拘束

52 0

金

沢

大 学 十 全 医学

会

雑 誌 第

9 6

巻 第

3

号

5 2 0

−

5 36 く 1 9 絢

拘束 ^． 寒冷 ^ス ト ^{レ ス に}対する自律神 経 ^一 内分 泌 系および

脳 内 神 経 伝 達 物 質 ^{の 応} 答

金沢 大 学 医学 部

公

衆 衛

生

学 講座 く主任

^こ

岡

田

晃 教 授I

綱 島 浩

く

昭

和

^{6 2}

年

³ 月 ^{2 0} 日

受 付ン

自律 神 経^一 内分 泌 系

や

脳 内神 経伝 達 物 質

が

異

な

っ

た ス ト ^{レ ス に} よ

っ

て ど の よ

う

な 反

応

を 示 す か

明

ら か に す る ^こ と は

，

ス ト レ ス に よ る

生 体 反応

の

発 現 機 序

を 理

解

す る

う

え で き わ め て

有

用 な

手掛

り を

与

え る と

考

え ら れ る

．

そ ^こ で

著 者

は

， 拘 束

^ス ト ^{レ ス} と

寒 冷暴 露 く寒 冷

^ス ト

^レ

^ス

う

を ラ ッ ト に

負 荷

し

， 自 律 神経 ^一 内 分泌 系

^{に お け る}

応答

と

脳 内 神 経伝 達 物 質

の

変化

を

調べ，

こ れ ら 二

種

の ^ス ト レ ス

間

の

差 異

^の

有 無

を

検 討

し た

．

本 研 究

で

取

り 上

げ

た ス ト レ ス は 3

時間

の

拘 束

と 4

⁸

C

，

3

時 間

の

寒 冷暴 露

で あ る

． 拘 束 群

の

体 温

は

時 間経 過

と と も に

低 下

し 3

時 間負 荷

の

後

^に は

約

4

^．

4

⁰

C

低 下

し た

．

一方，対 照群

^と

寒 冷

^ス ト レ ス

群

の

体温

は

大 幅

^な

変

勤

を 示

す

こ と な く

推移

し た

． 血 中コ

ル チ

コ

ス テ

^ロ

^ン

濃 度

は

， 拘 束

^ス ト ^{レ ス}

群

で は 1

時 間負 荷後

^に

著

し く 上

昇

し

，

3

時 間 負荷

ま で

高値

^の ま ま

推 移

し た が

， 対 照群

と

寒冷

^ス ト レ ス

負荷 群

で は 1

時 間後

^に 上

昇

し た も の の

，

そ の

後 低下 傾 向

を 示 し た

． 胃 潰 瘍

は

拘 束^． 寒冷

^ス ト ^{レ ス}

群

の

全 例

^に

発 現

し

，

し か も

発 現 部位， 大

き さ

，

重

症度

^は

両

^ス ト レ ス

間

で

差 異

は な か

っ

た

^． 拘 束^．寒 冷

^ス ト レ ス

群

の

全例

で の

胃 潰 瘍

の

発 生， 両

^ス ト

^レ

^ス

間

で の

^コ

^ル チ

^コ

ス テ

^ロ

^ン

分泌 反 応

と

体 温

の

推 移

の

違

^い は

， 自律 神 経 ^一 内 分泌 系

が ス ト レ ス に よ り

異

な

^っ

た

反応

を 示 す ^こ と を示

唆

し て ^い る

． 脳 内 神経 伝 達 物 質

の

応 答

を み る と

， 拘 束

^{ス ト レ ス}

負荷

で は

前頭 葉 皮質， 側

坐

核

^に お け る ホ モ バ

ニ

リ ン

酸 く

h

o m o v a n

i11i

c a c

i d

，

H V A

l 含 有 量

の

低下

と

側

坐

核5 線 条 体

で の ド

^ー

^パ ミ ン

く

d

o

p

a m

i

n e，

D A

l 代 謝

回

転

の

低 下， 他 方， 寒 冷

^ス ト レ ス

負 荷

で は

線 条 体

H V A

含 有 量

の

増 加

と

側

坐

核，

線 条体

D A

代 謝 回転

の

完 進傾 向

