─ ─295 （ ）1 Licaria puchury-major（Mart.）Kosterm. の種子は，ク スノキ科 （Lauraceae）に属する高木であり，アマゾン森 林地域に自生するブラジルの特産品である。その種子は 茶褐色でニクズクやサッサフラス様の強い芳香を持つ （Figure 1）。現地ではPhcurim（プクリ）と呼ばれ広く 市販されている。煎剤として興奮，強壮の作用があり， また，リウマチ，赤痢，下痢，腸内寄生虫等に用いられ る。1） これまでにL. puchury-major に含まれる化学成分と生 物活性の報告は，safrole, eugenolなどのモノテルペンの 抗菌活性や，2）phenylpropanoid, neolignan 類に対するア ポトーシス誘導3）に関する報告があるがアルカロイド成 分については本研究が初めての報告となる。 1．緒 言 ブラジル産薬用植物は，ブラジルに自生したものある いはブラジルに帰化し，民間療法として実際に現地にて 使用されているものをいう。ブラジル産の薬用植物種の 数は5000 種を超えるといわれ，薬用資源の宝庫であり， その植物種の数と多様性は世界中の地域と比較しても圧 倒するものがある。しかしながら，その多くの化学的検 討はなされておらず，有用な化合物は，未だ自然の中に 眠ったままであると考えられる。 大崎らは南米産の薬用植物に含有される二次代謝産物 の化学構造の骨格の多様性と新規性さらに，それらが持 つ生物活性に興味を持ち，生物活性成分の探索研究を継 続している。
大崎愛弓
＊・宝谷尚徳
＊＊・小沢正晃
＊＊・岸田晶夫
＊＊・
小宮山寛機
＊＊＊・久保伊佐夫
＊＊＊＊We studied the bioactivity of constituents extracted from the Brazilian medicinal plant, the seeds of Licaria puchury-major. Ten known alkaloid compounds were obtained from this plant and identified as reticuline (1), orientaline (2),
coclaurine (3), N-methylcoclaurine (4), norjuziphine (5),norisoboldine (6), isoboldine (7),glaziovine (8),and reticuline N-oxide [9; NMe (S), 10; NMe (R)]. The cytotoxicity of the obtained compounds was evaluated against vincristine-sensitive
and -resistant P388 cells in the presence (P388/VCR(+)) or absence (P388/VCR(-)) of low levels of vincristine. Norjuziphine (5), norisoboldine (6), and isoboldine (7) exhibited potent cytotoxic activity in the presence of vincristine P388/VCR(+). Keywords : Licaria puchury-major, benzylisoquinoline alkaloids, vincristine resistant P388 cells
南米産薬用植物
Licaria puchury - major 種子のアルカロイド成分と
薬剤耐性がん細胞に対する殺細胞活性
Cytotoxicity of the Alkaloid Constituents from the Seeds of Licaria puchury-major,
Brazilian Medicinal Plant, in Vincristine-Resistant P388 Cells
Ayumi OHSAKI
＊, Takanori HOYA
＊＊, Masaaki OZAWA
＊＊, Akio KISHIDA
＊＊,
Kanki KOMIYAMA
＊＊＊and Isao KUBO
＊＊＊＊（Accepted November 17, 2014）
＊ Department of Chemistry, College of Humanities and Sciences, Nihon
University, 3-25-40 Sakurajousui, Setagaya-ku, Tokyo 156-8550
＊＊ Institute of Biomaterials and Bioengineering, Tokyo Medical and
Dental University, Chiyoda-ku, Tokyo 101-0062
＊＊＊ Kitasato Research Center for Environmental Science, Sagamihara
252-0329
＊＊＊＊ Departments of Environmental Science, Policy and Management,
University of Calfornia, Berkely, CA 94720
＊ 日本大学文理学部化学科: 〒156−8550 東京都世田谷区桜上水3−25−40 ＊＊ 東京医科歯科大学生体材料工学研究所： 〒101－0062 東京都千代田区神田駿河台2－3－10 ＊＊＊ 北里環境科学センター： 〒252－0329 神奈川県相模原市南区北里2－25－1
