ウサギ大動脈血管平滑筋細胞におけるbasic fibroblast growth factorの遺伝子発現とタンパク合成の制御

(1)

原著

〔書女購、9第鷺、葎鍔〕

ウサギ大動脈血管平滑筋細胞におけるbasic飾roblast growth

factorの遺伝子発現とタンパク合成の制御

東京女子医科大学神経内科学教室（主任サトウレイコ

佐藤玲子

丸山勝一教授）（受付．平成3年10月15日） Regulation of Gene Expr6ssion and Protein Syntllesis of Basic Fibroblast Growth Factor in Rabbit Aortic Vascular Smooth Muscle Ce皿s Reiko SATO Department of Neurology（Director：Prof． Shoichi MARUYAMA） Tokyo Women’s Medical College Atherosclerosis is the principal cause of cerebral thrombosis． The proliferation of vascular smooth muscle cells（VSMC）is a key event in atherosclerosis and it量s widely recognized that growth factors mediate this event． In the present study， rabbit VSMC were found to express the mRNA for basic fibroblast growth factor（bFGF）which is a potent mitogen for VSMC and I investigated the reguiation of bFGF gεne and c・〃尾yc gene expression by other growth factors。 Platelet derived growth factor（PDGF）increased the level of bFGF and c一〃隻yc mRNA． Insulin−1ike growth factor・1（IGF・1）mildly increased the level of c一〃隻yo mRNA but didn’t increase the level of bFGF mRNA． The release of immunoreactive（ir）・bFGF into serum free conditioned medium of rabbit VSMC was also examined． Western blotting analysis of the cqndit孟oned medium revealed a single ir−band of 32 kilodaltons，which was reduced to 16 kilodaltons in the presence of 8 M urea． Furthermore， using 2−site immunoradiometric assay（IRMA）Iquantified irbFGF released by cells into the conditioned血edium with or without PDGF． IrbFGF in the conditioned medium was increased by PDGF． These results indicate that bFGF acts not only as paracrine factor but as autocrine factor in VSMC proliferation， and that one of the mechanisms by which PDGF stimulates VSMC proliferation ．is induction of endogenous bFGF production．緒言脳血栓の基盤に動脈硬化が存在するこ．とは明らかであり，その病態や成因の研究は予防，治療の面からも重要である．脳血管においては太い皮質

枝動脈におこる粥状動脈硬化と細い穿通枝動脈

（径400μm以下）におこるフィブリノイド壊死を主体とした細動脈硬化に分けられるが，高血圧例

の脳動脈では径100μm以下の小枝まで粥状動脈

硬化を見ることがある9という．本研究では脳動

脈硬化における2つの病変のうち，粥状動脈硬化

について検：討を行った．粥状動脈硬化（以下，動脈硬化）の発症，進展

に血管平滑筋細胞（vascular smooth muscle

cells：VSMC）の増殖が重要な役割を果たしてい

るが，一方VSMCの増殖には種々の増殖因子が

必要であると考えられ2》，最初Rossら3）によって．

血小板中に見出された因子一platelet derived

growth factor（PDGF）がVSMCの増殖に重要

一112一

(2)

な因子として着目された4）5）．しかしそれ以外にも insu正in−like growth factor−1（IGF1）， epidermal growth factor（EGF）， basic fibroblast growth factor（b FGF）， interleukin−1（IL−1）， transform− ing growth factor一β（TGF一β）， smooth muscle

cell derived growth factor（SDGF）などが

VSMCの増殖に関与していることが示唆されて

いる6＞∼17）．これらの中でPDGFに関する研究が最

も多く報告されてきたが，近年bFGFが，（1）動

脈硬化に関与する内皮細胞，マクロファージ，

VSMCで合成されること，（2）VSMC，内皮細胞

両者に対し増殖作用を持つことなどから動脈硬化に密接に関わる因子として注目されている18）．

さらにA鎖とB鎖よりなるPDGFのB鎖が

oncogene謝の産生産物であること5）， EGF rece− ptorがoncogene 67か月と同様の構造を有していること19），実験的動脈硬化巣においてoncogehe

