各種神経疾患における髄液および血清apolipoprotein E 測定の意義　：　脱髄との関連を中心に

原 著 〔東女医大誌 第61巻 第10・11号頁 977∼987 平成3年11月〕

各種神経疾患における髄液および血清apolipoprotein E測定の意義

一脱髄との関連を中心に一

東京女子医科大学 神経内科学教室（主任 丸山勝一教授） ブリ ヤ ヨシ コ 降 矢 芳 子 （受付 平成3年7月17日）

Significance of Apolipoprotei血EDetermination in Plasma and Cerebrospinal

F111id in Vadous Neurological Disorders

Yoshiko FURIYA

Department of Neurology（Director：Prof． Shoichi MARUYAMA）

Tokyo Women’s Medical College

It is well known that apolipoprotein E（Apo E）， an important mediator of lipid transport and metabolism， is secreted by non・neural cells， such as astrocyte in the central nervous systems and macrophages in the peripheral nervous systems， in士espons to nerve injuries． Plasma Apo E plays a role in the transport of myelin l三pids in prepalation for remyelination．

For this study， Apo E and albumin concentrations in serum and cerebrospinal fluid（CSF）were

determined and the CSF Apo E index was calculated in 65 patients with neurological d量sorders。 The

diagnosis included demyelinating diseases such as multiple sclerosis（MS）， acute disseminated encephalomyelitis（ADEM）， Guillain−Barr6 syndrome（GBS）， Fisher syndromes and chronic inflama− tory demyelinating polyneurit圭s（CIDP）as well as a variety of other neurological diseases such as

cerebrovascular disorders（CVD）， herpes simplex encephalitis（HSVE）， aseptic mening三tis， tuberculous

meningitis and mycotic meningitis． Seventeen normal controls were also studied． CSF Apo E was increased in patients with MS， ADEM， GBS， CIDP， Fisher syndrome and CVD indicating that either primary or secondary demyelination． Serum Apo E was decreased in all of the forementioned demyelinating diseases． The low levels of Apo E were presumed to reflect some degree of immunosuppression as Apo E concentlation below 20 mg／J have been demonstlated to suppress Iymph㏄yte−mediated immunofunction． The decreased serum Apo E and increased CSF Apo E seen in

the demyelinating diseases produced an elevation in the Apo E index． In following the clinical course of

apatient with MS， we found that serum Apo E decreased and CSF Apo E increased during

exacervations， while the converse， a decrease in CSF Apo E and an increase in serum Apo E，㏄curred

during remissions． Similar changes were seen in』 ≠垂≠狽奄?獅?with GBS． A patient with mycotic

meningitis initially has a slightly depressed serum Apo E levels which rose remarkably during

remission and had returned to normal by the time the patient was fully recovered． To elevated serum

Apo E concentlation seemed to be related to changes in lymphocyte−med童ated immunofunction．

緒 言

アポリポ蛋白E（apolipoprotein E；Apo E）は

VLDL（very low density lipoprotein）， HDL

（high density lipoprotein）などに広く分布してお

り，肝細胞および末梢実質細胞のLDL（low den−

sity lipoprotein）受容体あるいはApo E受容体と

強い結合能を有しcho．lesterolの輸送，代謝に重

要な役割をはたす蛋白として注目されてい

る1）2）．

最近，神経損傷時に生体反応として，中枢神経

系ではastrocyteより3）4），また末梢神経系では

macrophage5）6）より， Apo Eの分泌が起こり，髄

鞘の再生に関与することが動物実験により明らか にされた． 臨床的には脱髄疾患である多発性硬化症（mul− tiple sclerosis；MS）の回復過程で髄液中のApo Eの増加とそれに伴うApo E indexの増加が報 告されている7）8）．一方lApoEは血中に約40mg／ 1の濃度で存在し，in vitroでリンパ球幼若化反応 を抑制する働きがあること7），細胞表面の受容体 認識決定因子として作用し，抑制作用を示す部分 であることが明らかにされ，神経疾患における免 疫学的機序への関与を示唆する報告8）もある．し

かしMS以外の神経疾患における髄液および血

清中Apo Eに関する検討は過去に行われていな い． そこで著者は，MS以外の脱髄疾患をはじめと し，脳血管障害や各種感染性神経疾患患者につい て髄液および血清のApo E値の測定を行い，臨床 面への有用性および，これらの各種疾患における 特徴や発症機序への関与等について，検討および 考察を行った．同時に髄液および血清albumin値 の測定も行い，Apo E indexを算出し，その値に ついても同様に検討した．また中枢神経系で産生

