溶盈毒に間する研究

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懸clll縄罐解s（Zel麗1雛鯛騒ss響elのの

溶盈毒に間する研究

金澤讐科大賊細菌學教室（主任袖留授）

塩見盆朗

Masz．iro 5ン勿。〃2疹（昭和24年4月、18目受書）

（本要旨は日本細菌學會第1回北陸地方支部會に襲表した．）

第1章緒

著者1）は1944年：Bacillus gigas（Zeissler u

Rassfeld）， Bacillus sorde］lii （｝ asteur ］NTo， 24），

及：Bacillus novyi（Zeissler）3菌に關ずる形態學的，生物學的比較實験を行ひ1947年これを報告

した．次で此等の菌の産生する毒素に就て比較實輪中，東洋濾紙會就製除菌用濾過板を以て培養液を濾過した液は「マウス」に封ずる致死毒，

海狸皮膚に封ずる壊死毒は疎漏強V・にも拘らす，山羊赤血球に封ずる溶血毒は極めて低い事を経験した。皇PちSeitz濾：過板による濾液中には溶血毒は殆んど出て來なV・ので，Welchtt菌

言

に關する高橋3）の報告の如く溶血毒は濾過器に吸着されるものと考えて，増血液上清を溶血毒素液としてその産生歌況を槍討した．

：Bacillus gigasの溶血素に就ては、Zeissler 4）の記載に見へなV・．：Bacillus sordelliiに關しては Hall 5）が本菌と：Bacillus hamolyticusの比較實1 験に於てsordellii菌が血液塞天上で弱）・溶血を示す事を認めてみる．叉：Bacillus novyiに就てはZeissler 6）その他2）の記載があるが，総て溶血毒産生に諭する精細な報告は露なV・。

，

第2章

使用菌株はBacillus gigas（Zeissler u・Rassfeld），

Bacillus sordellii （Pasteur No 24）， Bacillus novyi

（Zeissler）である．

毒素製造用培地はpH 7・8肝臓ブイヨン」7）で容量は特に中試瞼管に肝片3〜4gr・「ブイヨン」10ccを秤量して分注した．之に起始培養（肝臓ブイヨン」24時間培養で護育良好なもの）1滴宛を接種して37。Cで所要時聞培養した．

溶血毒測定には所要時闇培養した肝臓ブイヨン」液

験方法

を無菌的に遠心しその上清をpH 7・0〜7．1の生理的食盤水で稀繹し0．5cc量系統で小試瞼管に階段的倍々稀繹する．之に1％山羊赤血球液1滴宛を加へ充分振盟後37。C 1時間艀卵器内に置き溶血度を判定，：更に之を24時間室濃に叡置したものに就て溶血を判定した。

表申記載した溶血償の記號は次の通りである．辮完全溶血．甘殆んど完全溶血．十孚分溶血．±微かに溶血．一全く溶血せず．溶血慣は一般に完全溶血を示す最大三三倍数を用ひた．

第3章西盛成績

1．培養時聞による溶血債の浩長pH 7．8 係は第1表の通りである． gigasは14時間培養肝臓ブイヨン」に於ける培養時闇と溶血債の關までは培養液の潤濁も弱く瓦斯護生も殆んどな

(2)

盤見 347

い．且溶血毒も極めて弱V・か叉は認め得ない．

之が18時聞培養では溜濁，瓦斯稜生は未だ少ないが溶血債は8倍となり，2−1時聞培養では最：高債に達し32倍となる．以後30時聞培養では16倍と減少し，48時闇培養で渥濁，瓦斯襲生が張くなると2倍にまで減少して來る．