産物の存在が証明されたこと20）などからon−

cogeneと動脈硬化に関係のあることが示唆され

ている．

今回著者はウサギのVSMCにおけるbFGF

mRNAの発現と培養上清中へのbFGFの放出を

確認し，bFGFがウサギVSMCにおいてauto−

crine雨止として働く可能性を明らかにした．ま

たPDGFおよびIGF−1の存在下でbFGF mRNA

の変化をみると同時に，protooncogeneである

。・彫y6 mRNAの変化をも観察し，興味ある知見を得た．方法 1．材料

実験に用いた細胞は生後3カ，月のNZWウサ

ギ胸部大動脈平滑筋をexplant法によって分離

し，ゲンタマイシン20μg／mlを含む10％ウシ胎児

血1清（FCS）加DMEM培地（FCS／DMEM）によ

り37℃，5％CO2下で4代から6代まで継代培養

した細胞である．ヒトPDGFはCollaborative

Research（Bedford， MA）製，ヒトIGF−1は

Toyobo（NewYork， NY）製を使用した．また

recombinantウシbFGFはAmgen（Thousand

Oaks， CA）製を用いた． bFGF cDNAプローブは1．4kb pjjll−1 cloneでJ． Abraham博士（Calbio Inc， Mountain View， CA）より提供された．ウシ

bFGFのアミノ酸配列N端HOに対応する合成

peptide／Tyrll／bFGF（、一11）一Nle12をkeyhole

limpet hemocyanin（KLH）に結合したもの（50

μgpeptide／mg KLH）はAlberta Peptide Insti− tute（Edmonton， Alberta， Canada）製を，また

ヘパリンセファロースはPharmacia（Dorva1，

Quebec， Canada）製を使用した．他の化学薬品は Fisher Scienti丘。（Don Mills， Ontario， Canada）製を用いた．

2．ウサギVSMCの塔養および増殖因子添加

実験

10％ FCS／DMEM中で培養した細胞が

subcon伽entとなったとき，培養液を0．1％ウシ血

清アルブミン（BSA）加DMEM培地（BSA／

DMEM）に変更し，48時間後ヒトPDGF（half

maximal unit／ml）， IGF1（30ng／lnl）を含む新

鮮な0．1％ BSA／DMEMに置換した． Western

blot法には無血清培地（0．1％BSA／DMEM）で

48時間培養した際の上清を用いた．

3．RNA抽出とNorthem blot法

RNAは10cmの培養皿2回分の細胞を剥離，採

取後ホモジネートし，guanidium isothiQcyanate− cesium chloride法21）で抽出した．抽出したtotal

RNAは30μg／laneを1％agarose formalde−

hyde ge1で電気泳動し，ニトロセルロースフィルターに転写した22）．このニトニセルロースフィルターを，random primer labeling system（Amer− sham， Oakville， Ontario， Canada）を用いて32P

で標識したウシ．bFGFcDNAプローブ（speci丘c

activity 2−4×109dpm／μg）とnick translationにより32P標識を行ったヒト。．物・oプローブ（ヒト。一〃z夕。遺伝子のエキソン1，2，3品目ンコードする8．3kbフラグメントを含むプラスミ．ド23））とでハイブリダイズした．ハイブリダイゼーションは

50％ホルムアミド，4×SSC，4×Denhardt液，2

mM EpTA， o．1％sodium dodecyl sulfate

（SDS），20mM NaH2PO4，100μg／m1サケ精子

DNA中で行った．ハイブリダイゼーション後に

ニトロセルロースフィルターを0．2×SSC，0．1％

SDSで60℃にて洗浄し，オートラジオグラフィー

(3)

