Noriko Sakurai

(1)

原著論文

変形性膝関節症由来関節滑膜細胞のマトリックス分解酵素産生に及ぼすグルコサミンの効果

櫻井規子^１）安部聡子^１）浅野和仁^２）

１）昭和大学大学院保健医療学研究科 ^２）昭和大学保健医療学部

Suppressive activity of glucosamine on osteopontin-induced matrix metalloproteinase production from human synoviocytes in vitro .

Noriko Sakurai

¹⁾

, Satoko Abe

¹⁾

, Kazuhito Asano

2)

１）

Showa University Graduate School, Showa University,

²⁾

School of Nursing and

Rehabilitation Sciences, Showa University, Yokohama 226-8555, Japan

(2)

2 Objective

Abstract

The present study was designed to examine the influence of glucosamine hydrochloride (GH) on the ability of synoviocytes to produce matrix metalloproteinase (MMP) and tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP) in response to osteopontin (OPN) stimulation in vitro.

Methods

Synoviocytes (5 x 10

⁵

cells/ml) derived from osteoarthritis patients were stimulated with 330 ng/ml OPN in the presence of various concentrations of GH for 24 hours. The levels of both MMPs (MMP-1, -2 and -13) and TIMPs (TIMP-1, and -2) in culture supernatants was examined by ELISA.

To examine the influence of GH on transcription factor, NF-κB, activation and mRNA expression for MMPs and TIMPs, synoviocytes (5 x 10

⁵

cells/ml) were also cultured in a similar manner for 4 and 12 hours, respectively. The levels of NF-κB activation was examined by ELISA. mRNA expression was examined by real-time RT-PCR.

Results

Addition of GH at more than 1.0 mg/ml into cell cultures suppressed dose dependently the production of MMP-1, -2, and -13 from synoviocytes after OPN stimulation. Although GH also suppressed the ability of synoviocytes to produce TIMP-1 and -2 in response to OPN stimulation, the minimum concentration that caused significant suppression was 1.5 mg/ml. GH inhibited mRNA expression for both MMPs and TIMPs through the suppression of NF-κB activation, which were increased by OPN stimulation in synoviocytes.

Conclusion

These results strongly suggest that GH favorably modify the clinical condition of osteoarthritis patients through the suppression of MMPs and TIMPs production from synoviocytes.

Key Words: Osteoarthritis, Glucosamine, Human synoviocytes, Osteopontin, MMP,

TIMP, Suppression, in vitro

(3)

はじめに

変形性膝関節症

(

膝

OA)

は中高年に好発する疾患で、その発生頻度は

50

歳を過ぎると急速に増加し、痛みを伴う膝

OA

患者数は

820

万人、

X

線学的検査において異常所見が認められる者が

2500

万人に及ぶとされている ¹⁾。また、膝

OA

はこのように罹患率が高いのみならず、発症早期の患者では関節液貯留や疼痛が主症状で、関節可動域制限はほとんど認められないものの、晩期になると広範囲な関節組織の変形や変性から関節可動域制限が著明となり、その結果、日常生活活動

(ADL)

や生活の質

(QOL)

の低下が誘発されることから、高齢者の支援・介護サービス受給の重要な原因ともなっており ²⁾、発症・進展予防や治療において今後より重要性が増す疾患であると考えられている。

膝

OA

は上述したように中高年に好発する疾患で、臨床症状の特徴は徐々に進行する関節の痛み、変形、機能障害であることから、医療機関における膝

OA

の治療では疼痛の緩和や関節可動性維持と改善等を目的に理学療法士による運動療法、温熱療法 ³^、⁴⁾あるいは足底板さらには義装具を使用した保存療法が主に行われている ⁵^）。一方、これら保存療法によって疼痛の緩和や機能改善が不十分な患者には非ステロイド性抗炎症薬

(NSAIDs)

