オキシ塩化燐による職業性アレルギー性皮膚障害に関する実験的研究
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(2) 4412. 佐. 藤. は蛋 白質 の燐 酸化 に伴 う その 物 理化 学 的 性 状 並 び に 基 質 蛋 白 抗 体 に 対 す る反 応 性 の 変 化 の 研 究 を 行 い, 結 晶 卵 白 ア ル ブ ミ ン(以 し た 場 合,そ Ea抗. 下Eaと. 略 記 す)を. 燐酸化. の 理化 学 的 性 状 が 如何 に変 化 す るか又. 体 に 対 す る 反 応 性 が 如 何 に 変 化 す る か をEa. を 対 象 と し て 検 討 し た の で,こ. 和. 人. 3) 燐 定 量法 燐 蛋 白液 の燐 定 量 法 はFiske‑Subbaraw法10)に. 硫 酸 灰 化法 に よ り燐 蛋 白 を灰 化 し総 燐 を 定 量 した. 即 ち燐 モ リブデ ン酸 を 亜硫 酸 塩 の 存 在 で1,. 実 験 材 料 並 び に実 験 方 法. 第1節 第1項. 実験材料. PEaの. 第1編 Slyke7)の. 出 した. 4) 煮 沸 試験. Cannan6)の. 脱 水 芒 硝 に て3回 2). 準 液 の 吸 光 度 を 基 準 と して 計 算 に よ りそ の燐 量 を 算. 調製. Kekwick,. 方 法 に 従 い,鶏. 卵 白よ り. 再 結 晶 後 透 折 し, Eaを. 調 製 し た.. 調製. 方 法 に 準 じ て 行 い, Eaを 記 す)を. Van. オ キ シ塩 化 燐. 用 い て 燐 酸 化 し, PEaを. 調. 製 し た. 実 験動 物 成 熟 強健 家 兎 を. 作 動 物 と し て 体 重350〜450grの. 間の健康. 活 溌 な る 海 〓 の 腹 部 白 色 の も の を 選 ん だ. 第3項 Ea. 兎 血清 の作 製. 1.0ccを. 家 兎 の 耳 静 脈 内 に3〜4日. 3.6よ. 酸 及 び1/5N.酢. りpH. 5.8迄 の 液 を. 作 り,こ れ に 蛋 白液 を 加 え て沈 澱状 態 を観 察 し,沈 澱 した 蛋 白量 をFolin法. に よ り 定 量 し,添 加 蛋 白. 血 し,血. 用 し た.. 清 を 分 離,使. 第2節 第1項. の. 目に 全採. 衡 に 達 した 後,液 を上 側 の 印線 の上 部 迄 吸上 げ る. 次 い で 液 を 自然 に 流 れ させ,メ ニ ス カ スが 上 の 印線. くと も4回 の 測 定 を 行 い,そ の. 時 間 が0.4秒 以 内 で一 致 す る様 にす る.こ の 程度 の. 蛋 白 定 量 法 はFolin‑Ciocalteau8)の. フ ェ ノー ル試. る様 な長 さで な け れ ば な ら な い.次 に水 を 取 り去 り, 水 と同 一 量 の 蛋 白 液 に就 いて 同 様 の 操 作 を 繰 返 した.. の. に 於 ける吸光度を島津製作所製. 光 電 分 光 光 度 計(QB‑50)を. 用いて測. ロ ジ ン標 準 液 の 吸 光 度 を 基 準 と し て 計 算 に. ア ミ ノ基 定 量 法. ち 蛋 白 質 の ア ル カ リ溶 液 に. 同 量 の 発 色 試 薬 液(ニ ン ヒ ド リ ン及 びHydrindantin. 間 沸 騰 浴 中 で 加 熱 す る.次. 燥 しな けれ ば な らな い.こ の 測定 値 よ り相 対 流 動 度 (相 対 粘 度 の 逆 数)を 算 出 した. 7) 濾 紙 電 気 泳動 法 水 平 法 を 改 良 した 小 林式 濾紙 電 気 泳. 