を行った． 4．抗bFGF（1．、。）抗体作製

1mgの／Tyrll／bFGF（1−u）一Nle12−KLHを

Freundの完全アジュバントと混じ，生後3ヵ月

の雌NZWウサギ背部皮内20−30ヵ所に注射し

た．次回よりFreund不完全アジュバントと混じ

て2−3週毎に背部皮内20−30ヵ所に注射した．

5．Western blot法

0．6M NaClを含むウサギVSMC培養上清15

mlを0．2μmボアサイズミリポアフィルターで濾過した後に，100μ1ヘパリソセファロースカラムでゲル濾過した，1M NaCl 50m1で洗浄後，ヘパリンセファロースゲルをエッペンドルフチューブに入れ，62．5mM Tris，0．2％ SDS，5％ β一

mercaptoethano1中で3分間煮沸した．この後

に，サンプルによっては最終濃度8Mの尿素を加

え，12時間室温に放置した．サンプルを厚さ1．5 mmの10−19％polyacrylamide gradient ge1で電気泳動し，ニトロセルロースフィルターにtrans blot cell（Bio−Rad， Mississauga， Ontario，

Canada）を用いて転写した． immunoreactive

（ir）一bFGFバンドは104倍に希釈した抗

bFGF（1−lo）血清とアルカリフォスファターゼ結合抗ウサギIgG（Fc）（Protoblot， Promega Biotec， Madison， WI）を用いて検：出した． 6．ヨード化ヒツジ抗ウサギIgGのF（ab〆）2のフラグメント（Organon Teknika， Westchester， PA）50μgは1 mCiのNa1251（New England Nuclear， Boston， MA）を用い，1μgのIodogen（Pierce， Rockford， IL）をコーティングしたガラス試験管中で室温にて15分間ヨード化し，ゲル濾過法でfree1251を分離した． 7．2・Site immunoradiometric assey（IRMA）既報24）のごとく，ポリ塩化ビニール96ウェルプレートに100μ1のpoly−L−lysine（PLL，．100μg／ml H20），次に100μ1のヘパリン（1mg／ml H20）を

固相化し，1％BSAを含む燐酸・ミッファー生理

食塩水（PBS）でウェルをブロックして4℃にて

保存した．使用にあたっては0．5M NaCl−PBSで一度プレートを洗浄し，各ウェルに100μ1のサン．

Kb

7．0レ

〈28s

鞘…… ＜18s

図1 ウサギVSMCにおけるbFGF mRNAの

Northern blot O．1％ BSA／DMEMで48時間培養したウサギ VSMCより抽出したtotal mRNA 50μgを32P・ウシ bFGF cDNAプローブでハイブリダイズした．28S， 18Sはribosomal RNAバンドの位置である．

プルまたは標準bFGF液を入れ，4℃で24時間イ

ンキュベートした．アッセイバッファー（0．1％ BSA加25mM Tris一生理食塩水）で洗浄後100μ1

の抗bFGF血清（アッセイバッファーで104倍に

希釈）を入れ，4℃で24時間インキュベートした．洗浄後1251一抗ウサギlgG F（ab’）2フラグメント（105cpm／100μ1）を加えて再び4℃で24時間インキュベートし，洗浄後馬ウェルを切り離してLKB 8000γカウンターでカウントした．結果

1．bFGF mRNAの発現

培養したウサギVSMCより抽出したtotal

RNAを32P−bFGFフ．ローブでノ・イブリダイズすると，図1のごとく7．Okbの位置にバンドが認め

られた．Weichらの報告25）ではヒト，ウシの

VSMCは複数のバンドが認められているが，ウサ

ギVSMCではラットと同様単一バンドであっ

た，

2．bFGF mRNA， c・myc mRNAに及ぼす

PDGFの影響

PDGFをウサギVSMC培養液に添加し，経時

的に細胞よりtotal RNAを抽出してNorthern

一114一

(4)

