溶連菌溶 毒 素 及 す 響 影

溶連 菌 溶^血毒素^に及 ^ぼす ^ペ

^ニ

^{シリ ン の} 影響^{に つ い て}

金

沢

大学 医学 部 薬

理

学 教 室

(

主

任 ^: 正 印

達教 授

)

姫 野 洋

( 昭

和

^{5 8}

年

⁴ 月 9 日

受付)

溶 連 菌

S u

株 (

S u

菌)

を ^ペ

^ニ

^シ リ ^ン G と

共

に 3 7

⁰

C

,

つ い で 4 5

⁰

C に イ ン キ

^エ

^ペ

^ー

卜 す る と

, 同菌

^{の ス} ト ^レ プ ト リ ジ ン S

(

S t r e p t o l y s i n S

,

S L S

) 産 生 能

が

完 全

^に

抑 制

さ れ

, 制

が ん

能

が

増 強

さ れ る

.

こ の こ と か ら

,

S L S

産 生 能,

S L S の

溶

血

活 性

な ら び に S u

菌体

を

破 壊

し て え ら れ る

無 細胞 抽 出液

^の 上

浦液 (

C F E

‑

^S

)

に み ら れ る

菌体 内溶 血 毒 素 (

I n t r a c e 11 u l a r h e m o l y s i n

,

I C H

)

に

対

す る ^ペ

^ニ

シ リ ン G の

影 響

^{に つ い} て

検討

が

行

わ れ た

.

S u

菌

の

生 食 水 浮遊 液

^{に ペ}

^ニ

^シ リ ^ン G

( 作

用

演 度

1 ^× 1 0

⁵

U

/

m l

)

を

加

え て 3 7

⁰

C に 5 0

分 間 静置

す る と

, 同処

理

菌

の S L S

産 生

は

完 全

に

抑 制

さ れ

,

ま た I C H の

活 性

も

低 下

し て い た

^.

ま た

,

ペ ニ シ リ ^ン

非処

理 S u

菌

か ら の I C H を ^ペ

^ニ

^シ リ ン G と

共

^に

静 置

す る と I C H の

活 性

は

急速

^に

低 下

し

,

こ の

減 弱 度

は ^ペ

^ニ

シ リ ^ン G の

濃度

が

高

^い ほ ど

強

か っ た

.

こ の ^ペ

^ニ

シ リ ン G に よ る

抑 制作

用 は

,

ア ン ピ シ リ ン

_,

セ フ _ァ リ ジ ^ン お よ び セ フ ォ タ キ ^{シ ム に} よ ^っ て も み と め ら れ た

.

C F E

^‑

S を さ ら に

遠

心

(

1 5 ^× 1 0

⁴

g

,

6 0

分)

し て え ら れ る 上

清 液 中

^に み ら れ る I C H も

,

C F E

^‑

S

中

の I C H と

同様

^ペ

^ニ

^シ リ ^ン G に よ ^っ て 不

活 性 化

さ れ た

.

こ れ に

対

し

,

S L S お よ び I C H と R N A の リ ボ ヌ ク ^レ ア

^ー

ゼ

抵 抗 性 画分 (

c o r e

)

を

作

用 さ ^せ て

形 成

し た I C H

‑

^{C O r e C O m}

^‑

p l e x の

溶 血活 性

は

,

ペ

^ニ

シ リ ^ン G ^に よ っ て

全 く影 響

を 受 け な か っ た

.

ペ ニ シ リ ン G

処

理 I C H に C O r e を

加

え て 3 7

⁰

C に

静 置

す る と ^ペ

^ニ

シ リ ン G

処

理 ^に よ っ て

減 弱

し て ^い た

活 性

は

約

4

倍 増 強

さ れ

,新

た ^に

溶 血 物質

^が

形成

さ れ た と

考

え ら れ た

.

c o r e と ^ペ

^ニ

シ リ ン G の

混 液

に I C H を

加

え て 3 7

⁰

C に

静 置

す る と

,

ペ ニ シ リ ン G

を

加

え

ず

^に c o r e と I C H を

作 用

さ せ た の と

同様

^に

溶

血

活 性

は

増 強

さ れ た

.

こ れ ら の こ と か ら

,

ペ

ニ

シ リ ン G

は I C H を

不 活性 化

す る が

, 菌体 外 溶 血 毒 素

と し て ^の S L S お よ び I C H

^‑

C O r e C O m p l e x を 不

活 化

し な い こ と と

,

S L S な ら び に I C H

‑

^{C O r e C O m} p l e x と I C H と は

化 学 的

に

異

な る も ^の で

あ

る こ と が

明

ら か ^に さ れ た

.

K

e y ^{w o r}

d

s

H

e m o

l

_{y t}

i

c s t r e p t ^{o c o c c}

i

,I

n t r a c e

ll

u

l

a r

h

e m o

l

_y s

in ,

S

t r e p t ^o

l

_y s

i

n

S

,P

e n

i

c

illi

n

ス ト ^レ プ ト リ ジ ン S

(

S t r e p t o l y s i n S

,

以

下

S L S と

略 記) 産 生 能

を

有

す る

抗

が ん

性 溶 連 菌

S u

株

を ^{ペ ニ シ} リ ^ン G

加

B e r n h e i m e r

,

s b a s a l m e d i u m

^l

) に

浮 遊

さ せ て

加 温 処

理 す る と

, 処

理

菌

の

抗

が ん

活 性

は

増 強

す る の に

対

し

,菌 増殖 性

と

共

^に S L S

産 生

も

消 失

ま た は

著

し く

減 弱

す る ^こ と が

岡本

ら

²

⁾

³

⁾ に よ ^っ て

報 告

さ れ て ^い る

.

