作 用 溶連菌 球 対す 抵抗性

金 沢大 学 十全 医 学 会雑 誌 第

9 2

巻 第

5

号

63 1

^‑

64 4 (1 9 83

)

マ ウ ス の ^{コ ー} チゾ ^ン抵 抗 性^{リ ン パ} 球 ^に 対 する 溶 連 菌^お よび ア ジ ^{エ バ} ン ト^の作用

金

沢 大

学 医学 部薬

理

学教 室

( 主 任

^:

正 印

達教 授

⁾

福 井

医

科

大

学

薬 理

学 教 室

( 主 任

: 木

越

茂教 授

)

西 尾 真 友

( 昭

和^{5 8}年9

月

^{1 2}

日

受付

)

63 1

溶連 菌

ま た は ア ジ

^{エ バン}

ト

で処

理 し た

^マ

ウ

ス

お よ び

非処

理

^マ

ウ

ス

か ら

得

ら れ た

^{コ ー}

チ

ゾ^ン抵抗 性

リ

ン パ球 (

C R リ

ン パ

球)

^の, エ ^ー ル

リ

ッ ヒ

が ん

細 胞^お

よ び ザ

^{ルコ ー マ}

18 0

細 胞^に対

す る

傷 害作

用

^につい

て

検 討

し た

.

7

p

⁸

週 令^の

d d Y

系雌^マ

ウ

ス の皮下^に,

A

群 溶 連菌

S

u 株,

F

r e u n

d

の完 全

ア ジ

^{エ バ}ン

ト

(

C F A

)

ま た は

大腸 菌の

リ ボ ポ リ サ

ッカ

テ ラ イ ド

(

L P S

)

を

注射

し

て 1 4

日

後^に屠 殺

し た

.

C R リ

^{ン パ}球

を

得

る た め

に, 屠 殺

2 日

前^に酢 酸^ハ

イ ド

^{ロ コ ー}

チ ゾ

^ン(¹

2 5

mg/ k )

^を

^マ

^ウ

^{ス の}腹 腔 内^に注 射

し た

.

C R リ

^{ン パ}球の

浮

遊 液

は

,

2

% 牛

血

清

ア

^ル

ブ

ミ ン加^{ハ ン}

ク

ス緩 衝 液(p

H 7

.

4

)

を 用

い て, マ

ウ

ス の胸 腺, 脾 臓

お よ び

腸 間膜

リ

ン パ節^か

ら

作 製

し た

^.腫瘍 細 胞に対

す る C R リ

ン パ球^の作

用 を

調^べ

る た め

に,腫 瘍細 胞

と C R リ

^{ン パ}球の

混

液

( 腫

瘍 細胞/

リ

ン パ球^:

1

/

1 0) を 37

⁰

C

^{で 1}

2 0

分間

イ

^ン

キ

^{エペ ー}

卜 し た の ち

, マ

ウ

ス の皮下^に接 種

し

(

1 0

⁶個

腫

瘍細 胞/^マ

ウ

ス), 接種マ

ウ

ス に お

け る

固

型

腫 瘍

の

増 殖

を 5

週 間観 察

し た

^. エ ^ー ル

リ

ッ ヒ

が ん

細 胞

と

非処

理 ま た は L P S 処 理

^マ ウ ス の腸 間膜

リ

^{ン パ}節

C R リ

^{ン パ}球の混 液

を

接種

し た と き

,

2 0 匹

中

9 匹

^のマ

ウ

ス に腫 瘍^の増 殖

が

^み

ら れ た

.

し

^か

し

, エ ^ー ル

リ

ッヒ

が ん

細 胞

と

溶 連 菌

ま た は C F A 処 理

^マ

ウ

^ス

の

腸 間膜

リ

^ン

パ節

C R リ

ン パ球^の混 液

を

接 種

し た 2 0 匹

^のマ

ウ

ス に

は

,

腫

瘍^の増 殖

は み ら れ な

かっ

た

.