動 装 置11)12)を 使 用 し,濾 紙 は東 洋 濾 紙No.. 蛋 白 質 の ア ミ ノ 基 定 量 法 は ニ ン ヒ ド リ ンに よ る比. 加 え,約10秒. 勿 論 一 つ の 測 定 と次 の 測定 の 間 で粘 度 計 を清 洗,乾. Grassmanの. よ り そ の 蛋 白 量 を 算 出 し た.. 色 定 量 法9)を 用 い た.即. 内 の 精 度 に止 ま. ち蛋 白質 の ア ル カ. リ性 溶 液 を フ ェ ノ ー ル 試 薬 に よ り発 色 せ し め,そ. は げ し く振 盪 し た 後15分 い で50:50の. ル 混 合 液 で 適 当 に 稀 釈 して30℃ 秒 振 盪 し,そ. の恒 温 槽 中 に垂 直 に支 持 し,こ. 変 動 が あ つ て も,流 出時 間 は1%以. 薬 に よ る チ ロ ジ ン法 を 用 い た.即. よ り な る)を. 毛 細 管粘 度 計 を用 いて 測 定 した.即 ち. ッチ で 測定 す る.少. 実験方法. 1) 蛋 白 定 量 法. Beckmann型. Ostwaldの. か ら下 の 印 線迄 くる の に要 す る時 間 を ス ト ジプ ウオ. 理化学的検査法. 青 色 の 波 長530mμ. 6) 粘 度 測定. の 中 へ 水 を ピペ ッ トで正 確 に一 定 量 入 れ る.温 度平. 後 の 注 射 日 よ り7日. 2). 酸 ソー ダ)を 用 い てpH. 粘 度 計 を ±0.05℃. 抗Ea家. 間 隔 で15回 注 射 し,最. 定 し,チ. 酷 酸緩 衝液(1/5N.酢. の 状 況 を 検 査 した.. 免 疫 動 物 と し て 体 重 約3,000grの. 1.0%. 5) 等電 点 沈 澱 測定. 量 に対 す る沈 澱 蛋 白 量 の百 分 率 を求 めて 等 電 点 沈 澱. 第2項. 用 い,感. 蛋 白液 を 煮 沸 し,そ の 凝 固性 を検 査 した.. Walp0leの. に 於 い て 述 べ た と 同 様 にPeters,. (以 下POCl3と. に 於 け る吸 光 度 を 光 電 分 光 光 度 計. を 用 い て測 定 し,酸 性 燐 酸 カ リに て 調 製 した燐 酸 基. 抗原の調製. 1) Eaの. 2, 4‑ア. ミノナ フ トー ル スル フ ォ ン酸 に て還 元 して 発 す る青. こ に 報 告 す る.. 色 の 波長750mμ 第2章. よ. る比 色定 量法 を用 い,先 づ無 機 燐 を 測定 し,次 い で. の 発 色 の 波 長570mμ. 水 エ タ ノー. 以 下 に 冷 却 し 約30 に 於 け る吸光 度. を 光 電 分 光 光 度 計 を 用 い て 測 定 し た.. い,緩. 51を 用. 画液 は ベ ロナ ー ル ソー グ,酢 酸 ソ ー ダ,酷 酸. 緩 衝液, pH 8.5,イ 0.3mA/cmの. オ ン強 度0.045の. ものを 使 用 し,. 電 流 で 泳 動 した.. 泳 動 後の 濾 紙 を乾 燥 してDurrumに phenol‑Blue染. 色 液 に て 染 色 後, 2%醋. よ るBrom‑ 酸 に て蛋 白. と結 合 しな い 色 素 を 除 去 した 後 流動 パ ラ フ ィ ン法 に よ り半 透 明 と し,デ. ンシ トメー ター(夏. 目製 作所 製. 光電 光 度 計 Ⅱ 型)に て 直 接 法 に よ り吸 光 度 を 測定 し,.