bFGF灘懸懸灘鞭難鑛羅羅

q O 1 4 8 12 24 hours bFGF

・弼・一翻麟躍

bOO．511．523hours

_{図2 bFGF mRNA， c・〃z夕6 mRNAに及ぼすPDGF} の影響ウサギVSMCを0．1％BSA／DMEMで48時間培養し，half maximal unitのPDGFを含む新鮮な0．1％ BSA／DMEMに置換した． a：PDGF添加24時間後まで各時問毎に細胞を採取し，抽出したtotal mRNA 30μgをbFGF cDNAプローブでハイブリダイズした． b：PDGF添加3時間後まで各時間毎に細胞を採取し，抽出したtotal mRNA 30μgをbFGF cDNAプローブと。一吻夕。プローブでハイブリダイズした． bFGF

・・my・醗鳥総雛罪源闘

048122448hours

図4 bFGF mRNA， c一〃z夕6 mRNAに及ぼすIGF−1 の影響ウサギVSMCを0．1％BSA／DMEMで48時間培養し，30ng／m1のIGF−1を含む0．1％BSA／DMEMに置換した．IGF・1添加後各時間毎に細胞を採取し，抽出したto￡al mRNA 30μgをbFGF cDNAブローブと。一御ッ6プローブでハイブリタイズした．．量3 3 竃話2 ．窒蚕1 ￡ 0 ．5 1 15 2 3 h 図3 bFGF mRNA， c一〃z夕‘mRNAに及ぼすPDGF の影響写真2bに示した各プロットをデンシトメー万一で測定し，0時間の値を1とした相対的な値で示した．

blot法を行った． bFGF mRNAの発現はPDGF

によって促進され，添加1時間後最高レベルに達

した．4時間後以降は減少し，8時間後には前野

（0時間）のレベルに復した（図2a）．

次にPDGF添加後短時間のbFGF mRNAの

変化に着目し，c一〃名y6との関係を検討した． c一〃膨

mRNA， bFGF mRNAともにPDGF添加0．5時

間後に上昇し始め，1時間後には最高レベルに達し，3時間後前値（0時間）のレベルに復した（図 2b，図3）．．萎3 3 雲隻2 山．婁為1 歪

一．／＼．

014 8 12 24〔h）

．図5 bFGF mRNA， c・〃2夕6 mRNAに及ぼすIGF−1 の影響図4に示した各プロットをデンシトメーターで測定し，0時間の値を1とした相対的な値で示した．

3．bFGF mRNA， c・myc mRNAに及ぼす

IGF・1の影響

IGF−1を培養液に添加し，経時的に細胞より

total RNAを抽出してNorthern blot法を行っ

た．c・物76 mRNAはIGF−1添加1時間後，12時間

後で軽度に発現の増強がみられた．bFGF mRNA

はIGF−1添加後むしろ軽度抑制された（図3，図 4，5）．

4．培善上清中のbFGFのWestern blot

ウサギVSMCがbFGFを放出するか否かを検

討した．bFGFはヘパリンに強い親和性を有し，1

MNaClで解離せず，1．5Mないしそれ以上の濃

度のNaClで解離することが知らされている．そ

こで培養上清をヘパリンセファロースゲルにか

け，1M NaClで洗浄後ヘパリソセファロースに残存した分画にWestern blot法を行った．対照とし

て新鮮な0．1％BSA／DMEMを用いた．培養上清

には約32 kilodaltons（kD）の単一のimmuno一

(5)