さ ら

^に,

ザ

ル コ ^ー マ 1

8 0

細 胞^に対

す る C R リ

^{ン パ}球^の作

用 を

検討

し た

^. 溶 連 薗

ま た は C F A

処

理

^マ

ウ

ス

あ る

い

は

非 処

理

^マ

ウ

ス の腸 間 膜

リ

^{ン パ}節

C R リ

^{ン パ}球

と ザ

^{ルコ ー マ 1}

8 0

細胞の

混

液

を

^マ

ウ

ス に接 種

し た

. 非 処

理

^マ

ウ

ス の

C R リ

ン パ球

を用

^い

た と き

,

2 0 匹

中¹

7 匹

^のマ

ウ

ス に お いて腫 瘍

が

増 殖

し た が

, 溶連 菌

ま た は C F A

処

理

^マ

ウ

ス の

C R リ

^{ン パ}球

を 用

^い

た と き

腫 瘍^の増 殖

が み ら れ た

の

は 2 0 匹

中

9 匹

で

あ

^っ

た

. 胸 腺

C R リ

^{ン パ}球^{のエ ー )L/}

リ

ッ ヒ

が ん

細 胞^に対

す る

傷 害作

用 は

,き容連 薗

ま た は C F A

^に

よ

^っ

て

増 強

さ れ た が

,

L P S

に

よ

っ

て は

増強

さ れ な

^かっ

た

.

ま た

, 肺臓^の

C R リ

ン パ球^の腫 瘍細 胞 傷 害作

用 は

, 溶 連 菌,

C F A ま た は L P S

に

よ

っ

て

増強

さ れ な

かっ

た

^.

さ

ら に, 細

胞

の a c

id

^α‑^{n ap}

^h

^t

^h

^y

^l

^{a c etate e ste rムs e}活性

を

指 標

と し て

, 各

リ

ン パ組 織^の

C R リ

ン パ球 中^の

T 細

胞^の

比

率

を

調^べ

た と

^こ

ろ

, こ の

比

率

は

,処

理

^マ

ウ

ス の

C R リ

^{ン パ}球

と

非処

理

^マ

ウ

ス の

C R リ

ン パ球

と

で_,

ほ と ん ど

同

じ

で

あ る

^こ

と が 示 さ れ た

. こ

れ ら

の成 績

は

, 溶 連 菌

ま た は C F A

で処

理 し た

^マ

ウ

ス の腸間 膜

リ

^{ン パ}節

C R リ

^{ン パ}球

は

, 非

処 理 ま た は L P S

処

理

^マ

ウ

ス の腸 間 膜

リ

^{ン パ}節

C R リ

ン パ球

よ り も

, エ ^ー ル

リ

ッ ヒ

が ん

細 胞

や ザ

^{ル コ ー マ} 1

80

細 胞^に対

し

^て,

よ り

細 胞 傷 害性^で

あ る

^こ

と を 示 し

てい

る

.

Ke

y

^{w or}ds Cor

t

is one^⊥r e Sis

t

an

t

l

_y

m

p

h oid c ells, S

t

r e

p t

o c o c c u s, A dj^{uv a n}

^t

^s, C

_{y t}

o

t

o xici

_{t y}

, T c ell

_p

r o

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^{o r}

t

io n

E ffe c

t

of S

t

r e

p t

o c o c c u s a nd A dj^{uv a n}

^t

^{s on}

^t

^{he Co r}

^t

^{is o n e･re Sis}

^t

^{a n}

^t

^L

y

^m

p

hoid Ce11s of M

i

c e

M a

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o m o N ish io

, De

p

^{a r}

t

m e n

t

of P ha r m a c olo

g y

(^{Dir e c}

^t

^{o r : Pr of. S. S hoin})^{, Scho ol of} M edicin e

,K _{a n az}a w a Univ e r si

t y

, K a n a z a w a9 20 a nd D e

p

^{a r}

t

m e n

t

of P ha r m a c olo

g y

(^{D ir e c}

^t

^{o r :} Po rf.S . K i

_g

o shi)^{, Fuk ui M edic al Scho ol,M a}

^t

^{s u oka,F ukui 9}

¹

^0‑1

¹

近

年

抗

腫

瘍 性 清適 薗 製 剤

O K

‑⁴

^{3 2 ( P}

^ic

^ib

^{a n}

^il)

^の抗

^腫

瘍 作 札 特^に宿

主

介在 作

用

^{に つ い て}

は

多

く

^の研 究

が

行

わ れ

て い

る が

,

そ

の詳細

は ま だ 明 ら

^{か で}

な

^い.