が み ら れ た

．

こ の

成 績

は

， 脳 内

D A

系

に

対

し て

拘 束

^ス ト ^{レ ス} が

抑 制 的

に

，

ま た

寒冷

^ス ト レ ス が

賦 括 的

^に

働 く

^こ と を 示 て ^い る

．

ま た

， 拘 束

^ス ト

^レ

^ス

群

で は

， 前頭 葉 皮 質

^{の セ}

ロ

ト

^ニ

^ン

く

5

⁻

h y d

r o x

y t

r

p t

a

m i

n e，

5

⁻

H T

l 含 有量

^の 上

昇

と

側

坐

核

5

^．

H T

含 有 量

の

低

下 が み ら れ た に

過

ぎ な か

^っ

た

． 他 方， 寒冷

^ス ト ^{レ ス}

負 荷

^で は

前 頭 葉 皮質， 側

坐

核， 線 条 体， 視 床 下 部

の 5

⁻

H T

代 講 回転

は

冗 進 あ

る ^い は

克 進 傾 向

を示 した

．

こ の

結果

は

， 寒 冷

^ス ト レ ス が

， 脳 内

^の

広範

な

部 位

で の 5

⁻

H T

系

^に

対

し て

長 時 間賦 括 的

^に

作 用

す る ^こ と を 示

唆

し て ^い る

^． 前頭 葉 皮 質

^の サ ブ ス タ ン ス P

様 免 疫 活性く^{s u}

b

s

t

a n c e

P

⁻

1i k

e

i

m m u n o r e a c

t i

v

i

⁻

t y

，

S P

^．

L I

l

は

拘 束^．寒 冷

^ス ト ^{レ ス} で

同 程 度低 下

し

， 側坐 核，

S P

⁻

L I は

拘 束

^{ス ト レ ス の み で}

低 下

し て ^い た

．

他

の 2

部 位

で の S P

⁻

L I に は

変 化

は

認

め ら れ な か

っ

た

．

こ の

結 果

^か ら

， 前 頭葉 皮 質，

S P

⁻

LI の

低 下

は

， 情 動 変 化

を

伴 う

^ス ト

^レ

ス に

特徴 的

な

変 化

と

考

え ら れ る

，

ま た

， 両 部 位

^の D A

代 謝

回

転

^に

関

す る

成 績

か ら

， 長 時 間

^{の ス} ト ^{レ ス}

負荷

^に よ る S P

⁻

L I の

低下

は S P 土工

生 合成

の

抑 制

^に よ る も の で は な ^い か と

推測

さ れ た

．

K

e y ^{w o r}

d

s

i

m m o

bili

z a t

i

o n s t r e s s

，

C

dld

e x p ^{o s u r e}

，

a u t O n O m

i

c n e r v o u s

f

u n c t

i

o n

，

e n

d

^{o c r}

i

n e

f

u n c t

i

o n

，

n e u r O t r a n S m

i

t t e r s

動 物

は

，

ス ト レ ス を

負荷

^{さ れ る こ と に よ}

^っ

^て

， 胃渡

る

．

ス ト レ ス に よ

っ

て

起

^こ る ^こ れ ら の

変 化

は

自律 神経 瘍

の

発 生， 胸 腺，

リ ^{ン パ}

節

の

萎 縮， 副 腎皮 質

の

肥 大

な

系， 内 分 泌 系

を

介

し ^て

引

き

起

^こ さ れ る

^{1 1}

が

，

さ ら に そ れ ど さ ま ざ ま な

生 体

反

応

を 示 す ^こ と が

良

く

知

ら れ て い ら を 上

位

^で

統 御 ^．調 節

し て い る の は

中枢 神 経 系

で あ

A b b

r e v

i

a t

i

o n s こ

D A，d

o p ^{a m}

i

n e ニ

E I A ，

e n Z y ^{m e}

i

m m u n o a s s a y 三