されるApo Eは血清中に存在するApo E・に比し

シアル酸結合量が多量であることの報告3）があ り，シアル酸残基に関する検討を電気泳動法およ び免疫化学的手技により行い，疾患との関連を調 べた． 対 象 疾患群は，1986年4月から1990年3月の間，当 科の入院または外来患者のうち，診断の確定した 65例である．その内訳は中枢神経系脱髄疾患とし てMS 8例，急性散在性脳脊髄炎（acute dis−

seminated encephalomyelopathy；ADEM）2

例，末梢神経系脱髄疾患としてGuillain−Barr6 症候群（GBS）7例，慢性再発性脱髄性末梢神経

炎（chronic inHammatory demyelinating

polyneuropathy；CIDP）5例， Fisher症候群7 表1 対象 中枢神経系脱髄疾患 多発性硬化症（MS） 急性散在性脳脊髄炎（ADEM） 末梢神経系脱髄疾患 Guillain−Barrε症候群（GBS） 慢性炎症性脱髄性多発根神経炎（CIDP） Fisher症候群 その他の神経疾患 脳血管障害（CVD） ヘルペス脳炎（HSVE） 髄膜炎：無菌性（Asept M） 化膿性（Bact M） 結核性（TbM） 真菌性（Mycot M） 非神経疾患患者（対照者） 8例 2例 7例 5例 7例 13例 9例 8例 3例 2イ列 1例 17例

例．その他の神経疾患として脳血管障害

（cerebro−vascular disorder；CVD）13例，ヘルペ ス脳炎（herpes simplex virus encephalopathy；

HSVE）9例，各種髄膜炎14例である（表1）． 患者対照群としては，当科入院または外来受診 し，診断目的で髄液検査を受け，炎症性，脱髄性 などの各種器質的神経疾患を除外された者，およ び虫垂炎等で外科手術を受けた症例で，神経疾患 を有さず，腰椎麻酔時に髄液を採取された患者計 17例とした．悪性腫瘍を有し，放射線治療中の者 や抗癌薬，免疫抑制薬投与中の者は対象から除外 した． 方 法 1．髄液および血清Apo E値の測定 Apo E indexの算出： 脳脊髄液は，発症後または再発後1週間以内に 腰椎穿刺により採取し，ただちに一80℃で凍結し， 測定に供するまで保存した．同時に採血を行い血 清を分離し同様に保存した．Apo E値はアポオー ト第一を用い，免疫比濁法9）10）で測定した．albu− min値はBehring社製laser nepherometerを用 い，免疫二二法1Dで測定した．血液脳脊髄液関門 （blood CSF barrier；BCB）の破壊による影響を 考慮し，IgG 量ndex12）の算出法に習い， Apo E

CSF Apo E index＝

［AoE］csF／［A o E］serum

［albumin］csF／「albumin］serum

但し［Apo E］csF：髄液中Apo E濃：度，［Apo

E］、e，。m：血清中Apo E濃度，［albumin］csF：髄 液中albumin濃：度，［albumin］ser。m：血清中albu−

min濃度

また同時に，BCB透過性の指標としてalbumin quotientを以下の式により算出した． alburnin quotient＝ ［albumin］csF／［albumin］serum×1，000 BCB透過性の堺町による髄液中Apo E値への影 響を検討するため，髄腔内でApo Eの産生がない と考えられる患者対照群17例および各種炎症性神 経疾患群23例の計40例において髄液中Apo E値， Apo E indexの各々とalbumin quotientとの関 連も比較した．経過を追うことが可能であった症 例については，数回にわたり検査を行い，臨床経 過とともに検討を行った．血清Apo E値に影響を 与えると考えられる合併症として糖尿病，高脂血 症，肝機i胃障害13）の有無も検討した． 2．髄液および血清Apo Eシアル酸残基の検討 約1mlの髄液を透析膜（サイズ：8／32）にとり， Sephadex G−25を用いて約4倍の濃：度に濃縮し た．濃縮した髄液および血清を等量のサンプル処 理後（2％SDS，10％メルカプトエタノール，40％ glycerol，20mM Tris−HCI緩衝液， pH 6．8）を 加えて加熱処理したものを泳動用試料とした． 10∼20％濃度勾配ポリアクリルアミドゲルを用い てSDS一スラブ電気泳動を行い， western blotting によりnitrocellulose膜に転写後，膜を二分した． 一方について，一次抗体として抗ヒトApo E抗ヤ ギ血清，二次抗体としてペルオキシダーゼ標識抗 ヤギIgウサギ抗血清を用いて酵素抗体法による 染色を行った．他片についてはamid blackを用 いて蛋白質の染色を行った． シアル酸残基の存在は，1mlの髄液に0．IUの neuraminidase（EC 3，2，1，18，半井化学） を加えて25℃で3時間反応させ，反応前後の髄液 について前述と同様に泳動試料を調整してApo Eの同定および蛋白質の染色を行い，移動度から 判定した． 結 果 1．髄液および血清Apo E値の測定 Apo E indexの算出： 1）Apo Eと」［血液脳関門