＊＊＊＊ Departments of Environmental Science, Policy and Management, University of Calfornia, Berkely, CA 94720
日本大学文理学部自然科学研究所研究紀要 No.50 （2015） pp.295−298
大崎愛弓・宝谷尚徳・小沢正晃・岸田晶夫・小宮山寛機・久保伊佐夫 ─ ─296 （ ）2 本論文においてはL. puchury-major の種子に含有さ れ る7 種 の benzylisoquinoline 型 （1-5，9-10） や 2 種 の aporphine型 （6-7）および 1 種の proaporphine 型 （8）の アルカロイド成分の単離および化学構造の同定と抗がん 剤として臨床現場において広く使用されているvincristine （オンコビン ，VCR）に対する薬剤耐性マウス白血病細 胞（P388/VCR）を用いた殺細胞活性試験の結果につい ての報告を行う。 2．結 果 2-1 成分の単離と同定 Licaria puchury-major の種子を粉砕後，メタノールに 冷浸し，得られたメタノールを濃縮した。得られたメタ ノール可溶抽出物に対し，アルカロイド抽出操作を行う ことにより，アルカロイド含有画分（クロロホルム画分， 酢酸エチル画分，ブタノール画分）を得た。この操作で 得られた各々のアルカロイド可溶画分をアミノシリカゲ ルクロマトグラフィー，シリカゲルクロマトグラフィー， および逆相HPLC を用いてアルカロイド成分の単離を 行った。単離された10 種のアルカロイド成分は，各々 1HNMRおよび13CNMR，DEPTおよび 2 次元NMR（1H-1H COSY，HMQC，HMBC，NOESY）および高分解能マス スペクトル（HR-EI，HR-FAB）を測定することによって構 造を推定した。その結果，得られた化合物は既知化合物 で あ るreticuline （1）4），orientaline （2）5），coclaurine （3）6）， N -methylcoclaurine （4 ）7 ），norjuziphine （5 ）8 ），
norisoboldine （6）9），isoboldine （7）10），glaziovine （8）11），
reticuline N-oxide［9： NMe（S），10：NMe（R）］12）であ
ることが文献記載のスペクトルデータと比較検討するこ とにより同定を行った。(Figure 2） 2-2 生物活性試験13） L. puchury-major の MeOH 可溶抽出物より得られた 10 種のアルカロイド成分 （1-10）の薬剤耐性細胞に対する 殺細胞試験をおこなった。細胞株としてマウス白血病 細 胞 薬 剤 感 受 性 株（P388/S）， マ ウ ス 白 血 病 細 胞 vincristine 耐 性 株（P388/VCR）の vincristine 非 存 在 P388/VCR（-），vincristineの極微量（12 ng）存在P388/ VCR（+）に対して各々殺細胞活性試験を行った。その結 果をTable 1に示した。P388/Sに対しては，全ての化合 物に対して10.0 μg/mL において活性は認められなかっ た。薬剤耐性株に対して活性試験を行ったところ，P388/ VCR（-）に対して glaziovine （8）が比較的強いIC50 値 5.40 μg/mL の活性が認められた。一方，P388/VCR（+）にお
いては，coclaurine （3）およびreticuline N（R）-oxide （10）
については10.0 μg/mL において殺細胞活性は認められ
なかった。しかしながら，reticuline （1），orientaline （2）， N-methylcoclaurine （4），glaziovine （8），reticuline N(S） -oxide （9）について 各々 IC50値 5.39，8.10，9.13，3.16，
6.36 μg/mL の 比 較 的 強 い 活 性 が 認 め ら れ た が， norjuziphine （5），norisoboldine （6），isoboldine （7）につ いては各々IC50 値1.55，0.36，1.69 μg/mLと強い活性が
認められた。本結果は，得られたbenzylisoquinoline 類
Figure 1 Seeds of L. puchury-major
大崎愛弓・宝谷尚徳・小沢正晃・岸田晶夫・小宮山寛機・久保伊佐夫 ─ ─298 （ ）4 104 cells/well）播種した。37 ℃，5 ％ CO 2存在下で24時 間培養した後，各種濃度に調整した10 μL の試験溶液を それぞれのwell に添加し，さらに 48 時間培養した。Cell Counting Kit-8（CCK-8，同仁堂）10 μL は，培養終了 4 時間前にwellに添加した。マイクロプレートリーダーを 用いて450 nmの励起波長と590 nmの発光波長を測定し， 殺細胞活性についてIC50値として表記した。 4）生物活性試験 P388 細胞に対する殺細胞活性試験 P388/S，P388/VCR（-）および P388/VCR（-）株細胞 は，10 % FBS，100 U/mLのペニシリン，100 μg/mLの ストレプトマイシン，25 mMの 2 −メルカプトエタノー ルが添加されたRPMI-1640培地で継代培養を行ったもの を用いた。各種細胞株は96 well プレートに 90 μL（5× 1) 橋本梧郎，ブラジル産薬用植物事典，p 598，アボック社， Japan (1996).
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