kD

1

ii：1…灘

31

21．5レ 14．4レ 2 3 麹

漁裂

ゆまジ蒙

嘘饗

難

びミモくピおセ

辮馨繕

議

5二野、亭空 ’ 急“㌧急、牽・

kD

92．5レ

662レ

45 レ 31 レ 21．5レ 14．4レ 1 ₂ ₃

講

◎ b 図6 ウサギVSMC培養上清中bFGFのWestem blot 本文の方法によりWestern blot法を行った． a：1．recombinant bFGF（10ng），2．0．1％BSA／DMEM，3．培養上清 b：8M尿素で培養上清を処理し，同様にWestern blot法を行った．1．培養上清，2． 0．1％BSA／DMEM，3． recombinant bFGF（20ng） reactive bandが認められ， recombinantウシ

bFGF（約16kD）の約2倍のサイズであった。対

照にはバンドは認められなかった（図4a）。しかし

1M NaClで洗浄した後ヘパリンセファロースに

残存した分画を8M尿素で処理し，同様の方法で

Western blot法を行うとrecombinant bFGFと

同じレベルにバンドが認められた（図4b）．

5．培養上清中ir・bFGFの測定

RecombinantウシbFGFを用いて2−site

IRMAで標準曲線を作成した．測定感度は3pg／

アッセイであった． SubconHuentのウサギVSMC（105 cells／cm2）

を0．1％BSA／DMEMで48時間インキュベート

し，洗浄後新鮮な0．1％BSA／DMEM，または

PDGFを含む新鮮な0．1％BSA／DMEMに置換

してこれらに放出されるir−bFGFを測定した．

PDGF添加群，非添加群ともに0．5時間後には培

養液中にir−bFGFの存在が認められ，2時間後に

最高値を示し，PDGF非添加群は9時間後，

PDGF添加群は24時間後にほぼプラトーとなっ

た（図7）．またPDGF添加群は0，5時間後より非添加群に比べて高値を示し，2時間後には非添加群の約1．6倍であった．そして24時間後にほぼ同じレベルとなった．雪300 蕊

9

卸oo ε 捗羊1oo ．」 0 n＝3 X±SD

ll極＼＼ト＿．＿＿

『ゆヨ hours after medium change 図7 培養上清中bFGFの測定ウサギVSMCを0．1％BSA／DMEMに48時間置ぎ，新鮮な0．1％BSA／DMEMまたはPDGF（half maxi− mal unit／ml）を含む0．1％BSA／DMEMに置換した．以後経時的にir−bFGFを測定した． ●一●：PDGF添加群，●…●：PDGF非添加群， ↓：培養液置換．考察動脈硬化の初期病変，すなわちfatty streakで

はマクロファージが中心的役割を果たすが，

丘brous plaque， complicated lesionにおいては VSMCの増殖が主体をなしている4）．しかしfatty

streakを経ず五brous plaqueになる場合も実験

的に多く証明され26），VSMCの増殖を抜きにしては動脈硬化の発症，進展を推論することはできない．一116一

(6)