5⁻H I A A ，5⁻h

_y

d

r o

x

y

i

n

d

^o

l

e

⁻3^，

a c e t

i

c a c

id

_i

5⁻H T_， 5⁻h

_y

d

r o x y t

^r

y p t ^{a m}

i

n e i

H R P， h

o

r

s e r a

di

s

h

_p e r o

xid

a s e i

H V A ， h

o m o

^，

V a n

illi

c a c

id

_三

O P D

，

0

⁻

p

h

e n y

l

e n e

di

a m

i

_{n e}

dih

_y

d

_{r o c}

hl

o r

id

e 三 ^m

⁻R N A

，

m e S S e n g ^{e r r}

ib

o n u c

l

e

i

c

拘 束^．寒 冷

ス ト

^レ

ス に

対

す る

生 体

反

応

る

^り．

し た が

^っ

て

，

ス ト レ ス に

対

す る

生体

反

応

の

中

心

的

な

役割

を

果

た す の は

中枢 神 経 系

^で あ る と

言

え る が

，

そ の

中枢 神経 系

^が

持つ複 雑

な

機能

^の 基

盤

と な

っ

て い る の

は

， 化 学的

^メ

^ッ

^{セ ン} ジ ャ

^ー

に よ る

^{ニ ュ ー ロ}

ン

間

^の

情 報 伝達機構

で あ る

． 化学 的

メ

ッ

セ ン ジ ャ

^ー

で あ る モ ノ ア ミ ン は

， 古 典 的神 経伝 達 物 質

と し て

古

く か ら

知

ら れ て お り

，

ス ト ^{レ ス} と の

関係

で も ラ

ッ

ト を 用 い て

数 多

く の

研究

が

行

な わ れ ^{て い} る

． 例

え ば

， 拘 束

^ス ト

^レ

^ス

負荷

は

，

脳

^の

広範

な

部位

で ^{ノ ル}

^エ

ビ ネ ^フ リ ン く

^{n o r e}

p i

n e

p h

r

i

n e

N E

l

や ^セ

^ロ

ト

^ニ

^ン

く

5

^．

h _y d

r o x

y t

^r

y p t

a m

i

n e，

5

⁻

H T

l 代 謝

^の

元 進

を

引

き

起

こ す だ け で な く

^{2 ト 5ン}， 中 脳一

辺

線

ド

^ー

^パ ミ ^ン

く

d

o

p

a

m i

n e，

D A

l 系

^の

機 能 克 進

も

生

じ る

可能性

が 示

唆

さ れ て い る

⁶¹．

ま た

， 弱

^い

電 撃

を 用 ^い た f

o o

t

s

h

o c

k

s

t

r e s s

は

， 中脳一皮 質

D A

系

を

賦 活

し

，

D A

の

代謝

を

元 進

さ せ る と

報 告

さ れ て い る

⁷¹．

さ ら に

_，脳 内

モ ノ ア ミ ^ン

系

と

密 接

な

関連

を

持

^つ も ^{の に}

寒 冷 暴 露

が あ る

^．

と ^こ ろ が

， 寒 冷暴 露

と

脳 内

モ ノ ア ミ ^ン

系

^に

関

して は

， 体

温

調 節

と い う

観 点

か ら

， 専

ら

視 床 下 部

^{モ ノ} ア ミ ン

系

と の

関 連

で

研 究

が

行

な わ れ て い る

． 例

え

ば， 視 床 下部

^に 5

⁻

H T を

投 与

す る と

， 体 温

上

昇

が み ら れ る

^郎鋸，

あ

る い は D A の

投 与

は

体

温 ^の

低 下

を

引

き

起

^こ す と ^い う

^{1 011り}．

ま た

，

5

⁻

H T の

体

温 上

昇 作

用 は D A

系

を

介

す る と の

報告

も あ り