albumin quotientと髄液中Apo E値の間には

一定の傾向を認めず（図1），albumin quotientと Apo E indexの間には相関係数一〇．53で1％の危 険率で負の相関を認めた（図2）． 2．0

s

岳 a1．0 託 8 0 o ，・：3 ● ？1・ 5 70．’ ● ● ● 0 50 albumin quotient 100 図1 対照および各種髄膜炎患者における髄液中 Apo E値とalbumin quotientの関係

患者対照者17例，ヘルペス脳炎9例，無菌性髄膜炎 8例，化膿性髄膜炎3例，結核性髄膜炎2例，真菌 性髄膜炎1例の計40例において，髄液中Apo E値と albumin quotientの間には一定の傾向を認めな かった． 10 鍾 缶 婁5 0 ● ’、♂、 塾

7

一．一， o Pく0．01 r卍一〇．527 Y＝一〇．049X＋3．32 図2 E indexとalbumln quotientの関係 患者対照者17例，ヘルペス脳炎9例，無菌性髄膜炎 8例，化膿性髄膜炎3例，結核性髄膜炎2例，真菌 性髄膜炎1例の計4G例において， Apo E indexと albumin quotientの間には相関係数一〇．53で1％ の危険率で負の相関を認めた． ｝，．． 一、 ちち ちへ ■ 『し・＼ 一＼ 、、 ● 、、 ヘ やち 0 50 100 abumin quotient 』 regression Ilrle 冒一一−95％GQn歪idence Iimits 対照者および各種髄膜炎患者におけるApo

2）名種神経疾患における髄液中Apo E値 髄液中Apo E値は対照群0．69±0．19mg〃に

対し脱髄疾患ではADEM 1．71±o．01mg〃， Fi− sher症候群1．01±0．23mg／1と，ともに1％の危 険率で有意に高値を示し，MS， GBSの場合もそ れぞれ1．02±0．49mg／1，1．01±0．43mg／1と高値 の傾向を示した（図3）．その他の神経疾患では

CVDで0．97±0．42mg〃と5％の危険率で高値

を示した（図4）． 3）各種神経疾患における血清中Apo E値 血清中Apo E値は対照群42．4±11．6mg／1に 対し脱髄性疾患ではMS 31．2±12．1mg／1， CIDP 34．8±11．6mg／1と5％の危険率で有意に低値を 示し，GBS， Fisher症候群でもそれぞれ32．3± 11．9mg／1，34．2±12．1mg／1と低値の傾向を示し た（図5）．その他の神経疾患では対照群とほぼ同 様の値を示した（図6）． 4）各種神経疾患におけるApo E index Apo E indexは対照群3．37±1．12に対し脱髄性 疾患ではMSで6．48±2．44と1％の危険率で：有 意に高値を示し，ADEMで9．67と高値の傾向を示 した（図7）．一方，その他の神経疾患ではHSVE 2．11±1，45，化膿性髄膜炎1．15±1．04，結核性髄 膜炎。．40±Q．10とそれぞれ5％，5％，1％の危 険率で有．意に低値を示し，無菌性髄膜炎では 2．41±2．09と低値の傾向を示した（図8）． 5）臨床経過との関連 経過を追った症例については，脱髄疾患のうち， 2．O 言 岳 む む ￡ 8 o

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図3 脱髄性疾患における髄液中Apo E値 対照群0．69±0．19mg〃に対し， ADEM 1．71±0．01 mg〃， Fisher症候群1．01±0．23！ug〃，ともに1％の 危険率で有意に高値を示し，MS， GBSの場合もそれ ぞれ1．02±0．49mg〃，1．01±0．23mg〃と高値の傾向 を示した． 図5 脱髄性疾患における血清中Apo E値 対照群42．4±11．6mg〃に対し， MS 312±12．1 mg〃， CIDP 34．8±11．6mg／1と5％の危険率で有 意に低値を示し，GBS， Fisher症候群でもそれぞ．れ 32．3±11．9mg〃，34．2±12．lmg／1と低値の傾向を示 した． 2．0 言 藷 む ゆ 盆 8 0 rP（0・。‘コ ● ； §1 ニ ／ ：