こ の

実験

^{で の} B e r n h e i m e r

,

s b a s a l m e d i u m の

組 成

^お よ び

浮遊 液

の

種 類

な ら び ^に

温 度 処

理

条 件

な ど の S L S

産 生 能

お よ び

抗

が ん

能

^に

及

ぼ す

影 響

^{に つ い} て は く わ し

く 検 討報 告

さ れ て ^い る が

,

ペ

ニ

シ リ ^ン G の S L S

産 生

に

対

す る

抑 制 的影 響, 殊

に そ の

作 用機 序

^{に つ い} て は ほ と ん

ど ふ れ ら れ て ^い な い

.

一方, 溶連 薗

^の

溶血 毒 素

^は

菌体 外

^に

産 生

さ れ る

溶 血 毒 素

と

菌 体 内

^に み ら れ る

菌 体 内 溶 血 毒 素 (

I n t r a

^･

I

n

fl

u e n c e o

f P

e n

i

c

illi

n u p ^{o n}

H

e m o

l

_y s

i

n o

f

c e ll u l a r h e m o l _y s i n

,

I C H と

略 記)

と に

大 別

さ れ

, 菌体 外 溶 血 毒 素

^{に つ い て} は 1 9 38

年

O k a m o t o

⁴

) が リ ボ

核酸 加

ブ イ ^ヨ ン

血 液 寒 天 培 地

で

溶 連 菌

S u

株

を

培 養

す る と

大

量 の S L S が

産

生 す る ^こ と

,

す な わ ち

核 酸 効 果

を

見出

し て 以

来

S L S に つ い て の

数 多

く の

研 究

が

国 外 国内

^よ り

発 表

さ れ て ^い る

^.

^こ れ に

対

し I C I1

⁸

⁾ に つ い て の

報告

は

少

な か

^っ

た が

, 実 験 方 法

^の

進 歩

^に と も な ^い

, 近 年

に な

^っ

^て

幾

つ か の

知 見^{9 )}

を み る に 至

っ

た

.

し か し

,

S L S と I C Il の

関係

^{に つ い} て は 不 明 の

点

が

多

く

,最 近林^{1 0 )}

はi n v i t r o で I C Il ^に リ ボ

核 酸

^の リ ボ ^ヌ ク レ ア

^ー

ゼ

抵 抗性画 分

R N a s e c o r e を

作

用 さ せ た I C H

^‑

R N a s e c o r e c o m

^▲

p l e x の 理

化 学 的性 状

が S L S と

類 似

し て い る ^こ と を

報 告

し

, 両 者

の

関係

は

漸

く

明

ら

や^ゝ

^{に な}

^っ

^{て き て い る}

^･

^こ

れ ら の ^こ と か ら

本 実 験

で は ^ペ

ゝ

シ リ ン G の S L S

産

生

H

e m o

l

_{y t}

i

c

S

t r e p t ^{o c o c c}

i. Y

o

i

c

h i H i

m e n o

,

I)

e p ^{a r} t m e n t o

f P h

a r m a c o

l

o g y

, S

c

h

o o

l

o

f M

e

di

c

i

n e

, K

a n a z a w a

U

n

i

v e r s

i

_{t y}

.

溶 連 菌 溶 血毒 素

^に

及

ぼ す ^{ペ ニ シ} リ ^ン の

影響

に

対

す る

影響

^の

作

用

機 序

を

明

ら か に す る た め

,

I C H

,

S L S ^お よ び I C I 十 R N ^{a s e c o r e c o m} p l e x に

対

す る ^ペ

^ニ

シ リ ^ン G の

影 響

^に つ い て

検 討

を

行^っ

た

^.

材 料

お よ び 方 法 1

. 溶 連 菌株

実 験

^に は

教 室 保 存

^の

抗

が ん

性

A

群 溶 連 菌

S u

株

( A T C C 21 0 6 0

,

t y p e 3

,

S L S お よ び ス ト ^レ プ ト リ ジ ン 0 を

産生,

以

下 単

^に S u

菌

と

略記)

を

使

用 し た

｡

S u

菌

の

継代培 養

^{に は}

普 通 肉 汁

ブ イ ^{ヨ ン}

(

p H 7

^,

2

)

を 用 ^い た

.

2

^.

3

% 酵 母

^エ キ ス

培地 (

以

下

Y E

培 地

と

略 記)

S a k u r a i ら

^{1 1}

⁾ の

方 法

に よ っ て

作 製

し た

^.

す な わ ち

,

ビ

ー

ル

酵母

^エ キ ^ス P 2 G

(

^{エ ビ} オ ^ス

薬 品

工

業株式 会 社)

3 0 g を

蒸留 水

1

,

0 0 0 m l に

溶解

し

,

p H を

苛 性

ソ

^ー ダ液

^に て 7

^.

4 に

調 整

し た の ち

,

1 0 0

⁰

C に 6 0

分 間加 熱

し

,

そ の

炉液

の p H を

再 調 整後 更

^に 10 0

⁰

C 6 0

分 間加 熱

し て か ら 3 回

折過

を

行

^い

,

え ら れ た

炉液

を 5 0 0 m l

宛

^に

分 注

し

,

1 00

⁰

C 3 0

分 間滅 菌

し た

^. 培 地

は

実験

の ^つ ど

作 製

し た

^.