ま た

,

グ

^{ラ ム}陰性 梓 菌の

リ ボ ポ リ サ

^{ッカ ラ}

イ ド や

結 核 菌

な ど

の ア

ジ

^{エ バ}ン

ト は

, マ

ウ

ス の脾臓

や リ

^{ン パ}節

を

肥 大

さ せ

, 組 織^の

リ

^{ン パ}球 数

を

増 加

さ せ る

^こ

と が

報 告

さ れ て

い

る

^{1 ) 2 ).}

さ ら

^に,

あ る

種^の細 菌

(

結 核 菌, 清 適 薗

^{な ど)}

お

よ び そ

の菌体 成 分

は

, 脾臓

や リ

^{ン パ}節^の肥

大 や

細 胞 数^の増 加

を も た ら す と

同 時^に,

腫

瘍^に対

す る

宿

主

^の抵

抗 性

を

増 大

さ

^せ

る

こ

と が

報 告

さ れ

て お

り

^{2 ト 6 )}, こ

れ ら

の細 菌

と

腫瘍 免 疫

と

の関 係

が 大

^いに注 目

さ れ て

い

る

.

一 方, マ

ウ

^{ス にコ ー}

チ ゾ

ン

な ど

^の

グ

ルコ コル ナコ

イ

ド を

投 与

す る と

,

リ

ン パ組 織

が

萎縮

^し

,

リ

^{ン パ}組 織の

リ

ン パ球 数

が

著

し く

減 少

す る

^こ

と が

知

ら れ て

い

る

^{7 ト 1 0)}. こ の ^{コ ー}

チ ゾ

ン

を

投 与

し た

^マ

ウ

ス に残存

し て

い

る リ

^{ン パ}球

は

, コ ^ー

チ ゾ

ン抵 抗性

リ

^{ン パ}球

と

^い

わ れ

,

そ

の

比

率

は

, 胸 腺

で は 5

^‑

7

% , 肺臓

や リ

^{ン パ}節^で

は 2 0

% 前後

で あ る

^{9 ト 1 1 )}. こ のコ ^ー

チ ゾ

ン抵 抗 性

リ

ン パ球

は

, 腫瘍 細 胞

や a l l

oge n e

i

c

な

細 胞^に対

し

て強^い傷 害作

用 を 示 す と さ れ

^{て お}

り

,

腫

瘍 免 疫

や

移 植 免疫^に

重

要

な

役 割

を

演

じ て

^い

る

こ

と が 示

唆

さ れ て

^い

る

1 0 ト 1 2 )

.

し か し な が ら

, 強^い細 胞 傷 害 作

用 を 示 す

^{コ ー}

チ ゾ

^ン抵 抗 性

リ

ン パ球^に対

す る

溶 連 菌

や ア ジ

^{エバ ン}

ト

^の影 響^につ い

て は

, 詳 細

な

報 告

は ま だ な さ れ

^{て い}

な

^い. 著 者

は

, こ の

点

を

明

ら か

に

す る た め

に_, 溶 連 菌

ま た は

各 種^の

ア ジ

^エ

バ ン

ト を

投 与

し た

^マ

ウ

ス の胸 腺, 牌 臓^お

よ び

腸 間膜

リ

ン パ節^か

ら

得

ら れ る

^{コ ー}

チ ゾ

ン抵 抗 性

リ

^{ン パ}球^に つい て_,

そ

の腫 瘍 細 胞傷 害 作

用 を W

^{in n} の方法^{1 3 )で}調^べ,溶 連 菌

や ア ジ

^{ュ バン}

ト を

投 与

し な

いマ

ウ

ス の^t

｣

ン パ球の

作

用 と 比

較

す る と 共

に, 溶連 菌

と

各 種

ア ジ

^{ュ バン}

ト

^の 作

用 を比

較 検 討

し た

.