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図4 その他の神経疾患における髄液中Apo E値 対照群0．69±0．19mg／1に対し， CVDで0，97±9．42 mg〃と5％の危険率で高値を示した． 図6 その他の神経疾患における血清中Apo E値 その他の神経疾患では対照群42．4±11．6mg〃とほぼ 同様の値を示した．

歪1。 思 2 Q 「P＜α01］ ● §王 ll ● ● ● lI ● ● il ● 。T

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＼ 図7 脱髄性疾患におけるApo E index 対照群3．37±1．12に対し，MSで6．48±2，44と1％の 危険率で有意に高値を示し，ADEMで9．67と高値の傾 向を示した。 垂1。 峯 0

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図8 その他の神経疾患におけるApo E index 対照群3．37±1．12に対し，HSVE 2．11±L45，化膿性 髄膜炎1．15±0．4，結核性髄膜炎0．40±0．10とそれぞれ 5％，5％，1％の危険率で有意に低値を示し，無菌 性髄膜炎では2．41±2．09と低値の傾向を示した．

末梢神経の脱髄性病変を示すGBSの1例で発症

後1ヵ月経過した回復期で血清中Apo E値の低 下と，髄液中Apo E値およびApo E indexの増

加を認めた（図9）．

MSの1例では急性期に比し回復期で血清中

Apo E値の低下と，髄液中Apo E値およびApo

Eindexの増加を認めた（図10）． 真菌性髄膜炎の1・例では髄液中Apo Eは全経 過を通じて明らかな変化を認めなかったが，血清 中Apo Eは発症時比較的三値を示し，経過ととも に異常高値を示したのち発症時の値に復した（図 11）． 2．髄液および血清Apo Eシアル酸残基の検討

髄液中Apo Eの増加の認められたMS， Fisher

症候群，GBS， CIDP各1例計4例の髄液および血 清について電気泳動を行ったところ，血清中Apo 80 70 も60_E 薗50 む 240 雪30 缶 ω20 10 0 2．0 言t5 岳 婁1．o 蓉 0．5

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q 、 4’ 、 、 、きメ更 ’、_戟^ ρ 0 0M IM 2M 3M 4M ・一4CSF Apo E い一◎serum APQ E ム．一ゆApo E lnde× 図9 GBS患者の臨床経過と髄液中および血清中

Apo E値とApo E indexの変化

発症後1ヵ月経過した回復期で，血清中Apo E値 の低下と髄液中Apo E値およびApo E indexの増 加を認めた。血清中Apo E値は18．5mg〃まで低下 した． 100 90 ミ80 警70 苗60 §50 §40 諺30 20 10 0 2．5 言20 岳15 婁 密1ρ 0．5 0 8．0 7．0 6，0 5．o蓉 4．o岳 3．o婁 2、0 1．0 0 ＿hemiPlegla鵬esthesia 一 ＿貯C丁、MRI abnormal｝ty q 外・一．『 〉、 ／〆 、or” ／…＜ OM lM 2M 3M 4M 5M 6M M ●一●CSF Apo E ⊂》一〇seτurn APQ E o一．4Apo E Index 10．0 9．0 8，0 7．0 6．o尋 50缶 4，0皇 3．0 2．0 1．0 0 図10MS患者の臨床経過と髄液中および血清中 Apo E indexの変化 増悪期に比し，回復期で血清中Apo E値の低下 と髄液中Apo E値およびApo E indexの増加を認 めた．血清中Apo E値は28．5mg〃まで低下した． 6ヵ月後の再発時には再び血清中Apo E値の増加と 髄液中Apo E値およびApo E indexの低下を認め

た． Eは34KD前後のものが主であり，髄液中Apo E は血清中のものに比し移動度が小で36KDあるい はそれ以上の分子量をもつものが認められた（図 12，13）． 考 察 1．Apo Eと血液脳脊髄液関門（BCB） Apo Eは分子量約34，000の糖蛋白であり，血中 リボ蛋白の重要な構成成分として，receptorを介 した血中脂質の排除および輸送に携わっており，