3

^. 前培 養培 地

Y E

培 地

2 5 m l に

普 通 肉 汁

ブ イ ヨ ン 2 5 m l を

加

え

滅 菌

し た も の を

前培 養 培 地

と し て 用 ^い た

^.

4

.

S u

薗

^の

培 養

前培 養 培地

5 0 m l に S u

薗

の

普 通 肉汁

ブ イ ^{ヨ ン}

培 養 液

1 m l を

接 種

し て

,

3 7

⁰

C で 1 8

時 間 培 養

し た も の を Y E

培 地

5 0 0 m l に

接 種

し て

,

3 7

⁰

C で 2 4

時 間 静 置 培 養

し た

.

5

^.

S u

薗

の

無細 胞 抽 出 液 (

c e 11 f r e e e x t r a c t

, 以 下

C F E と

略記)

^の

作製

S h o i n

^{1 2}

) の

方 法

^{に よ っ て C F E} を

作 製

し た

^.

す な わ ち

,

S u

菌

の Y E

培 地 培 養 液

5 0 0 m l を

低 温 下

で

遠

心 し

,

沈

澱 し た

生 菌体

を

冷

生 理

食 塩 水 (

以

下 生 食 水

と

略記)

で 2 回 洗 浄 し た の ち

,

2 0 m l の

蒸 留水

^に

浮 遊

し た

^.

^{つ い} で こ の S u

薗浮 遊 液

を

細 胞 破 壊

用 ガ ラ ス

瓶 (

ブ ラ ウ ン

社 製, 容

壷 5 0 ^m l

)

^に 入 れ

,

こ れ に ガ ラ ス

粒 ( 直 径

0

^･

1 0

^〜

0

･

1 1 m m

,

ブ ラ ウ ン

社 製)

3 0 g を

加

え て セ ル ホ モ ジ ナイ ザ

^ー

( ブ ラ ウ ン

社製)

^に て

炭 酸

ガ ス

噴 霧下

で 4

,

仙O r p ^m 2

分 間

2 回

計

4

分 間

ホ モ ジ ナ イ ズ し た

.

つ い で ホ モ ジ ネ

^ー

ト

液

を ガ ラ ^ス

炉過 器

G 2 で

炉過

し

,

ガ

ラ ス

粒

を

除

い た

炉 液

を

低温 下

^で

遠

心

^､(

¹ 5

,

0 0 0 _{× g}

,

1 5

分 間

) し

, 分離

し た 上

清 液

を C F E

T

^S

,

沈

澱 物

を C F E

^‑

P と し た

^.

I C H は こ れ ま で の

報 告^{1 0}

^{) か ら C F E}

^‑

^{S に}

存 在

し

,

C F E

^‑

S の

溶

血

性

は I C H に よ る ^こ と が 示 さ れ て ^い る こ とか ら

,

C F E

^‑

S を I C H と し て

実験

^に 用 ^い た

.

6

1

リ ボ

核 酸 分 画 標 晶 (

^{R ib o n u c l e a s e}

‑

r e S i s t _{a n} t f r a c t i o n

,

以

下

R N a s e c o r e ま た は c o r e と

略 記)

の

調 製

B e r n h e i m e r & R o d b a r t

^{1 3}

⁾ の

変 法

^に よ り R N a s e

4 61

C O r e を

作 製

し た

.

す な わ ち

, 酵 母

リ ボ メ タ レ イ ^ン

酸

ナ

ト リ ウ ^ム

(

メ ル ク

社 製)

1 0 0 g を

蒸 留水

8 0 0 m l に

溶解

し

,炭酸

^ソ

^ー

ダ

液

で p H を 7

^.

6 に

調 整

し た の ち

,更

に

蒸 留水

を

加

え て

全量

を 1

,

00 0 m l と し た

.

こ れ に リ ボ ^ヌ ク レ ア

^ー

ゼ

(

5 回

結 鼠

N B C o

)

1 0 0 m g を

加

え て

室 温

で p E を 7

^･

4 か ら 7

^･

6 に

調 整

し な が ら 2 ⁴

時 間 静 置

^{し た}

^.

つ い で

同 容 液

^に

酪 酸

ソ

^ー

ダ 1 0 0 g を

加

え て

溶 解

し た の ち

,

9 9

%

^エ タ ノ

^ー

ル 74 0 m l を

加

え

,生

じ た

沈澱

を

遠 心

に よ り

集

め

,

エ タ ノ

^ー

^ル で 2

臥

^エ チ ^{ル エ}

^ー

テ ^ル で 1 回

洗 浄

し た の ち R N a s e c o r e と し て

実験

^に 用 ^い た

^.

7

^･

I C H

^‑

C O r e C O m p l e x の

作製

I C H と し て の C F E

^‑

S l

容 量

^に 2

%

R N a s e c o r e

生 食水

1

容 量

を

加

え た

混 合 液

^{を 3 7}

^q

^{C で 6 0}

分 間 静置

し た も の を I C H

^‑

C O r e C O m p l e x と し て

用

^い た

.

I C H

^‑

C O r e

C O m p l e x の

溶 血 力

は C F E

^‑

S l m l

当

り の

溶 血 力

^に

換

算

し て 5 0

% 溶血 単 位 (

H U

/

m l

)

で

表

示 し た

^.

8

.