^{1 21}， 視 床下 部

5

^．

H T や D A

系

が

体 温 維 持機 構

^に

密 接

に

係

わ

^っ

て ^い る と

推 測

さ れ て い る

．

し か し

， 寒冷 暴 露

^に よ る

体 温 低 下

も

^一種

の ^ス ト

^レ

^ス

負荷

と

考

え ら れ る こ と か ら

，

そ の

際

^に

生 ず

る

脳 内

^{モ ノ} ア ^{ミ ン}

系

の

変化

は

視 床 下 部

に と ど ま ら

ず， 他

の

部 位

^に も

影 響

を

与

え る

可 能性

が あ る が

，

こ の

点

^に

関

し て は ^こ れ ま で ほ と ん ど

検 討

さ れ て ^い な ^い

．

と こ ろ で

，

上

述

し た

事 実

は

， 負 荷

す る ^ス ト

^レ

^ス の

違

い に よ

っ

て

， 脳 内

^{モ ノ} ア ミ ン

系

が

異

な

っ

た 反

応

を 示 す こ と を示

唆

し て

^い

る

0

し た が

っ

て

， 異

な

っ

た ス ト レ ス

負荷

^に よ る

脳 内

^{モ ノ} ア ミ ン

系

^の

変 化

を

調べ

る ^こ と は

，

ス ト レ ス に

対

す る

生体

反

応

の 理

解

を よ り

^一 層

深 め る う え で

，

き わ め て 重

要

な

手 掛

り を

与

え る と

考

え ら れ る

．

そ こ で

今

回

， 拘 束

^ス ト

レ

ス

_， 寒 冷 暴 露 く

以

下 寒 冷

^ス ト レ ス と

呼

ぶ

う

を

選

び

， 脳 内

モ ノ ア ミ ン

系

^に

対

す る 二

種

の ス ト

^レ

ス

間

^の

影 響

^に

^{つ い}

て 比

較^．検 討

す る こ と に し た

．

二

種

の ス ト レ ス は と も に

脳 内

^{モ ノ} ア ミ ン

系 全体

^に

影響

を及 ぼ す

可 能 性

が

高

^{い こ} と は 上

述

し た

通

り で あ る が

， 拘 束

ス ト

^レ

ス と

脳 内

N E

系

^に

関

し て は

既

^に

T

a n a

k

a

ら

^{1 j 2川}

に よ る

詳 細

な

検

討 が あ る の で

_， 今

回 は

脳内

D A お よ び 5

⁻

H T

系

^に

集点

を

絞っ

て

検 討

し た

^．

な お

，

ス ト ^{レ ス}

負荷

^に よ る

自 律神 経 ^一内

分

泌 系

^の

応答

の

a c

id

_i

N E，

n O r e P i ^{n e} p

hri

n e ニ

S P _，

S u

b

s t a n c e

P

_ニ

V T A，

V e n t

r

a

l

t e g ^{m e n} t a

l

_{a r e a}

．

5 21

指標

と し て 血

中コ

ル チ

^コ

^ス テ

^ロ

ン の

変 化

と

胃 渡瘍

の

発

生

頻 度

を

調べ

る と

同 時

^に

体温

^の

変化

も

調^べ，

二

つ

の ^ス ト レ ス

負荷 時

^の 反

応 性

の

適

い に つ い て

考察

を

加

え た

0

脳 内

に は モ ノ ア ミ ン な ど の

古典 的神 経伝 達物 質

の

他

に

多

く の

種 類

の

神 経

^ペ プ チ ド が

存 在

し

，

そ れ ら は

ニ ュ ^ー ロ

ン

間

の

情 報 伝達 機構

^{に お い} て

， 神 経伝 達 物 質

ま た は

神 経 調節 物 質

^{と し て}

働

^い て い る と

推 測

さ れ て ^い る

^用．神 経

^ペ プ チ ド の

中

^に は

，

D A や 5 月 T の

放 出

