発態紳現動胞死( ) 関連性関す研究単抗体認識す細胞活性化抗原

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金沢大学十全医学会雑誌第1 0 2巻第1 号 49 ^‑6 0(1 9 9 3)

単 ^ク ^ロ ^ー ^ン抗体^{I M N 3} ^.¹ ^の認識す^る ^ヒ ^{ト T} 細胞活性化抗原 ^の発現動態^と紳胞死 ( ^ア ^ポ^ト ^ー ^{シス}) ^の関連性 ^に関す ^る研究

金沢大学医学部小児科学講座 ( 主任^: 谷^口局数授)

上原貴博

( 平成5 年1月1 2 日受付)

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Epst_ein‑^B^{a r r} ^{ウイ}^ル^ス ⁽^Ep^stein^‑B^{a r r} vir u s, E B V) 初感染^による伝染性単核症 (ⁱⁿ^f^{e c}^tⁱ^{o u s} ^m o n o n u cle o sis,I M) で増加する活性化 (C D 4 5 R O 抗原陽性) T リンパ球ほよ適当な細胞増殖因子を欠くと速やか^{にア}ポト ^ーシスに陥るが, これは抗原刺激を介^{した}末梢^で^の^T 細胞選択機構^{のモ}^デ^ル^{とし}^て興味深^い｡今回,I M 患者末梢^血単核細胞^を免疫原^{とし}, アポト ^ーシスに陥りやす^い T細胞^に特異的な細胞表面分子^に対する単^ク^ロ ^ー ^ン抗体 (m o n o clo n al a ntibody^, m A b) ^の作成を試みた^. 得られた m A b (^{I M N 3}^.¹) ^に^よ^っ ^て認識される I M N 3.1抗原^ほ,I M 患者末梢^血活性化 (C D 4 5 R O 抗原陽性) ^T 細胞^に強く発現す^{るが}, 正常^人末梢血^{メモ}リ ^ー ^･活性化(C D 4 5 R O 抗原陽性)T 細胞にはわずかな発現が認められる^のみ^で, 同疾患^にお^いて増加した T 細胞を明瞭に区分する^ことができた^. また,I M N 3^.1抗原は同抗原陰性^ナイ ^q ブ(C D 4 5 R O 抗原陰性) T細胞を活性化する^ことにより比較的後期^にそ^の発現^が誘導された｡I M N 3.1抗原^は, 細胞外構造^{1 2 0 k D}^a ^の未知^の^T細胞活性化抗原^で, 主に I M 患者^丁細胞, 胸腺細胞, サイトカイン依存性A T L 細胞株および抗Fa s m A b 感受性丁細胞株などアポト^ー ^シ^スに陥りやす^いT細胞^に発現す^るも^の ^と考^{えられた}^.

K ey ^{w o}^rds E_pstein^‑Ba r r viru s,infe ctio u s m on o n u cle o sis, T c ell, a Ctiv atio n a nti_ge n, ap^Op t^{O S}is

生体^の恒常性維持^に^お^い^て, 細胞増殖^と細胞死^が ^一定^の割合で保たれることほ極めて重要であり, 悪性新生物^の発生および免疫不全^の磯序^を解明す^{る上}^で注^{目され}^{てい}^る^{‑ )2 )}^. 細胞死は!

非生理的条件 ( 低酸素状態^, 虚血など) による細胞膜障害を特徴とし周囲^の覿織障害を伴う壊死(n e c r o sis) と, 生理的条件 ( 個体発生過程, ある種^の抗原刺激など) ^に ^お^{いて} 核^の断片化 (n u cle a rfr agm e ntatio n) を特徴とする変化^{のの} ち観織障害を伴わず貪食細胞^{など}^に^よ ^っ^て処^{理される}^ア^ポ^ト ^ー ^シ ^ス (^apop to‑

sis)^{3 ト 5)} ^に大別されて^いる^.

アポト ^ーシスを介した細胞死^は , 個体発生^の過程⁸⁾ ^や胸腺^で

のT 細胞受容体一^{C D 3} ^{抗原複合体}^を^介^{した}^自^己^{反応性未熟}^丁^細

胞^の排除^{7 ト 9 )}, リンパ節胚中心^における B 細胞^の選択^{1 0 )}など免疫

機能^の樹立^, 調節過程^にお^{いて}中心的役割を果^{たし}^{てい}^る^. また末梢成熟丁細胞^の免疫応答や^{‖ ト 1 4 )}^･, 後天性免疫不全症候群 (^{a c}quir ed im m u n odeficie n cy syndr o me, A I D S) 発症 ^へ ^の関

与1 5 卜 1 7 )

も報告されており注目されている^.