ペ ニ シ リ ン

標 品

ベ ン ジ ^{ル ペ}

^ニ

シ リ ン カ リ ウ ム と し て

結 晶

^{ペ ニ シ} リ ^ン G カ リ ウ ム

(

2 0 ^{× 1} 0

⁴

U

/

v i a l

, 明 治製 薮, 以 下 単

に ペ F

シ リ ^ン G と

略 記)

ア ン ピ シ リ ^ン

末(

ブ リ ス ト ^ル

社),

セ フ ァ ロ リ ジ ^ン と し て セ ボ ラ ン

( 鳥 居 薬品)

お よ び セ フ ァ タ キ シ ム ナ ト リ ウ ^ム と し て セ フ _ァ タ ッ ク ^ス

( 中外製 薬)

を 用 い た

. 実験

^に は

蒸 留水

ま た は

生 食水

^で

適 当

な

濃 度

に

溶 解

し た も の を 用 ^い た

.

9

^･

B e r n h e i m e r

'

s b a s a l m e d i u m

^l

)

( 以下 単

に B B M と

略 記)

B e m h e i m e r に よ っ て

報 告

さ れ た

如

く

,

マ ル ト

^ー

ズ 6 7 5 m g

^,

2 0

%

リ ^ン

酸^一

カ リ ウ ム

液 ( 苛性

ソ

^ー

ダ

液

^に て p H を 7

･

0 に

調 整)

6 m l

,

2

% 硫 酸

^マ グ ネ ^シ ウ

^へ液

2 m l を

蒸 留 水

6 6 m l に

溶 解

し た も の を B B M と し て 用 ^い た

.

1 0

.

S L S

標 晶

1

%

R N a s e c o r e

加 普 通 肉汁

ブ イ ^ヨ ン

培 地

1

,

0 0 0

m l に S ^u

薗

を

接 種

^{し て 3 7}

⁰

^{C で} 3 0

時 間培 養

し た の ち

,

遠

心 に よ り 上

清 液

を

分離

し

,

こ れ よ り S h o i n

^{1 4}

) の

方法

に よ

^っ

て S L S を

分 離

し た

.

す な わ ち

上 帝 液

¹

,

0 0 0 m l に 2 8

%

ア ^{ン モ ニ} ア

水

5 0 m l を

加

え て

生

じ た

沈

澱

物

を

遠

心 に よ

っ

て

除

去 し た の ち

,

上

清液

の p 上 Ⅰ を

酪 酸

に よ

っ

て 7

^･

0 に

調 整

し

,

つ い で

冷

9 4

%

^エ タ ノ

^ー

ル 62 0 m l

を

加

え

, 生

じ た

沈 澱 物

を ^エ タ ^ノ

^ー

ル に て 2 回

洗 浄

し た の ち

, 乾 燥

し た も の を A

T

^{I S t r e} p t ^o l _y s i n

(

以

下単

に A

‑

^{I S L S と}

略 記)

と し て

実験

に 用 い た

.

1 1

^. 静 薗 法

^に よ る S L S

産 生 実験

Y E

培 地 培 養

S u

菌

を

遠 心

^に よ り

集 薗 洗 浄 後 培 養 液

の 1

/

1 0

容 量

の

生食 水

ま た は B B M に

浮遊

さ せ

,

こ れ に

等 量

の 0

･

2

%

R N a s e c o r e

加

B B M

液

を

加

え て 3 7

⁰

C

に

静 置

し て 2

時 間後

^に

菌浮 遊 液

を

冷 却, 遠 心

し

,

え ら

れ た 上

清 液

^{に つ い} て

溶 血 試験

を

行

っ た

.

1 2

^. 溶

血

試 験

被 検 液

の

生 食 水

^に よ る 1 ^m l

宛

^の

倍 下 稀 釈 液 列

を

作 製

し

,

こ れ に 3

%

人 血

球浮 遊 液

1 m l

宛 を加

え て 3 7

⁰

C 2

時 間静置後, 各 液

^の

溶 血

の

有 無 強弱

を

判 定

し た ^の ち

,

被検 液

の

溶血 力 価

を 5 0

% 溶 血 単位 (

H e m o l _{y t} i c u n i t

,

以下

^{H ロ と}

略)

で

表

示 し た

^.

成 績

1

.

ペ ニ シ リ ン

処

理 S u

菌

の S L S

産 生

お よ び I C H に

関

す る

実 験

S u

菌

の 2 0

時 間

Y E

培 地 培 養 液

2

,

5 0 0 m l か ら

遠 心 (

6

,

00 0 r p m

,

20

分 間)

^{に よ っ て}

分 離

^{し た}

生 菌 体

を

冷生 食 水

^に て

洗 浄

し た の ち

生菌 体

を 5

等 分

し

,

そ れ ぞ れ を 2 5 ^皿 1

ず

^つ の ^a

^.生 食 水,

b

^.

ペ

^ニ

シ リ ^ン G

含 有 生 食 水

(

2 ^× 1 0

⁴

U

/

m l

),

C

.

B B M

,

d

.

ペ ニ シ リ ^ン G

含 有

B B M

(

2 ^× 1 0

⁴

U

/

^m l

)

^お よ び e

^.生 食 水

の 5

液

^に

浮 遊

さ せ

,

そ れ ぞ れ ^a

菌液,

b

薗 液,

C

薗 液,

d

薗 液,

お よ び e

菌 液

と し た

.

こ の う ち a

菌液,

b

薗 汲,

C

菌 液

お よ び d

菌 液

^の 4

薗液

に つ い て は 3 7

⁰

C に 2 0

分 間

の

静 置

^{に つ} づ い

て 4 5

⁰

C ^に 3 0

分 間 静 置

し

,

e

菌 液

^{に つ い て} は 0

⁰

C で 5 0

分間 静 置

し て

対 照薗 液

と し た

.