そして72時間培養では原液のみ完全溶血を示す様に減少した．

sordelliiに於ては6時闇培養まで毒素は認められないが，10時間培養で培養液の洞濁が認められる様になると8倍まで完全溶血をする．次

で14時聞培養で最高便32倍となり，次第に減少して30時間培養では潰失してしまう．

n⑪vyiは⑳時間培養まで完全溶血を見ないが 14時間で8倍となり，18時聞で最高債16倍とな

り以後次第に減少する．

との實験に於て封照として用ぴた非接種肝臓ブイヨン」では全く溶血を認めす．叉氷酷酸，

苛性曹達を以てpH 8．0，7．1，65，6．2，5．0の 5種肝臓ブイヨン」を作ったが，此等の液は全く山羊血球を溶血しなかった．（第1表参照）

2．生動物蛋白加肝臓ブイヨン」に於ける

第1表：培養時間による溶血債の消長終末

菌株培養二一

PH

原2倍4 8 163264128256

Gigas

6 10 14 18 20 24 30 48

72，

7．6 7．4 7．0 6．5 6．3 6．2 6．1 6．1

± 儲一・一一・一瞳一一一

十土一一一一措柵冊：±＝諭一一一冊柵冊十一一十丹柵柵冊・榊十一一十冊冊一一一柵柵士一一一一等十一一一一一一

SordeNii 6 1e 14 18 20 24 48 72

7．2 6．4 6．1 6．0 5．9 5．9 5．8

士一一一一面柵柵柵 ± 一一冊柵柵珊柵一一溜柵柑冊・H十 ± 一一

・冊柵柵柵冊十一一柵粥士一一

sp 一一一一一一一一

6 7．6 一一一＿一一＿一＿

10 7．4 士一一一一一一一一 14 6．4

三脚柵柵｛十一一一一一

Novyi 18 6．3

柵柑柵辮柵±一一一

20 6．1

柑冊冊畳士一一一一

24 6．1

柵柵十一一一一一一

48 ^6．1

三一±一・一一一一一

72 ^6．⑪

柵柵± 一一一一一一

一

一一

gigas菌の溶血毒産生に就て著者1）は先に gigas菌の肝臓ブイヨン」培養に於ける稜育が

難胎仔エキス」（谷教授考案になる難胎仔の酸性タイロード浸出液を申和せる＄の），及生家

［ 75 ］

(3)

兎血清添加によわ極めて促進される事を経験した．依てこの嚢育捉進によb溶血毒産生も攣化するやも知れすと考えて，肝臓ブイヨン」に30

％の割に鶏胎仔エキス」，家兎生血清を無菌的に加へたる培地を用ぴて培養時聞と溶血便攣動の關係を研究し第2表の成績を得た．

生家兎血清加肝臓プ■ヨン」（SLB）では14時間培養で8倍，18時闇培養で培養液の潤目，瓦斯襲生が見られる様になると32倍（：最高値）となり，以後次第に低下して24時聞で8倍，48時聞で原液のみ完全溶血を示す様になる．

難胎仔エキス」伽肝臓ブイヨン」（XLB）では更に早く溶血毒が認められ，10時聞増養から原液は完全溶血を示し，14時間で16倍，18時間で 32倍撮高値）とな夢，以後亥第に低下して24時聞では4倍，48時間で原液のみ溶血を示す様に

なる．

帥ちX：L：B，SL：B， L：Bに於けるgigas菌の完全溶血償曲線はX：L：B，SL：B， L：Bの順で早い方にすれる．

叉難胎仔エキス」生血門門によlj溶血債を僅かながら‡昇させ得た・（第2表参照）

第2表：生産物蛋白のgigas菌溶血毒産生に及ぼす影響

（pH 7．8：L：B山羊血球）

培地

LB，

S：L正㍉

XLB．

培養時間階

6 10 14 18 20 24 30 48 72 6 10 14 18 20 24 48 72 6 10 14 18 20 24 48 72

7．6 7．4 7．e 6．5 6．3 6．2 6．1 6．1 5．6

7．4 6．6 6．4 6．2 6．0 5．9 5．8 5．5

7．4 6．5 6．2 6．0 5．9 5．8 5．6 5．5

原 2培 4 8 16 32 64 128 256

十十柵野冊柵柵柵

±

柵柵柵士一・幽一二帯珊十一一十H 柵柑柵 ÷ 一柵・柵柵柵一一柵士

冊

珊柵辮冊

十 ± 一一一一一一柵柑十十十 ± 一一一報柵柵措一一珊柵柵十一一柵柵柵十十一一一士一一一一十 ± 一一一一一一

帯柵柵

珊

柵

± 一一一一一一一一珊柵士一 H 柵柵柵士一三柵柵十一冊十」＝一一一寸

3．起始pHの溶血毒産生に及ぼす影響肝臓ブイヨン」の起始pHが各菌の溶血毒産生に

(4)

