海洋性中心目珪藻 Thalassiosira pseudonana にお ける炭酸脱水酵素の局在及び機能解析
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(2) 2013 年度修士論文要旨. 海洋性中心目珪藻 Thalassiosira pseudonana における炭酸脱水酵素 の局在及び機能解析 関西学院大学大学院理工学研究科 生命科学専攻 松田研究室 寒川美央 海洋性珪藻は地球全体の炭素固定量の約 20％を担っており、重要な一次生産者である。 また、現在の大気圧環境下における溶存 CO2 濃度は珪藻にとって不十分であるが、海水中 の溶存無機炭素を細胞内に濃縮し CO2 に変換して ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/ oxygenase (RubisCO) へ供給する CO2 濃縮機構 (CO2-concentrating mechanism:CCM) により 珪藻は効率よく炭素固定を行う。CCM において HCO3-と CO2 の変換反応を両方向に触媒す る炭酸脱水酵素 (carbonic anhydrase: CA) は、細胞内外の無機炭素流路を調節する重要な因 子である。海洋性羽状目珪藻 Phaeodactylum tricornutum は β 型 CA である PtCA1, 2 が大気 圧環境下において高発現し、葉緑体内のピレノイドと呼ばれる RubisCO 蓄積顆粒体で CO2 供給を行っていると考えられている。また、珪藻の葉緑体は高等植物とは異なる 4 重包膜 であり、CA 候補の多くがここに局在していることから、無機炭素の膜透過を制御している と考えられている。一方、海洋性中心目珪藻 Thalassiosira pseudonana では 3 つの α 型 CA、 5 つの γ 型 CA、4 つの δ 型 CA、1 つの ζ 型 CA の計 13 の CA 候補遺伝子が見つかっている が、局在や機能については未解明である。本研究では、T. pseudonana における CA 候補の 細胞内局在及び機能を解析し、海洋性珪藻の炭素獲得機構を解明することを目的とした。 CA 候補の全長アミノ酸配列と EGFP を連結したタンパク質の局在を解析した。その結果、 細胞膜、細胞質、ミトコンドリア、葉緑体の periplastidal compartment (PPC)に局在した。ま た、CO2 濃度の変化による転写量を比較したところ、TpαCA1-3, TpγCA1, TpδCA4 は定常的 に発現したが、その他の CA は低 CO2 環境下で転写量が増加した。ミトコンドリアに局在 する TpγCA4 と細胞膜に局在する TpδCA1 については大腸菌で発現させたタンパク質を精 製し、CA 活性測定を行った結果、CA 活性を持つことがわかった。また、HCO3-輸送体候 補を探索し、TpSLC4-3 が葉緑体辺縁部に局在した。 羽状目珪藻 P. tricornutum の CA 候補の多くが 4 重包膜系に集中して局在するのに対して 中心目珪藻 T. pseudonana においては細胞内の様々な領域に局在した。T. pseudonana は細胞 外 CA を用いて HCO3-を CO2 に変換し、CO2 を取り込み、細胞質 CA によって HCO3-に変換 し HCO3-輸送体によって葉緑体内へ取り込まれる。取り込まれた HCO3-はストロマの CA が CO2 に変換し、RubisCO へ供給するというモデルが考えられる。また、P. tricornutum は 細胞外 CA はなく、細胞膜に局在する HCO3-輸送体に依存しているのに対して、T. pseudonana は細胞外 CA があり CO2 を獲得する能力や順応性を持っていると考えられる。 以上のことから海洋性珪藻の 2 種のモデル生物において両者は大きく異なる炭素獲得機構 を有すると考えられる。.
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