1銘 ．鬼 登・。 峯器 1碧 11 2．5 2，0 書1・5 昼1，0 曇 0，5 一CSF Cryptcoccus po釧t」ve

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HCSFApoE o・鴫serum Apo E 6『噛ApoEl噛x 図11 真菌性髄膜炎患者の臨床経過と髄液中および血 清中Apo E値とApo E indexの変化

髄液中Apo E値は全経過を通じてほぼ一定の値を 示したが，血清中Apo E値は発症時には23．4mg〃 とやや低値を示していたが，後に102．9mg〃と異常 高値を示し，臨床症状の軽快とともに25．4mg／1と 発症時の値に復した． ．一一94KD 芒

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三一20．1KD

図12 蛋白銀染色による髄液および血清の電気泳動像 1ane a， b， c， dは患者血清を100倍希釈したもの， lane a’， b’， c’， d’は患者髄液を透析膜を用いて約4 倍に濃縮したものをサンプルとして，10／20％濃度勾 配SDS・ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い，

蛋白銀染色を行った．1ane a， a’はGBS患者，1ane b，b’はCIDP患者，1ane c， c’はMS患者，1ane d， d’はFisher症候群患老である．最左laneは分子量 マーカーを示す． 10．o ．o ，0 アむ 。暮 ．o己 ．。婁 3．0 2．0 1．0 0 他のアポリポ蛋白と異なり，脾臓，肺，macrophar− ge等の食細胞の発達した肝外臓器でも広く産生 が認められている13）旬16）．一方，髄鞘のミエリン脂 質は主にcholestero1から成るため，大脳では cholesterolの代謝回転が非常に活発であり17）多 量のApo Eがその代謝に関与することが報告さ 芒

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serum CSF 図13 Apo E酵素抗体法染色による髄液および血清 の電気泳動像 lane a， b， c， dは患者血清を10倍希釈したも の，lane a’， b’， c’， d’は患者髄液を透析膜を用いて 約4倍に濃縮したものをサンプルとして，10／20％ 濃度勾配SDS・ポリアクリルアミドゲル電気泳動を 行ったのち，western blottingによりnitrocellulose 膜に転写を行い，左31aneはamid blackによる蛋 白染色を，右81aneは酵素抗体法染色を行った．Iane a，a’C b’， b’， c， c’， d， d’は図12に用いた検体と同 一患者のものである，最左laneは分子量マーカーを 示す． れている．

髄液中Apo Eを測定するにあたり， Apo Eの BCB透過性に関してまず検討する必要がある．髄 液中Apo Eとalb㎜in quotientの間には有意な 相関は認められず，むしろApo E indexとalbu・ min quotientの間に負の相関を認めた， BCB透 過性が増加する時，Apo E index値は髄液中albu・ min値の増加に従い減少しており，このことは，

髄液中Apo E値に比し髄液中albumin値の方

が，炎症等によるBCB透過性変化の影響をより 受けやすいことを示している．以上の結果から Apo Eは分子量約66，000のalb㎜inに比しBCB を透過しにくいことが示唆された．BCB透過性を 規定する因子としては，分子量18），分子半径18｝，荷 電19）等があげられているが，特に分子量に関して は，その値に反比例してBCB透過性が変化する ことが確められている18｝．松島ら20｝によればモル モヅトのApo EはPi螺旋構造をとる両親媒性物 質であり，albuminのようにほぼ球形をなす物質 に比べるとBCBを透過しにくいことが予想され

表2 各種神経疾患における血清および髄液中Apo Eおよびalbumin値， Apo E index， albumin quotient Se「_C監、甥oE

_c主部3E

Serum alb

img／dl）

CSF alb

img／dl） Apo E index

Albumin 曹浮盾狽奄?獅 Contro1 （n＝17） 42．4±11．6 0．69±0．19 3290．1±501．8 17．0± 4．0 3．37±1．12 5．26±1。35 MS （n＝8） 31．2±12．1皐 1．02±0．49 3806．1±350，2寧 22．0± 6．9 6．43±2．44串 5．79±1．80 ADEM （n＝2） 49．4 1．71±0，01． 4535．0 16．4 9．67 3．61 GBS （n＝7） 32．7±11．9 1．01±0．43 3439．1±772．8 47．0±37．4 4．66±3，96 13．74±10．91 Fisher （n＝7） 34．2±12．1 1．01±0，23串奉 3739，7±657．6 36．2±23．2 4．67±3．45 9．87±6．32 CIDP （n＝5） 34．8±11．6寧 0．85±0．42 3902．2±131．3寧 29．0±18，6 3．99±2．64 7．45±4．86 CVD （n＝13） 40．2±4．7 0．96±0．42寧 3340．1±584．9 21．3± 9．2 4．26±2．56 6．40±2．46 HSVE （n＝9） 41．5±8．8 0．82±0．43 3590．2±484．0 42．6±23．9廓 2．11±1．45廓 12．32±7．75噛 Aseptic M （n＝8） 37．7±10．1 0．87±0．38 3153，1±844．9 36．5±11．6串 2，41±2．09 12．11±3．85騨 Bact M （n＝3） 45。3±16．7 0．91±0．18 2600．0±1054．0 124．6±150．7 1．15±1．04寧 43．80±44．5 TbM （n＝2） 49．9±3．9 0．61±G．19 3230．0± 65．0 110，0±70．5 0．40±0，10拳 33，84±21，1 Mycot M （n＝1） 23．4 0．43 3026．0 19．8 2．82 6．54