^に

影 響

を

与

え る ^ペ プ チ ド の

存 在

が

報 告

さ れ て る

．

ラ

ッ

ト

脳 内

^に

広

く

分 布

す る サ ブ ^ス タ ^{ン ス} P

くs u

b

s

t

a n c e

P

，

S P

l

は

，

D A に

対

し て

賦 清作

用 を

持っ

て ^い る ^こ と が 示 さ れ て ^い る

^{叫 瑚．}

こ の

他

^に S P は

，線 条体

で 5

^t

H T

放 出

も

促進

す る

^岬．

さ ら に S P と 5

⁻

H T は

縫線 核

^で

共存

し て ^い る と の

報 告^川

も

あ

る

．

こ れ ら の

報 告

は

，

S P が D A や 5

⁻

H T の

調 節

^に

関与

す る ^こ と を 示

唆

し て い る

．

し た が

^っ

て

，

こ の

神経^ペ

プ チ ド は

， 脳 内

D A

_，

5

^．

H T の

変^化

に

伴^っ

^て そ の

動 態

も

変化

す る と

想 定

さ れ る が

，

ス ト

^レ

ス

負 荷

^に

際

し て の S P の

動態

は

未

だ

明

ら か ^に さ れ て ^い な い

．

そ こ で

本研 究

で は

， 拘 束

お よ び

寒 冷

の 二

種 類

^の

ス ト ^{レ ス} を

負荷

し た

際

の

脳 内 各 部位

^{に お} け る S P

含 有 量

を

測定

し

，

D

A

5

⁻

H T の

検 討

で

得

ら れ た

結 果

と

合

わ せ て

，

二

_つ

の ス ト レ ス

負荷 時

の

生 体

の

反 応性

の

遠

い に つ い て

考 察

を

加

え た

．

対 象

^お よ び

方 法

工

． 実 験 動 物

対 象

は

第

9

^勺

1 0

適 齢 く体 重

3 ¹ 3 士3

^．

8 g

l

の W i

s

t

a r

系 雄 性

ラ

ッ

ト

く

3 5 匹

フ

で

あ

る

． 各

ラ ッ ト は

実 験 開始 前

1

週 間， 固 形飼 料 く

日

本

ク ^レ ア C E

⁻

2

1

お よ び

水

が

自 由

に

摂 取可 能

な ホ

^ー

ム ケ

^ー

ジ に 入 れ

，

1 2

時 間周 期

の

明 暗

サ イ ク ^ル

飼 育室 く室 温

2 2 士 2

⁰

C

， 湿度

^{4 5}

％う

で

飼 育

し た

．

工 工

．

血

液 採取

^の た め ^の 手

術

各

^ラ

ッ

ト に

ペ

ン ト ^{パ ル} ビタ

^ー

^ル

く

6 0

m

g

l

k g

l 麻 酔 下

で

採

血 の た め の カ テ

^ー

テ ル

挿

入

手術

を

施

し た

^． 採

血 用 カ テ

^ー

テ ル に は

，

Cl

a

y A d

a m s 社製

P E

⁻

1 0

く内径

0

^．

2 3

m

l

外 径

0

^．

3 8

m ml ，

P E

⁻

5 0

く内 径

0

^．

2 8

m m 外 径

0

^．

61

m mフ

ポ リ

^エ

チ

^レ

ン チ

^{ュ ー}

ブ に

熱

を

加

え て

接 着

し た も の を 用 ^い た

^．内 外 径

の

細

^い P E

^t

l O は

大 腿動 脈 内

^に

挿

入 し

， 内 外径

^の

太

い P E

^．

5 0 は

皮 下

を

通

し て ラ

ッ

ト の

頸 部 背 側

よ り

引

き

出

し た

．

そ の

後，

0

．

1

％^ヘ

^パ リ ン 入 り

生

理

食 塩 水

を カ テ

^ー

テ ル に

封

入 し

，

ラ

ッ

ト の

頸 部 背側

よ り

引

き

