,. 感 染 のOU. ず, OUMS‑6C1. 9000rpm. 15分 間 遠 沈 し,. 集 ま っ た 沈 渣 と ほ ぼ 同 量 の さ き にhuman etone し,. powderで. liver. 1時 間 低 温 に 放 置 し て か ら,再 の 上 清 は,で. び4℃. 9000rpm,. き る だ け 早 く使 用 し,. 残 りは 細 胞 が こ わ れ て 出 て き たenzymeの が 失 活 す る の を 防 ぐた め‑80℃. R1,. RLV感. (2) RLV山. の よ う な 材 料 と 方 法 を 用 い た.. 染OUMS‑11a‑R,. OUMS‑6C1‑. OUMS‑6C1‑R2にFITC抗. globulin山 bulin家. た め抗 体. に 貯 蔵 し た(表7). 対 照 の設 置. 対 照 と し て,次 (1). ac. 吸 収 した抗 血 清 を加 えて よ く攪 拌. 15分 間 遠 沈 し,そ. 4. 間室. 15分 間 遠 沈. ら にRLV非. よ る吸 収 を 行 っ た.ま. をPBSで3回. 湿. 15分 間 遠 沈 し た も の に そ. し,そ の 上 清 を 採 取 し た.さ MS‑6C1に. li. あ らか じ めPBSで. れ ぞ れ 別 々 に 抗 血 清 の 原 液0.2mlを. 表5. 兎. 羊 血 清,ま. ラ ツ ト γ‑ た はFITC標. 識 山 羊 γ‑glo. 兎 血 清 の み 作 用 さ せ た も の. RLV非. 感 染OUMS‑11a,. 羊 血 清,抗gs‑3. 標 識 抗 山 羊 γ‑globulin家. OUMS‑6C1に. (FeLV)山. 抗. 羊 血 清 とFITC. 兎 血 清 を反 応 させ た もの.
(4) 516. 宇. 表7. 野. 抗血清 の吸収方法. 潤. 一. 郎. 報 告27)し て い る よ う にstaining RLV抗. 1 ) Absorption with human liver acetone powder 2) Absorption with normal lymphoblastoid cell lines Cell is washed repeatedly 3 times withP C. f. g at 9000 rpm for 15 min at low temp. About same amounts of antiserum is added to this sediment Mix thoroughly and stand for 1 hour at room temp. C. f. g at 9000 rpm for 15 min at low temp. Supernatant is used for immunofluorescence test. titerは32倍. で,. 原 に 特 異 的 な もの で あ る こ と が 分 っ て い る.. 抗gs‑1. (MSV)ラ. ッ ト血 清,抗gs‑3. 羊 血 清 に つ い て は,そ れ ぞ れ2 て32倍. ま で 希 釈 し, FITC標. 兎 血 清,お. fold. (FeLV)山 dilutionに. ょ っ. 識 抗 山 羊 γ‑globulin家. よ び 抗 ラ ッ ト γ‑globulin山. 羊 血 清 は20倍. に 希 釈 し た もの を 用 い た. 染 色 す る 材 料 は,. Rauscher白. 血 病 発 症BALB/c. マ ウ ス の 肝 の 凍 結 切 片 と 脾 の ス タ ン プ 標 本,対 し て 正 常BALB/cマ. 照 と. ウ ス の 肝 の 凍 結 切 片,脾. の スタ. ン プ標 本 お よ び 腹 水 系 ラ ッ ト 白 血 病DBLA‑6の. 腹. 水 細 胞 塗 抹 標 本 を10分 間 室 温 で ア セ ト ン 固 定 し た も と,抗gs‑1. (MSV)ラ. ト γ‑globulin山 (3). ツ ト血 清 とFITC標. 識 ラツ. OUMS‑11a‑R,. ‑6C1‑R2に. OUMS‑6C1‑R1,. OUMS. 羊 血 清 を 反 応 させ た も の.以 上3種. 類. (MSV)血. glass塗. 抹 し,ア セ ト ン 固 定 し. に 希 釈 し たFITC標. 識 抗RLV山. 潤 プ ラ ス チ ッ ク容 器 内 で37℃. 反 応 さ せ た の ち,. (2). 15分 間 に3回PBSを. 羊 1時 間. 代 え て 洗 い,. 衝 グ リセ リ ン で 封 入 す る.. 間接法. 抗RLV血 LV)血. 清,抗gs‑1. 清 を,そ. (MSV)血. 清,抗gs‑3. れ ぞ れ8‑10倍. (Fe‑. に 希 釈 し,ア セ ト ン. 固 定 し た 細 胞 塗 抹 標 本 に の せ て,湿. 潤 プラスチ ッ. ク容 器 内 で37℃. 15分 間 に3回. TC標 を,そ. 1時. 間 反 応 さ せ た 後,. 代 え て 洗 い 風 乾 す る. 識 抗 山 羊 γ‑globulin,ラ れ ぞ れ20倍. さ せPBSで. 2次. 清. に 希 釈 し た もの を 再 び 同 様 に 反 応. dak. 衝 グ リセ リ ンで 封. 銀 ラ ン プ は 東 芝SH‑. 起 を 用 い,倍 率 は200‑400倍. high. speed. 出 時 間 は3‑10分. に お い て は,少. Anscochrome ectachrome. で 観 察 し た.. 成. ウス. きの あ る緑 色 の 特異 蛍光 腹. 水 細 胞 も同 様 に 陰 性 で あ っ た.