ま た

同 時^に, 各

リ

ン パ組 織^{で の},

コ ^ー

チ ゾ

^ン抵抗 性

リ

ン パ球 数

と

,

そ

の中^の

T

細 胞の

比

率

を

求

め

, 腫 瘍細 胞 傷 害作

用 と

の関連 性

を

検 討

し た

^. 材 料お

よ び

方

法

1

^. 溶 連菌

実験に

は A

群 溶連 菌

S

u 株 (

3 型

)

を 用

^い

た

. 溶連 菌

は W

o o

d と G

u n s a

l

u s の合 成 培 地^{1 4 )に}

3 7

⁰

C

で 1

2

時 間 培 養

し た

の

ち

, 菌

量

の

3 0

倍

量

の

ア

^セ

ト

^ン

(

和 光 純 薬,

試薬 特級)

で 処

置 ( 室 温,

2 4

時 間)

し て

乾燥

し た も

の

を 用

^い

た

^{1 5 ) 1 6)}

2

^. ア

ジ

^{ュパ ン}

ト

実験^に

は

,

E

^.c o

li

(

0 11

1,

B

4)^の

1i

popo

l

ys a c c

h

a r

id

e

(

Dif

c o,

以

下

L P S と

略)^お

よ び

結 核 菌

H

, 7

R

a

を

含

む

c o mp

l

ete

F

r e u n

d

^,s a

d

j^{u v a nt}(

D if

c o,

以

下

C F A と

略

) を ア ジ

^{エバ ン}

ト と し て 用

^い

た

.

3

. 投 与^{エ マル ジ}ョン の作 製

マ ウ ス に投 与

す る た

め に, 溶連 歯の

生 理

食

塩 水

浮遊 液

(

^{1 0m}g/m

l) あ る

^い

は L P S

^の

生 理

食

塩 水

溶

液 (

1〔) O J^Jg/^m

l)

の 1 (〕m

l を

,

同 左 ヒ

の

i

n c o m p

l

ete

F

r e u n

d

^.s a

d

j^u v a nt

( D if

^{c o}

) と 混 和 し

^,

2

m

l

^{J )}注 射 筒で ^エ マ]L

ジ

ョン

を

作 製

し た

^.

C F A は

同

邑

^の生

理

食

塩 水 と 混 和 し

て, 同 様^{にエ マ ル}

ジ

^ョ ン化

し た も

の

を 用

^い

た

^.

4

. 実 験 動

物

実

験

^に

は

,

d d

ヽ^一系^の雌^｢7ウ ス

( 7

脚

⁸

週 令

) を 使 用 し た

.

5 . マ

ウ

^{ス の}処

置

マウニて のネi侭

J

腹 部

皮 ド

^{に ().2} m

l

のエ マ ル

ジ

ョ ン

を

注 射

し ( 処 理

^マ ウ ス

)

,

注

射 後1 4

日

目に

リ

^ンパ組 織

を

摘 出

し た

.

ま た

,

生 理

食

塩

水

0

^.

2

m

l を

投 与

し た

マ ウ ス

(

非

処 理

^マウ ス

)

か

ら も リ

ンパ組 織

を

摘 出

し た

.

コ ^ー チ

ゾ

ン抵 抗 性リン パ球

を

得

る た

^{め に},

C

ohe n ら の

方

法^{川 )に}

よ り リ

ン パ組織

を

摘 出

す る 2 日

前^に,

処 理

マ ウ ス

ま た は

非 処

理

^マ ウ ス の腹 腔 内に酢 酸^{ノ ＼}

イ ド

^ロ

コ ^ー

チ ゾ

^ン

(S

c

h

e r

i n

g

A G

, 1 2

5

mg/

k

g

) を 注

射

し た (

^{コ ーチ}

ゾ

ン投 与^{マ ウ ス}

)

.