出

し た カ テ

^ー

テ ル

端 く

P E

⁻

1 0

う

を

皮膚

^に

固定

し

， 手 術

を

終

え た

．

S P ⁻L I，

S

ub

s t a n c e

P⁻1ik

e

i

m m u n o r e a c t

i

v

i

_{t y ニ}

5 2 2

HI

^．

ス ト レ ス

負 荷 実験

D A

，

5

^．

H T

測 定

の た め の

実 験

は

， 拘 束

^ス ト

^レ

^ス

負荷 実験 く

5 匹

う

と

寒 冷

^ス ト

^レ

^ス

負荷 実験 く

5 匹

1

の 二 回 に

分

け て

行

^い

， 各

^ス ト レ ス

群

^で

得

ら れ た

成 績

は

同 時

^に

行っ

た

対 照群 く各

々 ^ス ト レ ス

負 荷 実験

^{に つ い} て 5 匹

ず

つ

う

の そ れ と

比 較

し た

^．

な ^お

， 拘 束

^ス ト ^{レ ス}

負荷 実験

は 1 1

月， 寒 冷

^ス ト レ ス

負荷 実 験

は 8

月

^に

行^っ

た

．

ま た サ ブ ^ス タ ン ス P

様 免 疫 活 性 くs u

b

s

t

a n c e

P

⁻

L ik

e

I

m m tl n O r e a C

t i v i t y

，

S P

⁻

L I

l 測 定

の た め の

実 験

は

， 対 照 群 く

5 匹

う， 拘束

^ス ト レ ス

群 く

5 匹

フ， 寒 冷

^ス ト

^レ

^ス

群 く

5 匹

1

の

実験

を

同時

^に

行

^い

， 得

ら れ た

成 績

は

対 照 群

の そ れ と

比 較

し た

^．

手 術後，

ラ ッ ト の

体 重

が

術 前

の

体 重

ま で 回

復

す る の を

待っ

て

，

ス ト レ ス

負荷 実験

を

行

な

っ

た

．

ラ

ッ

ト は ス ト

^レ

^ス

負荷 開始

2 4

時間 前

よ り

絶 食

さ せ た が

，水

は

自 由

に

摂 取

さ せ た

． 実 験 開 始

は

午 前

1 0

時

1 5

分^へ

1 1

時

4 5

分

の

間

と し た

．

ス ト レ ス

負 荷直 前

^に

， コ

ル チ

コ

ス テ

ロ

ン

測 定

の た め の

採 血 く

0

^．

6

m

l

う

と

体 温

^の

測 定

を

行^っ

た

．

体 温

は

，

サ

^ー

ミ ^ス タ

ほ 浦 電

子

製 作 所，

T y p

e

P T

l

を

肛 門

^か ら

約

5

c m 挿

入 し

，

サ

^ー

ミ ス タ

温 度 計 く芝 浦 電

子

製作 所，

M

o

d

e

l

⁻

M G A III

l

を 用 ^い て

測 定

し た

．

1

^． 拘 束

^ス ト ^{レ ス}

拘束

^ス ト レ ス は

，

B

u

tt

e r

fi

e

l d ら ^の

方 法^l

叫 こ

準

じ て

負 荷

し た

^．

ラ ッ ト の

前 肢

と

後 肢

を

麻 紐

^で

縛

り

， 木製

の

台 上

に て

左 側 臥位

^に

固 定

し

，

上 か ら

網 戸

用 の

網 く合 成 樹 月旨製う

を

被

せ て

頭 部

お よ び

体 幹

の

動

き を

抑 制

し た

^． 拘 束

^ス ト レ ス

負荷

は 3

時 間

と し

， 負 荷 中

は

水

^お よ び

飼 料

を

摂取

さ せ な か

っ

た

．

こ の

間， 留 置

し た カ テ

^ー

テ ル か ら 1

時 間毎

^に

採

血 し

く

0

．

6

mり， コ

ル チ

^コ

^ス テ

^ロ

^ン の

測 定

^に

供

した

．

ま た

， 採

血