こ. れ に よ っ てstai. ning. 清 が16倍,抗gs‑. 3. titerは. 抗gs‑1. (FeLV)血. 2. (MSV)血. 清 が8倍. お よ びgs‑3抗. の もの で,し. か もgs‑1抗. 原. 原 と特 異 的 に 反 応 す る こ と が 分 っ た.. RLV持. 続 感 染 人 リ ンパ 芽 球 様 株 細 胞 の ウ イ ル. OUMS‑11a‑Rに. お い て は,抗RLV血 染13日. 日 後0.3%,. 後 か ら470日 後 ま で0.2‑0.3%と. 342日. 後0.2%,. 清 に よ る陽. 性 細 胞 は, RLV感. 54日 後0.2%,. 数 で あ る が ほ ぼ 一 定 の 値 を 示 し た(写 (MSV)血. 393日 3. な っ た(写. 清 で は416日. た はKo. い て 検 索 し た が,特. ASA160を. 用 い,露. っ た.. 後 と470日. 172 少. 真3).抗. 清 で は54日 後 に0.6%で. 以 後 は0.2‑0.3%と. (FeLV)血. あ っ た が,. 真4).抗gs‑ 後 の細 胞 に つ. 異 蛍 光 を示 す 細 胞 は み られ なか. OUMS‑6C1‑R1で RLV血. は395日. 清 で は13%,. 11%で. 後,. 400日 後 に は 抗. あ り,抗gs‑1. (MSV). 績 血 清 で は15%,. 予 備 染 色 試 験 に よ る 抗 血 清 の 抗 体 価 測 定 と特. 異性の検討 抗RLV山. 清 は8 32倍 希. と は 明 確 に 区 別 で き る もの で あ っ た. DBLA‑6の. ASA200ま. 間 と し た. Ⅲ. 1. (FeLV)血. 数 の 細 胞 に非 特 異 反 応 と思 え る黄色. 調 の 吸 着 が み られ た が,輝. gs‑1. 蛍 光 顕 微 鏡 は 日 本 光 学 製,水. 写 真 撮 影 に は,. 清 は16倍,抗gs‑3. た 抗gs‑1. 釈 で は 著 明 に 減 少 し た.対 照 の 正 常BALB/cマ. 抗 血 清 と し てFI‑. ッ トγ‑globulin血. 洗 い,風 乾 し た 後,緩. UV励. 異 蛍 光 は細 胞 質 に 限. ス抗 原. 入 し 観 察 し た.. 200,. 真2).特. に は み られ な か っ た.ま. 倍 希 釈 ま で 明 らか な 特 異 蛍 光 が み ら れ た が,. 培 養 細 胞 をcover. 風 乾 し,緩. 血 病 マ ウ ス の 脾 に お い て,. で も浸 潤 細 胞 の 集 団 が 緑 色 に 輝 く特 異 蛍. ら れ て お り,核. 直接法. た 標 本 に4‑8倍. PBSを. 真1),肝. 光 が 認 め ら れ た(写. 蛍 光抗 体 法. 血 清 を の せ,湿. Rauscher白. 浸 潤 し た 白 血 病 細 胞 と 思 え る 多 数 の 細 胞 が 光 り(写. 識 ラツ ト. の 対 照 を 設 定 し た.. (1). 光 抗 体 法 間 接 法 に よ り染 色 し た.. そ の 結 果,. 正 常 ラ ツ ト血 清 とFITC標. γ‑globulin山. 5. の を 用 い,蛍. 羊 血 清 を 反 応 さ せ た も の.. (写 真5,. 10%に. 6)が,抗gs‑3. そ れ ぞ れ 特 異 蛍 光 が み られ た (FeLV)血. 清 で は陰性. で あ っ た. 羊 血 清IS‑7に. つ い て は,す で に 私 達 が. OUMS‑6C1‑R2で. は243日. 後,. 313日. 後 に は抗.
(5) 人 白血 病 の ウ イル ス 学 的 研 究 表8. Rauscher白 血 病 ウ イル ス 感 染 人 由 来 リンパ 芽 球 様 株 細 胞 の 感 染 後 日数 と蛍 光 抗 体 法 に よ る特 異 蛍 光 陽性 細 胞 の 出 現 率. ND:. RLV血 は13%, gs‑3. 517. not. determined. 清 で は12%, 8%が (FeLV)血. 10%,抗gs‑1. (MSV)血. 陽 性 で あ っ た(写 清 で は,や. 真7,. 清で. は り特 異 蛍 光 は み られ. 識 抗 ラ ッ ト γ‑globulin血 清 を 反. OUMS‑6C1で. 感 染 のOUMS‑11a,. は,い ず れの 場 合 に お いて も全 く光. らな い か,ま た は弱 い淡 緑 色 を示 す ものや,強. な か っ た(表8). 対 照 と し て 用 い たRLV感 OUMS‑6C1‑R1,. い輝 きの あ る青 緑 色 と は明 確 に区 別 で きる もの で,. 清 ま た はFITC標. 識抗 山. 吸着 に よ る非 特 異 反 応 で あ る と判 定 した(表9).. 清 の み 反 応 さ せ た もの や 正 常 ラ ッ. 表9. Rauscher白. 血 病 ウ イル ス感 染 人 由 来 リンパ 芽球 様 株細 胞 の. 蛍 光 抗 体 法 に よ るgs抗 原 の検 索 成 績. ※. RLV:. い黄. 色 を 示す 細 胞 が時 に み られ た が,特 異 蛍 光 が示 す 強. 染 のOUMS‑11a‑R,. OUMS‑6C1‑R2にFITC標. 識 抗 ラ ッ ト γ‑globulin血 羊 γ‑globulin血. ト血 清 とFITC標. 応 させ た もの,お よ びRLV非. 8)が,抗. Rauscher. Leukemia. Virus.
