Posted at the Institutional Resources for Unique Collection and Academic Archives at Tokyo Dental College, Available from http://ir.tdc.ac.jp/
Title
歯周病におけるPCR-Invader 法を用いた唾液中の歯周病
原菌の検出
Author(s)
佐々木, 脩浩; 佐々木, 紀子; 廣瀬, 立剛; 廣瀬, 邦子;
西村, 優; 小林, 史卓; 太田, 亮輔
Journal
歯科学報, 112(2): 158-158
URL
http://hdl.handle.net/10130/2713
Right
目的：歯周病・インプラント歯周炎は宿主因子，環 境因子および歯周病原菌により引き起こされる慢性 炎症性疾患であり，歯周病原菌の検出は歯周炎の診 断および治療の効果判定に有用である。今回，我々 はインプラント治療を予定している歯周病患者を対 象とし，その歯周病原菌レベルを解析する目的で唾 液中に含まれる歯周病原菌の検出と定量を試みた。 方法：平成１９年３月２６日より平成２４年３月３１日の間 に，インフォームドコンセントを得た患者７８名（男 性２１名，女性５７名）を対象とした。内訳は７mm 以 上の歯周ポケットを有する慢性歯周炎患者２８名（平 均年齢５９．５歳），６mm 以下の歯周ポケットを有す る慢性歯周炎患者３９名（平均年齢５６．０歳），健常な 歯周組織を有する対象者１１名（平均年齢５８．２歳）で あった。被験者の残存歯数，プロービングデプス， プラークインデックス，プロービング時の出血歯面 数（BOP）等の歯周炎の指標を測定すると共に， 喫煙累計本数についても調査した。被験者の刺激唾 液中の歯周病原菌の菌量は，株式会社ビー・エム・ エ ル に 外 注 し て PCR-Invader 法 を 用 い て６菌 種 Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphy-romonas gingivalis（P. g．），Tannerella forsythia （T. f．），Treponema denticola, Prevotella
interme-dia, Fusobacterium nucleatum について行った。
成績：７mm 以上の歯周ポケットを有する患者群で は P. g.および T. f.の占める割合（０．２７％）が６mm 以下の歯周ポケットを有する患者群（０．０３％）およ び健常者（０．０３％）に比べ非常に高かった。歯周病 患者のうち，７mm 以上の歯周ポケットを有する患 者群では６mm 以下の歯周ポケットを有する患者群 に 比 べ，統 計 学 的 に 有 意 に BOP，プ ラ ー ク イ ン デックスの値および喫煙累計本数が高かった。 考察：唾液中の P. g.および T. f.の占める割合は歯 周炎の状態と関連し，これらの菌種の検出は歯周炎 のリスク判定に有用であることが示唆された。さら に，インプラント周囲炎のリスクの点からも，イン プラント治療以前に検査を行う必要があると考えら れた。 目的：近年，インプラント治療は欠損補綴の一手段 としての地位を確立し，広く用いられている。しか し，インプラント体は生体にとって非自己であり， 上皮を貫通し外界と交通をした環境を形成するた め，細菌や外来性物質に対する防御機構が弱く，慢 性的に炎症を来たすことから，インプラント周囲上 皮への影響が問題となっている。口腔粘膜上皮から 由来するインプラント周囲上皮の病理組織学的な報 告は数多くなされているが，分子生物学的な検討に 関しては少ない。そこで今回我々は，ゲノムレベル で遺伝子発現の比較が行えるマイクロアレイ法を用 いて，インプラント周囲上皮の遺伝子の発現変化を 検討し，インプラントが口腔粘膜上皮に及ぼす影響 を明らかにする事を目的とした。 方法：４週齢の雄性 S-D 系ラットを用い，上顎両 側第一大臼歯を全身麻酔下にて抜歯し，右側にのみ 直径１．３mm 長さ４mm のチタン製インプラントを 埋入した。４週後に実体顕微鏡下にてインプラント 周囲上皮（PIE 群）及び，反対側の抜歯窩治癒後の
口腔粘膜上皮（OE 群）を採取し，total RNA を抽 出した。One-Cycle 法にて cDNA を合成し，aRNA 精製，fragmentationの後にGeneChipⓇ
; Rat Genome 230 2.0 Array と hybridization を行った。GeneChip の洗浄・染色を行い，スキャニング後，GeneSpring GX にてデータの解析を行った。 成績および考察：シグナル強度比が Fold 値３．０以上 の遺伝子を未解析のものも含めて検索した結果， PIE 群に発現上昇したものが２９６個であったのに対 して，OE 群では２９個であった。PIE 群で発現上昇 した遺伝子には上皮の構成成分であるケラチンに関 する遺伝子の他に，炎症・免疫に関与する IgG-2 a （Fold 値９９．６），Cxcl９（１６．６）が み ら れ た。こ の ことから口腔粘膜上皮と比較して，インプラント周 囲上皮は炎症や免疫などの生体反応によって様々な 遺伝子発現の上昇が惹起されていることが示唆され る。今後は RT-PCR 法，免疫組織化学染色などを 用いて，これらの遺伝子の局在や定量を行なってい く予定である。
