常 解析 遺伝子異 型 症 家系 け 無 連鎖

金 沢 大学 十 全 医 学 会 雑 誌 第1 0 5巻 第1 号 1 2 1^‑1 3 5 (1 9 9 6)

Ⅹ 連 鎖 無 r ^‑ グ ^ロ ブ リ ^ン 血 症 ² 家 系 ^{に お} け る ブ ^ル ト ^ン型 ^{チ ロ シ ソ} キ ナ ^ー ゼ遺伝 子 異常^の解析

金 沢 大 学 医学 部 医学 科 小児 科 学 講 座 (主任^: 谷^口 局 数 授)

新 井 田 要

1 2 1

Ⅹ連鎖 無 r^‑グ^ロプ リン血症 (X‑^{1inked a}ga m m aglobulin e mia･ ⅩL A) は B リン パ球 系細 胞^に特異 的な分 化 異常が生じ成 熟 B 細 胞 数^と免 疫^{グロ プ リン}値^が低 下 す^ること を特 徴と し た遺 伝 性^の免 疫不全 症 候 群である^. 患 者 男性^ほ典 型 的^には乳 児期 後 半 よ り細 菌 感 染を反 復 する ように な り, 免 疫グ^ロ プ リン補 充療 法が 必要と な る. 近 年^{ⅩL A の}責任 遺 伝 子 加点 が同 定さ れ, そ^の 遺 伝 子 産 物は ブルトン塾^{チ P} シ ソキナ ^ー ゼ(^{B rutO n's} t y^{r o s}in e k in a s e,Btk) と命 名され た^. Btk の単 離 乳 X L A 患 者^における 遺 伝子変 異^は既^{に1 0 0}種 類 以上報 告されている^･ 今 臥 軍^{L A の 2 家 系に つき 逆 転 写 P C R 法 (}r e v e r s e tr a n s c ribed^‑P C R,

R T‑^{P C R})^, P C R ダ イ ^レ クト シ ^ー ク ^エ ン ス 法 (P C R dire ct s equ e n cing), 競 合 逆 転 写 P C R 法 (c o mpetitiv e R T^‑P C R,

C R T‑^{P C R})^, お よ び P C R を 用いた イント^ロ ン1 0調 節 領 域^{のメ チ ル}化^の検 出^の4 ^つの方 法^によ る系統 的な Btk 遺 伝 子 変 異^の解 析を行った･ 家 系1 では Btk の翻 訳 領 軋 ^一部^のプ^ロモ ^ー タ ^ー 配列を含む 5^'側 非 翻訳 領 域, ざ側 非翻 訳 領 軌 イ^ント^{ロ ン}1 0の

調節 領 域^の全^{て に}お^{い て}塩 基配 列ほ 正常^であっ た が, C R T^‑P C R によ り Btk 遺 伝子の転 写^が減 少し ていること が 示 さ れ た. 家 系^{2 において ほ イントロ ン1 6のス プラ}イ^ス ドナ ^ー 内^にG か ら C ^への1 塩 基置 換が認め ら れ た. こ の変 異^{のた め Btk rnR N A の} 異常な^ス プライ^スが生じ^エ ク ソン1 6 と^{エク ソ}ン1 7^の間^に60塩 基 対^の挿^{入 が}生じた^. ま た, こ の変異のた め^エ ク ソン1 6以 降^{に フ}

レ^ー ム シ フ トが生じ Btk タンパ クは早 期 翻 訳終 結^{して い}た^. C R T^‑P C R の結 私 家 系2 に おい ても Btk m R N A 量^の低 下^が認 め ら れ た が, これ ほ変 異^によって異 常な^スプライスを生じ て^いる m R N A の安 定性^が低 下した た め と解さ れ た^. 家 系^2におけ る保 因者 診 断を P C R と変 異 対立遺伝 子特 異 的^な制 限 酵素^{Pv u Ⅱ}認 識 部 位を 用い て行^い ‥患者^の姉^{の 一} 人が保 困着である^こと が判明 し た^･ 患 者 末 梢血由 来^Epstein^‑Ba r r ウ イ^{ル ス}形 質 変換 系^B細 胞 株^における イン トロ ン1 0の調 節 領 域^は家 系¹ , 2 とも^に

メチ ル化さ れ て お り, こ の こと ほ 両家 系^の患 者^に存 在 する わずか な B 細 胞 も完 全^にほ成 熟^してお らず 幼 君 性^を残して いること を 示唆し た.

K ey ^{w o r}ds X‑^{1inked a}g^{a m m a}globulinemi a, B r uton^,s t y^{ro s}in e kin a s e, g^{e n e m u}tation,

CO m p^etitive r e v er se tran s c ribed P C R

Ⅹ連鎖 無T^‑グ^ロブ リン血症(Br uto n 型, X‑^{1inked a}ga m m‑

aglobulin e mia,X L A) ^ほ,1 9 5 2年 小 児 科 医^{Br uto n に}よっ て報 告 さ れ たヒ ト の液 性 免 疫^に関 する最 初^の遺 伝 性 疾 患^である^{‑ )}.