(3) オ キ シ塩 化 燐 に よ る職 業 性 ア レル ギ ー性 皮 膚障 害 に関 す る実 験 的研 究 そ の値 を グ ラフ用紙 に 描 い た. 第2項. そ の 吸 光 度 は0.982及. 沈降反応. られ な か つ た.こ. 第1編 に述 べ た と同様 に,輪 環 法 と してUhlen. 4413. び0.980で. 殆 ん ど差 が 認 め. れ は 燐 酸 化 に 伴 うPEaの. 基 の 変 化 が 軽 度 で あ る 事 を 示 す 他,加. ア ミノ. 熱 に よ りア ミ. huth法13)及 び緒方 氏 抗 原 抗 体 稀釈法14)を 用 い,寒. ノ基 に導入 され た燐 酸 基 が 離 れ た 為 に差 が 見 られ な. 天 層 内沈 降 反 応 はOudin法15)に. か つ た と考 え ら れ る.. 第3項. 能 働 性Arthur反. 準 じて行 つ た.. 第3項. 応. 第1編 に 述 べ た と 同様 に, 1.0%. Ea 0.5cc又. は. 1.0%. 燐 の含 有 に就 い て. Ea及. びPEa各0.5ccの. トリク ロ ール 酷. 1.0ccを 海 〓胸 骨 部 皮 下 に1回 注 射 して 感 作 し, 2. 酸 除 蛋 白 濾 液 中 の 無 機 燐 を 測 定,比. 〜3週 間 の 潜伏 期 の後 に,海 〓腹 部 皮 内 に同 濃 度 の. も プ ラ ン クとの 差 を 認 め 難 く無 機 燐 は認 め られ な か. Ea及. つ た.次. びPEa各. 々0.2ccを. 再 注 射 し, 24時 間 後の. に1.0%. Ea及. 較 し た が,何. びPEa各0.05ccを. 皮 膚症 状 殊 に 発赤 の 大 き さを 計 測 して 比 較 した,反. 灰 化 法 に よ り灰 化 し 総 燐 を 測 定,比. 応 表 示 方法 は 発赤 の 大 き さを そ の長 径 及 び短 径 の長. Eaに. さmmを. に 発 色 し,有. 以 つ て 表 わ し,肉 眼 上 変 化 の 認 め られ な. て は 燐 は 認 め 難 く, PEaに. い 場 合を 陰 性 一 と し た.. 第1節. 実. 第4項. 験. 成. 績. POCl3添. EaをPOCl3を 的 性状 のEaと. 理化 学. の 差 異 は 〔表1〕 に 示す 如 くで あ る.. 表1. 理化学的性状の比較. 5分 の1及. を 添 加 し て 各 種 のPEaを 加 量 とPEa中. 即 ち各PEa液 Folin法 め た.. 調 製 し, Eaに. 蛋 白1.0g中. 燐 を 含 有 し, 5分 の1の. 合 に は25.90mgの 軸 にPOCl3添. びPEa各0.1ccを. の 吸 光 度 は 何 れ も0.340で 燐 酸 化 に 伴 うPEaの. 差 が な か つ た.こ. れ は. 蛋 白変 性が軽 度 で あ る事 を 示. す の か も 知 れ な い. 第2項 1.0%. Ea及. 用 い て, 0.2mg/cc. の 蛋 白 の ニ ン ヒ ド リ ン試 薬 に よ る 発 色 度 を 比 校 し,. 加 量 の増 加 と共. 煮 沸 し, Eaは. 酷 酸 緩 漸 液 を 用 い てpH. Ea. じ な か つ た.次 を 加 え,. びPEaを. pH. 作 り ,そ. 0.1ccを. 加 え ,す. に 同 一pH,同. をFolin法. 3 .6よ. りpH. の 各 々 の 中 へpH べて に沈 澱を 生. 一 濃 度 のPEa. 0 .1cc. 4.4に 最 大 沈 澱 量 を 示 し, pH 3.6〜5. に 明 ら か に 沈 澱 を 認 め た .こ. 加 蛋 白量 に対 す る沈 就 い て求 めて 示 した. も の が 〔図2〕. で あ る.即 ちPEaはEaに. pH 4.2〜4.6の. 等 電 点 附近 での 沈 澱 が 容 易 で あ る. 第7項. 粘 度 に就 いて. .8. れ を 遠 心 して そ の 沈 渣. に よ り 定 量 し,添. 澱 蛋 白 量 の 百 分 率 を 各PHに. ニ ンヒ ドリンに よ る発 色 状 態 に就 いて びPEa各0.2ccを. 加 量 と燐 含 量 の 関 係 を. 全 く凝 固 性 を 示 さ な か っ た .. の 緩 衝 液2.0ccを. 7.0の1.0%. の 蛋 白 の フ ェ ノ ー ル 試 薬 に よ る 発 色 度 を 比 較 し,そ. は横 1.0g. 等電 点 沈 澱 に就 いて. Walpoleの. 用 い て, 0.1mg/cc. 5倍 の 場. 軸 にPEa. ちPOCl3添. Ea及 PEaは. 第6項. 1.0%Ea及. ,. 燐 を 含 有 して い た.〔 図1〕. pH 7.0の1.0%. 状 態 に就 いて. 場 合には. 煮 沸 に よ る凝 固 性 に就 い て. 凝 固 し た が,. 5.8迄. の1の. 1.0g中. の燐 量 が増 加 して い る.. 第5項. フェ ノー ル 試 薬 に よ る発 色. 10分. 場 合 に は16.16mg. 中 の 燐 量 を 求 め, POCl3添. Folinの. の燐量を求. 加 量 の 比 率 を と り,縦. 示 し た もの で あ る.即. 第1項. 対 す る. 加 量 が 基 準 量 の 場 合 はPEa. に21.85mgの. そ の詳 細 を 次 に 述 べ る.. のPOCl3. 中 の 総燐 の 量 を 測定 し更 に蛋 白量 を. POCl3添. にPEa中. び5倍. の 燐 含量 の 関係 を 検 査 した .. に よ り定 量 し,燐. 10.08mg,. 調 製. に これ と同 一 時 間 内 に 同 一. 操 作 に よ り そ の10分 の1,. POCl3添. ち. の燐 酸 化 蛋 白質 調 製 法 添 加 してPEaを. し た 場 合 を 基 準 と し,更. 用 いて 燐 酸 化 したPEaの. 較 し た.即. て は 明 らか に青 色. 加 量 と燐 含量 に就 いて. 対 し 第1編. に て 述 べ た 割 合 にPOCl3を. 理化 学 的性 状. 硫酸. 機 隣 の 存 在 が 認 め ら れ た.. 一 定 量 のEaに. 第3章. れ. 比 して ..