つ い で

各

2 5 m l の

処 置 液

を 2 m l と 2 3 m l と に

分

け

,

そ れ ぞ れ を

遠 心

し て

菌体

を

分 離 洗 浄

し た の ち 2 m l の

処

理

菌 液

よ り の

菌 体

は 4 m l の 0

.

1

%

R N a s e c o r e B B M

液

^に

浮 遊

さ せ て

, 静

止

薗法

に よ り 37

⁰

C で 2

時 間静 置

し た

後,

そ の 上

清 液

^{に つ}

い て

溶

血

力 試験

を

行

^っ て S L S

産 生

の

有 無 強 弱

を

判 定

し た

. 処

理

菌 液

の 2 3 m l か ら

分 離 洗 浄

し た

菌 体

は 2 0

m l の

蒸 留 水

^に

浮遊

さ せ た の ち

実 験 方 法

で

記

し た

如

く

に し て

菌体

を

破 壊

し て C F E

‑

^{S を}

^{作 製}

^し

^,

^{こ れ に つ い}

て

溶 血 試験

を

行^っ

た

^.

^こ れ ら の

成 績

は

表

1 に 示 し た

如

く で あ る

.

す な わ ち

,処

理

菌

^に よ る S L S 産

生 実

験 ^で は

,

生 食 水

^に

浮遊

し

,

0

⁰

C

下

で 5 0

分間 静 置

し た

対 照菌

^の

産

生 S L S

力 価

は 20

,

00 0 H U

/

m l で あ る の に

対

し

, 浮遊 液

が 生

食 水

^で

,

ペ

ニ

シ リ ン を

附加

せ

ず

に

加 温 処

_{理 を}

行

っ た a

菌

の S L S

産

生 は

著

し く

減 弱

し

, 対 照 菌

の 1

/

10 で あ っ た

.

こ れ に

対

し

, 浮 遊 液

が B B M で あ る c

薗

で は S L S

産 生

の

減 弱

は み ら れ

ず,対 照

と ほ ぼ

同

じ で あ

^っ

た

.

こ れ ら

生 食 水

お よ び B B M の

浮遊 液

^{に ペ}

^ニ

^シ リ ン G を 2 ^× 1 0

⁴

U

/

m l

濃 度

^に

付 加

し て 処

置

し た b

菌

な ら び に d

菌

^で は

両 者

と も S L S

産

生 は

著

し く

減 弱

し

,

こ と に b

菌

で は S L S

産 生

は

完 全

^に

抑 制

さ れ て い た

.

ま た

各 処

理

菌

よ り

作 製

し た C F E

‑

^{S に つ い て の}

溶血 力価

は

, 対

照

菌

で は 1

,

6 0 0 H U

/

m l ^で あ り

,

a

,

b

,

C お よ び d の

各 処

理

薗

^の C F E

溶

血

力 価

も

対 照 菌

^の そ れ と ほ ぼ

同

じ で あ ^っ た

.

Y E

培 地 培 養 液

1

,

5 0 0 m l よ り

前 記

と

同 様

^に し て

分 離

し 3

等 分

し た S ^u

菌

を

,

そ れ ぞ れ 25 m l の

生 食水,

ペ

ニ

シ リ ン G

含 有

生

食 水 (

1 ^× 1 0

⁵

U

/

m l

)

お よ び ^ペ

^ニ

シ リ ン G

含 有生 食 水 (

1 0 ^× 1 0

⁴

U

/

m l

)

の 3

液

^に

浮 遊

さ せ

,

そ れ ぞ れ を C

^一薗,

P 2

一菌

^お よ び P l O

‑薗

と

命名

し て 3 7

⁰

C に 5 0

分 間静 置

し た の ち

,各 菌

^{に つ い て の}

静 菌法

に よ る S L S

産 生 実 験

お よ び C F E

^‑

S

作 製

を

行

^い

,

こ れ ^に つ い て

前 記

と

同様

^に し て

溶 血 試験

を

行^っ

た

.

こ れ ら の

成 績

は

表

2 に 示 し た

如

く で

あ

る

.

静 菌 法

^に よ る S L S

産 生 実 験

で は

,

C

M菌

^で は

先

^の

実 験

と ほ ぼ

同

じ 1 6

,

30 0 H U

/

^m l の

溶

血

力 価

を 示 し た の に

対

し

,

ペ

ニ

シ リ ン G 2 ^× 1 0

⁴

U

/

m l

含 有

生

食 水浮遊液

T a bl e l

^.

H e m o l y t i c a c t i v i t y ^o f s t r e p t o l y s i n S

(

S L S

)

^{a n} d i n t r a c e ll u l a r h e m o l _y s i n

(

^{I C H}

)

o f _{p e} n i c illi n

^‑

t r e a t e d h e m o l y t i c s t r e p t o c o c c i

(

S u c o c c i

)

M e di a i n w hi c h S u c o c c i w e r e s u s p e n d e d T r e a t m e n t o f S u C O C C l

S u S p e n S i o n

H e m o l y t i c a c t i v i t y ( H U

^'

/ ^m l

)

B a s a l m e di u m

P r e s e n c e

(

⁺

)

^{o r}

a b s e n c e

(

丁

)

o f

瑠^盟喘訝

^{i a}

S L S p r o d u c e d b y I C H o f t r e a t _e d S u c o c c i i n t r e a t e d

r e s t i n g c e ll s y ^s t e m S u c o c c i P h y s i o l o g l C a l

S a li n e

(

P S

)