事P〈0．05vs patient controls，鱒P〈0．01 vs patient controls．

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serum CSF

図14neulaminidase処理前後の髄液および血清の電 気泳動像の変化

非神経疾患患者対照者の血清について，neur・

aminidase処理前を1ane a， bに，処理後を1ane a’，

b’に示した．同様に髄液についても，処理前を1ane

c，dに，処理後を1ane c’， d’に示した． lane a， a’，

c，c’およびlane b， b’， d， d’は同一患者である。図 12と同様に左31aneはamid blackによる蛋白染色 を，右81aneは酵素抗体法染色を行った，最左1ane は分子量マーカーを示す． る．また陽性に荷電した物質の方がBCBを透過 しやすいことが報告されている19）．Apo Eはar・ ginineに富む好塩基性蛋白であり，血液中では陰 性に荷電している可能性があり，その意味でも BCB透過性が低いことが予測される． Apo Eが BCBを透過するかどうかに関しては核医学を用 いた基礎的な検討が必要であるが，いずれにせよ 今回の検討では，髄液中Apo E値は血清値を反映 せず，神経系には独立した代謝系が存在すること が予測され，神経系による産生を反映するものと 考えられた．千葉ら21）も，正常人20例の髄液中およ び血清中Apo E値の測定を行い，同様の結果を得 ている．髄液中に存在するApo Eが血清中のもの と比べ，高度にglycosylateされ，多数のシアル酸 残基を有し，より大きな分子量であること9》から も，中枢神経系で産生されたApo Eは血清中のも のと区別されうると考えた． 2．各種神経疾患とApo E 対照群における髄液中Apo E値は0．69±0．19 mg／1であった．この値は既知の報告による値 0．52∼2．20mg／110），2．86±1．86mg／121）とほぼ同 様の結果が得られたことになるが，むしろぼらつ きが少なく，信頼性が高いと考えられた． 今回の検討における対照群の血清中Apo E値 は42．4±11．6mg／1であった．血清においては多 くの検索がされており，赤沼ら22）は22施設1，127名 を対象とした検討から40．7±12，1mg／1を正常値 として報告しており，既知の正常値とほぼ同様の 結果が得られた． 1）脱髄性疾患 （1）中枢神経系脱髄疾患

MS患者およびADEM患者において髄液中

Apo E値が高値を示した．神経損傷時，特に脱髄 がみられるとき，cholesterolがmyelin膜から放 出されるが，髄鞘再生に備え，これらの脂質は回

収され再利用される．中枢神経系ではastrocyte から分泌されたApo Eがcholesterolと結合し lipoproteinを形成し， oligodendrogliaや再生線 維に内在するApo E受容体を介して取り込まれ， そして髄鞘再生にあずかるといわれているD．両 疾患において髄液中Apo E値が高値を示したこ とは，上記の機序により脱髄後の修復機転として astrocyteからApo Eの分泌を来したことを示す ものと考えられた．過去の報告ではMSの回復期 のみに髄液中Apo E値が高値を示し，急性期の髄 液中Apo E値は特に高値を示していないとされ ている6）．今回の検討では髄液中Apo E値は発症 または再発1週間以内の急性期の時点で既に高値 の傾向を示した．ラットを用いた実験では坐骨神 経損傷後3日以内に末梢神経系でのApo E産生 細胞であるmacrophageの集積が起こり，3週間 以内にApo E分泌量が最：大となることが明らか にされている23）．中枢神経系においても急性期に 既にApo E分泌が起こっていた可能性がある．