VSMCの増殖には前述のごとく種々の増殖因

子が関与し，それらの相互作用が重視されている

が，動脈硬化の発症の段階ではVSMC以外の細

胞からVSMCの内膜への遊走，増殖を促す因子

がparacrineに分泌され，動脈硬化の進展の段階

ではparacrine系で刺激を受けたVSMC自らが

autocrineに増殖因子を分泌し自律的な遊走，増

殖を繰り返すと考えられている27）．近年auto−

crine系が注目され， VSMCがPDGF様因子を産

生すること28）29）が報告されている．しかし，森崎

ら26）は自らが分泌するPDGFは一般に増殖活性

の弱いA鎖のホモダイマーであることなどから

増殖のaUtocrine系を担うものとしてPDGFだ

けでは不十分であるとし，SDGFの関与を提唱し

た．bFGFに関してはヒト，ウシ25），ラット30）の

VSMCでmRNAの発現がみられている．しかし

ながらVSMCにおいて増殖因子によるbFGF

mRNAの制御を検討した報告はこれまでになさ

れていない．今回著者はウサギVSMCもbFGF

mRNAを発現することを証明し， bFGFが動脈

硬化の発症，進展においてparacrine系のみなら

ず，autocrine系をも担う重要な因子として働く

可能性を示唆した．さらにbFGFの他の因子によ

る制御について検討した．

今回の実験ではPDGFがウサギVSMCにお

いて。・脚cmRNAの発現を増強させると同時に

bFGF mRNAの発現も増強させた． c一彫夕6は

protooncogeneであるが，同じくprotooncogene

である。一ルsと同様，その遺伝子産物はDNA結

合能を有するタンパク質であり，細胞増殖に必要な遺伝子のプロモーター領域に結合してその発現を制御していると考えられている31）．実際に種々の増殖因子の作用に先立って。一応夕6の発現が誘導されることが報告されており32）33），VSMCにお

いても増殖に際して同様の現象が報告されてい

る34）．

一品目GF−1はウサギVSMCにおいて細胞増殖

の際に上昇する。一船艦omRNAの発現を増強させ

たが，bFGF mRNAの発現は増強させなかった．

これらの現象によりPDGFとIGF−1のVSMC増

殖作用におけるメカニズムの違いが示唆された．

すなおち，PDGFのVSMC増殖作用の少なくと

も一部は内因性のbFGFを介するものであり，

IGF−1に内因性bFGFを介する作用はないと考え

られる．一般にPDGFが種々の因子の中で最も

VSMC増殖作用が強いとされているが，その理由

の一つとして，それ自体強いVSMC増殖作用を

有するbFGFの遺伝子の発現をPDGFが増強さ

せることが考えられた．

さらに著者はWestern blot法によってウサギ

VSMC培養上清中にir−bFGFを証明した． bFGF

が分泌のsignal peptidesを持たない35）∼37）ことからどのようなメカニズムで細胞内から分泌されているのか不明であるが，細胞外で細胞外基質と結合して蓄積されており，マクロファージなどの炎症細胞の産生するプロテアーゼにより細胞外基質の変性が起こると遊離されるのではないかと推測されている18）．しかし培養細胞がbFGFを放出す

るか否かについて報告者の見解は一定していな

い．bFGFが培養液中に放出されることを示唆す

る報告もみられるが38）∼40），Vlodavsky4Dらは殆ど放出されないと述べている．

著者の実験ではWestern blotで約32kDの位

置にir−bFGFのバンドが認められ， recombinant

ウシbFGFの約2倍のレベルであった．しかし8

M尿素で処理するとrecombinantウシbFGFと

同レベルの約16kDの・ミソドとなり，このことか

らウサギVSMCは培養上清中にbFGFを放出

し，そのbFGFはホモダイマーの形で存在するこ

とが示唆された．以前我々はウシ角膜内皮細胞，

astrocytoma由来のU87−MG細胞においても同

様のことを証明した25）．さらに今回ウサギVSMC 培養上清中のir−bFGFを定量し， PDGFによって

bFGFの放出が促進されていることを証明し得

た，

以上の結果はウサギVSMCがbFGF mRNA

を発現し，その発現がPDGFによって増強された

という遺伝子レベルでの現象とも合致している．

さらに遺伝子レベルの現象からbFGFが

VSMC増殖の際にautocrine因子として働くこ

と，PDGFのVSMC増殖作用のメカニズムの一

つに内因性bFGFを介する系が存在することを

(7)