の経口投与やステロイド、ヒアルロン酸の関節内投与という薬物療法が行われている ⁴⁾。さらに、グルコサミンやコンドロイチン等の機能性食品あるいは栄養補助食品には膝

OA

の進行抑制作用があることが報告 ⁶⁻⁸^）され、欧米諸国では膝

OA

の薬物療法としてこれら物質が使用されている。我が国においても膝

OA

に対するグルコサミンの効果が膝

OA

患者を対象に検討され、グルコサミンの経口摂取により、膝の痛みが緩和されることが示されるとともにグルコサミン摂取患者では膝

OA

の進行抑制が

X

線学的に確認されることが報告 ⁹^）されているものの、その作用機序については不明な点が多い。

膝

OA

患者関節を形態学的に観察すると関節包や軟骨の肥厚、軟骨細胞の変性や異常増殖、さらには軟骨表層の変性、びらんが認められる ¹⁰^）。また、この軟骨変性は軟骨下層から石灰化層に及ぶとともに、コラーゲンの変化や軟骨の線維化、線維束形成、軟骨組織内への血管侵入も認められる ¹⁰^）。これら形態学的変化は組織リモデリングと呼ばれ、本反応の発現には細胞外マトリックス分解酵素

(MMP)

が重要な役割を果たしていることが報告されている ¹¹⁾。一方、膝

OA

罹患関節では上述した形態学的変化のみならず、好中球やマクロファージ等の多核白血球の高度な浸潤を伴った関節液の貯留が認められる ¹⁰⁾。この関節液の貯留には滑膜細胞からのヒアルロン酸の過剰産生や微小血管の透過性亢進が重要とされ、血管の透過性亢進や血中からの組織への多核白血球の浸潤には血管内皮細胞間隙の拡大、基底膜の破壊が必須で、これらの反応発現にも

MMP

が重要な役割を果たしている ¹²⁾。このような観点から、膝

OA

の病態形成と

MMP

の関連性を検討するための解析が行われ、

膝

OA

患者血清中には健常者と比較し、有意に高濃度の

MMP

が含有されること、その含有量は膝

OA

の病態進行と相関していることが報告されている ¹³⁾。また、著者らは膝

OA

患者から関節液を採取し、関節液中の

MMP

濃度を測定、その結果、膝

OA

患者関節液中

(4)

4

には健常者のそれと比較すると有意に高濃度の

MMP-2

ならびに

MMP-3

が含まれていること、さらには、これら

MMP

濃度は膝

OA

の病態進行に伴って増加するとともに、軟骨破壊の指標とされている関節液中の

COMP

含有量との間に相関関係が認められることも観察報告した ¹²⁾。これらの報告は膝

OA

の発症やその進展に

MMP

が重要な役割を果たしている可能性があることを明示している。そこで今回、膝

OA

患者由来関節滑膜細胞を用いて骨代謝と膝

OA

の発症・進展に重要なことが示唆されているオステオポンチン ¹⁴⁾で刺激、

当該細胞からの

MMP

産生を指標に膝

OA

の進展予防効果があるとされているグルコサミン

(GH)

の効果について検討した。

(5)

材料と方法

1

試薬

本実験で使用したヒトリコンビナントオステオポンチン

(OPN)

は

R & D Systems, Inc.

(Minneapolis, NM, USA)

から購入したもので、使用の直前に

Synoviocyte Growth Medium (SG Medium; Cell Application Inc., San Diego, CA, USA)1 ml

に

660 ng

になるように溶解した ¹⁵⁾。転写因子

NF-κB

並びに

AP-1

の抑制剤 ¹⁶⁾である

BAY11-7085 (BAY)

と

SP600125 (SP)

はいずれも

SIGMA-ALDRICH Inc. (St Louise, MO, USA)

から購入し、使用の直前に

SG Medium

に溶解した。

GH

は和光純薬株式会社

(

大阪

)

から購入した保存料を含まない化合物で、使用の直前に

SG Medium

に溶解した。

2

細胞とその培養

本実験で使用した細胞は膝

OA

患者から採取し、株化した滑膜細胞

HFLS-OA

であった

（

Cell Application Inc.

）。実験に際しては液体窒素で凍結保存してあった細胞を溶解後、

SG Medium (Cell Application Inc.)