MSとADEM患者の血清のApo Eは対照群

に比し低値の傾向を認めた．Germannら8）はMS の回復期でApo E indexが高値を示す原因とし て，髄液中Apo Eが高値を示すことよりむしろ血 清中Apo Eが害鳥を示すことが強く影響すると 述べており，MS患者の末梢血におけるsuppres・

sor T cell機能の変化と，血清中Apo Eが低値を 示すことに関係があるのではないかと推測してい

る8）．一方，Apo Eはin vitroで20mg／1の濃：度で

リンパ台岳弱化反応を抑制することが実験的に確 かめられている9）．また脳内では活性化されたT cellに対しdown regulateの役割を担うneuro− mediatorとして働くとの報告もある24）． MS患者 では末梢血で増悪期にsuppressor cytotoxic T cell（CD4＋）が減少しているという報告25）や慢性 進行性の症例で選択的にCD4＋の欠損がみられ るという報告26）がある．一方，経過を追った症例で は，MS回復期の血清中Apo Eが，リンパ球幼弱 化反応が抑制されている可能性のある20mg／1台 まで低下している．Bachら27）はMS患者で6例

中5例で回復期に比し増悪期でCD4が減少し

CD8が増加しCD4／8比が低下したと報告してい る．臨床経過の面からみても，MS患者において血 清中Apo E値の変化は細胞性免疫能の変化と何 らかの関連があるものと推測される． （2）末梢神経系脱髄疾患 GBS， CIDP， Fisher症候群等の末梢神経系脱髄 疾患でも，中枢神経系脱髄疾患と同様に髄液中 Apo Eの高値と血清中Apo Eの面前を認めた． 末梢神経系では神経損傷時にmacrophargeから Apo Eが分泌され，神経再生のためのcholesterol の回収にあたる5）6）．今回対象にした末梢神経系脱 髄疾患はいずれも神経根に病変が及ぶものであ り，これらの疾患における髄液中Apo Eの高値は 脱髄に対する修復過程でのApo E分泌を反映す るものと考えた． GBS， CIDP等の末梢神経系脱髄性疾患患者で 血清中Apo E値が低値を示したことから， MSだ けでなくGBS， CIDP患者においても末梢血の suppressor T cell機i能の変化が起こることが推 測される．文献的にはGBS患者では末梢血CD4／ CD8比が上昇する例，低下する例と様々である が28），CIDP， Fisher症候群については検討されて いない．今後はリンパ球サブセットなど細胞性免 疫能検査も併用した検討を行う心要があると考え る． 末梢神経系脱髄疾患では，中枢神経系脱髄疾患 と同様に，髄液中Apo E高値，血清Apo E低値

を示しながらも，Apo E indexは高値を示してい ない．これは，GBS等では，神経根や脊髄髄膜血

管の透過性の漸進やBCBにおけるalbuminの

turn over雨隠等29）のため，髄液中albuminが高 値を示したためと思われた．GBS患者で臨床経過 とともにリンパ球サブセットの変化を追った検討

はないが，GBS回復期でもMS回復期と同様に

血清中Apo Eが10mg／1台まで低下しており，

GBS患者でもMS患者に類似の傾向が認められ

た． 2）その他の神経疾患 （1）脳血管障害（CVD） CVDでは髄液中Apo Eが高値を示した． CVD では二次的に脱髄が起こるため，前述のMS， GBS等と同様の機序で，その修復過程でApo E

が分泌され，髄液中Apo E値が高値を示したもの と考えられた． 血清中Apo E値は特に対照群との問に大きな 差が認められなかった．CVD患者では基礎疾患 として糖尿病や高脂血症等の動脈硬化およびその 危険因子が高頻度に存在する．III型高脂血症や肝 障害，糖尿病患者で血中Apo Eが高値を示すこと が報告されている13）．また近年，Apo蛋白と動脈 硬化の関連については様々の検討がなされてい る．動脈の硬化性変化が生じる時，血小板由来成 長因子が血小板から分泌され平滑筋細胞の増殖が 起こるが，同時にmacrophageや単球がcholes− tero1で泡沫化され，これらの細胞からApo Eが 分泌されることが確められている30）．しかし血清 中Apo B／A1濃度比は冠動脈狭窄の程度と正の相 関を示し，そのriskの指標となるという報告31）が あるが，血清Apo E値と動脈硬化の相関を示す報 告はない．また一方，肝硬変患者ではHDL中Apo

E含有量が異常高値を示し，HDL中Apo E量と

血小板凝集能との間に正の相関を認めたという報 告32）もあり，肝硬変患者における血中Apo Eの血 液凝固異常への関与が示唆されている．本研究に おいては血清中濃度で明らかな差を認めなかった が，脳血栓症患者において血小板凝集能充進は危 険因子の一つであり，脂質分画中の分布の異常や 局所的な集積が起こっている可能性がある． （2）ヘルペス脳炎：（HSVE）