十

I n c u b a t i o n a t 3 7

⁰

C f o r 2 0 m i n

f o 1l o w e d b y i n c u b a

^‑

t i o n a t 4 5

⁰

C f o r 3 0

m l n

0 1

,

4 8 0

1 2 8 1

,

3 2 8 B e r n h e i m e r

'

s b a s a l

m e d i u m

(

B B M

)

十 1 6 1

_,

24 8

1 8

,

0 00 1

,

55

^ト

5

H

P S ^I

^{n c u}

^{b a ti o}

ⁿ

^{a t O} ℃

f o

r

5 0

m

i n 2 0

,

0 00 1

,

60 0

*

H U : H e m o l _{y t} i c u n i t

S u c o c c i w e r e s u s p e n d e d i ⁿ b a s a l m e di ^{u m} w i t h o r w i t h o u t p ^{e n} i c illi n a n d i n c u b a t e d a t 3 7

⁰

C f o r 2 0 m i n

f o ll o w e d b y i n c u b a t i o n a t 4 5

⁰

C f o r 3 0 m i n

･

A f t e r t h e t r e a t m e n t

,

O n e p ^{a r} t _O f t r e a t e d S u c o c c i w e

r

^e

u s e d f o r S L S f o r m a t i o n i n r e s t i n g c e 11 s y s t e m

,

i

^.

e

.,

S u c o c c i w e r e s u s p e n d e d i n O

^.

2

%

r ib o n u c l e a s e

十

r e SI S

^‑

t a n t f r a c t i o n o f R N A

(

R N a s e c o r e

) ^一

B B M a n d i n c u b a t e d a t 3 7

^q

C

^.

A f t e r 2 h r i n c u b a t i o n

,

t h e s u p ^{e r n a}

^‑

t a n t o f S u c o c c i s u s p e n s i o n w a s t e s t e d f o r h e m o l y t i c a c t i v i t y ^o f S L S p r o d u c e d i n s u s p e n s i o n

.

T h e r e s t

O f t r e a t e d S u c o c c i w e r e h o m o g e n i 写 e d a n d s u p e r n a t a n t

(

^{c e} ll f r e e e x t r a c t

^‑

S

,

C F E

^‑

S

)

^o f h o m o g e n a t _e w a s

t e s t e d f o r h e m o l _{y t} i c a c t i v i _{t y} o f I C H

^.

H e m o l _{y t} i c a c t i v i _{t y} w a s e x p ^{r e s s e} d a s H U

/

^m l o f C F E

^‑

S

^･

溶 連 菌 溶血 毒 素

に

及

ぼ す ^べ

^ニ

^シ リ ン の

影 響

T a b l e 2

^.

H e m o l _{y t} i c a c t i v i _{t y} o f S L S a n d I C H o f S u c o c c i t r e a t e d w i t h v a r i o u s c o n c e n t r a t i o n s o f p e n i c illi n G

4 6 3

C o n c e n t r a t i o n o f p e n i c illi n

G i ⁿ P S i n w hi c h S u c o c c i

w e r e s u s p e n d e d

T r e a t m e n t o f S u C O C C i s u s p e n s i o n

H e m o l y t i o a c t i v i t y

(

H U

/

^m l

)

S L S _p r o d u c e d b _{y t} r e a t _e d S u I C H o f t _{r e a} t e d

C O C C i i n r e s t i n g c e 11 s y ^s t e m S ^u c o c c i 2 × 1 0

⁴

U

/

^m l

I n c u b a t i o n a t 3 7

⁰

C f o r 5 0 m i n

8

,

0 0 0 1

,

3 0 0

1 0 ^{× 1} 0 ⁴ U

/

^{m l} 0 8 0 0

O U

/

m l I n c u b a t i o n a t O

^O

C

f o r 5 0 m i n 1 6

,

3 8 4 1

,

6 0 0

S u c o c c

!

^{w e r e s u s p e n d e d i n P S c o n t a i n i n g p e n i c illi n G a n d i n c u b a t e d a t 3 7}

⁰

^{C f o r m i n}

^.

^{T h e t r e a t e d}

S u c o c c I W e r e u S e d f o r e x p ^{e r} i m e n t s o f S L S p r o d u c t i o n i n r e s t i n g c e ll s y s t e m a n d f o r p r e p a r i n g C F E

^‑

S

.

T a bl e 3

.

I n n u e n c e o f p e n i c i11i n G u p o n h e m o l y t i c a c t i v i _{t y} o f I C H

M e di a w i t h w hi c h I C H w a s T i m e o f i n c u b a t i o n a t H e m o l y t i c a c t i v i _{t y} o f I C H

m i x e d 3 7

⁰

C

(

m i n

) (

H U

/

m l

)

P S

0 1

.

66 4

1 0 55 3

2 0 4 0 3

3 0 6 8

P S c o n t a i n i n g p e n i c illi n G

0 1

,

23 5

1 0 8 8

(

4 × 10 ⁴ U

/

m l

)

2 0 1 9

3 0 0

I C H w a s i n c u b a t e d a t 3 7

^Q

C f o r s t a t e d t i m e w i t h o r w i t h o u t p ^{e n} i c illi n G

^.

A f ^t e r i n c u b a t i o n

,

I C H w a s t e s t e d f o r h e m o l y t i c a c t i v i t y

^.

中

^で

処

理 さ れ た P 2

一菌

の

産 生

S L S

溶 血 力 価

は 8

,

0 00 H U

/

m l で

, 先

の

実験

と

異

な り S L S 産

生能

を

有

し て ^い た が

,

C

一薗

^{の 1}

/

2 で あ

っ

た

^.