(4) 4414. 佐 図1. POCl3添. 加 量 と燐 含 量. 藤. 和. 人. pH 6.6の1.5%. Ea及. を 測定 せ る に, Eaの で は0.838で. びPEa. 6.0ccに 就 いて 粘 度. 相対 流動 度0.939に. 対 しPEa. あつ た.即 ち粘 度 の 上 昇 が 見 られ た.. 粘 度 の上 昇 は 同一 溶媒 で は溶 質 分子 の 大 な る事 を 意 味 し, PEaがEaよ. り粘 度が 大 で あ るの はEaに. 燐 酸 基 が 配 結 した為 で あ る. 第8項. 濾 紙 電 気 泳動 成 績 に就 いて. pH 7.0の1.0%. Ea及. びPEaの. 同 一 量 を 濾紙. につ けて電 気 泳動 を 行 つ た.そ の結 果 は 〔図3〕 に 示 す 如 くで,縦 軸 に吸 光 度 を横 軸 に泳 動 距 離 を 示 し て い る.泳 動速 度 に は 大差 は見 られ な いが, PEaは Eaに. 比 しや や 速 い傾 向 を示 す部 分 が 見 られ た.又. PEaはEaに. 比 しよ り単 一 成 分 と して 泳 動 す る傾 向. を示 した. 第2節 第1項. 沈 降 反 応(抗 卵 白ア ル ブ ミン系) 抗Ea家. 兎 血 清 の 沈降 反 応(Uhlenhuth. 法 及 び 抗原 抗 体 稀釈 法) 抗Ea家. 兎 血 清 はEaと. の沈 降 反 応 に於 いて 〔表. 2〕 に示 す 如 く抗 原 価1:10,000,抗 Eaに. 対 す るPOCl3添. 加 量 の 比率. 結 合帯 価1:250で. 体 価1:250,. あつ た.尚 抗 原 対 照 に は生 理 的. 食 塩水 を抗 体 対 照 に は正 常 家 兎 血 清 を 使 用 した. 図2. PEaの. 等電 点 沈 澱. 表2. 抗Ea系(抗. 原:. Ea)抗. 原抗 体 稀 釈法. Uhlenhuth法. 図3. 濾紙 電 気 泳動 成 績. 第2項 抗Ea家. 抗 原 価 に就 いて(Uhlenhuth法) 兎 血 清 に対 しEaに. 導 入 す る燐 酸 基 を増. 加 したPEa抗. 原 を 重 層 す る と, PEa抗. 原 価 はEa抗. 原 に対 す る抗 原価 に比 し燐 含量 の増 加. 原 に対 す る抗. と共 に 減 弱 した.そ の 関 係 は 〔表3〕 に示 す 如 くで あ る.即 ちEaに の に対 し, PEa抗. 対 す る抗 原 価 が1:10,000で. ある. 原 に対 す る抗 原価 は1:5,000乃.