で

2

回継代したものを使用した。本細胞を上記培地

1 ml

あたり

5 x 10

⁵個になるように浮遊させ、

24

穴の細胞培養用プレートに

1 ml

ずつ分注し、

CO

2 培養器内で

2

時間静置した。その後、プレートの各

well

を滅菌した生理食塩水で

2

回洗浄し、非付着細胞を除去した。次に、プレート各

well

に

660 ng/ml

のヒト

OPN

と各種濃度に調整した

GH

を含む

SG Medium

、それぞれ

1 ml

づつを添加し、

CO

2 培養器内で細胞を培養した。培養

24

時間目に上清を採取、使用時まで

-40

℃で保存した。

MMP

並びに

TIMP

産生に及ぼす転写因子活性化抑制剤の効果を観察するための実験では、

GH

の代わり

に各種濃度の

NF-κB

抑制剤である

BAY

あるいは

AP-1

抑制剤である

SP

を細胞培養系に添加し、上記と同様に

24

時間細胞を培養した。転写因子の活性化ならびに

mRNA

の発現を調べるための細胞も上記と同様に

4

時間あるいは

12

時間培養、トリプシン処理することによってプレートから細胞を剥離し、

-80

℃で保存、

24

時間以内に実験で使用した。

3

各種因子の測定

本実験では市販のヒト

MMP

並びに

TIMP

測定用

ELISA

キット

(Amersham Biosciences Corp., Piscataway, NJ, USA)

を用いて培養上清中の

MMP-1, -2, -13

と

TIMP-1, -2

を測定した。それぞれのキットの測定限界は

1.7 ng/ml

、

0.37 ng/ml

、

0.094 ng/ml

、

51.0 ng/ml

、

3.0 ng/ml

であった。

4

転写因子活性化の測定

市販の転写因子、

NF- κ B

ならびに

AP-1

、活性化測定用

ELISA

キット

(Active Motif Co.,

Ltd., Carlsbad, CA, USA)

を用いて、培養細胞における転写因子の活性化を測定した。

(6)

6 5 mRNA

発現の検索

MMP

ならびに

TIMP mRNA

発現に及ぼす

GH

の効果をリアルタイム

RT-PCR

によって検討した。各種濃度に調整した

GH

の存在下、

OPN

で刺激した細胞から磁気ビーズを用いて

Poly A

⁺

mRNA を分離した。 1.0 mg の Poly A

⁺

mRNA から Superscript cDNA

合成キット

(Invitrogen Corp., Carlsbad, Calif, USA)

を用いて

cDNA

を合成、オートクレーブ滅菌した蒸留水を用いて

DNA

量を

100 ng/ml

に調整した。この

cDNA

サンプル

2.0 µl

、

25.0 µl

の

SYBR-Green Mastermix (Applied Biosystems, Forster City, CA, USA )

さらに

0.3 µl

のプライマーを混合、

GeneAmp 5700 Sequence Detection System (Applied Biosystems)

を用いて既報の条件に準じて特異的

mRNA

を合成した ¹⁷⁾。合成された

mRNA

量をβ-actin のそれと比較し、結果として示した。尚、本実験で使用したプライマーの塩基配列は表

1

に示したとおりである ¹⁷⁾。

6

統計学的検討

得られた値の統計学的有意差検定を

ANOVA

と

Bonferroni

試験によって行い、危険率

0.05%

以下をもって統計学的に有意と判定した。

(7)