(6) 518 3. 宇 RLV抗. 抗RLV血. 野. 原の細胞内局在 清 お よ び抗gs‑1. 出 され たRLV感. 潤. 一. 郎. わ れ る もの や,細 胞膜 周 辺 が特 に強 く光 る とか,核 (MSV)血. 清 で 染め. 原 を示 す 特 異 蛍 光 は,細 胞 質 に限 られ,ほ. 周 辺 が 強 く光 るこ とな どが み られ て い る35)‑39).ま た Hampar36), Girardiら40)は,び. 染 人 リン パ芽 球 様 株 細 胞 のRLV抗 とん どが. ci染 色 はgs‑1抗. まん 性, punctate. fo. 原 に 多 く,核 周 囲 染 色 はgs‑3抗. び まん 性 の もの で あ っ たが,時 に そ れ が 不 均一 な,. 原 に多 くみ られ る と述 べ て い る. RLV感. い わ ゆ るpunctate. 染 人 リンパ. fociと して み られ る もの(写 真. 芽 球 様 株 細 胞 で は 核周 囲 染色 の所 見 は み られ なか っ. どの染 色 様 式 が み られ た.ま た特 異 蛍 光 を示. た が,そ の 他 の 染色 様 式 は,こ れ らの報 告 とよ く一. す と思 え る一 部 の細 胞 で は稀 に,細 胞 質 の み で な く. 致 して い る.核 は 原則 と して光 らな か った が,時 に. 核 の部 分 に粗 い顆 粒 状 また はハ ケ で はい た よ うな 線. 核 の 部 分 に粗 い 顆 粒状 ま た は ハ ケで は い た よ うな 線. 状 の蛍 光 が み られ る こ とが あ った.. 状 の 蛍 光 が み られ た.こ れ は対 照 に も同 じよ うな 所. 9)な. Ⅳ. 考. 見 が み られ るの で 非 特 異 反 応 と考 えて い る. Chuat. 按. ら37)はMoloney肉 人 の 血 液細 胞 由来 の株 細 胞 の 樹 立 は,培 養 細 胞 が. 腫 ウ イ ル ス感 染 マ ウ ス胎 児 培 養. 細 胞 に同 様 の 所 見 が み られ,や は り非 特 異 反 応 と考. 必 ず し も白血 病 細 胞 そ の もの でな い に して も,今 日. えて お り, Hilgersら39)も. で は,白 血 病 の研 究 に欠 くこ との で きな い方 法 で あ. な吸 収 操 作 に よ る非 特 異 反 応 で あ る と述 べ て い る.. り,し か も,そ の培 養 細 胞 に動 物 白血 病 ウ イル ス を. RLV持. 核 染 色 は抗 血 清 の不 充 分. 続 感 染 人 由 来 リンパ芽 球様 細 胞 か ら産 生 さ. 感 染 させ て,そ の ウ イ ル ス抗 原 分 析 を行 うこ と は,. れ るC型 ウ イル ス粒 子 が感 染 に用 い たRLVと. 人 白血 病 の成 因 を さ ぐる1つ の モ デル と して す ぐれ. 原 性 を もつ もの で あ るの か,あ. た方 法 で あ る こ とに は異 論 は あ る ま い.最 近, Pri. 通 過 す る こ と に よ り何 らか の 抗 原 性 の 変化 を受 けて. oriら28)に よ るESP‑1,. McAllisterら29)のRD‑114. な ど,人 癌 患 者 由 来 の 培 養 細胞 にC型RNAウ. 同 じ抗. るい は,人 の細 胞 を. い る のか と い う点 につ いて,三 好 ら23)‑25)のbioass. イル ス. ayの 結 果 に よ る と,両 系 の 細 胞 か ら産 生 され るC型. 粒 子 の持 続 的 産 生 を認 め た とい う報 告 が な され,こ. ウ イ ル ス を マウス に接 種 して もRauscher白. れ が 人 の 未知 腫 瘍 ウ イル ス で は な い か と注 目 され た. 起 らな い.つ ま り,こ のC型 ウ ィル ス は,も は やle. が,そ の 後 の 詳 細 な 研 究 に よ って,そ れ ぞれ マ ウス. ukemogenicityを. 白 血 病 ウ イル ス,ネ. RLVが. コ白血 病 ウ イ ル ス 由来 で あ る可. 血病 は. もた な い とい わ れ て い る.こ れ は,. 人 の細 胞 に感 染 しbuddingに. よ って 成 熟 す. 能 性 が 強 く,人 由来 ウイ ル ス で あ る こ とは ほ ぼ否 定. る過 程 で,そ のvirionの. され た とい って よ い.. ま た は全 部 が くみ込 まれて 構 成 され る可 能 性 が あ り,. 私 が,本 研 究 で使 用 したSMON患 ンパ 芽 球 様 株 細 胞 やHodgkin病. 者 末 梢 血 由来 リ 患 者 リ ンパ節 由来. リンパ 芽 球 様 株 細 胞 は, in vitro及 びin vivoに RLVの1回. て. の感 染 に よ り持 続 感 染 系 とな り,長 期 間. そ の た め も とのvirionの. 被 膜 は人 の 細 胞 膜 の 一 部. そ れ とは異 な っ た 被 膜 が. で き上 るの で,当 然 な ん らか の病 原 性 また は抗原 性 の 変 化 が起 るの で は な い か と考 え られて い る. この こ とを蛍 光抗 体 法 に よ る成 績 と電 顕 に よ るC. C型 ウ イル ス 粒 子 を産 生 し続 け て お り,そ の経 時 的. 型 粒 子 産 生 細 胞数 と比 較 して考 え て み る と,電 顕 で. な 電顕 的 観 察, bioassayに. は そ の数 値 を定 量 的 にはみてな いが, OUMS‑11a‑R. つ いて は,す で に報 告 さ. れ て い る と う りで あ る23)‑25).蛍 光抗 体 法 に よ るRNA. に つ い て は,感 染 初 期 に は 多数 のC型 ウ イ ル ス産生. 型 腫 瘍 ウ イル ス のgs抗 原 を含 め た ウイルス抗 原 の 分. 細 胞 が 見 られ る23)24)のに反 して,特 異蛍 光 陽性 細 胞. 析 は,す で に 種 々 の 実 験系 を 用 い た 多 くの報 告 が あ. 数 は0.2‑0.6%と. り,且 つ す ぐれ た ウ イル ス学 的検 索 方 法 の1つ で あ. ‑Rの 感 染 後 期 とOUMS‑6C1‑R1. る こ と もよ く知 られ て い る30)‑39).し か しな が ら,人 由. ‑R2の. 来 リンパ 芽 球 様 株 細 胞 にRauscher白. 陽 性 細 胞 数 は,ほ ぼ 一致 して い た.な ぜOUMS‑11a. 血 病 ウイルス. 非 常 に少 ない.し か しOUMS‑11a. , OUMS‑6C1 感 染 後 期 で は, C型 ウ イ ル ス産 生 細 胞 数 と. を感 染 させ,そ の 持 続 感 染 細 胞 にお け るgs抗 原 の検. ‑Rの 感 染 初 期 に この よ うな 差 が 出 た か につ い て は,. 索 は,ま だ そ の 報 告 をみ な い.. 前 述 の ウ イル ス抗 原 の変 化 とい うこ とが 考 え られ る.. さて, gs抗 原 の 細 胞 内 局 在 を示 す 特 異 蛍 光 は,多 くの 場 合,核. には 見 られ ず,細 胞 質 に 限 られ て い る. と ころ が,ウ イ ル ス被 膜 の抗 原 は ウ イ ル ス抗 原 の う ちで はtype. specific(型. 特 異 的)な .もの で あ り,. とい わ れ て い る.そ の 染 色 様 式 は,び まん 性 で あ る. この抗 原 は細 胞 表 面 に存 在 して お り,こ れ を蛍 光抗. 場 合 が 多 く,細 胞 質 に不 連 続 なpunctate. 体 法 で 確 認 す るに は細 胞 を 固 定 した の で は 細胞 表 面. fociと い.