こ れ に

対

し ^ペ

^ニ

シ リ ン G l O ^X l O

⁴

U

/

^m l

付 加 生 食 水

^で

処

理 し た P l O

T^菌

^{で は}

^溶 血力価

は 0 と S L S

塵 生

を

全

く み と め な か

っ

た

^.

C F E

^‑

S の

溶

血

力価

^に

関

し て は

,

K

一^菌

^{で は 1}

^,

^{6 0 0 H U}

/

^m l で あ り

,

P 2

一菌

で は 1

,

3 00 H U

/

^m l と 3 7

⁰

c に つ づ い て 4 5

⁰

C の

加

温

処

理 を

行っ

た a

,

b

,

C

,

d お よ び e

薗

^の そ れ と ほ ぼ

同

じ で あ

^っ

た が

,

P

.

^{1 0}

^菌

^{の C F E}

^‑

^{S の}

溶

血

力価

は 80 0 H U

/

^m l と

減 弱

し

,

C

一菌

の

約

1

/

2 で あ

っ

た

.

2

^･

I C H に

対

す る ^ペ

^ニ

シ リ ン G の 影

響

( C F E

^‑

S l

容 量

+ ペ

^ニ

シ リ ン G

加 生食 水

1

容 崖) (

ペ

^ニ

シ リ ン

作

用

濃 度

2 × 1 0

⁴

U

/

m l

)

と

(

C F E

L

^{S l}

容 量

十

生 食水

1

容

量

)

^の 2

液

を

作 製

し

,

3 7

⁰

C ^に

静 置

し て

定時 的

^に

液

を

採 取

し て

行^っ

た

溶

血

試験

^の

成 績

は

表

3 ^お よ び

図

1 に 示 し た

如

く で あ る

(

な お

溶 血 力価

は C F E

‑

S の

稀釈倍 数

に

換 算

し て 示 し た

) .

C F E

^‑

S

^一生 食 水 液

は

温 度

^に

不 安定

^で 3 7

⁰

C

下

で は 1 0

分 間

で 1

/

3 に

,

2 0

分 間

で 1

/

4 に

_,

3 0

分 間

で 1

/

2 5 と

時間

^の

経 過

と

共

^に

溶 血 活性

は

減弱 失 活

し た

.

こ れ に

対

し ^ペ

^ニ

シ リ ン G を 2 ^× 1 0

⁴

U

/

m l に

付 加

し た

(

C F E

^‑

S + ペ

^ニ

シ リ ^ン G

加 生食 水)

^で は ペ

^ニ

シ リ ^ン G を

加

え た だ け

(

0

分時)

で す で に

若

干 の

減 少

を 示 し

,

さ ら に

時 間

の

経 過

と

共

^に

溶

血

力 価

は

急激

に

減 弱

^し

,

そ の

減 弱度

は C F E

T

^S

^一生食 水

^に 比 ^べ て さ ら に

急

^{で 1} 0

分

で 1

/

2 0 に

減 弱

し

,

3 0

分

^で は

溶

血

括性

は ほ と ん ど

認

め ら れ な か っ た

.

3

^.

I C H

‑

^{C O r e C O m p l e x} お よ び S L S ^に

対

す る ^{ペ ニ} シ リ ン G の

影 響

実 験 方 法

^で

記

し た

如

く ^に し て

作 製

し た I C H

^‑

C O r e C O m P l e x

液(

2

,

1 5 0 H U

/

m l

)

^お よ び A

‑

^{I S L S}

^液(

¹

^,

^{50 0}

H U

/

^m l

)

を 用

意

し

,

こ れ ^に

等量

の

生食 水

あ る ^い は ^ペ

^ニ

シ リ ン G

含 有 生 食水(

4 × 1 0

⁴

U

/

m l

)

を

加

え て 3 7

^O

C に

静 置

し

,

2 0

分 後

^に

涛

血

試 験

を

行^っ

た

^.

そ の

成績

は

表

^{4 お}

よ び

図

2 ^に 示 し た

如

く で

あ

る

.

す な わ ち

対 照

と し て

行

っ た I C H は ^ペ

^ニ

^シ リ ^ン G を

加

え

,

3 7

⁰

C ^に 2 0

分処

理 す る こ と で

溶 血 活 性

が

消失

す る の は

先

の

実 験

と

同様

で

あ

っ た が

,

I C H

^‑

C O r e C O m p l e x お よ び A

^‑

I S L S で は

,

ペ ニ シ リ ^ン G を

付加

し て も し な く て も 3 7

⁰

C 20

分

の

処

T i

m e o

f i

nc

豆b

a

t i

o n

(

^m

l

n

)

F i g

^.

1

^.

C h a n g e i n h e m o l _{y t} i c a c t i v i t y o f I C H b y t r e a t m e n t o f _p e n i c illi n G

.

I C H w a s i n c u b a t e d a t 37

⁰

C f o r s t a t e d t i m e w i t h

o r w i t h o u t p ^{e n} i c illi n G a n d h e m o l _{y t} i c a c t i v i _{t y}

w a s t e s t e d a n d e x p r e s s e d a s p e r c e n t c a l c u l a t e d b _{y t} h e f o ll o w i n g f o r m u l a :

H U o f I C H

t

H U o f I C H

｡

× 1 0 0

I C H

t

: I C H i ^{n c u} b a t e d f o r t m i n

w i t h o r w i t h o u t p ^{e n} i c illi n G I C H

｡

: I C H i n c u b a t e d f o r O ^m i n

w i t h o u t p ^{e n} i c i11i n G

●

‑ … ‑

● I C H i n c u b a t e d w i t h p e n i c illi n G

= I C H i n c u b a t e d ^w i t h o u t p e n i c illi n G

埋 ^で は

両 者

^の

溶 血 活 性

^に は

変 化

は ^み ら れ

ず, 処

理

前

と ほ ぼ

同

じ で あ

っ

た

.