CVDの他に二次的脱髄をきたす疾患にHSVE

があるが，HSVE患者の髄液中Apo E値は高値

を示さなかった．herpes simplex virusは壊死性

脳炎を起こすが，oligodendrogliaよりastrocyte を強く障害することが報告されている33）．Apo E

は中枢神経系では主にastrocyteから分泌される ため，HSVEでは二次性脱髄が存在するにもかか わらず髄液中Apo E値が高値を示さなかったも

のと推測された．一方，herpes simplex virusは

01igodendrogliaよりastrocyteを強く障害する ことが脱髄および壊死の機序に重要な意味をもつ との報告33）もあり，逆に壊死性脳炎においてApo E分泌の増加がないという事実と，再生機転の欠 如および壊死の機序との関連を考えると非常に興 味深い． （3）各種髄膜炎 各種髄膜炎ではBCB破壊による髄液中albu−

min高値の影響を受けたため， Apo E indexが低

値を示した．この傾向はBCB破壊が高度である 結核性髄膜炎および化膿性髄膜炎で特に著明で あった．このようにApo E indexはむしろalbu− min等Apo E以外の物質の影響を受けており，

BCB透過性の変化の影響を受けやすいIgGと異

なり，中枢神経系での純粋な産生量を知るために indexをあえて算出する必要はないものと思われ る．しかしMSにおいては前述のように血清値の 低下および髄液値の増加が起こるため，他疾患と の鑑別や増悪期および回復期の病期判断のために は，やはりApo E indexの算出は有意義であり必 要であると思おれた． 真菌性髄膜炎の1例で，血清中Apo Eが発症時 やや低値を示しながら，経過とともに異常高値を 示し，のちに発症時の値に復した．cryptococcus 感染症ではkiller T cellを中心とした細胞性免疫 が感染防御の主体をなすといわれており，その発 動時期は感染初期よりやや遅れ数日後と報告され ている34）．このことも，血清中Apo Eが細胞性免 疫能の変化と何らかの関連を示唆するものと思わ れる． 3．髄液および血清Apo Eのシアル酸残基の検 討 イヌおよび正常人の髄液および血清の電気泳動 による検討において，中枢神経系で産生される Apo Eはシアル酸結合量が血清中に存在するも のに比し多量であるとの報告3）がある．今回の検

討でも髄液中Apo Eは血清中Apo Eに比し移動 度が小であり高分子であった．neuraminidase処 理による検討により，その差はシアル再結合によ ることが示唆された．髄液中Apo Eの増加の認め られた疾患の中からMS， GBS， Fisher症候群患 者のそれぞれ検体について比較検討したが，ma−

crophage由来のApo Eとastrocyte由来のApo

Eとの間に明らかな差異は認められなかった． 結 語

に相関を認めず，髄液中Apo Eは．BCB透過性変 化の影響を受けないことが明．らか．．になった． 2．髄液中Apo Eは脱髄性疾患およびCVDで 高値の傾向を認めた．この事実は，これらの疾患 における一次性または二次性脱髄の存在を示し， 髄鞘再生，修復機転発動の結果生じたものと考え られた． 3．血清中Apo Eは脱髄性疾患では低値の傾向 を．認め，脱髄性疾患における免疫学的機序の関連 のあることが推測された．またGBSの回復期で

髄液中Apo Eの増加と」血清中Apo Eの低下を認

め，MSの回復期と同様の結果が得られた． 4．髄液中に存在するApo Eは血清中に存在す るApo Eより移動度が小であり，分子量約36KD のものが多く認められた．neuraminidase処理に よる検討により，その差はシアル．酸結合によるこ とが示唆された． 稿を終えるにあたり，御指導，御高閲を賜りました 神経．内科丸山勝一教授に深謝致します．また終始御指 導頂きました．神経内科村上博彦講師に深謝致します． 実験手技に関し御教示頂ぎました生化学教室の三野 純恵先生，伊東栄子先生，松田隆子先生ほ．かの諸先生． 方に深謝致します． さらに検体の呈示に御協力．頂きました神経内科教 室の諸先生方，総合研究室技師小原三千代氏，橋口孝 子氏に深謝致します． また本論文の一部は第36，37回臨床病理学会総会， および第31回日本神経学会総会で発．表した． 文 献

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