(7) 人 白血 病 の ウ イ ル ス学 的研 究 が破 壊 され る た め検 出 しに く く,生 細 胞 を 用 い た膜 蛍 光抗 体 法 に よ らな けれ ば な らな い36)37).本 研究 では 膜蛍 光 抗 体 法 を行 な って い な い の で,こ. こで染 め 出. 519. べ て培 養 の継 代 が進 む につ れ て陽 性 細 胞 が 少 な くな る と述 べ て い るが, ‑R1. ,. OUMS‑11a‑R,. OUMS‑6C1. OUMS‑6C1‑R2のgs‑1抗. 原 も,と. もに. され た抗 原 は ウ イル ス 被 膜抗 原 で は な く,細 胞 質 内. わず か な差 で あ るが 培 養 日数 の 多 い 程 陽 性 細 胞 数 は. に 局在 す るintraviral. 減 少 の 傾 向 が み られ て い る.. gs‑1抗. componentの. 抗原つ まり. い ず れ に して もRLV感. 原 とい うこ と にな る.し た が っ て,人 リン パ. 芽 球様 細 胞 か ら産 生 され るC型 ウ イ ル ス粒 子 に く ら. murine. べ て,特 異 蛍 光 陽 性 細 胞数 が 少 な い とい うだ け で ウ. 抗RLV血. gs‑1抗. 染 人 リン パ芽 球 様 細 胞 が. 原 を 有 し て い る こ と は 確 か で あ り,. 清 に よ る フ ェ リチ ン抗 体 法 に よ る検 索 で. イル ス抗 原 に変 化 が 起 った とは い えな い.し か も,. も細 胞 外 に 産 生 さ れ るC粒. 培 養後 期 に は, C粒 子 産 生 細 胞数 と特 異 蛍 光 陽 性 細. ベ ル され て お り41),また,. bioassayを. 胞 数 は ほ ぼ一 致 して お り,ウ イル ス の抗 原 性 に変 化. 上 経 過 後Rauscher白. 血 病 の 起 らな か った マ ウ ス に,. が あ るな らば,後 期 にお い て も,初 期 と同 じよ うな. Rauscher白. よ る限 りで は,ウ イル ス被 膜 抗原 の変 化 は分 らな い. 米 国Flow. こ とに な る.. 反 応 に よ っ て もmurine. 細 胞数 との関 係 につ いて, Hamparら36)はRLVを 染 させ たmurine. cell line (F‑4)お. 感. よ びハ ムス. ター 白血 病 ウ イ ルス 感 染 ハ ムス ター胎 児 培 養 細 胞 で,. fibroblast. Laboratoryの. よ り産 生 さ れ るC型. て も. 畑 中 博 士 に よ る補 体 結 合 gs‑1抗. 原 を有 して い る と. 染 人 リン パ芽 球 様 細 胞. ウ イ ル ス 粒 子 は,も. 病 原 性 は 有 し な く な っ て い る が, gs‑1抗. と の よ うな. RLV. originの. 原 は そ の ま ま 有 し て い る と結 論 さ れ よ う.. 1963年. cell lineに お い て,固 定 細 胞. 月 以. 血 病 の 発 生 が か な り抑 制 され る こ と や25). い う こ と41)な ど か ら, RLV感. kellofら31)は ニ ワ トリ 白 血 病 ウ イル ス感 染chick embryo. 行 っ て2ヶ. も と のleukemogenicなRLVをchallengeし. 差 が生 じて もよ い.固 定 細 胞 を用 い た蛍 光 抗 体 法 に. ウイ ル ス粒 子 産 生 細 胞 数 と蛍光 抗 体 法 に よ る陽 性. 子 は フ ェ リチ ン に よ り ラ. 平 木42)は,白. 血 病 の 発 生 機 構 に 関 す る仮 説. と し て,白 血 病 の 成 因 をC型RNAウ. イ ル ス と想 定 し. を用 い た場 合,電 顕 に よ るウ イル ス産 生 細 胞 数 に く. てactivation. の後 それ を実 証. らべ て,陽 性 細 胞 数 は か な り少 な くな る と述 べ て い. す る 実 験 白 血 病 の 多 数 の 研 究 が あ る43)‑45).1969年. theoryを. る.こ れ はgs抗 原 が,ウ イ ル ス産 生 の み られ な い か. Huebnerら46)も,平. ある い は少 量 の 細 胞 に お い て は,主. ogene. に存 在 し, buddingに. と して細 胞 質 内. よ る ウ イル ス産 生 の さか ん な. 細 胞 で は細 胞 膜 周 辺 に 多 く,そ の た め固 定 に よ っ て. theoryに. 提 唱 し,そ. 木 と 同 じ概 念 のoncogene, よ っ て,ほ. 物 細 胞 に は 腫 瘍 性RNAウ tical. vir. とん どすべ て の 脊 椎 動 イ ル ス のgenomeがver. transmissionに. よ り入 り込 ん で お り,内 外 か. 細 胞膜 を破 壊 す れ ば,ウ ィル ス産 生 が 多 い に もか か. らの 刺 激 に よ っ て 活 性 化 さ れ て 腫 瘍 の 発 生 が 起 る の. わ らず検 出 で きるgs抗 原 は少 な くな る と解 釈 され て. で は な い か と い う有 名 な 仮 説 を 発 表 し た. RLV感. い る.こ れ は人 由来 血 液 細 胞 の場 合 とそ の ま ま比 較. 人 リ ン パ 芽 球 様 細 胞 か ら 産 生 さ れ るC型. は で きな い と して も, OUMS‑11a‑Rの. 子 は,感 染 に 使 っ たRLVと. 感染初期 に. は ウイル ス産 生 が活 発 で, gs抗 原 は細 胞 周辺 に 多 く,. 判 明 し た が,. 固定 に よ って 細 胞 膜 を破 壊 す る こ とに よ り細 胞 周 辺. ば,も. のgs抗 原 やtype. al. specific抗. 原 が 検 出 され な くな. り,ウ イ ル ス産 生 細 胞 と陽 性 細 胞 とに差 が で きた の. activation. genomeがRLVの. ivateな. 固定 とい う前 処 置,す. nのRLVと. と考 え られ る.そ して, OUMS‑11a‑Rお OUMS‑6C1‑R2の. よ びOU. 概 念 を導 入 す れ. れ て,人. の 腫 瘍 性RNAウ. れ る よ う に な り, murine. よ. る産 生 は減 少 し, gs抗 原 は 主 と して細 胞 質 内 に存 在. 共 存 して い る可 能 性 も考 え られ 非 常 に. も し,人. 由 来 の 白 血 病 ウ イ ル ス が 存 在 す る もの な. ら,こ の ウ イ ル ス はinterspecies‑specific antigenを. 有 し て い る は ず で あ る.し. して い る た め に ウ イル ス 産生 細胞 数 と陽性 細 胞 数 が. 11a‑R,. OUMS‑6C1‑R1,. ほ ぼ一 致 して い た と も考 え られ る.. gs‑3抗. 