直 前

^に

月

工

門

^に サ

^ー

ミ ス タ を

挿

入 し

体 温

を

測 定

し た

．

2

． 寒冷

^ス ト ^{レ ス}

各

ラ ッ ト を

床 敷

き 用 の

木製

チ ッ プ を

取除

^い た ホ

^ー

ム ケ

^ー

ジ

中

に 入 れ て

，

4

⁰

C

定温 宴

に 3

時 間放 置

^{し た}

^．

^そ の

間，

1

時 間毎

^に

拘 束

^ス ト

^レ

^ス

群

と

同様

^に 0

^．

6

m

l の

採 血

と

体 温

の

測 定

を

行

な

っ

た

． 拘 束

^ス ト レ ス と

同

じ く

負 荷 中水

お よ び

飼 料

^は

摸 取

さ せ な か

っ

た

．

な お

，対 照群

の

各

ラ

ッ

ト は

，木 製

チ ッ プ を 入 れ た ホ

^ー

ム ケ

^ー

ジ

中

^で

最 初

^の

採 血

と

体温

^の

測 定

を

行

な い

，

そ ^の

後，

3

時 間 室温

に

放 置

した

．

そ の

間

^ス ト

^レ

^ス

群

と

同 様

に

_，

1

時 間 毎

の

採 血

と

体 温

の

測定

を

行

な

^っ

た

^．

な ^{お ス} ト ^{レ ス}

群

と

同様

に

， 水

お よ び

飼 料

の

摂 取

は

中

止 し た

^．

I V

． 屠 殺 方法

お よ び

脳

^の

取 出

し

拘束 群， 寒冷 群， 対照 群

と も に 3

時 間目

^の

採血 直 後

に

_m

i

c r o 波加 熱 装 置 く東 京 芝 浦電 気 株 式 会 社

T M W

⁻

6 4 0 2

1

を

使 用

し て

屠 殺

し た

． 直

ち に

全 脳 く嘆 球

を

除

く

う

を

取

り

出

し

，

−

70

⁰

C で

保 存

した

．

V

^． 胃 潰 瘍

上

記

の

方 法

で

屠殺

し た ラ

ッ

ト の

腹 部

を

解 剖

し

， 胃潰 瘍 発 生

の

有 無

を

調べ

た

^． 胃潰 瘍

の

評価

^に は

，

B h

a r

g

a v a

ら

^湖

の

u

l

c e r

i

n

d

e x

を 用 ^い た

．

IV

．

脳 ^の 分

割 方 法

−

7 0

⁰

C で

凍 結 保存

し た

脳

を

解 凍

し

， 氷

上 で 1

m m

の 厚 さ の

全 額 断

の

切 片

を

作 製

し た の ち

， 視 床 下

寺

弧 線条 凧 側 坐 核

を M

a r

l

e

y ら の

方 法^{2 0}

厄

従っ

て

直 視

下 で

内 径

2

m m

の ^{パ ン} チ ア ウ ト 用 の

針

を

使

用 し て パ ン チ ア ウ ト し た

． 前 頭 葉 皮 質

は

， 前 頭葉 先 端

か ら 2

m m

の

切 片

で

， 喚索

を

除

^い た

部 位

を 用 ^い た

．

刊L ド

^ー

パ ミ ン

く

D A

l

お よ ぴ セ

^ロ

ト

^ニ

^ン

く

5

^．

H T

l

と そ れ ら の

代謝 産物

^の

測 定

同 ^一

の

脳 組 織

か ら

，

D A お よ び 5

⁻

H T と

，

D A の

代 謝 産 物

で あ る ホ ^{モ バ}

^ニ

リ ^ン

酸 く

h

o m o v a n

illi

c a c

id

，

H V A

l，

5

⁻

H T の

代謝 産 物

で

あ

る 5

⁻

h _y d

r o x

y i

n

d

o

l

e^．

3

^L

a c e

t i

c a c

id

く

5

⁻

H I A A

l

を

測 定

し た

． 測 定

^に は

電気化 学 検 出 器付 高速 液 体