X L A ほ Ⅹ連 鎖 劣 性 遺 伝の形式を と り, 典 型 的な患 者 男 性^にお

い てほ末梢血液 中^のB ^{リン パ}球 数は0^.1% 以 下^と著明^に減 少し,

血清 免疫^{グロ ブリン}値 も 全^{て の}分画^におい て異 常 低 値^{を 示}す ( 通常I_gG 2 0 0mg/^dl 刺 凱 ^IgA 5m g/^dl 未 満, I_gM 2 0m g/^dl 未満)^. 母親か らの移 行 免疫が消 過 する生 後6 カ月 頃よ り肺 炎 双球 菌▲ 連 鎖 球 菌, インフ ル ^エンザ菌^{を 主}体^{と した}細 菌 感 染( 肺 炎, 中 耳 軋 副 鼻腔 炎) を繰り返 すよ うにな り最悪^の場 合 敗血 症よ り 死に至る場合 も 有り得る^. リン パ系 観 織^の発 育^{ほ 不}良で

表在^{リン パ}節^は触 知さ れず, 口蓋扁 桃 ^{･ ア}デ^ノイ ドも低 形 成を 示す･ ま た! 反復 感 染^がある にも関^{わ ら}ず 脾 種を認め ること は ない²⁾.

患 者の末 梢血^において ほ 甘粕胸が著 滅して いる が骨 髄 中^のB 前駆 細胞 数ほ 正常であり, 近年^{ⅩL A の}病態は B 細 胞^の分 化 ^･

平 成7 年^{1 2}月^{2 5 日}受付^, 平 成⁸ 年¹ 月1 7 日受 理 A b br e viations: b_p, ba s e p^air s; Btk, Br uto n

,

s

成 熟^の障害^にある と考え ら れ る よ うに なっ て いた^. そ ん な中 1 9 9 3年^に本 疾 患^の責 任遺 伝 子が 同定さ れ ブル トン型^{チ ロシ ソキ}

ナ ^ー ゼ(^{Br uto n}

'

st y^{r o s}in e kin a s e,Btk) と命名さ れ た^{a) 4).} Btk は

癌 遺 伝 子^{Sr c} 類似^の構造を持ち な が ら全く新し^い フ ァミリ^ー に

属 する非^レセプ^{タ ー} 型テ^ロ シ ソキナ ^ー ゼ であり, B 細 胞^の初期 分 化^に関わ る細胞 内^シ グナ ル伝 達に重 要^な働 きを し ているも^の と▲_{推 定さ れ た}. Btk には細胞 特 異 的, 分 化段階 特 異的^な発 現^が あり B 前駆 細胞^, 成 熟^B細 胞, 顆 粒 球, 単球お よ び幼 君丁細胞

には発 現を認め る が成熟^丁細胞, 形 質 細 胞, 非 造血 器細 胞^には 認め られ な^{い5) 6 )}. ま た! Btk 遺伝 子^{のイン トロン1 0にほ}発 現^に 関 与 す^{る と}思わ れ る調節 領 域があり, こ の部 位ほ成熟B 細 胸で のみ特異 的^に脱メ チ ル化されていること が知ら れて いる^{7 )}.

Btk 遺伝子^の単 離後. X L A 患 者^におけ^{る Btk} 遺伝子変 異が 次^々と報 告さ れ, 本 疾患^の遺伝 子^{レ ベル}での患 者 診 断^･ 保 困者 診 断が 可能であること が 示 さ れ た^{8 ト 1 7)}. 今^回, 金 沢 大 学 医 学 部 小 児 科^忙て経過 観 察 中^{の X L A 2} 家 系に閲し Btk 遺伝 子^の異常

t y^{r os}ine kin ase; C R T^‑P C R, CO mp^etitiv e re verse tr a n s cribed^‑P C R; D E P C, dieth_yl _{p y}r o c a rbo n ate; DI G, di_go xi_genin; d N T P, de o xy^ribo n u cle otide tri_pho sphat 9 ; P B S , pho sphate^‑buffe r ed s alin e ; P H, ple ckstrin ho m olog y ; R T^‑P C R, r e V er S e tr a n S C rib^ed^‑P C R _; S H ,

1 2 2 新 井 田

を解 析^し ‥患者^の遺 伝 子^{レ ベル で の}診 断, 家 系 内^の女 性 保 因 者

の診 断を試み た^.

対象および 方 法

Ⅰ. 対 象

対 象^ほ金 沢 大 学 医 学 部 小児 科^にて経 過 観 察 中^{の ⅩL A} 患 者^お よ び その家 族^の2 家 系である^･( 図1)^. 両 家 糸とも遺 伝 子 診 断に よ る患 者^, 保因者 診 断^の可能 性^に つき説明 し インフ_ォ ^ー ム ド^コ

ンセン トを得^た後^に解析を開始^{し た.} 家 系^{1 の}患 者¹ ( 図¹ ,

Fa mi_{l y l} I

ⅠⅠ

F a mily 2

Ⅰ

ⅠⅠ

ⅠⅠⅠ

メ

F ig^.1^. Tw o pedigr e e s with X^‑1inked aga m m aglobulin e mia

(ⅩL A)^･ Ar r o ws indic ate the pr oba nds of e a ch pedigr e e.