(5) オ キ シ塩 化 燐 に よ る職 業 性 ア レル ギ 「性 皮 膚 障 害 に 関す る実 験 的研 究 表3 PEa抗. 抗Ea系(Uhlenhuth法). 写 真1. 原 の燐 酸 基 増 加 に よる抗 原 価 の変 化. PEa抗. 註:()内 至1:2,500で. 第3項 Oudin法. 燐 含 量 の 増 加 に よ り 減 弱 し た.. 4415. 抗Ea系(Oudin法). 原 の 燐 酸 基 増 加 に よ る 変 化(7日. の 数 値 はEaに. 後). 対 す るP0Cl3添. 加. 量 の 比 率 を 示 す.. 寒 天 層 内 沈 降反 応 に就 い て(Oudin法) に よ り抗Ea家. 兎 血 清 に対 し0 .1%のEa. 及 び これ と同 一濃 度 の各 種PEa(POCl3添 準 量 の もの,そ の10分 の1及. 加量が基. び5倍 の もの の3種 で. 上記 のOudin法. に用 い た 各種PEa抗. 家 兎 血 清 に対 す る抗 原価 をEa抗 したの が 〔 表4〕. 原 の 抗Ea. 原 の 抗 原 価 と比 較. で あ る.即 ちOudin法. に 於 いて. あ るが,燐 含量 の定 量 は 行 つ て い ない)を 重層 し,. 反 応 輪 の数 が1個 に して 且 反 応 輪進 行速 度 の遅 い 傾. 17日 目迄 観察 した.こ の 場 合Eaの. 向 を 示 したPEa抗. 反 応輪の数は. 〔図4〕 及 び 〔写 真1〕 に示 す 如 く2個 で あ るが , 一定 量 の燐 酸 基 を導 入 す る と1個 に な る傾 向 が 見 ら れ た.又 反 応輪 進 行 速 度 は 〔図5〕 基 導入 量 の多 い程Eaに. に示 す 如 く燐 酸. 比 し遅 い傾 向 が 見 られ た.. 抗Ea家. 原 に は, Uhlenhuth法. 兎 血 清 に対 す る反 応性 の減 弱 が 明 らか に認. め られ た. 第3節 1.0%. 能 働 性Arthus反. Ea 0.5cc又. 応. は1.0ccを4匹. 勿 論 抗 原対 照 と して生 理 的食 塩 水 を 抗体 対 照 と して. 部 皮 下 に注 射 して 感 作 し, 2〜3週. 正 常家 兎 血 清 を 使 用 した.. に, 0.1%〜0.8%のEa及. 図4 PEa抗. PEa (1/10). びPEa各. の 海 〓胸 骨 間 の潜 伏 期 の後 々0.2ccを. 海. 〓腹 部 皮 内に 再注 射 し, 24時 間 後 に発 赤 を 計 測 して. 抗Ea系(Oudin法). 原 の 燐 酸 基 増 加 に よ る 変 化(7日 Ea. に於 いて. PEa (1). PEa (5). 後). 比 較 し,更 に 経過 を観 察 した,そ の 結 果 は 〔 表5〕 及び 〔 表6〕 す るEa及. に示 す如 くで あ る.尚 無感 作海 〓 に対 びPEaの. 対 照 試験 で は反 応 が 陰 性 で あ. つ た. 図5. 註:()内. の 数 値 はEaに. 添 加 量 の 比 率 を 示 す.. 対 す るPUCl3. 註:()内. 抗Ea系(Oudin法). の 数 値 はEaに. の 比 率 を 示 す.. 対 す るPOCl3添. 加量.
(6) 4416. 佐. 表4 PEa抗. 藤. 和. 人. 抗Ea系(Uhlenhuth法). 第1項. 原 の燐 酸 基 増 加 に よる抗 原 価 の 変 化. Ea能. Eaの. 反 応. 働 性 感 作 海 〓 に 対 す るEaの. す べ て 陽 性 で あ つ た.感. 作 注 射 星,潜. 量 が 海 〓 に よ り 異 な る の で あ る が,同 対 す る 反 応 の 平 均 値 は0.8%, 7.0mm,. 0.4%,. 0.2ccで. 0.2ccで. 0.2ccで. 反 応 は4例 伏 期,再. 0.1%,. 注 射. 一 再 注 射 量 に は10.0mm×. は8.0mm×4.8mm,. は10.3mm×6.0mm,. 中. 0.2%, 0.2ccで. は陰. 性 で あ つ た. 第2項 PEaの. PEaの 反 応 も4例. 応 と 同 様 にPEaの. 註:()内. の 数 値 はEaに. 対 す るPOCl3. 添 加 量 の比 率 を 示 す 表5. 表6. Ea能. 海〓番号. 0.8%,. 0.2ccで. す べ て 陽 性 で あ つ た.. Ea能. 働 性 感 作 海 〓 のArthur反. 応の経過. ×3.5mm,. 応(24時. 0.1%,. 即 ちEaの. Eaの. 反. 反 応 の 平 均 値 を 観 察 す る に, は7.0mm×5.0mm,. で は4.0mm×2.5mm,. 働 性 感 作 海 〓 のArthus反 2. 反 応. 0.4%,. 0.2%,. 0.2ccで. 0.2cc. は5.8mm. 間 後). 0.2ccで. は 陰 性 で あ つ た.. 反 応 に比 し,同 一 海 〓 に 同 一 蛋 白量 を. 注 射 したの であ るが, PEaで. は明 らか に 反 応性 の減. 弱 が認 め られ た.し か しEaの. 反 応 が 強 い 程PEa. の 反 応 も強 い傾 向 が 見 られ た. 第3項. 経 過 観察. 海 〓 番 号2に 就 い て再 注 射 後 の経 過 を観 察 す るに, Ea及. びPEaの. 何 れ に 於 い て も0.4%,. 0.2ccの.