ク

^{ロ マ}

ト グ ラ ^フ

く

H P L C

⁻

E C D l を

使

用 し た

．

な お

，

D A と 5

⁻

H T の

測定

^に は Y

a n a c o

し 5 0 0 0

く柳 本 製 作 所

^こ

検 出 器

V M D

⁻

50 1

l，

H V A

，

5

^．

H I A A の

測 定

^に は Y

a n a c o

L

⁻

2 0 0 0

く柳 本 製 作 所 製

こ

検 出器

V M D

⁻

1 01

1

を

使

用 し た

．

1

．

D A

，

5

^t

H T の

測 定 い

イ オ ^ン

交換 樹 脂

の

調 整

陽

イ オ ^ン

交 換樹 脂

と し て

，

A

m

b

e r

li t

e

C G

⁻

5 0

く

t y p

e

II

l

を 用 い た

．

A

m

b

e r

li t

e

を 2 N N

a

O H

，

2 N H C I で

交互

に 2

回洗 浄

し

，水 洗 後，

0

^．

1 M リ ^ン

酸 緩衝 液 く

p 王 i 6

^．

1

1 中

^に 4

^O

C で

平 衡 化

し た

．

A

m

b

e r

li t

e 約

¹ 00

^m

g は

先端

^に ポ リ プ

^ロ

ピ レ ン

綿

を

詰

め た ガ ラ ス カ ラ ム

く内径 約

2

m ml

に 入 れ

，

D A

，

5

⁻

H T の

分 離 ^．精 製

^に

使

用 し た

．

2

1

D A

，

5 月 T の

測 定

脳 組 織

^に 0

^．

4 N 過

塩 素 酸 く

P C A

H

O

^．

1

m

M E D T A を

含

む

1

2

m

l と D A

，

5

⁻

H T お よ び H V A

，

5

⁻

H I A A の

内 部 標 準

と し て そ れ ぞ れ dih y d

r o x

y b

e n z

y l

a

m i

n e

く

D H B A

1

4

^．

9

n

g

，

p

⁻

h y d

r o x

y p h

e n

y l

a c e

t i

c a c

id

く

P H P A

う

7 5 0

n

g を

加

え た

．

そ の

後， 超 音 波 破砕

を

行

な

い

， 遠

心

分離 く

⁴

^O

C

，

1 30 0 0

r

p

m ，

2 0

m

i

nl

し た

． 沈溶

は

組 織 蛋 白

量 の

測 定

に

供

し た

^．

上

清

に は

，

1

^．

5

^m

l の 0

．

4 M K

2

C O

，く

0

^．

1

m

M E D T A を

含

む

1

を

加

え て p H を 6

．

5 に

調 整

し

， 再

び

遠

心

分 離 く

4

^O

C

，

3 0 0 0

r

p

m ，

5

m

i

ⁿl

を

行

な ^い

，

そ の 上

清 全

量 を A

m

b

e r

li t

e

カ ラ ^{ム に}

通

し

，

D A

，

5

⁻

H T を 吸

着

さ せ た

． 通過 液

は H V A

，

5

⁻

H I A A の

測 定

^に

供

し た

．

翌 日

，

0

．

6 M H C I

く

0

．

1

m

M E D T A を

含

む

1

0

^．

8

m

l で D A

，

5

⁻

H T を

溶 出

し

，

6 0 J

L

l を H P L C

⁻

E C D ^に

注

入 し た

．

そ れ ぞ れ ^の 回

収 率

は

約

95

％

で あ

^っ

た

．

な お

，

D A

，

5

^．

H T の

分 離^．精製^．溶 出

^の

全 裸作

は

，