原 は す べ て 陰 性 で あ っ た.. ま た, Ubertiniら38)はFeLVを. イ origi. 興 味 あ る 点 で あ る.. 感 染後 期 で. は,ウ イル ス産 生 は み られ るが 活 発 なbuddingに. theoryの. 感 染 な ど の 刺 激 に よ っ てact. い しrescueさ. ル ス がreleaseさ. MS‑6C1‑R1,. ウ イル ス 粒. 共 通 抗 原 を有 す る こ とは. と も と 人 リ ン パ 芽 球 様 細 胞 に ひ そ む 人 のvir. で あ っ て,ウ イ ルス 抗 原 の 変 化 とい うよ り,細 胞 の なわ ち方 法 論 に起 因 す る もの. 染. 感 染 させ た ネ コ胎. 児 培 養 細 胞 のgs抗 原 の 検 索 の と き,感 染初 期 に く ら. ウ ス 白 血 病 ウ イ ル ス はgs‑1抗. (gs‑3) か し,. OUMS. OUMS‑6C1‑R2の RLVを. 原 とgs‑3抗. 含 めたマ 原 を共. 有 し て お り10)11),し か も同 じ抗 原 蛋 白 分 子 にgs‑1抗.
(8) 520. 宇. 原 とgs‑3抗. 原 のdeterminantが. る17)36).した が っ て,た 生 さ れ な く て,そ の もつgs‑3抗. 野. あ る と い われ て い. と え人 の 白 血 病 ウ イ ル ス が 産. のgs‑3抗. 原 が 出 な く と も,. 原 は 存 在 す る か ら,蛍. 清 のtiterが. 低 い た め か,細. 光抗 体 法で検 血. 胞 質 中 のgs‑3抗. 一. 郎. RLV山. 羊 血 清,抗gs‑1. (MSV)ラ. 原量. ツ ト血 清 で は. ,. 細 胞 を1000個 数 えて 特 異 蛍 光 の み られ る細 胞 は, OUMS‑11a‑Rで0.2‑0. RLV. 出 で き る は ず で あ る の に 陰 性 で あ っ た こ と は,抗. 潤. OUMS‑6C1‑R2で 3. (FeLV)山. .6%, は8‑15%で. OUMS‑6C1‑R1, あ った が ,抗gs‑. 羊 血 清 で は,い ず れ の 細 胞 に も特異蛍. 光 は み られ な か った.電 顕 に よ るC型 ウ イ ル ス産生. が 少 な か っ た か の ど ち ら か で 検 出 で き な か っ た と考. 細 胞 数 と比 較 した場 合,特 異蛍 光 陽性 細 胞 数 はOU. え て い る.そ. MS‑11a‑Rの. して 人 リ ン パ 芽 球 様 細 胞 か ら持 続 的 に. 産 生 され るC型 たRLVで. ウ イ ル ス 粒 子 は,も. あ っ て,人. がactivateき. との感 染 に 使 っ. の 細 胞 に ひ そ むviral. genome. れ て 形 を表 わ した 人 の 白血 病 ウ イ ル. もの,細 胞 質 周 辺 が 環 状 に強 く光 る もの. 人間. られ なか っ た.対 照 群 はす べ て 陰 性 で あ り,抗 血 清 の 特 異 性 の 検 討 か ら も,こ こで み られ た蛍 光 は特 異. ウ イ ル ス の 産 生 が み ら れ る こ と は,ウ transmissionの. tate fociの. か も持 続 的 に. し か し,マ ウス 白 血 病 ウ イ ル ス で あ るRLVが の 血 液 由 来 の 細 胞 に 容 易 に 感 染 し,し C型. 特 異 蛍 光 はす べ て 細 胞 質 に限 られ,顆 粒 状 のpunc. な どの染 色 様 式 が み られ たが,核 周 辺 や 核 内 に はみ. ス の 可 能 性 は ほ ぼ 否 定 さ れ た.. vertical. 感 染 初 期 の み ウイルス 産 生細 胞 数 に く. らべ て少 な か っ た が,そ れ 以 外 は ほ ぼ一 致 して いた.. イルスの. 考 え と と も にspecies. 蛍 光 で あ る こ とが 分 った. 以 上 の ご と く, RLV感. 染 人 由 来 リンパ 芽球 様 株 細. barrierを. 越 え た 人 の 細 胞 へ のhorizontal. trans. 胞 の 抗 原 分 析 の 成 績 か ら,こ の 人 リ ンパ 芽球 様 細胞. missionの. 可 能 性 が 示 唆 され る と と も に,人. の培養. か ら産 生 され るC型 ウイル スは感 染 に用 い たRLVで. 細 胞 に 長 期 間 感 染 を 続 け る う ち に,人. の 白血 病 ウ イ. ル ス と し て 病 原 性 を 発 揮 す る よ う に な り得 る 可 能 性 も考 え ら れ,興. 結. 6C1‑R2に 抗gs‑3血. OUMS‑6C1‑R1, お け るgs抗. RLV感. 原 の 分 析 を,抗gs‑1血. 染 後13日. れ. ウ イル スで あ る. か ら470日. 木 潔 教 授 に深 甚 の 謝 意 を表 し ます.ま た 終始 多大 の 御 指 導 と御 援 助 を いた だ いた 入 野 昭 三 講 師,三 好 勇. OUMS‑ 清,. 清 を 用 い た 蛍 光 抗 体 法 に よ っ て 行 っ た.. 検 索 し た 細 胞 は,. れ てreleaseき. 稿 を終 る に あ た り御 指 導 と御 校 閲 を賜 った恩 師 平. 続感 染 人 由来 リンパ 芽 球 様 株 細 胞 で. あ るOUMS‑11a‑R,. genomeがactivateさ. 可 能 性 はほ ぼ 否 定 され た.. 語. 人 白 血 病 の ウ イ ル ス 学 的 研 究 の 一 つ のapproach と し て, RLV持. るviral. る よ うに な った 人 由来 の 腫 瘍 性C型. 味 あ る現 象 と い え よ う. Ⅴ. あ り,人 の 細 胞 に もと もと潜 在 して い る と想 定 され. まで. 経 時 的 に 採 取 し た ア セ トン 固 定 標 本 を 用 い た.抗. 夫 講 師 に深 謝 い た します. (本論 文 の要 旨 は昭 和48年 第35回 日本 血 液学 会 総 会 お よ び,昭 和48年 第22回 癌 学 会 総 会 に お い て発 表 した.).