見 349

如何なる影響を與へるかを槍査するため，pH

8．5，7．8，7．2，6．4の4種類の肝臓ブイヨン」を作b，9igasは24時間， s⑪rdelliiは14時間， novyi

は18時闇培養に於ける溶血便を槍呈して第3表の域績を得た．培養した肝臓ブイヨン」の肉眼

的性1伏比1較ではs⑪rdellii及novyiでは4種類培地で差を認めす．唯gigas：培養のpH 6．4増地のみ潤濁，瓦斯護生が少なかった，

各菌共溶血債はpH 7．8が最高でpH 7．2，

8．5，6．4の順に低下した．（第3表参照）

第3表：培地pHの溶血毒産生に及ぼす影響

菌種撃培養時間一二原248・632

^64 128 256

Gigas

8．5 1 24 7．8 1 tt 7．2 1 pt 6．4 1 ，t

6．3 柵柵柵 6．2 州1州・柵 6．3 柵柵柵 5．7 帯十H・柵

柵拙・十 ± 一一冊十什柵十一一冊柵十十

柑 ± 一

Sordellii

8．5 ［ 14 7．8 i 7．2 i t1 6．4 1 tt

62 構柵柵

6・1 柵柵・冊 6．0 柵柵柵

5・8 帯柵工

8．5 18 6．3 辮珊

Novyi ^7．8 ^〃 ^6．3 冊冊

7．2 ^〃 6．1 柵柵

6．4 ^〃 5．7 珊柵

4．溶血毒の耐熱性各毒素の比較的高々なものを選び，之を水浴中で500C10分，60。C10 分，60。C 20分聞加熱してその溶血債を測定し

た．

8igasはpH 7．8肝臓ブイヨン」24時間培養

珊

・柵柵十 ± 一一輔十柵州1十f 一一

冊帯％士一一

柵士一一一一一骨幽

M＝＿＝＿

柵柵 ± 一一断碑十十一一一一 H m一．．nt 一一一，

t

で32倍まで完全溶血を示すものを加熱した所，

50。C 10分力n熱後は4倍までに降b，それ以上のカロ熱では原液に於てすら完全溶血を認めなかった．sordelliiは14時聞培養で最高値32倍のものを用ぴ50。C 10分加熱すると8倍までに低下

第4表：溶血毒の耐熱性

毒素液 Gigas pH 7．8 LB．

24 H

serdellii pH 7． 8LB．

14 H

novア1 p正17齢8工，B．

18 H

加熱法非加熱

soac loi 60eC lgs 60ec 20x

非加熱

50。C 10／

60ec lot 60ec 20ノ

非加熱

soec lot 6eoc le，

60。C 20ノ

原2倍4 8 16 32 64 ユ28256 珊柵柵柵

辮十什柵十十下

拙｝号骨十一一

± 一一一一一一

柵柑什一一柵冊十士一一一

・冊柑柵柵柵 ± 一一一帯柵十十十一一一 ± 一一一一一一一

［ 77 ］

(5)

し609C lO分以上加熱では完全溶血は認めなかった．叉novyiでは18時間培養で最高僻6倍の

ものを50。C 10分聞加熱すると4倍に低下し，

それ以上の加熱では完全溶血を示さなかった．

即ち各菌の溶血毒は60。C 10分聞の加熱によ塾殆んど破壊された。（第4表参照）

5．溶血毒の濾過性加熱試験と同材料を用ひて，之を：Berkefeld及Seitz濾過器により濾過し，その濾液の溶血便を測定した，各菌の凄素共，Seitz濾過では原液が完全溶血を示すのみであり，叉Berkefeld濾過では原液に於てすら完全溶血を認めなかった．（第5表参照）