4

^.

^ペ

^ニ

^シ リ ^ン G の

抑 制作

用 に お け る

濃度

の

影響 各 種 濃 度

の ^ペ

^ニ

^シ リ ^ン G

加 生 食 水 液 (

2 × 1 0

⁴

U

/

m l

,

4 ^× 1 0

⁴

U

/

m l お よ び 2 ^× 1 0

⁵

U

/

^m l

)

を 用

意

し

,

I C H

,

I C H

‑

C O r e C O m P l e x お よ び A

‑

^{I S L S}

^液

^{に そ れ ぞ れ}

等

出 ^の

各 濃 度

^{の ペ}

^ニ

^シ リ ^ン G

生 食 水 液

を

加

え て 3 7

⁰

C に 2 0

分 間 静 置

し て お ^こ な ^っ た

溶

血

試 験

の

成 績

は

表

5 お よ び

図

3

,図

4 に 示 し た

如

く で あ る

.

す な わ ち

,

I C H は

ペ

ニ

シ リ ン G を

加

え ず ^に 3 アC ^に

静 置

す る だ け ^で そ の

溶 血活 性

は

減 弱

し

,

10

分 間

で 1

/

3 に

減 弱 ( 表

3 お よ び

図

1

参 照)

す る が

,

こ れ に ペ

ニ

シ リ ^ン G を

加

え る こ と で そ の

減 弱 度

は は さ ら に

高

ま り

,

ま た

,

そ の

減 弱度

も

付 加

し た ^ペ

^ニ

^シ リ ^ン G

濃 度

が

高

^い は ど

強

ま り

,作

用

濃 度

1 × 1 0

⁴

U

/

m l で は 1 0

分

で 1

/

^{4 に}

,

2 0

分

で 1

/

6 0 に

,

5 × 1 0

⁴

U

/

m l お よ

び

1 0 ^× 1 0

⁴

U

/

m l で は 1 0

分

で

溶

血

活 性

を み と め な ^か

^っ

た

.

こ れ に

対

し て I C H

^‑

C O r e C O m

^‑

p l e x と

,

A

^‑

I S L S の

両者

は 互 ^{い に}

似

た 反

応

_{を 示 し}

,

A

‑

I S L S で は ^ペ

^ニ

^シ リ ^ン G ^の

作

用

濃 度

が 1 0 ^× 1 0

⁴

U

/

m l で も 3 7

⁰

C 2 0

分

で

溶 血 活 性

^の

減 弱

を み と め な ^か

^っ

た

^.

5

^.

^ペ

^ニ

^シ リ ン G の

抑 制 作 用

^に

対

す る

温 度

の

影響

C F E

^‑

S 3 m l に ペ

^ニ

シ リ ^ン G

生 食 水 (

4 ^× 1 0

⁴

U

/

m l

)

3 m l を

加

え た

液

を 3

等分

し

,

そ れ ぞ れ を 0

⁰

C

,

20

⁰

C な ら

び ^に 3 7

⁰

C ^に

静置

し て 2 0

分 後

に

各処

埋

掛

^{こ つ い} て

溶

血

活 性

を

行

っ た

成績

は

表

6 ^に 示 し た

如

く で

あ

る

.

す な わ ち

,

0

⁰

C

下

^に

静 置

す る と

溶 血 活 性

^の

低 下

は

全

く み と めら れ

ず,

3 7

⁰

C

下

で は ほ と ん ど

溶 血 活性

は

消 失

し て い た

.

T a bl e 4

.

I n 触 e n c e o f _p e n i c illi n G u p o n h e m o l y t i c a c t i v i t y ^o f I C H

^‑

C O r e C O m P l e x

^*

a n d S L S

M a t e r i a l s

P r e s e n c e

(

⁺

)

^{o r a} b s e n c e

( ^‑)

^o f p e n i c i11i n G i n m e di a

(

^{2 × 1 0 4 U}

/

^{m l}

)

T i m e o f i n c u b a t i o n

(

m i n

)

H e m o l _{y t} i c a c t i v i _{t y}

(

H U

/

^m l

)

I C H

^･

C O r e C O m p l e x

+

0 1 0 20

2

.

0 0 0 1

,

9 0 0 1

,

8 7 0 0

1 0 2 0

2

,

0 0 0 1

,

9 5 0 2

,

1 0 0

S

I^‑

^S

+

田

1 0 2 0

1

,

6 0 0 1

,

5 5 0 1

,

5 7 0 0

1 0 2 0

1

,

6 0 0 1

,

5 0 0 1

,

5 7 0

*

I C H

^･

C O r e C O m p l e x w a s p r e p a r e d a s f o ll o w s ; 5 m l o f C F E

^‑

S ^{w a s m} i x e d w i t h 5 m l o f 2

%

R N a s e c o r e s o l u t i o n a n d i n c d b a t e d a t 37

⁰

C f o r 6 0 m i n

.

I C H

^‑

C O r e C O m p l e x o r S L S ^{w a s} i n c u b a t e d a t 37

^｡

C f o r s t a t e d t i m e w i t h o r w i t h o u t p ^{e n} i c illi n G a n d t e s t e d

f o r h e m o l y t i c a c t i vi t y

^.