(7) オ キ シ塩 化 燐 によ る職 業 性 ア レル ギ ー 性皮 膚 障 害 に 関す る実 験 的 研 究. 注 射 で は2時 間後 に反 応 を認 め, 0.8%,. 0.2ccの 注. 4417. 家 兎 血 清 に よ る感 作 海 〓 にPEaで. は過 敏 性 シ ヨ ッ. 射 では5時 間 後 に反 応 が明 らか とな り,何 れ も18時. クを認 め て い な い.著. 間 後 頃 の反 応 が最 も強 く48時. 家 兎 血清 と よ く沈 降 反 応 を示 し燐 含 量 に逆 比 例 して. 間 後 に は24時 間 後 に. 比 して明 らか に反 応 が弱 くなつ た. 第4章. 考. 者 の 場合 に はPEaが. 抗Ea. 抗 原価 の減 弱 を 認 め,又 寒 天 層 内 沈降 反 応 に於 いて もPEaは. 按. 抗Ea家. 兎 血 清 との反 応 性 を示 し且 燐 含. 量 の 増 加 と共 に反 応 性 に変 化 を来 す事 が認 め られ た. 燐 酸 化 蛋 白 質 の理 化 学 的 性状 並 び に基 質 蛋 白 の抗. 更 にEa能. 血清 に対 す る反応 性 の基 質 蛋 白 との差 異 に 関 して は,. もPEaは. PEaに. に比 較 す る と反応 性 の減 弱 が 認 め られ た.即. 就 いてHeidelberger他3)の. 馬 血 清 ア ル ブ ミン(以 下PSaと M ayer他4)の. 報 告 が あ り,燐 略 記 す)に 就 いて. 報 告 が見 られ,大 川5)はPEa,. Psa. 働 性 感 作 海 狽のArthur反. 反 応 及 び能 働 性Arthus反 対 す るEa及. びPEaの. 応 に於 いて, Ea抗. 等 の 基 質蛋 白抗 体 に対 す る反 応 性 の変 化 の観 察 を 行. 示 した. Ea抗. も尚 残 存 して い るの はEa燐. 比 較 的 短 時 間POCl3を. 酸 化 した 場合 に もEaに Eaに. 添 加 して これ を燐. 燐 酸基 の 導 入 され る事 は,. 燐 を 証 明 し得 な い の にPEaに. ち沈 降 体に. 反 応 の 成 績 は 同 様 の傾 向 を. つ て い る. Eaに. 応 に 於 いて. 明 らか に 反 応 性 を示 したが, Eaの 反 応. 体 に対 しPEaの. 反 応 性 が 減弱 す る. 酸化の程度が軽度であ. る為 と考 え られ る,著 者 の場 合POCl3添. 加 後2時. 間 放 置 して燐 蛋 白 を 分 離 した 寮, Heidelberger他. 燐 を証 明 し得. 及 び 大 川 は24時 間 後 に 分離 して い る ので,燐 酸 化 が. る事 で化 学 的 に も明 らか で あ り,又 燐 酸 基導 入 量 が. 高 度 で あ ると同 時 にそ の他 の変 化 も強 く受 けて い る. POCI3添. 事 が考 え られ,こ の 為 に 基 質蛋 白 の抗 体 との 反 応 性. 加 量 の大 小 に或 程 度 左 右 され る事 も明 らか. で あ る.し か しEa及. びPEaの. フ ェノ ール 試 薬 に. よ る発色 状 態 に大 差 が 見 られ な かつ た の は燐 酸 化 に. を 失 つ た もの と考 え られ る. Eaは. 血 清 ア ル ブ ミン. に較 べ 何 れ の処 理 に於 いて もは るか に著 しい免 疫 学. 伴 う蛋 白 変性 の度 合 の 少 な か つ た事 を示 す もの で は. 的 特 異 性 の 変 化 を受 け る と云 わ れ て い る.そ して. な い か と考 え られ る.. PSaは 抗 血 清 ア ル ブ ミン家 兎 血 清 と よ く反 応 し,そ. 煮 沸 に対 しPEaは. 