推測．したが，培養上清におけるir・bFGFの存在．とその測定結果は上記の推測を支持するものであ．つた．結語

1．ウサギVSMCにおいてbFGFの遺伝子発

現とタンパク合成の．制御について検討した．

2．ウサギVSMCはbFGF mRNAを発現し，

その培養上清中にbFGFの存在が認められた．

3．PDGFによってbFGF mRNAの発現は。・

〃η6mRNAと．ともに増強したが， IGF−1によ？て

は。一締omRNAの発現のみ増強し， bFGF

mRNAの発現は増強しなかった．

4．培養上清中のbFGFはPDGFによって増

加した．

5．以上の結果より，1）．bFGFがVSMCの増

殖に際してautocrine因子として働くこと，2）

PDGFのVSMC増殖作用のメカ乱ズムの一つに

内因性bFGFを介する系が存在することが示唆

された．稿を終えるにあたり，御指導御校閲を賜りました：丸山勝一教授，竹．宮敏子教授に深謝申し上げます．また研究の機会を与えて下さると同時に御指導頂きましたマニト・ミ大学生理学教室H．G． Friesen教授に深謝申し上げます．文献 1．）吉田洋二，新開紘子，美原樹ほか：脳．脳動脈硬化性．病変の諸相．動脈硬化 6：409−420，1979 2）Weinstein R， Stemerman MB，皿aciag T： Hormonal requirelnent for growth of arterial smooth muscle cells in vitro：An endocrine apProach to atherosclerosis． Science 212： 818−820， 1981 3）Ross R， Glomset J， Klariya B et al：A PIatelet・dependent serum factor that stilnulate the proliferation of arterial smooth muscle cells in v圭tro． Proc Natl Acad Sci USA 71： 1207−1210， 1974 4）Ross R： The pathogenesis of atherosclerosis −An update． N Engl J Med 314：488−500，1986 5）Ross R， Rai狛es EW， Bowen・Pope I）F：The biology of platelet，derived growth factor． Cell 46：155−169， 1986 6）King GL、， Goodman DA， B腿zney S et a1： Receptors．and growth・promoting effects「of insulin and insulin・1ike growth factors on cells from bovine retinaユcapillaries and aorta。 J CIin． Invest 75：1028−1036， 1985 7）Clemmons DR， Van Wyk JJ：Evidence for．a functional role of endogenously produced somatomedin・like peptide in the regulation of DNA synthesis in cultured human飾roblasts and porcine smooth muscle cells． J CIin Invest 75：1914−1918，1985 8）Gospodarowicz D， Hirabayashi K， Giguere L et al： Factors controlling the proliferative rate，且nal cell density， and life span of bovine smooth muscle cells ill culture． J Cell．Biol 89： 568−578， 1981 9）Be2k 8C， Bmck TA， Webb RC et a匡：Epider・ mal growth factor， a vascular smooth muscle mitogen， induces rat aortic contraction． J CIin Invest 75：1083−1086，．1985 10）Wink16s JA， Friesel R， Burgess WH et a藍： Human vascular smooth muscle cells both． express and respond to heparin・binding growth factor 1（endothelial cell growth factor）． Proc Natl Acad Sci USA 84：7124−7128，1987 11）GospodarQwicz D， Cheng D， Lui GM et al： Corpus luteum angiogenic factor is related．to fibroblast growth factor． Endocrinology 117： 2283−2391， 1985 12）Ikeda U， Ikeda M， Ookara T et al： Mitogenic action of interleukin−1αon vascuiar smooth muscle cells mediated by PDGF． Ather− osclerosis 84：183−188， 1990 13）Libby P， Wyler DJ， Janicka MW et al： Differential effects of human interleukin・10n growth of human fibroblasts and vascular smooth muscle cells． Arteriosclerosis 5： 186−191， 1985 14）Assoian RK， Sporn MB：Type beta transfor． ming growth factor in human platelets．： Release during platelet degranulation and action on vascular smooth muscle cells． J Cell Biol 102：1217−1223，1986 15）Majack RA：Beta−type transforming growth factor specifies organizational behavior in vas− cular smooth muscle cell cultures． J Cell Biol 105：465−471， 1987 16）Morisaki N， Kanzaki T， Koshikawa T et al： Secretion of a new growth factor， smooth muscle cell derived growth factor， distinct from platelet derived growth factor by cultured rabbit aortic smooth muscle cells． FEBS Lett 230：186−190， 1988 17）Morisaki N， Koyama N， Mori S et al：一118一

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