結果

1

膝

OA

由来関節滑膜細胞の

OPN

依存性

NO

産生に及ぼす

GH

の効果

膝

OA

由来関節滑膜細胞

5 x 10

⁵個を

0.5 mg/ml

から

2.0 mg/ml

の

GH

存在下、

OPN

で刺激し、滑膜細胞からの

MMP-1, -2, -13

産生に及ぼす

GH

の効果を検討した。図

1

に示したように関節滑膜細胞を

OPN

で刺激したところ、非刺激の場合と比較し、当該細胞からの

MMP-1

産生が有意に増加した。この

OPN

刺激による

MMP-1

産生の増加は細胞培養系への

0.5 mg/ml

の

GH

添加では全く抑制されなかったものの、

1.0mg/ml

以上の

GH

添加により統計学的に有意に抑制された。また、図

1

に示したように関節滑膜細胞を

OPN

で刺激すると、

MMP-2

ならびに

MMP-13

の産生も統計学的に有意に増加し、この

OPN

依存性

MMP

産生増強は細胞培養系に

1.0 mg/ml

以上の

GH

添加により、有意に抑制された。次に、

MMP

の内因性抑制因子である

TIMP

産生に及ぼす

OPN

刺激ならびに

GH

の効果を検討した。

上記と同様の方法で培養した滑膜細胞培養上清中の

TIMP-1

、

-2

の含有量を測定したところ、

図

2

に示したように

OPN

刺激培養上清中からは対照と比較し、高濃度の

TIMP-1

、

-2

が検出され、細胞培養系に

1.5 mg/ml

以上の

GH

を添加すると培養上清中の

TIMP

含有量が

OPN

のみの場合と比較し、統計学的に有意に減少した。

2

膝

OA

由来関節滑膜細胞に対する

GH

の

OPN

依存性

MMP

産生抑制機序の検討

膝

OA

関節由来滑膜細胞からの

OPN

依存性

MMP

産生に及ぼす

GH

の抑制機序を

MMP mRNA

発現と転写因子の活性化を指標に検討した。まず、滑膜細胞からの

OPN

依存性

MMP

産生における転写因子、

NF-κB

と

AP-1

の関与をこれら因子の活性化抑制剤を細胞培養系に添加することによって検討したところ、図

3

に示したように、

NF- κ B

活性化抑制剤である

BAY

の

5.0 µM

以上の細胞培養系への添加により

OPN

依存性

MMP

産生が統計学的に有意に抑制された。しかしながら、細胞培養系に

AP-1

の阻害剤である

SP

を添加しても滑膜細胞からの

OPN

依存性

MMP

産生は全く抑制されなかった（図

4

）。

TIMP

産生に及ぼす転写因子活性化阻害剤の効果を検討したところ、

TIMP

の場合も

MMP

と同様に細胞培養系に

MF-κB

阻害剤である

BAY

を加えたところ、

TIMP-1

ならびに

TIMP-2

の産生が抑制されたものの、

SP

添加では何ら抑制作用は認められなかった

(

図

5)

。次に、滑膜細胞を

0.5 mg/ml

、

1.0 mg/ml

、

1.5 mg/ml

さらに

2.0 mg/ml

の

GH

存在下、

OPN

で

4

時間刺激し、

当該細胞における

NF- κ B

の活性化を調べた。図

6

に示したように滑膜細胞を

OPN

で刺激したところ、

NF-κB

の著明な活性化が観察され、この滑膜細胞における

OPN

依存性

NF-κB

の活性化は細胞培養系への

1.0 mg/ml

以上の

GH

添加により統計学的に有意に抑制された。

滑膜細胞を

0.5 mg/ml

、

1.0 mg/ml

、

1.5 mg/ml

さらに

2.0 mg/ml

の

GH

存在下、

OPN

で

12

時間刺激し、当該細胞における

MMP

ならびにβ-actin mRNA 発現を調べたところ、図

7

に示したように、細胞培養系への

1.0 mg/ml

以上の

GH

添加により、

OPN

刺激によって誘導される

MMP mRNA

発現が統計学的に有意に抑制された。また、図

8

に示したように

(8)

8

細胞培養系への

1.5 mg/ml

以上の

GH

添加により

TIMP mRNA

の発現も対照と比較し、統計学的に有意に抑制された。

(9)

考察

我が国における膝

OA

患者数は、

2008

年で潜在的な者を含めると

2000

万人以上 ¹^）とされ、これらの中から毎年約

90

万人が発症する ¹⁸^）と考えられている整形外科領域では非常に重要な疾患の一つである。本疾患は加齢や筋肉の衰え、肥満などが基盤となっている膝関節の変性疾患で、根本的治な治療法がないばかりでなく高齢者の日常生活に多くの障害をもたらし、介護保険における要介護の対象として上位を占めている疾患でもある ²^）。また、

本症末期の患者では人工関節全置換術が行われ、その実施数も著増している ²^）ことから、

医療経済的観点からも本症の発症や増悪化予防法の確立は、非常に重要な課題 ²^）とされ、

骨・関節の痛みに起因した身体活動の低下防止が叫ばれて ¹⁹^）いる疾患である。

膝

OA

の臨床症状は徐々に進行する関節の痛み、変形、機能障害で、疼痛の訴えが最も多い ¹⁰⁾。臨床症状、特に疼痛の弱い患者は、市販の湿布薬を用いた患者自身による自宅での処置や栄養機能食品、所謂サプリメントの摂取により症状の緩和を図っているとされている ⁹⁾。このような観点から、健康食品の膝