6

.

リ

^{ン パ}

球

浮 遊 液^の作 製

･^十群5

^{0 匹}

^{の コ ー チ}

^ゾ

^{ン投 与17ウ ス}

^{あ る}

^い

^は

‑^･群

²

^(】

匹

のコ ^ー

チ ゾ

ン非 投 与^{マ ウ ス か ら}胸腺^, 脾 臓お

よ び

腸 間膜

リ

ンパ節

を

摘 出

し

,

ハ ン ク ス の綬 衝 液

(

p

H

7.4,

以

下^{ハ ン ク ス}液

と

略

)

中^で細

切 し

て細 胞 浮 遊 液

を

作製

し た

^{1 7 )}. こ の細 胞 浮遊 液 中^に

混

在

し

てい

る

赤

血

球

を

除

く た め

に_, 遠

心 (1

(】

(

)(

)

rp11 1, 1 0 分 間

) し て

沈

殿 し た

細 胞

を 0

^.

8 3 %

^の

塩

化^{ア ン モニ} ウ ム溶 液に浮 遊

さ

せ て,

2 5

⁰

C

で 1 5 分 間

イ

ン

キ

^{ュ ベ ー}

ト し た

^.

塩 化

^{アンモニ ウ ム}

で 処

置

し た

細胞

を

^{′､ン ク ス}液^{で 2}

回

遠

心

^･

洗

浄

し て

か

ら

, 適

量

^{の ハン ク ス}液

を

加

え

て約^{1 ()7}胤^/′m

ル

⁾刹

那 射貫遊

液

を

調整

し

, 遠

心

常^に

人月

^L

て

4

0

C

^{で 9 ( ト}

分

間静 置

し た

.

静 置後,管 底に沈

ん だ 凝

集

片 を

除

去 し た

細 胞 浮 遊液

を

,

リ

ン パ

球

浮 遊 液

と し

て使

用 し た

. 胸 腺お

よ び

腸 間膜^リ

ンパ節^{か ら}作 製

し た リ

^{ン パ}球浮 遊 液^で

は

,

9 5

‑ ^{9 日}

^9占

^J) 細 胞

が

^{リ ン パ}球^で

あ

り, 2‑ ⁴

^%

^出

^細

^胞

^が

^{て :ソ ロ}

ファ ^ー

ジ

で

あ

っ

た

.

ま た

, 脾 臓か ら作 製

し た

^リンノ､球 浮 遊 液^で

は

,

ほ ぼ

9 ()

%

^山

細

胞

が

^リン′＼灘^で

あ 畑 ケ畑

の細 胞

は

^{て クロ ブ ァ ー}

ジ

で

あ

^一)

た

^.

な

お,

i

^{リノ＼ン ゾ}

ル ^{ー ･} テ ス

ト

で調^べ

た

紬月

鋸

^)ノ

h ナ

率

は

, い

ずカ

L いりニ

パ球 浮 遊 液

で も 9

7

% 以 上

^で

あ

^′ノ

た

.

本 論

文

^で

は

, コー^チ

^ゾ

^{ン投 与マ ウ ス か ら掛､ノdとイニり}

ンパ球

を

^{コ ー} チ

ゾ

^ン抵 抗 性^{リン パ}球

と

記 載

し

, ニコー^イ

ゾ

^ン非 投 与マ ウ ス か 一日守^ら

れ た

^リン パ球

を 絞

^りン′＼

妹 と

記 載

し た

.

7

.

腫

瘍 細胞 浮 遊

さ

夜の

調 整

腫

瘍 細 胞 浮遊 液

は

,速 度

沈

降 法

( V

^{e r o c}

i

t y s e

d

^{im e11tZl}‑

t

i

o n

)

1 9 卜 2 1 )に

よ

^って調 整

し た

^.

す な わ

^ち, エ ^ー ル リ^ッ