Ⅲ^‑6 0f fami 1y l d ied of ba cte rialr n e ningitis at 6 ye a r s old.

Fa mil_yl ⅢL^{7) お よ び家 系2 の患 者2 ( 図1 , Fa mil}y2 Ⅲ‑^{6) に} 於^{いて ほ}既^に末 梢血 よ り Ep^stein^‑Ba r r ウ イ ル ス形 質 変 換 系B 細 胞 株 (E B V 形 質変 換 細 胞) が樹 立さ れ て お り検 体と し^て用^い ること が でき^{た. ま た}, これ と ほ別^に患 者^{お よ び}家 族^の末梢血 を採 取し白血球 分 画よ り D N A ^･R N A を抽出 し試 料と し た^.

各 家 系の患 者における初 診ま での経 過, 臨 床 症 状ほ以 下のと お り である^.

家 系1 ^一息 者1 ( 図1 , Fa mily l Ⅲ^‑7): 生後, 特^に細 菌感 染

の既 往^なく 経 過^{し ていた が}, 2歳^{1 0 ケ}月 時^に下 痢, 発熱 あり近 医受 診^{. こ のと}きの検 査で IgG 8 0m g/^dl 未満,IgA 1 3mg/^dl,

I_gM 71m g/^{dl と低T‑グロ ブ リン血症を認め,} 当科 紹 介 初 診^. 表 在^リンパ節l 口蓋 扁 桃^の低 形 成を認^め, 末 梢血中^にB細 胞を認 めず^. X L A を疑わ れ る^.

家 系^{1 一} 息者² ( 図 1 , Fa miIyl Ⅲ^‑8)^{: 上}記患 者^の弟^. 生 後 感染 症^の既 往なく 経 過して^いた が, 兄に低r^‑ グ^ロ ブリ ン血症 を認め た た め 6 ^ケ月 時^に検 査 施 行.I_gG 4 0m g/^dl,IgA 3m g/^dl,

IgM l Om g/^{dl と}低値^であり, 末 梢^血中^にB細 胞を認^めず^. 兄と 併せ て ⅩL A と診 断^.

な お, 家 系^{1 の母}親 ( 圃¹ , Fa miiyl Ⅱ一⁵) ^には前 夫^との間^に 男 児( 図 1 ,Fa mil_yl Ⅲ^‑6) がいた が 6 才 時^に細 菌 性 髄 膜 炎^にて 死 亡 し^てお り, 本 児 もⅩL A であった 可能性が 示唆さ れ る.

家 系^{2 一} 息 者¹ ( 図¹ , Fa mily 2 Ⅲ‑^{3 ): 生}後^しばらく^ほ特^に 問題なく 経 過^. 3 歳 頃よ り中耳 炎を繰り返 すよう^にな る^. 6 歳 時, 左 下肢 蜂 窟 織 炎に て紹 介 医入院. こ のときの検 査で低γ^‑グ

ロブ リン血症を指 摘さ れ当 科 受 診^{. I}gG 5 0mg/^{dl 未 満, I}gA l Om g/^dl 未 満,IgM 7m g/d l と低値^{. 口}蓋 扁桃は痕 跡を認め る

程 度^. 末 梢^血中^B 細 胞^ほ0.6% ^{. X L A を}疑わ れ る^.

家 系2 ^一 息 老2 ( 図 1 , Fa miIy 2 Ⅲ^‑6 ): 生後2 回^の発 熱を認 め た が^いずれも1 日 で解 熱. 生 後^{4 ケ}月 時^に下 痢^が続^{いた. 1} 歳 時^に肺 炎^にて近 医入院^{. こ の}とき^の検 査^でIgG 6 8mg/^dl,IgA 2mg/^dl,IgM 3 9m g/^{dl と}低T‑ ^{グロ ブリン血症を認め, 当 科 紹} 介 初 診^. 末 梢^血中^B細 胞^ほ0.1% 以下^. 検査 所 見, 家 族歴 よ り 上 記 家 系2 一息 老1 と併せ て X L A と診 断^.

いずれ^の患 者 も 診 断 後ほ, 血清^IgG 値3 0 0mg/^{d l以上 を}維 持

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F ig^･2^･ Lo c atio n s of P C R prim e r s a s r elat_ed to the pr otein str u ctu r e s a nd e x o n e s of the Btk _ge n e.(^{s e e Ta}blel)^.

S rC^pho m olog y ; T E, T ris^‑E D T A ; U T R , u ntra n Sl^atedT

r egio n; ^Ⅹid, Ⅹ^‑1inked im m u n od eficie n cy^; ⅩL A , Ⅹ^‑1inked

ag^{a m m a}globulin e mi_{a ;} E B V 形質変換 柵 胸, Ep^stein^‑B a r r ウ イ ル ス形質変換 系^B 細 胞株