OA

の発症や進展予防さらには疼痛緩和作用等に関し、科学的な作用機序等の解明が重要であるとされている ²^）。そこで今回、膝

OA

に効果があるとされている

GH

を対象に、本症の病原因子として重要と考えられている

MMP

産生に及ぼす効果を関節滑膜細胞を対象に細胞培養実験によって検討した。

まず、関節滑膜細胞を骨代謝や膝

OA

の発症に重要な役割を果たしているとされている

OPN

で刺激、

MMP

産生に及ぼす

OPN

の効果を検討するとともに

OPN

依存性

MMP

産生に及ぼす

GH

の効果を検討したところ、

OPN

刺激により有意に増加した滑膜細胞からの

MMP-1、MMP-2、MMP-13

の産生が細胞培養系への

1.0 mg/ml

以上の

GH 添加により統

計学的に有意に減少することが判明した。線維芽細胞、上皮細胞、多核白血球等の生体構成細胞を刺激すると本実験で示したように当該細胞からは各種

MMP

が産生されるとともに、

MMP

の内因性抑制因子である

TIMP

も同時に産生される ²⁰⁾。そこで次に、滑膜細胞からの

TIMP

産生に及ぼす

OPN

刺激と

GH

の効果を検討した。その結果、細胞培養系に

1.5 mg/ml

以上の

GH

を添加すると、

OPN

依存性

TIMP

産生が対照と比較し、統計学的に有意に抑制されることが判明した。

14

C

で標識した

GH

を犬に経口投与すると未変化体のまま投与量の

98%

以上が吸収され、

その後速やかに血中に移行し、軟骨に取り込まれることが報告されている ²¹⁾。また、¹⁴

C

で標識した

GH

投与犬の大腿骨から軟骨組織を採取し、放射活性を測定すると、投与後

2

時間で投与量の約

9%

の放射活性が、投与

144

時間後でも約

1%

の放射活性が検出されることも示されている ²¹⁾。ヒトにグルコサミンを経口投与し、消化管からの吸収率や体内動態を検討すると吸収率が約

90%

と犬の吸収率より低いものの、その後の体内動態は犬のそれとほぼ同様であることが示されている ²²⁾。膝

OA

に対する

GH

の有効性を検討した報告では

1

日当たり

1500mg

の

GH

を経口摂取すると、

GH

投与群では膝関節間隙の拡大が認められるとともに臨床症状、中でもとりわけ疼痛の改善率がプラセボ群と比較し、有意に高かっ

(10)

10

たことが報告されている ⁹⁾。また、乾燥肌のヒトが

1

日当たり約

1500mg

の

GH

を経口摂取すると皮膚水分量の正常への回復や皮膚水分量の一定化、皮膚乾燥感の消退が認められることも報告されている ²¹⁾。

膝

OA

の発症では、関節組織構成細胞から産生された

MMP-1

や

MMP-13

が関節基質の重要な成分である

I

型ならびに

II

型コラーゲンを

3:1

の特異的部位で分解・断片化する ¹⁷⁾。その後、分断化されたコラーゲンは

MMP-2

や

MMP-9

の作用により修復に長時間を要する小さな分子に分解される ¹⁷⁾。このようなコラーゲンの分解や断片化が膝

OA

の進行につれて軟骨深層にまで広がり、不可逆的な軟骨の変性・消失が起き、骨の露出につながることが推察されている ¹⁰⁾。

MMP

は上述した細胞外マトリックス分解作用以外に血管に作用し、

透過性を亢進することや血球の遊走作用を促進することが報告されている ²³⁾。また、膝

OA

患者関節軟骨、特に軟骨変性部を組織学的に観察すると軟骨細胞の著明なアポトーシスが認められることが報告される ¹⁰⁾とともに、アポトーシスに陥った軟骨細胞で形成されるアポトーシス小体にはピロリン酸が沈着し、その結果、軟骨組織の石灰化や変性が助長される可能性も示唆されている ²⁴⁾。今回検討した

TIMP

は

MMP

産生と同時に同じ細胞から産生される物質で、

MMP

の活性化を阻害するのみならず、線維芽細胞等の増殖反応増強作用や各種細胞のアポトーシスを促進することも報告されている ²⁵⁾。したがって、本研究の結果とこれら報告を併せ考察すると、経口摂取により関節部に移行した

GH

が関節滑膜細胞からの

MMP

産生を抑制、関節軟骨基質の分解を阻止するとともに、血管の透過性や多核白血球の関節間隙への遊走を調節、関節液の貯留、腫脹、さらには罹患膝で認められる局所の炎症反応発現を抑制、膝