(9) 人 白血 病 の ウ イ ル ス学 的 研 究. 文 1) Wright, B. S. and Korol, W.: Infection ine leukemia virus. 2) Maruyama, K. man. Texas. Cancer. Res.,. Biol.. Med.,. 献. of human embryonic 29: 1886-1888,. and Dmochowski, L.: Rep.. 521. Studies. cell culture. on the relationship. 29: 83-97,. with the Rauscher. of leukemia. in animals. Aaronson, S. A., Todaro, G. J.,: Transformation in human cells. Nature, 225: 458-459, 1970.. 5) Jarrett, O.,. Laird, H. M., and Hay, D.,:. 224: 1208-1209, and lymphoma.. Cancer,. Nature,. 228: 927-929,. leukemia viruses.. Electron. Theri Med.,. Antigens. relation. G.,. of leukemias. The murine leukemia-sarcoma. virus. 265-266,. Virology,. induced by natrually. A.,. determinants. Shared. viral. E.,:. antigen. of a group-specific. and Old,. associated. USA.,. L. J.,:. Isolation. with the structural. 68: 901-904,. Shared. structural. protein. of hamster. 16) Nowinski, R. C., Sarkar, Characteristics. of mammalian. L.,:. Studies. Isolation. murine. strains.. Int.. protein. and Gilden, L. J.,. Moore,. components. viuses.. 38: 387-394,. 1969.. of a group-specific. 1969. and interspecific. of feline C-type. virus.. antigenic. Pro. Natl.. R. V.,:. The group-specific. Acad.. viruses. Virology,. D. H., Scheer,. antigen. 43: 665-674,. D. I. and Hilgers,. of the mouse mammary tumor Virus.. of a group-specific Group-specific. J. Cancer,. 6:. antigen 145-152,. M. and Abelev, G. I.,: Immunofluorescent. leukemia viruses.. 20) 長 谷 川 晴 己:ヒ. viruses.. Proteins. antigen by isoelectric. and 1971.. J.,:. II. viral. of the murine. C-type. focusing.. Gen.. J.. 1970.. 18) Ablev, G. I. and Elgort, D. A.: low-leukemic. antigen of. on mouse leukemia. and some characteristics. protein and antigens Virology, 46: 21-38, 1971. 17) Oroszlan, S., Fisher, C. L., Stanley, T. B., and Gilden, R. V.: 1-10,. leukemia. antigen. Virology,. and mouse C-type. N. H., Old,. of the Structural. RNA tumour Viruses:. group-specific. 1968.. 1971.. S., Foreman, C., Kelloff, G.,. 19) Lejneva, O.. and other murine. complex. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S.,. antigen of the murine leukemia viruses. Virology, 37: 189-202, 14) Oroszlan, S., Huebner, R. J., and Gilden, R. V.,: Species-specific. 8:. occur. 1970.. and characteristics. 13) Gregoriades,. Virol.. of human leukemia. of Gross virus. 36: 678-707,. 12) Schafer, W., Anderer, F. A., Bauer, H., and Pister,. other. of human leukemia. 1966.. Hardy, W. D., Old, L. J., and Harven,. 226:. 15) Oroszlan,. studies. 1967.. 11) Geering, G., Aoki, T., Old, L. J.,:. Sci.. in human cell. Nature,. DNA polymerase. to the antigens. 124: 753-772,. and feline leukemia viruses.. I. Isolation. microscopic. RNA dependent. and Boyse, E. A.,:. J. Exptl.. 9) Huebner, R. J.,:. Nature,. viruses. 1970.. ring murine leukemia virus:. murine. by murine sarcoma. 1967.. and Ting, R. C.:. 8) Geering, G., Old, L. J.,. 10) Geering,. growth. Growth of feline leukemia virus. 20: 760-777,. 7) Gallo, R. C., Yang, SS.,. 58: 835-842,. and virus. Moloney. 1969.. 6) Dmochowski, L., Yumoto, T., and Grey, C. E.:. cells.. and. 1971.. 3) Boiron, M., Bernard, C., and Chaut, J. C.,: Replication of mouse sarcoma virus strain (MSV-M) in human cells. Proc. Amer. Ass. Cancer Res., 10: 8, 1969. 4). mur. 1969.. Int.. J. Cancer,. 6:. of murine. leukemia viruses. in mice of. 1970. study of the group-specific. 153-159,. 1970.. ト末梢 血 由来 リン パ芽 球 様 株 細 胞 に 関 す る研究. 第1編. antigen. of. ・リ ンパ芽 球 様株 細 胞 の 樹 立.