凝 固 性 を示 さない とFieildeber. ger他 は 述 べ て い る が,著 者 の 成績 も同 様 で あ つ た. 天然 の蛋 白 と異 な りPEa又. はPSaはpH. 2〜4の. 間 で多 少 と も難 溶 性 で, PSaの 場 合 そ の溶 解 度 は燐. の 反 応 度 はPSaの. 燐 含 量 に逆 比 例 す る とMayer他. は云 つ て い る.従 つてEaの. 燐 酸 化 に伴 う蛋 白分 子. の 構 造変 化 が少 な い場 合 に はEa抗. 体 に対 す る反 応. 性 が 桟 存 す る事 は 当然 考 え られ る所 で あ る.. 含 量 に依 存 す る と云 われ て い る.著 者 の 場合Eaに て は沈 澱 を 示 さ ざ るにPEaに. て は殊 にpH. 第5章. 4.4前. PSa溶. 論. 燐 酸 化 蛋 白質 の物 理 化学 的性 状 並 び に基 質 蛋 白 抗. 後 にて 高 度 の難 溶 性 を 示 した. PEa,. 結. 液 は両 者 共 にEaやSa溶. 液 よ りも. 体 に対 す る 反 応 性 の 研 究 を 行 い, POCl3を. 用 いて. そ れ ぞ れ粘 性 が 高 く,そ の 粘 度上 昇 の大 き さは燐 含. Eaを. 理化学. 量 に依 存 す る と云 わ れ て い る.著 者 の 場 合 に もPEa. 的性 状 を異 に し且Ea抗. はEaに. を 生 ず る事 を認 あ,次 の 如 き結 論 を 得 た.. Mayer他. 比 して 明 らか に粘 度 の 上 昇 を示 した.. 燐 酸 化 した 場 合,そ のPEaがEaと. 1) PEeはEaに. は酸 性 の燐 酸 基 が 導 入 され る為 にPsa. は等 電 点 の ア ル カ リ性 側 で よ り速 い電 気 泳動 易 動 度. Eaに 対 す るPOCl3添. を 示 す様 にな り,燐 酸化 蛋 白質 が 未 処 理 蛋 白質 よ り. 増 加 した.. も大 きな 易 動 度 を 以 つて 単 一 成 分 と して 泳動 す る と. 2) PEaはEaに. 体 に 対 す る反応 性 に も変 化. 比 して 燐 を 含 有 し,そ の 含 量 は 加量 の増 加 に よ り 或 程 度 迄. 比 して煮 沸 に対 し不 凝 固 性 を示. 云 う事 実 は燐 酸 基 と蛋 白質 とが 化 学 結 合 を して い る. し,等 電 点 附 近 に於 い て 難 溶 性 とな り,粘 度 が上 昇. 事 を示 す もの で あ る と述 べて い る.著 者 の 場 合濾 紙. し,濾 紙 電 気 泳 動 に於 い て や や速 い速 度 を 示 す 部分. 電 気 泳動 の速 度 はPEaに. を 認 め 且 よ り単 一 成 分 と して 泳 動 す る傾 向 を 示 した.. て はEaよ. り もや や速 い. 傾 向 を 示 す部 分 を認 め,又PEaはEaに. 比 しよ り. 単 一 成 分 と して 泳動 す る傾 向 を示 した. Heidelberger他. 3) PEaの. 燐 酸 基導 入 量 が増 加 す る と,そ れ に. 逆 比 例 して 抗Ea家. 及 び 大 川 はPEaは. 抗Ea家. 兎. 4) Eaに. 兎 血 清 の抗 原価 が 減弱 した.. 導 入 す る 燐 酸 基 の 量 が増 加 す る と,寒. 血 清 と殆 ん ど沈 降反 応 を 示 さな い と述 べ,大 川 は能. 天 層 内 沈 降 反 応 に 於 い て 抗Ea家. 働 性 及 び被 働 性 過敏 症 実 験 に於 い てEa及. が1個 に な る傾 向 を示 し且 反 応 輪 進 行速 度 が遅 くな. び 抗Ea. 兎 血 清 との 反 応 輪.