Epstein‑^B^{a r r} ^{ウイ}^ル ^ス(^Ep^stein‑^B^{a r r} ^vⁱ^{r u s}^,^{E B V}) 初感染^に^よる伝染性単核症(iⁿfe ctio u s m o n o nucle o sis,I M)^{1 8 )}^で著明な増加が認められる活性化丁細胞^{1 9 )}では, メモリ ^ー (m e m o ry)^･活性化 (^{a c}^tⁱ^{v a}^t^e^d) T細胞^の指標^である C D 4 5 R O 抗原^{2 0)}^の発現^が増

強している^{2 1 )}が, この活性化 (C D 4 5 R O 抗原陽性) T細胞は, 細

胞増殖国子^の欠如^に^{より}速^{やか}^{にア}^{ポト} ^ー ^シ^{スに}陥^る^{2 2 卜 2 4)}^. 末梢で抗原刺激を受けた T 細胞は C D 4 5 R O 抗原を発現し^{メモ}

リ ^ー T 細胞群^を形成す^{るとされて}^い^{るが}2 5 ト 2 g )

,I M ^にお^いて増加

した活性化 (^{C D}⁴^{5 R O} 抗原陽性) ^T 細胞^が^ア^{ポト}^ー ^シ ^ス死^によって選択される可能性は, 末梢^に^{おける}抗原刺激^を介した^メ

モリ ^ー T 細胞群形成機構^の^モ^デ^ル^{とし}^て興味深^い^{2 1 )}

現在, B細胞^に^お^いてほ C D 7 7 抗原^が^リ^ン ^パ節胚中心^{でア}ポト^ーシスを介して選択される細胞^に発現するとされて^いる^{30 )} が, 胸腺細胞^を含む T 細胞^に特異的な^アポト ^ーシス関連抗原^は知られていない. 今回, アポト ^ーシスに陥りやすいI M 活性化丁細胞^に発現す^る表面抗原^を明らかにする目的^で, 単^ク^ロ ^ー ^ン抗体 (r n o n o clo n al a ntibod_y, m A b)I M N 3.1 を作成した. I M N 3.1m A b によって認識される抗原ほ, 各種細胞^における発現分

布および分子量^の検討^により, アポト ^ーシス指向性丁細胞^に特異的^に発現する未知^のT 細胞活性化抗原と考えられる^.

対象および方法

Ⅰ IM N 3.1 m A^b の作成

臨床症状, 血液所見および血清学的所見より I M と診断^{l 即}された 5 歳男児^{より}^ヘ ^パ ^リ^ン加静脈血を採取, F ic oll‑^Hy p^aq^{u e} 比重遠心法^に ^て得られた末梢血単核球 (pe riphe r al b lo od

m o n o n u cle a r c ells, P B M C) で B A L B/^c ^マ ^ウ^スを免疫し,

m A b を作成^{した}^{3 1)}^. 5 匹の ^マウスにそれぞれ 2 ^×1 0⁶ の I M

P B M C を, Fr e u nd 完全^アジュバント(D ifc o Labo r ato rie s,

Detr oit. M I C H, U S A) ^と共^に腹腔内接種, 以後²週毎^{に 3 回}皮下接種す^る^ことにより追加免疫を行^い^, 2 週間後0^.1 M リ^ソ酸緩衝塩化^ナ^{トリウ}^ム液 (pho sphate‑^b^u^ff^{e r e}^d ^{s a}^li^{n e}^, ^{P B S}) ^に再

A b br e viatio ns: A I D S , a Cq^uir ed im m un odeficie n cy ^syⁿdr o m e; A T L, adult T c ell le uke mia; E B V,

Ep^stein^‑Ba rr virus; F C S , fetal c alf se r u m ; F I T C. flu o r e s c ein isothio cy^{a n a}te; I_g, im m u n oglobulin; I M ,

infectio u s m ono n u cleo sis;I L,interle ukin; ^m A b, m O n O Clo n al a ntibod_{y ;} 2 M E, 2^.m elc ap t^{o e}tha nol; N K, n atu ral

発 態 紳 現動 胞死( ) 関連性 関す 研究 単 抗 体 認識す 細胞活性化抗原

発態紳現動胞死( ) 関連性関す研究単抗体認識す細胞活性化抗原