(10) 522. 宇. 岡 山 医学 会 雑 誌83: 21) 坪 田輝 彦:ホ. 553‑568,. 野. 潤. 一. 郎. 1971.. ジ キ ン病 患 者 由来 淋 巴芽 球 様 株 細 胞 に関 す る研 究.第1報.同. 一 ホ ジキ ン病 患 者 淋 巴 節 お よ. び末 梢 血 よ り樹 立 した淋 巴芽 球 様 株 細 胞 の比 較 検 討,日 血 会 誌, 35: 156‑170,. 22) Miyoshi, I., Hasegawa, H., Tsubota, lymphoblastoid. cells.. T., and Hiraki, K.:. GANN, 63: 361-363,. 23) Miyoshi, I., Hasegawa, H., Tsubota, T., lymphoblastoid. Shape. 1972.. and motility of cultured. human. 1972.. Irino,. cell line with Epstein-Barr. S.,. virus. and Hiraki,. K.:. and Rauscher. Dual infection. leukemia virus.. of a human. GANN, 63: 395,. 1972. 24) 三 好 勇 夫,長 谷 川 晴 己,坪 田輝 彦,吉 本 修 子,駄 お け るEBウ. 馬 崎 浩,入 野 昭 三,平 木 潔:ヒ. トリン パ芽 球 様 株 細 胞 に. イル ス とマ ウ ス 白血 病 ウ イ ル ス の 重 複 感 染,医 学 の あゆ み, 82: 437‑438,. 25) Miyoshi, I., Yoshimoto, S., Propagation. of. Rauscher. chamber cultivation.. Tsubota, T., leukemia. Fujiwara,. virus. S.,. Dabasaki, H.,. to human. lymphoblastoid. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 143:. 26) Aoshima, M., Ishidate, M., and Sakurai, ics of transplantable. rat leukemia.. Y.:. 850-853,. Comparative. DBLA lines.. 1972.. Abe, S., and Irino, cells. in vivo. S.,:. diffusion. 1973.. studies. on biological. GANN, 62: 95-106,. characterist. 1971.. 27) 入 野 昭 三,宇 野 潤 一 郎,三 好勇 夫,瀬 崎 達 雄,平 木 潔:蛍 光 抗 体 法 に よ る ヒ ト白 血 病 の ウ イル ス学 的 研 究 医学 の あ ゆ み, 82: 633‑634,. 28) Priori, type. E. S., C virus. particles. Nature. B.,. tissue. New Biology,. R. M., Nicolson, M., Gardner,. Huebner, R. J., type virus 235:. Myers, B.,. in a continuous. of a lymphoma patient. 29) McAllister,. 1972.. Dmochowski, L.,. 3-6,. from cultultred. 232:. derived. 61-62,. S., Gilden,. of cells. 1971.. human rhabdomyosarcoma. virus. in tissue. culture.. Nature,. 31) Kelloff, G., and Vogt, P. K,: Localization. Rasheed, S.,. Sarma, P. S.,. Nature. New Biology,. and virus.. Virology,. 29: 377-384,. cells.. and immunofluorescent. investigations. leukemia viruses. Biol.. 1966.. 121:. 72-81,. Studies. by immunofluorescence.. 34) McGrath, C. M., and Blair, P. B.,: Cancer. Res.,. Williams,. Nat.. antigen. leukemia viruses. I.. immunnofluorescence.. Inst.. Monograph.. localization. in cell. Detection. Proc. Soc. Exp. leukemia. viruses. 22: 671-679,. 1966.. of mammary tumor cells. in in. 1070.. Myers, B., and Dmochowski, L.:. mouse mammary tumor (MTV) and murine from mammary tumors. group-specific. of Moloney and Rauscher. Cancer.. Immunofluorescent. 30: 1963-1968, W. C.,. 1964.. of murine. by indirect. 33) Pinkel, D., Yoshida, K, and Smith, K.,: Studies cultures. 52-54,. 1966.. of Moloney and Rauscher Med.,. 201:. of avian tumor virus. 32) Yoshida, K., Smith, K L., and Pinkel, D.,:. culture.. effusion. 1972.. of Friend. 35) Hilgers, J.,. Production. pleural. R. V., Kabigting, A., and Vernon, L.,: C-. 30) Osato, T., Mirand, E. A., and Grace, J. T.,: Propagation. cell. Constant. from. M. B., Rongey, R. W.,. Hatanaka, M., Oroszlan,. released. and Wilbur, J. R.,: culture. of mice of several. leukemia strains.. virus. Detection. (MuLV) in cells. Virology,. 45: 470-483,. of antigens of cultures. of the derived. 1971.. 36) Hampar, B., Gilden, R., Kelloff, G., Oroszlan, S., and Simmms, D.,: Immunofluorescent detection of murine and hamster C-type virus species-specific (gs-1) determinants by monospecific guinea-pig sera and interspecies-specific Int. J. Cancer, 8: 425-431, 1971. 37) Chuat, J. C., Lasquellec F., Lhirondel, virus: II. Detection of group-specific 101-111,. 1971.. (gs-3). determinants. by tumor-bearing. rat sera.. A. M., and Boiron, M.,: Studies on murine sarcoma antigens by immunofluorescence. Int. J. Cancer, 7:.