OA

の病態の改善や進行抑制に寄与している可能性が推察される。また、

TIMP

によって誘導される関節軟骨細胞や滑膜細胞のアポトーシスも

GH

経口摂取により抑制され、このことが関節組織の変性や破壊を調節していることも推察される。

OPN

は骨組織から単離された分泌型酸性リン酸化蛋白質で、細胞膜上のインテグリン受容体と結合し、

MMP

をはじめとしたタンパク産生に必須のシグナルを細胞内に伝達、その結果、

NF- κ B

や

AP-1

等の転写因子の活性化、さらには特異的

mRNA

合成が誘導され、各種蛋白質の産生が増強する ²⁶^）。そこで次に、

GH

の

MMP

ならびに

TIMP

産生抑制機序を解析するために、滑膜細胞を各種濃度の

GH

存在下、

OPN

で刺激し、転写因子の活性化ならびに

MMP

と

TIMP mRNA 発現に及ぼす効果を調べた。まず、滑膜細胞からの MMP と

TIMP

産生に必要な転写因子の種類を転写因子活性化阻害剤を細胞培養系に添加すること

によって検討したところ、

NF-κB

阻害作用を有する

BAY

の添加により

OPN

依存性

MMP

ならびに

TIMP

産生が濃度依存的に抑制されたものの、転写因子

AP-1

阻害剤

SP

の添加では全く

OPN

依存性のこれら因子の産生は抑制されなかった。このことは

OPN

刺激による滑膜細胞の

MMP

産生増加は

NF-κB

依存性の反応であることが明示されるとともに、

GH

が

OPN

刺激によって誘導される

NF-κB

の活性化を阻止することによって

MMP

ならびに

TIMP mRNA

の発現を抑制、被験細胞のこれら因子産生能を調節している可能性があるこ

(11)

とを示唆している。この推察は、

1.0 mg/ml

以上の

GH

存在下、

OPN

で刺激した滑膜細胞では

NF- κ B

の活性化ならびに

MMP

と

TIMP mRNA

発現が

GH

非存在下で刺激培養した細胞のそれと比較し、有意に低いことを示した本実験の結果から支持されるであろう。

(12)

12

結論

膝

OA

の発症・進展に重要な役割を果たしていると考えられている

OPN

で膝

OA

由来関節滑膜細胞を刺激し、

MMP

ならびに

TIMP

産生に及ぼす

GH

の効果を検討したところ、

1.0 mg/ml

以上の

GH

が

OPN

依存性

MMP

と

TIMP

産生を有意に抑制すること、さらにこの産生抑制作用は

GH

の転写因子

NF- κ B

活性化と

MMP

と

TIMP mRNA

発現抑制作用によっていることが判明した。したがって、ここに示した結果は

GH

が滑膜細胞からの

MMP

ならびに

TIMP

の産生を抑制することによって膝

OA

の発症や進展を調節している可能性があることを示唆している。

(13)

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2014

；印刷中

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；

7

：

154

−

157

．

(15)

図の説明

図

1

変形性膝関節症患者由来関節滑膜細胞のオステオポンチン

(OPN)

依存性細胞外マトリックス分解酵素（

MMP

）産生に及ぼすグルコサミンの効果

GH=

グルコサミン；＊

OPN

のみと比較し統計学的に有意差あり

図 2 変形性膝関節症患者由来関節滑膜細胞のオステオポンチン(OPN)依存性組織メタロプロテアーゼ阻害因子

(TIMP)

産生に及ぼすグルコサミンの効果

GH=

グルコサミン；＊

OPN

図

3 (OPN)

依存性細胞外マトリックス分解酵素

(MMP)

産生に及ぼす転写因子、

NF-κB

活性化抑制剤の効果

BAY = BAY11-7085

；＊

OPN

図

4 (OPN)

(MMP)

産生に及ぼす転写因子、

AP-1

活性化抑制剤の効果

SP = SP600125

；＊

OPN

のみと比較し統計学的に有意差なし

図

5 (OPN)

依存性組織メタロプロテアーゼ阻害因子

(TIMP)

産生に及ぼす転写因子活性化抑制剤の効果

BAY = BAY11-7085

；

SP = SP600125

；＊

OPN

のみと比較し統計学的に有意差あり、＊＊

OPN

のみと比較し統計学的に有意差なし

図

6 (OPN)

依存性

NF-κB

活性に及ぼすグルコサミン

(GH)

の効果

＊

OPN

図

7 (OPN)

(MMP) mRNA

発現に及ぼすグルコサミン

(GH)

の効果

図 8 変形性膝関節症患者由来関節滑膜細胞のオステオポンチン(OPN)依存性組織メタロプロテアーゼ阻害因子

(TIMP)

産生に及ぼすグルコサミン

(GH)

の効果