(8) 4418. 佐. 藤. 和. 人 稿 を 終 るに 当 り,終 始 御 懇 篤 な る御 指 導 と御 校 閲. る傾 向 を示 した. 5) Ea能. 働 性 感 作 海 〓 のArthus反. に て も陽 性 で あつ た が, Eaの. 応 はPEa. を 賜 つ た 恩 師大 田原 教 授 に 深甚 な る謝 意 を 表 す る と. 反 応 に比 し て 減 弱 し. 共 に,種 々 有 益 な る御 助 言 を 戴 い た 緒 方 助 教 授 に 深. て い た.. 謝 す る.. 6) 以上 の結 果 よ り燐 酸 化 に よ りEa抗. 原 の決 定. (本 論文 の要 旨は 昭 和33年2月15日. 群 の一 部 が破 壊 されて い る事 が推 定 され る.. 第67回 岡 山 医. 学 会 総 会 並 び に 昭 和33年10月20日 第13回 日本 公 衆 衛 生 学 会 に 於 い て発 表 した).. 文 1) Obermayer,. Pick:. 19, 327,. K.:. Reactions.. Wochenschr.,. 627, 9). The Specificity. Harvard. Univ.. Press,. J. 4) Mayer,. Chem.. 10). Cambridge,. B., Treffers,. Soc., 63,. M., Heidelberger, 68,. 5). 大 川 緑 郎:. 6). Kekwick,. 18,. 498, M.:. H. P.. 11). (1941) 12). (1946) 雑 誌,. 10,. Biochem.. 1251,(昭. 和7年). J.,. 227,. 30,. 13). 8). Van. Slyke:. Chemistry.. The. Baltimore,. 385,. O.. Folin,. V.. Quantitative. Witliams. and. orylated. J.. Biol.. Chem.,. 211,. Subbarow,. Y... J.. Biol.. Chem.,. 生 物 物 理 化 学,. 2,. (1),. 3,. (昭 和. 林 茂 三 郎:. Uhlenhuth:. Ogata:. 和30年) Prkt.. 15). o.,. Oudin,. Z.. 濾 紙 電 気 泳 動 法 の 実 際,. Anleit.. (Jena) f.. Zur. Ausfuhr.. Biol.. (1909). Immunitateforech.. Bd.. 39,. (1924) J.:. Ann.. Inst.. Pasteur,. 75,. 30,. 109,. (1948). Ciocalteu:. 2.. Stein:. (1925). 森 五 彦,小. 270,. Clinical WilkinsC. J.. Biol.. Studies. Chem.,. 73,. on the Professional induced. Part. 375,. 小 林 茂 三 郎:. (1932). Experimental. C. H.,. Eiweieadiff. 14). Peters,. H.. (1954). Fiske,. 南 山 堂,(昭. 千 葉 医 学 会 Cannan:. W.. 29年). J. Am. Chem.. (1936) 7). Moore,. 66,. M., Davis,. Am.. S,. (1927). 907,. of Serological. (1945). 3) Heidelberger,. Soc.,. Klin.. (1906). 2) Landsteiner,. Mass.,. Wien.. 献. Studies Proteins. Skin Reactions. by POCI3.. on the Physicochemical and Reactions. with Antibodies. Allergic. Properties. of Phosphorylated. of Original. of Phosph Proteins. Proteins.. By Kazuto Sato Departmentof Public Health, OkayamaUniversity, MedicalSchool. (Director: Prof. K. Ohtahara, M.D.) The author studied the physicochemical properties of phosphorylated proteins and also studied the reactions of phosphorylated proteins with antibodies of original And it was proved that the phosphorylated egg albumin (PEa) was different from nal egg albumin (Ea) in the physicochemical properties and also proved that the. by POCIs proteins. the origi reactions.
(9) オ キ シ塩 化 燐 に よ る職 業 性 ア レル ギ ー性 皮膚 障 害 に関 す る実験 的研 究. of PEa with. antibodies. as follows. 1) Comparing. of Ea were different. with. Ea,. PEa contained. from the reactions phosphoryl. of Ea.. groups.. 4419. And the. results. And the quantity. were. of phos. phoryl groups increased, in some extent, in accordance with 'the quantity of POCI3 additioned in Ea. 2) Comparing with the Ea solution, the PEa solution showed incoagulability on boiling also showing insolubility near the isotonic point and was far more viscous and then showed the slightly fast moving electrophoretic method. 3). The antigen. titer. parties. and. of anti-Ea. a moving sera decreased. tendency. as one component. in inverse. proportion. by filter-paper. to increasing. phos. phoryl groups introduced into Ea. 4) The PEa anti-Ea reaction was compared with the Ea anti-Ea reaction by applying the serum agar technic and the number of precipitate bands of the former showed a tendency to get into one by increasing phosphoryl groups introduced into Ea and the moving speed of precipitate bands of the former was slow than that of the latter. 5) The Arthus's reaction between PHuSa and antibodies in guinea pigs actively sensi tized to Ea was kept positive, but this Arthus's reaction was weak than that of Ea. 6) It was presumed from the above results that the phosphorylation of Ea antigen destroyed a part of determinant groups of it..
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