(11) 人 白血 病 の ウ イ ル ス学 的研 究. 38) Ubertini,. T.,. Noronha, P.,. Post, J. E.,. the detection of the group-specific Virology, 44: 219-222, 1971.. and Ricard, C. G.:. 523. A fluorescent. antibody. antigen of feline leukemia virus infected. techniqne. tissue-culture. for cells.. 39) Hilgers, J., Nowinski, R. C., Geering, G., and Hardy, W.: Detection ofavian and mammalian oncogenic RNA viruses (Oncornaviruses) by immunofluorescence. Cancer Res., 32: 98-106, 1972. 40) Girarde, A., Hampar, B., Hsu, K. C., Oroszlan, Intracellular es-specific copy.. localization (gs-3). antigenic. J. Immunology,. 111:. determinants. Hornberger,. 152-156,. 平木. 潔:白. 血 病 の 成 因‑と. 平木. 潔:発. 癌 に お け る ウ イ ル ス の 関 与.第22回. くに ウ イ ル ス の 関 与 に つ い て.日. Sezaki,. T.,. (gs-1) technique. Suzaki,. 血 会 誌,. 日 本 癌 学 会 記 事,. M.,. and Hiraki,. 36:. 427‑444,. 315‑319,. 1963.. K.,:. RF monse leukemia and electron. 45). 入 野 昭 三,永. micros. 1973.. Cell free transmission. microscopic. particles in its leukemic tissue. GANN, 54: 225-237, 1963. 44) Irino, S., Sota, S., and Hiraki, K.,: The role of virus in radiation 57: 507-511,. and interspeci and light. 1973.. 42). - methylcholanthrene-induced. E., Kelloff, G., and Gilden, R.:. species-specific. with immunoperoxidase. 41). 43) Irino, S., Ota, Z.,. S.,. of mammalian type C virus. demonstration. of 20 of virus. leukemogenesis.. GANN,. 1966. 森 俤 一 郎,太. 田 善 介,鈴. 木 信 也:. 3,. 4‑Benzpyreneの. る白 血 病 の 誘 発 並 に ウ イ ル ス 粒 子 の 電 子 顕 微 鏡 に よ る 証 明,綜. 新 生 児RF系. 合 臨 床,. 15:. マ ウ ス1回. 1444‑1446,. の 注射 に よ. 1966.. 46) Huebner,R. J., and Todaro, G, J.: Oncogenes of RNA tumor viruses as determinants of cancer. Proc. Nat. Acad.Sci., 64: 1087-1094, 1969. 47) Traul, K A., Mayyasi,S. A., Garon, C. E., Schidlovsky. G., and Bulfone, L. M.: Antigenic comparison Proc.. of Rauscher. Soc. Exp. Biol.. Med.,. murine 139:. leukemia-virus 10-14,. 1972.. cultivated. in human. embryo. and. mouse. cells..
(12) 524. 宇. Virological Report. Ⅱ.. and. 潤. Studies. Immunofluorescent. Antigens. 野. 一. on. Human. Detection. of. Interspecies‑Specific. Lymphoblastoid. Cell. Lines. The Second Department Medical in the human lymphoblastoid technique. Medicine,. (Director:. infected. cells.. Human. the group-specific. with Rauscher. were examined. rat serum and anti-gs-3. and OUMS-6C1-R2. the. Rauscher. Prof. K. Hiraki). However,. (gs) antigens. leukemia. by the. virus,. OUMS. immunofluorescence. goat serum.. Immunofluorescence-positive cells with the anti-Rauscher anti-gs-1 rat serum were observed in 0.2-0.6% of OUMS-11a-R - 6C1-R1. in with. Okayama University. to the study of human leukemia,. and OUMS-6C1-R2,. with anti-gs-1. Antigens. Infected. (gs‑1). UNO. of Internal. School. Species‑Specific. Virus. cell lines chronically. -11a-R, OUMS-6C1-R1. the. (gs‑3). Junichiro. approach. Leukemia. Chronically. Leukemia. As a virological. 郎. no staining. leukemia virus goat serum and cells, and in 8-15% of OUMS was detected. in any cell lines with. anti-gs-3 goat serum. The number of fluorescent cells roughly coincided with those of cells pro ducing type-C virus particles as observed by electron microscopic examination. In all instances,. the fluorescence. was restricted. to the cytoplasm. It was diffuse and homo. geneous in almost all cases, although granular cytoplasmic fluorescence was sometimes observ ed. There was no nuclear or perinuclear fluorescence. The specificity of these antisera was confirmed. by the occurrence. with Rauscher. of specific. leukemia virus,. From these. results. of gs antigen analyses. fected with Rauscher. leukemia. in these. Rauscher. cells. were. that the hypothetical were rescued.. fluorescence. but not in the control virus,. in the tests. virus. and liver. itself. that. type-C. virus. used for infection,. viral genome of human origin was activated. of mice. infected. mice.. in the human lymphoblastoid. it was considered. leukemia. spleen. of uninfected. cells. chronically. particles. in. propagated. and it seemed unlikely. and human type-C. virus. particles.
(13) 人 白血 病 の ウ イル ス学 的研 究. 字. 写 真1. Rauscher白. 潤. 一. 血 病 マ ウス の 肝の 抗. gs‑1血. 清 に よる特 異螢 光. 写 真3. OUMS‑11a‑RのRLV感. の 抗RLV血. 野. 清 に よる特 異 螢光. 郎. 論. 文. 写 真2 gs‑3血. 染13日 後. 写 真4. 525. 附. 図. Rauscher白. 血 病 マ ウ ス の脾 の 抗. 清 に よ る特 異 螢 光. OUMS‑11a‑RのRLV感. 後 の 抗gs‑1血. 清 に よ る特 異 螢 光. 染416日.
(14) 526. 宇. 野. 宇. 野. 潤. 一. 潤. 一. 郎. 論. 郎. 文. 附. 図. 写 真7 OUMS‑6CI‑R2のRLV感 染243 日後 の 抗RLV血 清 に よ る特 異 螢 光. 写 真5 OUMS‑6CI‑RIのRLV感 日後 の 抗gs‑1血 清 に よ る特 異 螢 光. 染395. 写 真8 OUMS‑6CI‑R2のRLV感 染243 日後 の 抗gs‑1血 清 に よ る特 異 螢 光. 写 真6 OUMS‑6CI‑RIのRLV感 染400 日後 の 抗gs‑1血 清 に よ る特 異螢 光 写 真9 OUMS‑11a‑RのRLV感 に 抗gs‑1血 清 で み ら れ たpunctate. 染416日 foci. 後.
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