第5表：溶血毒の濾過性

毒素液盧理法原 2重音 4 8 16 32 64 ユ28 256

Giga5 非濾過

夢 T昏柵柵柵柵柵十一一

P耳7．8LB， ^Seitz 柵昔十一一一一一一

2411 ^：Berkefeld 十卜十土一一一一一一

『 sOrdd1重i

非濾過

冊柑柵柵冊甘一一

pH 7．8：LB． Seitz 柵什 ±：一一一一一一

14H

^：Berfeld 昔士一一一一一一一

、

n⑪vyi 非濾過

柵柵柵柵柵± 一一一

PH 7．8 LB． SeitE 柵十一一一一一一一

18H

^：Berkefeld 骨 ± 一一一一一一一

6．．血球の種類と溶血償の關係使用毒素液：

は前實験と同一である．人，山羊，家兎，海狸の1％赤血球の生理的食盤水浮游液：を作り，溶血毒の各種赤血球に封ずる作用度を比較實験し

た．各血球の感受性はgigasに劃しては家兎，

海狸，山羊，人の順に，sordel】ii及novyiに封しては田畠，家兎，山羊の順に低下した．但し大きな差ではない．（第6表参照）

第6表1血球種と溶血債の關乙

子素液血球原 2 4 8 16 32 64 128 256 512

@＼

gigas 入辮柵珊柵柑什十一一一

PH 7．8 L：B．山羊

柵柵冊辮柵柵十一一一

2411 家兎冊柵・柵冊柵柵枡 ± 一一・

海猿

柵柵柵珊柵柵柵一一・一

sordellii 人柵冊柵守則什士一一一

PH 7．8 LB．山羊

柵柵柵柵下措甘一一一

14H

^家兎

柑冊柵柵冊柵一十卜一一

海狽

冊辮冊柵三三柵％1土一

・

獅nVア1 人柵柵柵柵｛十土一一一一

PH 7．8：L：B．山羊柵柵柵柵拙・± 一一一一

1811 家兎柑辮｛什柵柵柵 ± 一一一

海狽柵・柵冊柵柵柵十一一一

(6)

見 351

第4章結

Bacillus gigas， Bacillus sordellii， Bacillus novyi

の溶血毒に就て比較丁丁を行ぴ次の結果を得

た．，・

1．各菌の肝臓ブイヨン」培養には動物の赤血球を溶解する物質が認められる．この物質は細菌濾過器で濾過すれぼ吸着されて殆んど濾液：中に出ない。この毒素に拝し海瞑，家兎血球は最も鏡敏で，山羊次で入の血球の順に抵抗性が強い．肝臓ブイヨン」に於ける本物質産生至適

論

pHは7．8乃至8．0である．又この物質は60。C 1⑪幽幽の加熱によ砂殆んど破壊ざれる．

2．gigas菌獲育促進物質たる難胎仔エキス」

及生家兎血清加肝臓ブイヨン」に於てはgigas 菌の溶血毒産生は一早くなり，且より高債な毒素

を作る．

発日に解り御指導，及御校闘を賜った谷教授に深謝する．「

文 1）瞳見，十全會雑誌，50，1，（1947）・ 2）高由，二三醤學，21，19Q，（昭12）． 3）高橋，

長崎醤學誌，9，612，（昭6）・ 4）Zeissler u Rassfeid： Arehiv fttr X］Vissenschaft］iche u．

praktische Tierheilkunde， 59，（1929）． 5）

獣

Iv6n C． Hall： J． of inf． dis． 45，（1929）． 6）

Zeissler： Handbuch d． pathog． Microorg． Bd．

IV2・S・1115，（1928）・ 7）谷友次，醤學微生

物學，南山堂護そテ， 303，（昭23）．

擢礎垂慮敏＿

リウマ・チ・十両痛

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文献邊呈

乞掲載誌名記入

新費

（， 79 ］

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